نحن نقدم بروتوكولا مفصلا لمقايسة طول مسار ذبابة الفاكهة السوداء للبحث. نناقش إعداد الاختبار والتعامل معها ، وكيفية إجراء الفحص وتحليل البيانات.
مقالة منهجية
نحن نقدم بروتوكولا مفصلا لمقايسة طول مسار ذبابة الفاكهة السوداء للبحث. نناقش إعداد الاختبار والتعامل معها ، وكيفية إجراء الفحص وتحليل البيانات.
والدروسوفيلاميلانوجاستر اليرقات مسار بطول النمط الظاهري هو مقياس واستخدامها لدراسة المساهمات الوراثية والبيئية للتغيير السلوكي. وقد وضعت اليرقات فحص مسار طول لقياس الفروق الفردية في السلوك تستخدم علفا التي ارتبطت في وقت لاحق هذا الجين تستخدم علفا. اليرقات مسار طول هو سمة سجل بسهولة أن يسهل جمع عينات كبيرة الحجم، بأقل تكلفة ممكنة، لشاشات الوراثية. هنا نقدم وصفا مفصلا للبروتوكول الحالي لاليرقات فحص مسار بطول استخدم لأول مرة من قبل Sokolowski. تفاصيل البروتوكول كيفية التعامل مع بتكاثر حيوانات الاختبار، إجراء فحص السلوكية وتحليل البيانات. مثال عن كيفية الفحص يمكن استخدامها لقياس المرونة السلوكية في الاستجابة للتغيرات البيئية، من خلال بيئة تغذية التلاعب قبل إجراء الفحص، وتقدم أيضا. وأخيرا، تصميم الاختبار المناسب فضلا عن العوامل البيئية التي يمكن تعديلوتناقش اليرقات مسار بطول مثل نوعية الغذاء والعمر التنموي والآثار اليوم.
منذ اكتشاف الجين بيضاء في مختبر توماس مورغان في عام 1910، وقد استخدمت ذبابة الفاكهة، ذبابة الفاكهة (د البطن)، كنموذج لدراسة الأسس الجزيئية والفيزيولوجية للعمليات البيولوجية المختلفة. شعبية د. البطن ينبع إلى حد كبير من كمية كبيرة ومتنوعة من الأدوات الجينية. حجم ذبابة الفاكهة الصغير، وسهولة النسبية للمعالجة وتوليد وقت قصير يجعله نموذجا مثاليا للدراسات علم الوراثة. على قدم المساواة المهم هو قدرة ذبابة الفاكهة لاظهار العديد من الظواهر التي عبر عنها أكثر الكائنات الحية المعقدة بما فيها الثدييات. وهذا يشمل الظواهر المعقدة مثل السلوك التي تقف في واجهة بين الكائن الحي وبيئته. كما ساهمت هذه والدراسات السلوكية على ذبابة الفاكهة بشكل كبير في فهمنا لكيفية الجينات والبيئة تتوسط السلوك1.
واحدة من الدراسات الأولى من د. التحقيق في سلوك اليرقات البطن الفروق الفردية في استراتيجيات تستخدم علفا اليرقات عن طريق قياس أطوال مسار اليرقات 2 في حين تغذية. تم تعريف مسار طول والمسافة الإجمالية التي يقطعها يرقة واحدة على الخميرة، خلال مدة خمس دقائق. كل من السلالات المخبرية والذباب من الطبيعي للسكان في تورونتو تفاوتت في السلوكيات البحث عن الطعام، وكان هناك عنصر وراثي إلى الفروق الفردية في مسار طول. وقد وصفت اثنين نقرأ تستخدم علفا اليرقات من التوزيعات مسار بطول الكمية وكانت تسمى روفر وحاضنة. روفرز تبدي أطول مسار أطوال حين تعبر مساحة أكبر في حين على ركيزة الغذاء من المعتصمون. باستخدام هذا المسار طول فحص، دي حسناء وآخرون. 3 تعيين تستخدم علفا (ل) الجينات الكامنة وراء هذه الاختلافات السلوكية الفردية إلى موقع منفصل على chromosome- 2 (24A3-24C5). ود. مelanogaster لالجيني تم استنساخ في وقت لاحق 4 وكشفت أن يكون المركب تعتمد بروتين كيناز 5، المغير من علم وظائف الأعضاء والسلوك في ذبابة الفاكهة وغيرها من الكائنات 6.
نحن هنا الخطوط العريضة للبروتوكول الحالي لاليرقات فحص مسار طول وضعت أصلا في Sokolowski 2. على الرغم من أن بعض جوانب الفحص تغيرت على مر السنين، والمفهوم الكامن وراء تصميم لديه لا. كما نقوم بتوفير البيانات لتوضيح إمكانية فحص لتقييم المساهمات الوراثية والبيئية إلى الفروق الفردية في السلوك تستخدم علفا لليرقات ذبابة الفاكهة. اليرقات مسار بطول فحص بسيط وفعال، ولكن قوية. ويمكن لشخص واحد اختبار ما يصل الى 500 اليرقات بكل سهولة في أربع ساعات والنتائج التي يمكن الحصول عليها مع مستوى عال من التكاثر. وضعت أصلا لتوطين ل، يمكن استخدامه في شاشات الوراثية، الكمي رسم الخرائط موضع الصفة، والدراساتمن الجينات التي كتبها للبيئة (GXE) التفاعلات. وعلاوة على ذلك، بساطته واستنساخ جعلها موردا كبيرا للتدريس في المرحلة الجامعية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
1. إعداد لوحات العنب وزجاجات القابضة للجمع يرقات
2. إعداد لوحات للأغذية
3. إعداد لوحات الاختبار
4. إعداد السكان الوالدين
5. جمع L1 (الطور الأول) يرقات من لوحات العنب
6. اليرقات مسار طول الاختبار
7. الغذاء الحرمان
تحليل 8. البيانات
ملاحظة: يصف هذا القسم طريقة لتحليل البيانات باستخدام يماغيج 7 أو 8 فيجي لتجهيز مسار أطوال، على الرغم من أن برامج أخرى يمكن استخدامها.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ويوضح الاختلافات في مسار طول روفر وحاضنة للسلالات وتأثير الحرمان من الطعام على مسار طول في الشكل. 3 جمع البيانات على مدى ثلاثة أيام متتالية من التجارب أظهرت تأثير كبير سلالة (F (1421) = 351.89، ف <2.20 × 10 -16؛ الشكل 3A)، مع روفرز السفر أبعد من المعتصمون. بالإضافة إلى تأثير الإجهاد، وكان هناك أيضا تأثير كبير معالجة الغذاء (F (1، 421) = 461.62، ف <2.20 × 10
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
فحص مسار بطول المذكورة هنا يوفر مقياسا قوية وبسيطة من السلوك تستخدم علفا لليرقات ذبابة الفاكهة. بروتوكول يتبع المنهجية العامة وصفها في Sokolowski 2، ولكن منذ ذلك الحين تحسنت في ما يخص الكفاءة والضوابط التجريبية. إلى علمنا هذه الطريقة هي الطريقة الوحيدة المتاحة لقياس اليرقات مسار طول. النسخة الأصلية من بروتوكول 2، 3، 15، 16 اختبار اليرقات على أطباق بتري بطبقة رقيقة من معجون الخميرة تطبيقها مع فرشاة، وبعد ذلك الزجاج نشر قضيب مسار طول. أحدث الإصدارات من...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
يقر المؤلفون باستمرار تمويل مجلس العلوم الطبيعية والهندسة الكندي (NSERC) إلى MBS.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 6 أوقية زجاجات ثقافة الذبابة | فيشر العلمية | AS355 | |
| سدادات قارورة الطيران | Droso-Plugs | 59-201 | |
| 35 × 10 مم أطباق بتري | فالكون | 351008 | |
| أطباق بتري 100 × 15 مم | فيشر | 875712 | |
| أطباق بتري 60 × 15 مم | VWR | 25384-168 ؛ | |
| تشريح المجسات | Almedic | 2325-58-5300 | |
| مختبر | الخميرة | FLY-8040-20F |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن