مقالة منهجية

كشف في وقت واحد ج-فو التنشيط من مواقع مكافأة Mesolimbic والقشري المتوسطي الدوبامين بعد ساذج السكر والدهون الابتلاع في الجرذان

DOI:

10.3791/53897

⸱

أغسطس 24, 2016

 ,  , 
1Behavioral and Cognitive Neuroscience Cluster, Psychology Doctoral Program, The Graduate Center, CUNY, New York, NY, 2Department of Psychology, Queens College, CUNY, Flushing, NY, 3Behavioral and Cognitive Neuroscience Cluster, Psychology Doctoral Program, The Graduate Center, CUNY, Flushing, NY

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهدف من هذه الدراسة هو تحديد شبكات الدماغ وزعت المتعلقة مكافأة من قبل ترسيم تقنية immunohistological موثوقة باستخدام الخلوي تفعيل ج منظمات المزارعين لقياس التغيرات في وقت واحد في مسارات الدوبامين ومواقع المحطة بعد تناول الرواية من الدهون والسكر في الفئران.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تستخدم هذه الدراسة الخلوية تفعيل ج مكتب الإحصاء الاتحادي لتقييم الآثار المترتبة على تناول الرواية من الدهون والسكر على الدوبامين في الدماغ (DA) مسارات في الفئران. وتوسط مآخذ من السكريات والدهون والمعالم السياحية التي الفطرية وكذلك تفضيلات المستفادة. الدوبامين في الدماغ، وخاصة المتوسط ​​والحوفي والتوقعات والمتوسط ​​القشرية من المنطقة الجوفية السقيفية (VTA)، وقد تورط في كل من هذه الردود امي وتعلمت. مفهوم شبكات الدماغ وزعت، حيث العديد من المواقع ونظم الارسال / الببتيد تتفاعل، وقد اقترح التوسط تناول الطعام مستساغا، ولكن هناك أدلة محدودة مما يدل تجريبيا مثل هذه الأعمال. وهكذا، وتناول السكر يتسبب DA إطلاق والزيادات ج-فو-لمثل مناعية (FLI) من مناطق الإسقاط VTA DA الفردية بما في ذلك النواة المتكئة (بريدا)، اللوزة (AMY) وسطي قشرة الفص الجبهي (mPFC) وكذلك المخطط الظهرية. وعلاوة على ذلك، الإدارة المركزية للانتقائية مستقبلات DA في هذه الموقعق تفاضلي لحد من اكتساب والتعبير عن تفضيلات نكهة مكيفة التي تسببها السكريات أو الدهون. نهج واحد التي يمكن من خلالها تحديد ما إذا كانت هذه المواقع تفاعلت كشبكة الدماغ توزيعها ردا على السكر أو الدهون سيكون لمتزامنة تقييم ما إذا كانت VTA والمناطق الرئيسية في mesotelencephalic DA الإسقاط (الحوف وinfralimbic mPFC، الأساسية وقذيفة من حلف شمال الأطلسي، basolateral ووسط-القشرة-وسطي AMY)، فضلا عن أن المخطط الظهري العرض تنسيق وتفعيل FLI في وقت واحد بعد عن طريق الفم، وتناول غير المشروط من زيت الذرة (3.5٪)، والجلوكوز (8٪) وسكر الفواكه (8٪) والسكرين (0.2 ٪) الحلول. هذا النهج هو خطوة أولى ناجحة في تحديد جدوى استخدام الخلوي تفعيل ج مكتب الإحصاء الاتحادي في وقت واحد عبر مواقع الدماغ ذات الصلة لدراسة التعلم ذات الصلة مكافأة في تناول الطعام مستساغا في القوارض.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تورط الدوبامين في الدماغ (DA) في استجابات المركزية لتناول السكريات مستساغة من خلال المقترح على أساس المتعة 1،2 و 3 و عادة على أساس 4،5 آليات العمل المتعلقة الجهد. مسار DA الأساسي المتورطين في هذه الآثار ينشأ في منطقة السقيفية البطنية (VTA)، ومشاريع لالمتكئة (بريدا) الأساسية وشركة شل، واللوزة basolateral والقشرة المركزية-وسطي (AMY)، ونواة والحوف وسطي infralimbic قشرة الفص الجبهي (mPFC) (انظر ملاحظات 6،7). وقد تورط في VTA في تناول السكروز 8،9، ويلاحظ إطلاق DA تناول السكر التالية في NAC 10-15، AMY 16،17 وmPFC 18-20. يحفز الدهون أيضا DA NAC الافراج عن 21، ومنطقة الإسقاط DA-غنية أخرى إلى المخطط الظهري (المذنبة-putamen) ارتبط أيضا مع DA-بوساطة تغذية 22،23. اقترح كيلي 24-27 أن هذه المشاريع متعددةشكلت مناطق أيون من هذا النظام بوساطة DA-شبكة الدماغ توزيع متكاملة وتفاعلية من خلال الترابط واسعة وحميمة 28-34.

بالإضافة إلى قدرة DA D1 و D2 مستقبلات للحد من تناول السكريات والدهون 35-37 38-40، كما تورطت DA الإشارات في التوسط في قدرة السكريات والدهون لإنتاج تفضيلات نكهة مكيفة (CFP) 41- 46. إبر دقيقة جدا من مستقبلات DA D1 في حلف شمال الأطلسي، AMY أو mPFC 47-49 القضاء على اكتساب CFP التي تسببها الجلوكوز المعدي. في حين إبر دقيقة جدا إما DA D1 أو D2 مستقبلات في mPFC يزيل اكتساب الفركتوز CFP 50، يتم حظر اقتناء والتعبير من الفركتوز CFP تفاضلي قبل الخصوم DA في حلف شمال الأطلسي وAMY 51،52.

وقد استخدمت هذه التقنية 53،54-ج منظمات المزارعين للتحقيق activatio العصبيالناجم ن قبل تناول قبولا وتفعيل العصبي. مصطلح "تفعيل ج فو" سوف تستخدم في جميع أنحاء مخطوطة، ويعرف من الناحية التشغيلية من زيادة النسخ من ج-فو خلال الاستقطاب الخلايا العصبية. زيادة تناول السكروز مكتب الإحصاء الاتحادي مثل مناعية (FLI) في النواة AMY المركزية وVTA فضلا عن قذيفة، ولكن ليس الأساسية، من NAC 55-57. في حين أن تناول السكروز في الجرذان الرضاعة صورية زيادة كبيرة FLI في AMY وحلف شمال الأطلسي، ولكن ليس VTA 58، داخل المعدة السكروز أو الغلوكوز ضخ زيادة كبيرة FLI في حلف شمال الأطلسي ونوى المركزية وbasolateral من AMY 59،60. بالإضافة المتكررة من السكروز إلى الوصول تشاو المقرر زادت FLI في mPFC فضلا عن قذيفة NAC والأساسية 61. وكشف السكروز تركيز بالاستعداد النموذج أن أكبر الزيادات FLI وقعت في AMY basolateral وحلف شمال الأطلسي، ولكن ليس VTA 62. بعد تكييف، انقراض ريوا الطبيعي ذات الصلة السكرزادت السلوكيات الثالثة FLI في AMY basolateral وNAC 63. وعلاوة على ذلك، أدى الاقتران توافر السكر لهجة في لهجة زيادة في وقت لاحق مستويات FLI في AMY basolateral 64. كما زادت كمية عالية من الدهون FLI في مواقع NAC وmPFC 65-67.

معظم الدراسات المذكورة سابقا فحص السكر وآثار الدهون على تفعيل ج منظمات المزارعين في مواقع واحدة التي لا توفر المعلومات حول تحديد شبكات الدماغ وزعت ذات الصلة مكافأة 24-27. وعلاوة على ذلك، فإن العديد من الدراسات أيضا لم تحدد المساهمات النسبية للمناطق الفرعية لحلف شمال الأطلسي (الأساسية وقذيفة)، AMY (basolateral والقشرة-وسطي المركزي) وmPFC (الحوف وinfralimbic) التي يمكن أن يتم دراستها من قبل ميزة ممتازة المكاني، قرار وحيد الخلية في رسم الخرائط ج-فو 68. مختبرنا 69 استخدمت مؤخرا ج فو تفعيل والتعديلات قياسها في وقت واحد في مسار VTA DA والمؤيدمناطق jection (NAC، AMY وmPFC) بعد تناول الرواية من الدهون والسكريات في الفئران. تصف الدراسة الحالية الخطوات الإجرائية والمنهجية لتحليل في وقت واحد ما إذا كان التعرض الحاد لستة حلول مختلفة (زيت الذرة، الجلوكوز، الفركتوز، والسكرين والمياه والتحكم مستحلب الدهون) من شأنها تفعيل تفاضلي FLI في المناطق الفرعية لحلف شمال الأطلسي، AMY، mPFC فضلا عن المخطط الظهرية. هذا الكشف في وقت واحد من الاختلافات يسمح تأكيد آثار كبيرة على FLI في كل موقع، وتحديد ما إذا كانت التغييرات في موقع واحد معين يرتبط مع التغييرات في المواقع ذات الصلة، وبالتالي توفير الدعم لشبكة الدماغ وزعت 24-27. هذه الإجراءات اختبار ما إذا كان VTA، والحوف وinfralimbic mPFC، جوهر وقذيفة من حلف شمال الأطلسي، وAMY basolateral والقشرة المركزية-وسطي)، وكذلك المخطط الظهري أن العرض تنسيق وتفعيل FLI في وقت واحد بعد عن طريق الفم، وتناول الغير مشروط من الجلوكوز (8٪) وسكر الفواكه (8٪) وزيت الذرة (3.5٪) والحلول السكرين (0.2٪).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تمت الموافقة على هذه البروتوكولات التجريبية لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي تثبت أن جميع الموضوعات والإجراءات وفقا لالمعاهد الوطنية للصحة الدليل للرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية.

1. المواد الدراسية

  1. شراء و / أو سلالة الذكور سبراغ داولي الفئران (260-300 ز).
  2. الفئران منزل على حدة في أقفاص سلكية. المحافظة عليها في 12:12 ساعة دورة الضوء / الظلام مع طعام الفئران والمياه المتاحة الإرضاع بحسب الرغبة.
  3. تعيين أحجام العينات المناسبة (على سبيل المثال، ن ≈ 6-8) عشوائيا إلى مجموعات.

2. جهاز والسعرات إجراءات الاختبار

  1. استخدام أنابيب الطرد المركزي معايرة مع سدادات المطاط وزاوية 45 درجة أنبوب sipper المعادن لتوفير قياسات دقيقة (± 0.1 مل) من الحلول المقدمة. تأمينها لأقفاص المنزل من قبل الربيع المعادن مشدود للسماح تسليط الضوء على المعايرة.
  2. تقييد الحصص الغذائية (~15 / ز / يوم) من الفئران لخفض الوزن إلى 85٪ من وزن الجسم الأصلي للزيادة الحافز للاستهلاك الحلول. ملاحظة: إنقاص الوزن يجب أن يستغرق ما بين 3-5 أيام.
  3. توفير حلول قبل التدريب (10 مل) من 0.2٪ السكرين لمدة أربعة أيام على جلسة 1 ساعة لتحقيق أقصى قدر من احتمال أن الفئران التي سوف أخذ عينات من حلول اختبار لاحقة قصيرة (أقل من 1 دقيقة) الكمون.
  4. تأكيد التدفق من خلال أنبوب الطرد المركزي بإراقة بضع قطرات.
  5. وزن الأنابيب قبل وبعد كل دورة للحصول على قياس المدخول.
  6. إجراء اختبار تناول في اليوم الخامس على مجموعات فرعية تلقي واحد من ستة حلول (10 مل، 1 ساعة): أ) الماء، ب) رواية النكهة (0.05٪ نكهة الكرز) 0.2٪ السكرين، ج) 8٪ سكر الفواكه، د) 8 ٪ جلوكوز، ه) 3.5٪ زيت الذرة معلقة في 0.3٪ زنتان الصمغ، و) 0.3٪ زنتان الصمغ.
  7. تأكد من أن المحاليل الغذائية هي متساوي الكالوريات. وبالتالي، فإن تركيز الذرة والنفط 3.5٪ غير متساوي الكالوريات إلى حلول السكر 8٪.
  8. ضمان عشرفي حلول عينة الفئران مع الكمون قصيرة (أقل من 1 دقيقة). إذا لم يتحقق هذا الشرط، ثم تجاهل الموضوع من الدراسة.

3. الأنسجة التحضير

  1. تخدير كل حيوان عن طريق الحقن داخل الصفاق من بنتوباربيتال 90 دقيقة بعد التعرض الأولي لكل حل الاختبار. تأكد من أن الحيوانات هي تخدير بشكل صحيح من قبل مما يدل على أن الحيوان لم يعد يستجيب لمثل هذه ردود الفعل كما انسحاب لقرصة القدم، وامض بعد ضغوط القرنية مباشرة أو يهز رأسه لتحفيز الصيوان الشديد.
  2. يروي كل حيوان transcardially كما هو موضح سابقا 69.
    1. تخدير الفئران مع جرعة زائدة من الصوديوم (65 ملغ / كلغ)، وإزالة القفص الصدري وكشف الصدر عن حرية الوصول إلى قلب 69.
    2. وضع إبرة في قمة صمام القلب الأيسر، وقطع الوريد الأجوف. إدارة الفوسفات حل العازلة (PBS، ~ 180 مل) تليها شارك تثبيتي الفوسفاتntaining 4٪ امتصاص العرق (~ 180 مل).
    3. التأكد من أن الحيوان في الواقع يجري perfused بشكل صحيح من خلال دراسة ما إذا كان السائل هو ترك تجاويف أخرى، مثل الأنف والفم والمناطق التناسلية. ملاحظة: سيرافق التثبيت السليم مع امتصاص العرق من قبل حركات العضلات الكبيرة. إذا كان هذا لا يحدث، وإعادة ضبط الإبرة حتى يحدث هذا التفاعل.
  3. إزالة الدماغ من الجمجمة بسرعة عن طريق قطع الفراء والجلد بعيدا عن الجمجمة. استخدام رينجرز للقضاء وإزالة العظام من الدماغ تتحرك من الخلف إلى الأمام. عمل في البداية في منطقة أسفل وخلف المخيخ، وضمان أن مقراض ما بين العظم والسحائية الأم الحنون. حالما تتم إزالة الجزء العلوي وجوانب الجمجمة، استخدم ملعقة صغيرة لرفع الدماغ من القاعدة، وقص الأعصاب القحفية مع مقص صغير. يجب الحرص على عدم تلف الدماغ أثناء محاولة إزالة العظام.
  4. إصلاح العقول في حل بارافورمالدهيد 4٪ بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.وضع العقول في السكروز 30٪ / 70٪ محلول برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة حتى يستقر في قاع الإناء.
  5. منع الدماغ
    1. إزالة جزء منقاري من الدماغ قطع الذيلية بالعرض إلى البصلة الشمية.
    2. إزالة جزء الذيلية من الدماغ قطع بالعرض على مستوى المخيخ والجسر.
  6. جبل الدماغ coronally مع الجزء الذيلية الثابتة إلى مرحلة مشراح انزلاق، وقطع المقاطع الاكليلية (40 ميكرون) من خلال mPFC (2،86-2،20 مم منقاري إلى bregma)، جوهر NAC وقذيفة وظهري المخطط (+ 1،76-1،60 مم منقاري إلى bregma)، وإيمي (-2.12 - -2.92 ملم الذيلية إلى bregma)، وVTA (-5.20 - -5.60 ملم الذيلية إلى bregma). استخدام الفئران أطلس الدماغ 70 للاسترشاد بها.
  7. جمع المقاطع التعويم الحر في الآبار الفردية من 24 لوحة جيدا مليئة برنامج تلفزيوني لتحليل المناعى في نهاية المطاف 71. استخدام بارافيلم لاغلاق نحن 24لوحة ليرة لبنانية للتأكد من أن برنامج تلفزيوني لا تتبخر في الحاوية وتجفيف الدماغ. تخزين أنسجة المخ في 4 درجات مئوية.

4. إجراءات-ج منظمات المزارعين (مقتبس من 71)

  1. علاج كل قسم مع 5 مل من 5٪ مصل الماعز العادي و 0.2٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة.
  2. احتضان أقسام تعامل مع الأجسام المضادة الأولية (أرنب المضادة للج-مكتب الإحصاء الاتحادي، 1: 5000) في 4 درجة مئوية لمدة 36 ساعة في الآبار التي تحتوي على 1 مل من برنامج تلفزيوني.
  3. 3X أقسام شطف مع برنامج تلفزيوني (5 مل) لمدة 10 دقيقة لكل منهما.
  4. احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية (المعقدة البيروكسيديز الماعز المضادة للأرنب، 1: 200) في RT لمدة 2 ساعة في الآبار التي تحتوي على 1 مل من برنامج تلفزيوني.
  5. شطف كل قسم 3X في برنامج تلفزيوني (5 مل) لمدة 10 دقيقة لكل منهما.
  6. احتضان أقسام تشطف لمدة 2 ساعة في المتاحة تجاريا البيروكسيديز خليط أفيدين-الفجل الذي يأتي في مجموعة مكونة من Avadin درهم (100 ميكرولتر) والبيروكسيديز الفجل البيروكسيد H (100 ميكرولتر) في 5 مل من برنامج تلفزيوني.
  7. إعادة شطف 3X المقاطع في الجريدة الرسميةS (5 مل) لمدة 10 دقيقة لكل منهما.
  8. تتفاعل الأقسام مع 0.05٪ diaminobenzidine (DAB) في وجود 0.0015٪ H 2 O 2 ل5-10 دقائق، وهذا يتوقف على تفاعل النسيج في الآبار التي تحتوي على 5 مل من محلول DAB.
  9. المزدوج تسمية أقسام VTA. احتضان لهم هيدروكسيلاز التيروزين (TH) الأجسام المضادة (أرنب مكافحة الفئران TH، 1: 2000) في برنامج تلفزيوني (5 مل) بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
  10. 3X شطف المقاطع في برنامج تلفزيوني (5 مل) لمدة 10 دقيقة لكل منهما.
  11. احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية (الماعز البيروكسيديز المضادة للأرنب، 1: 200) في برنامج تلفزيوني (5 مل) في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة.
  12. 3X شطف المقاطع في برنامج تلفزيوني (5 مل) لمدة 10 دقيقة لكل منهما.
  13. تصور الأجسام المضادة باستخدام مجمع الأضداد البيروكسيديز الثانوي. تتفاعل مع مجموعة من 0،05٪ DAB و 0.3٪ محلول كبريتات النيكل، ل5-10 دقائق، وهذا يتوقف على رد فعل الأنسجة في الآبار التي تحتوي على 5 مل من DAB / حل NiCl.
  14. تأكد من أن حل DAB هو حليبي اللون الأخضر الفاتح اللون منهرد فعل مع كبريتات النيكل بنسبة 0.3٪. إذا كان هذا الحل هو أخضر جدا، ثم رد الفعل سيكون مظلما للغاية.
  15. تحميل كافة الفروع على الشرائح المغلفة الجيلاتين. دعهم بين عشية وضحاها الجافة، ومن ثم تغطية للانزلاق مع بضع قطرات من الحل القائم على التولوين (TBS).
  16. الشرائح التعليمات البرمجية بحيث حالة تجريبية غير معروفة للمراقبين.

5. تحديد ج-مكتب الإحصاء الاتحادي مناعيا التهم

  1. تعيين أزواج من المراقبين غير منحازة لحساب الخلايا العصبية فو-إيجابية في هذه المناطق ذات الاهتمام (ROI): الحوف mPFC، infralimbic mPFC، NAC الأساسية، NAC قذيفة، نوى AMY basolateral، AMY المركزية-القشرة-وسطي، الظهرية المخطط، وVTA. تحدد ما إذا كان ج-فو مناعية موجودة في TH + وTH- الخلايا في VTA الشكل 1 يقدم صورة الملتقطة شاشة NAC من المجهر.

figure-protocol-1
الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. تحليل لا يقل عن ثلاث شرائح تمثيلية لكل موقع مشترك لجميع الحيوانات في جميع الظروف الاختبار.
  2. استخدام البرمجيات والمجهر الضوئي لتحليل المنطقة بأسرها لكل العائد على الاستثمار عن طريق تتبع الخطوط العريضة (الشكل 1).
    1. لموقع معين، افتح التطبيق وانقر على القائمة المنسدلة الاستحواذ وانقر على "صورة لايف". تحقيق العائد على الاستثمار في التركيز وانقر على الشاشة لإنشاء نقطة مرجعية. ثم آرالآس منطقة الدماغ اختيار باستخدام الشبكة كدليل. بمجرد الانتهاء من التتبع، عد خلايا (الخطوات 5.3.1.1 - 5.3.1.3).
      1. انقر نقرا مزدوجا فوق رمز البرنامج. انتقل إلى شريط القائمة، انقر على "شراء" ثم "صورة لايف". تحقيق العائد على الاستثمار في التركيز وانقر على الشاشة لإنشاء نقطة مرجعية.
      2. انتقل إلى شريط الأدوات شبكة وانقر على "العرض الشبكة" و "تسميات استخدام شبكة". الخطوط العريضة للالعائد على الاستثمار مع اثر محددة سلفا.
      3. عدد جميع الخلايا في كل منطقة العائد على الاستثمار، حدد "+" في الشريط الجانبي الأيسر للحفاظ على عدد من الخلايا ج منظمات المزارعين. انقر فوق كل خلية منفردة لتسجيل التهم الموجهة إليه. النظر في خلية إيجابية لج-مكتب الإحصاء الاتحادي عندما لوحظ دائرة حمراء داكنة محددة (الشكل 1).
    2. كرر هذه العملية لكل موقع.
    3. بحساب سجل في دفتر المختبر وعلى الكمبيوتر لتحليل المستقبل. انتقل إلى شريط القائمة، انقر على "ملف"، "ملف حفظ بيانات" لحفظ تتبع والتهم الموجهة إليه.
      4. رأ>
  3. ضمان موثوقية بين المقيم (باستخدام ارتباط من التهم) من اثنين من ذوي المرتبة جهل لكل قسم في كل العائد على الاستثمار يتجاوز دائما 0.8.

6. الاحصائيات

  1. تقييم مآخذ السكرين الأساسية خلال الأيام الأربعة الأولى باستخدام المتكررة تدابير تحليل 1-طريقة التباين (ANOVA) مقارنة مآخذ السكرين من أيام 1 و 2 و 3 و 4 69.
  2. قارن تناول السكرين (يوم 4) مع مآخذ اختبار (يوم 5) مجموعة من المجموعات الست باستخدام العشوائية كتلة 2-طريقة أنوفا 69.
  3. استخدام المقارنات توكي (ع <0.05) لتحديد آثار كبيرة الفردية 69.
  4. تحديد موثوقية بين المقيم، ومن ثم استخدام التهم مراقب العادى.
  5. متوسط ​​التهم-ج منظمات المزارعين لشرائح تمثيلية ثلاثة لكل موقع 69.
    1. إجراء 1-طريقة أنوفا من تفعيل ج منظمات المزارعين الناجم عن تناول الحلول ستة (3.5٪ زيت الذرة، و 8٪ الجلوكوز، الفركتوز 8٪، 0.2٪ السكرين النكهة، XAالسيطرة nthan اللثة والماء) لperilimbic mPFC 69.
    2. تحليلات موازية كرر مجموعة من المجموعات الست لinfralimbic mPFC، NAC الأساسية، NAC قذيفة، basolateral AMY، AMY المركزية-القشرة-وسطي، VTA والمخطط الظهرية. استخدام المقارنات توكي (ع <0.05) للكشف عن آثار كبيرة الفردية 69.
  6. مقارنة كمية زيت الذرة مع كل من كمية الماء وتناول وكيل تعليقها، صمغ زنتان. مقارنة سكر الفواكه والجلوكوز مآخذ مع كل من كمية الماء وكمية من مادة التحلية غير الغذائية، السكرين.
  7. تحديد ما إذا كان لوحظت علاقة مهمة بين مآخذ حل وج فو التنشيط في كل موقع من المواقع باستخدام الارتباطات ص بونفيروني (ع <0.05).
    1. مقارنة منهجية عمليات العد ج مكتب الإحصاء الاتحادي في perilimbic وinfralimbic القشرة قبل الجبهية لكل حيوان في مجموعة زيت الذرة 3.5٪.
    2. كرر تحليلات موازية بشكل منهجي من كل زوج من المواقع الستة (VTA، المخطط الظهري، infralimحلبة البحرين الدولية mPFC، perilimbic mPFC، NAC الأساسية، NAC قذيفة، basolateral AMY، وسط-القشرة-وسطي AMY) لزيت الذرة 3.5٪.
    3. كرر تحليلات موازية بشكل منهجي من هذه المواقع الستة لخمسة شروط تناول التجريبية الأخرى (8٪ الجلوكوز، الفركتوز 8٪، 0.2٪ السكرين النكهة، ومراقبة الصمغ زنتان والمياه).
  8. الاستفادة من حقيقة أن الحيوانات نفسها في حالة الحل تم تقييمها في جميع المواقع من خلال تحديد العلاقات الهامة بين تفعيل ج منظمات المزارعين عبر حلول وداخل كل الحل باستخدام بونفيروني ص الارتباط (ع <0.05).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تم نشر جميع نتائج ممثل موضح أدناه قبل 69 عاما، ويعاد قدمت هنا لدعم "دليل على مفهوم" في يشير إلى فعالية هذه التقنية.

حل الكميات
وقد لوحظت فروق ذات دلالة إحصائية في مآخذ السكرين الأساسية خلال الأيام الأربعة الأولى لجميع الحيوانات (F (3108) = 57.27، ف <0.001) مع مآخذ (يوم 1: 1.3 (± 0.2) مل، يوم 2: 3.9 (± 0.4) مل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكان الهدف من هذه الدراسة هو تحديد ما إذا كان المصدر (VTA) والدماغ الأمامي أهداف الإسقاط (NAC، AMY، mPFC) من الخلايا العصبية ذات الصلة مكافأة DA تم تفعيلها في وقت واحد بعد تناول الرواية من الدهون والسكر في الفئران باستخدام الخلايا تقنية ج فو . الدراسة الحالية هي عبارة عن وصف مفصل للبروتوكولات دراسة نشرت سابقا 69. كان الافتراض أن VTA، مناطقها إسقاط الرئيسية للالحوف وinfralimbic mPFC، جوهر وقذيفة من NAC وAMY basolateral والقشرة المركزية-وسطي، فضلا عن المخطط الظهري سيكون ب...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بفضل ديانا إيكاثا-Culaki، كريستال سامبسون وTheologia Karagiorgis على عملهم الشاق في هذا المشروع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي> المعدات< / قوي> سبراج
داولي الفئرانمختبرات نهر تشارلزCD-1
أقفاص سلكيةمنتجات مختبر ، سيفورد ، DE30-Cage رف
الفئران تشاوPMI التغذية الدولية5001
الربيع المعدنية المشدودة، سيفورد ، DEn / A
ميزان وزن الفئرانشركة فيشر العلميةغير متوفرة في
مختبر أنابيب الطرد المركزي Nalgene، Seaford ، DE10-0501
السدادة المطاطية، Seaford ، DEn / A
الغربال المعدني، Seaford ، DEn / A
SaccharinSigma Chemical Co82385-42-0
Kool-Aid ، CherryKool-Aidالتجارية
Kool-Aid ، العنبKool-Aidالتجاري
الفركتوزSigma Chemical CoF0127
GlucoseSigma Chemical CoG8270
زيت الذرةMazzolaالتجاري
Xanthan GumSigma Chemical Co11138-66-2
Sliding Microtomeميكروم الدوليةن / أ
Neurolucida CameraMBF Bioscienceتطبيق
الشرائح المطلية بالجيلاتينشركة فيشر العلمية12-550-343
غطاءزجاجي شركة فيشر العلمية12-545-M
فرش نايلون ذهبيةLoew-Cornell   ؛2037
السمور للشعر الطبيعي Loew-Cornell 2022
24 لوحة آبارفيشر سيانتيفك3527
6 ألواح آبارفيشر سيانتيفك3506
زجاجات بيركس 1 لترفيشر ساينتفيك1395-1 لتر
إدراج الأنسجة (مصفاة الأنسجة)فيشر 7200214
النسر  أدوات الدقة العالميةE10 ل 1-10 &# 956 ؛ ل
ماصات النسر أدوات الدقة العالميةE100 ل 20-100 &# 956 ؛ ل
ماصات النسر أدوات الدقة العالميةE200 ل 50-200 &# 956 ؛ ل
ماصات النسر أدوات الدقة العالميةE1000 ل 100-1000&# 956; ل
ماصات النسر أدوات الدقة العالميةE5000 ل 1000-5000&# 956; l 
نصائح عالمية .1-10 &# 956; لأدوات الدقة العالمية500192
نصائح عالمية 5-200 &# 956 ؛ لأدوات الدقة العالمية500194
نصائح عالمية 500-5,000 &# 956 ؛ لأدوات الدقة العالمية500198
شفرة Vibroslice 100World Precision InstrumentsBLADE
DPX Mounting Medium   ؛المجهر الإلكتروني 13510
أنابيب الطرد المركزي سعة 15 مل شركةBiologix Research Co.10-0501
صناديق الشرائحبيولوجيكس للأبحاث41-6100
شاكر مداري شركة مادل   ZD-9556
وزن القوارب  فيشر ساينتفيك02-202-100
5 مل ماصات يمكن التخلص منهافيشر ساينتفيك13-711-5AM
برنامج محقق ستيريوبرنامج مايكرو برايت
<قوي>الاسم<قوي>الشركة<قوي>رقم الكتالوج<قوي>تعليقات
<قوي > الكواشف < / قوي >
بارافورمالدهيد حبيباتفيشر علمي19210
كلوريد الصوديومفيشر العلميS271-1
الصوديوم فوفات أحادي القاعدةفيشر العلميS468-500
فوسفات الصوديوم ثنائي الالأطوارفيشر العلميBP332-500
الهيدروجين بيروكسيد  فيشر ScientificH324-500
SafeClear II   ؛فيشر ساينتفيك23-044-192
الميثانول فيشر ScientificA412-1
ناقلاتمصل الماعز العاديS-1000
البيوتينيل المضاد للأرانب IgG (H + L)VectorBA-1000
ABC Kit بيروكسيداز القياسيPK-4000
Anti-cFos (Ab-5) RabbitEMD chem / Cal BiochemPC38
Triton X 100SigmaAldrichX-100
3،3 'ديامينوبينزيدين تترا هيدروكلوريد SigmaAldrichD5905
هيدروكسيد الصوديومSigmaAldrich5881
الأساسي TH المضاد للجسمEMD MilliporeAB152
EuthosolVirbac AH
منتجات مختبر منتجات منتجات مختبر منتجات مختبرالبرمجيات ماصات شركة تطبيق فيلد

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Koob, G. F. Neural mechanisms of drug reinforcement. Ann. N.Y. Acad. Sci. 654, 171-191 (1992).
  2. Wise, R. A. Role of brain dopamine in food reward. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 361, 1149-1158 (2006).
  3. Salamone, J. D., Correa, M. The mysterious motivational functions of mesolimbic dopamine. Neuron. 76, 470-485 (2012).
  4. Horvitz, J. C., Choi, W. Y., Morvan, C., Eyny, Y., Balsam, P. D. A "good parent" function of dopamine: transient modulation of learning and performance during early stages of training. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1104, 270-288 (2007).
  5. Wickens, J. R., Horvitz, J. C., Costa, R. M., Killcross, S. Dopaminergic mechanisms in actions and habits. J. Neurosci. 27, 8181-8183 (2007).
  6. Bjorklund, A., Dunnett, S. B. Dopamine neuron systems in the brain: an update. Trends Neurosci. 30, 194-202 (2007).
  7. Swanson, L. W. The projections of the ventral tegmental area and adjacent regions: a combined fluorescent retrograde tracer and immunofluorescence study in the rat. Brain Res. Bull. 9, 321-353 (1982).
  8. Cacciapaglia, F., Wrightman, R. M., Careli, R. M. Rapid dopamine signaling differentially modulates distinct microcircuits within the nucleus accumbens during sucrose-directed behavior. J. Neurosci. 31, 13860-13869 (2011).
  9. Martinez-Hernandez, J., Lanuza, E., Martinez-Garcia, F. Selective dopaminergic lesions of the ventral tegmental area impair preference for sucrose but not for male sex pheromones in female mice. Eur. J. Neurosci. 24, 885-893 (2006).
  10. Bassareo, V., Di Chiara, G. Differential influence of associative and nonassociative learning mechanisms on the responsiveness of prefrontal and accumbal dopamine transmission to food stimuli in rats fed ad libitum. J. Neurosci. 17, 851-861 (1997).
  11. Bassareo, V., Di Chiara, G. Differential responsiveness of dopamine transmission to food-stimuli in nucleus accumbens shell/core compartments. Neurosci. 89, 637-641 (1999).
  12. Cheng, J., Feenstra, M. G. Individual differences in dopamine efflux in nucleus accumbens shell and core during instrumental conditioning. Learn. Mem. 13, 168-177 (2006).
  13. Genn, R. F., Ahn, S., Phillips, A. G. Attenuated dopamine efflux in the rat nucleus accumbens during successive negative contrast. Behav. Neurosci. 118, 869-873 (2004).
  14. Hajnal, A., Norgren, R. Accumbens dopamine mechanisms in sucrose intake. Brain Res. 904, 76-84 (2001).
  15. Hajnal, A., Smith, G. P., Norgren, R. Oral sucrose stimulation increases accumbens dopamine in the rat. Am. J. Physiol. 286, R31-R37 (2003).
  16. Bassareo, V., Di Chiara, G. Modulation of feeding-induced activation of mesolimbic dopamine transmission by appetitive stimuli and its relation to motivational state. Eur. J. Neurosci. 11, 4389-4397 (1999).
  17. Hajnal, A., Lenard, L. Feeding-related dopamine in the amygdala of freely moving rats. Neuroreport. 8, 2817-2820 (1997).
  18. Bassareo, V., De Luca, M. A., Di Chiara, G. Differential expression of motivational stimulus properties by dopamine in nucleus accumbens shell versus core and prefrontal cortex. J. Neurosci. 22, 4709-4719 (2002).
  19. Feenstra, M., Botterblom, M. Rapid sampling of extracellular dopamine in the rat prefrontal cortex during food consumption, handling, and exposure to novelty. Brain Res. 742, 17-24 (1996).
  20. Hernandez, L., Hoebel, B. G. Feeding can enhance dopamine turnover in the prefrontal cortex. Brain Res. Bull. 25, 975-979 (1990).
  21. Liang, N. C., Hajnal, A., Norgren, R. Sham feeding corn oil increases accumbens dopamine in the rat. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 291, R1236-R1239 (2006).
  22. Dunnett, S. B., Iversen, S. D. Regulatory impairments following selective kainic acid lesions of the neostriatum. Behav. Brain Res. 1, 497-506 (1980).
  23. Salamone, J. D., Zigmond, M. J., Stricker, E. M. Characterization of the impaired feeding behavior in rats given haloperidol or dopamine-depleting brain lesions. Neurosci. 39, 17-24 (1990).
  24. Kelley, A. E. Ventral striatal control of appetitive motivation: role in ingestive behavior and reward-related learning. Neurosci. Biobehav. Rev. 27, 765-776 (2004).
  25. Kelley, A. E. Memory and addiction: shared neural circuitry and molecular mechanisms. Neuron. 44, 161-179 (2004).
  26. Kelley, A. E., Baldo, B. A., Pratt, W. E. A proposed hypothalamic-thalamic-striatal axis for the integration of energy balance, arousal and food reward. J. Comp. Neurol. 493, 72-85 (2005).
  27. Kelley, A. E., Baldo, B. A., Pratt, W. E., Will, M. J. Corticostriatal-hypothalamic circuitry and food motivation: integration of energy, action and reward. Physiol. Behav. 86, 773-795 (2005).
  28. Berendse, H. W., Galis-de-Graaf, Y., Groenewegen, H. J. Topographical organization and relationship with ventral striatal compartments of prefrontal corticostriatal projections in the rat. J. Comp. Neurol. 316, 314-347 (1992).
  29. Brog, J. S., Salyapongse, A., Deutch, A. Y., Zahm, D. S. The patterns of afferent innervation of the core and shell in the "accumbens" part of rat ventral striatum: immunohistochemical detection of retrogradely transported fluoro-gold. J. Comp. Neurol. 338, 255-278 (1993).
  30. McDonald, A. J. Organization of amygdaloid projections to the prefrontal cortex and associated stritum in the rat. Neurosci. 44, 1-14 (1991).
  31. McGeorge, A. J., Faull, R. L. The organization of the projection from the cerebral cortex to the striatum in the rat. Neurosci. 29, 503-537 (1989).
  32. Sesack, S. R., Deutch, A. Y., Roth, R. H., Bunney, B. S. Topographical organization of the efferent projections of the medial prefrontal cortex in the rat: an anterograde tract-tracing study with Phaseolus vulgaris leucoagglutinin. J. Comp. Neurol. 290, 213-242 (1989).
  33. Wright, C. I., Beijer, A. V., Groenewegen, H. J. Basal amygdaloid complex afferents to the rat nucleus accumbens are compartmentally organized. J. Neurosci. 16, 1877-1893 (1996).
  34. Wright, C. I., Groenewegen, H. J. Patterns of convergence and segregation in the medial nucleus accumbens of the rat: relationships of prefrontal cortical, midline thalamic and basal amygdaloid afferents. J. Comp. Neurol. 361, 383-403 (1995).
  35. Geary, N., Smith, G. P. Pimozide decreases the positive reinforcing effect of sham fed sucrose in the rat. Pharmacol. Biochem. Behav. 22, 787-790 (1985).
  36. Muscat, R., Willner, P. Effects of selective dopamine receptor antagonists on sucrose consumption and preference. Psychopharmacol. 99, 98-102 (1989).
  37. Schneider, L. H., Gibbs, J., Smith, G. P. D-2 selective receptor antagonists suppress sucrose sham feeding in the rat. Brain Res. Bull. 17, 605-611 (1986).
  38. Baker, R. W., Osman, J., Bodnar, R. J. Differential actions of dopamine receptor antagonism in rats upon food intake elicited by mercaptoacetate or exposure to a palatable high-fat diet. Pharmacol. Biochem. Behav. 69, 201-208 (2001).
  39. Rao, R. E., Wojnicki, F. H., Coupland, J., Ghosh, S., Corwin, R. L. Baclofen, raclopride and naltrexone differentially reduce solid fat emulsion intake under limited access conditions. Pharmacol. Biochem. Behav. 89, 581-590 (2008).
  40. Weatherford, S. C., Smith, G. P., Melville, L. D. D-1 and D-2 receptor antagonists decrease corn oil sham feeding in rats. Physiol. Behav. 44, 569-572 (1988).
  41. Azzara, A. V., Bodnar, R. J., Delamater, A. R., Sclafani, A. D1 but not D2 dopamine receptor antagonism blocks the acquisition of a flavor preference conditioned by intragastric carbohydrate infusions. Pharmacol. Biochem. Behav. 68, 709-720 (2001).
  42. Baker, R. M., Shah, M. J., Sclafani, A., Bodnar, R. J. Dopamine D1 and D2 antagonists reduce the acquisition and expression of flavor-preferences conditioned by fructose in rats. Pharmacol. Biochem. Behav. 75, 55-65 (2003).
  43. Dela Cruz, J. A., Coke, T., Icaza-Cukali, D., Khalifa, N., Bodnar, R. J. Roles of NMDA and dopamine D1 and D2 receptors in the acquisition and expression of flavor preferences conditioned by oral glucose in rats. Neurobiol. Learn. Mem. 114, 223-230 (2014).
  44. Dela Cruz, J. A., et al. Roles of dopamine D1 and D2 receptors in the acquisition and expression of fat-conditioned flavor preferences in rats. Neurobiol. Learn. Mem. 97, 332-337 (2012).
  45. Yu, W. Z., Silva, R. M., Sclafani, A., Delamater, A. R., Bodnar, R. J. Pharmacology of flavor preference conditioning in sham-feeding rats: effects of dopamine receptor antagonists. Pharmacol. Biochem. Behav. 65, 635-647 (2000).
  46. Yu, W. Z., Silva, R. M., Sclafani, A., Delamater, A. R., Bodnar, R. J. Role of D(1) and D(2) dopamine receptors in the acquisition and expression of flavor-preference conditioning in sham-feeding rats. Pharmacol. Biochem. Behav. 67 (1), 537-544 (2000).
  47. Touzani, K., Bodnar, R. J., Sclafani, A. Activation of dopamine D1-like receptors in nucleus accumbens is critical for the acquisition, but not the expression, of nutrient-conditioned flavor preferences in rats. Eur. J. Neurosci. 27, 1525-1533 (2008).
  48. Touzani, K., Bodnar, R. J., Sclafani, A. Dopamine D1-like receptor antagonism in amygdala impairs the acquisition of glucose-conditioned flavor preference in rats. Eur. J. Neurosci. 30, 289-298 (2009).
  49. Touzani, K., Bodnar, R. J., Sclafani, A. Acquisition of glucose-conditioned flavor preference requires the activation of dopamine D1-like receptors within the medial prefrontal cortex in rats. Neurobiol. Learn. Mem. 94, 214-219 (2010).
  50. Malkusz, D. C., et al. Dopamine signaling in the medial prefrontal cortex and amygdala is required for the acquisition of fructose-conditioned flavor preferences in rats. Behav. Brain Res. 233, 500-507 (2012).
  51. Bernal, S. Y., et al. Role of dopamine D1 and D2 receptors in the nucleus accumbens shell on the acquisition and expression of fructose-conditioned flavor-flavor preferences in rats. Behav. Brain Res. 190, 59-66 (2008).
  52. Bernal, S. Y., et al. Role of amygdala dopamine D1 and D2 receptors in the acquisition and expression of fructose-conditioned flavor preferences in rats. Behav. Brain Res. 205, 183-190 (2009).
  53. Dragunow, M., Faull, R. The use of c-fos as a metabolic marker in neuronal pathway tracing. J. Neurosci. Methods. 29, 261-265 (1989).
  54. VanElzakker, M., Fevurly, R. D., Breindel, T., Spencer, R. L. Environmental novelty is associated with a selective increase in Fos expression in the output elements of the hippocampal formation and the perirhinal cortex. Learn. Mem. 15, 899-908 (2008).
  55. Norgren, R., Hajnal, A., Mungarndee, S. S. Gustatory reward and the nucleus accumbens. Physiol. Behav. 89, 531-535 (2006).
  56. Park, T. H., Carr, K. D. Neuroanatomical patterns of fos-like immunoreactivity induced by a palatable meal and meal-paired environment in saline- and naltrexone-treated rats. Brain Res. 805, 169-180 (1998).
  57. Zhao, X. L., Yan, J. Q., Chen, K., Yang, X. J., Li, J. R., Zhang, Y. Glutaminergic neurons expressing c-Fos in the brainstem and amygdala participate in signal transmission and integration of sweet taste. Nan.Fang Yi.Ke.Da.Xue.Xue.Bao. 31, 1138-1142 (2011).
  58. Mungarndee, S. S., Lundy, R. F., Norgren, R. Expression of Fos during sham sucrose intake in rats with central gustatory lesions. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 295, R751-R763 (2008).
  59. Otsubo, H., Kondoh, T., Shibata, M., Torii, K., Ueta, Y. Induction of Fos expression in the rat forebrain after intragastric administration of monosodium L-glutamate, glucose and NaCl. Neurosci. 196, 97-103 (2011).
  60. Yamamoto, T., Sako, N., Sakai, N., Iwafune, A. Gustatory and visceral inputs to the amygdala of the rat: conditioned taste aversion and induction of c-fos-like immunoreactivity. Neurosci. Lett. 226, 127-130 (1997).
  61. Mitra, A., Lenglos, C., Martin, J., Mbende, N., Gagne, A., Timofeeva, E. Sucrose modifies c-fos mRNA expression in the brain of rats maintained on feeding schedules. Neurosci. 192, 459-474 (2011).
  62. Pecoraro, N., Dallman, M. F. c-Fos after incentive shifts: expectancy, incredulity, and recovery. Behav. Neurosci. 119, 366-387 (2005).
  63. Hamlin, A. S., Blatchford, K. E., McNally, G. P. Renewal of an extinguished instrumental response: Neural correlates and the role of D1 dopamine receptors. Neurosci. 143, 25-38 (2006).
  64. Kerfoot, E. C., Agarwal, I., Lee, H. J., Holland, P. C. Control of appetitive and aversive taste-reactivity responses by an auditory conditioned stimulus in a devaluation task: A FOS and behavioral analysis. Learn. Mem. 14, 581-589 (2007).
  65. Zhang, M., Kelley, A. E. Enhanced intake of high-fat food following striatal mu-opioid stimulation: microinjection mapping and fos expression. Neurosci. 99, 267-277 (2000).
  66. Teegarden, S. L., Scott, A. N., Bale, T. L. Early life exposure to a high fat diet promotes long-term changes in dietary preferences and central reward signaling. Neurosci. 162, 924-932 (2009).
  67. Del Rio, D., et al. Involvement of the dorsomedial prefrontal cortex in high-fat food conditioning in adolescent mice. Behav. Brain Res. 283, 227-232 (2015).
  68. Knapska, E., Radwanska, K., Werka, T., Kaczmarek, L. Functional internal complexity of amygdala: focus on gene activity mapping after behavioral training and drugs of abuse. Physiol. Rev. 87, 1113-1173 (2007).
  69. Dela Cruz, J. A. D., et al. c-Fos induction in mesotelencephalic dopamine pathway projection targets and dorsal striatum following oral intake of sugars and fats in rats. Brain Res. Bull. 111, 9-19 (2015).
  70. Paxinos, G., Watson, C. The rat brain in stereotaxic coordinates. , Elsevier. (2006).
  71. Ranaldi, R., et al. The effects of VTA NMDA receptor antagonism on reward-related learning and associated c-fos expression in forebrain. Behav. Brain Res. 216, 424-432 (2011).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

DAB

مقالات ذات صلة