مقالة منهجية

العزلة وتدفق Cytometric توصيف الفئران الصغيرة المعوية اللمفاويات

DOI:

10.3791/54114

⸱

مايو 8, 2016

 , 
1Division of Infectious Diseases, Department of Medicine, Boston Children’s Hospital

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هناك اهتمام متزايد بالتوصيف الكمي للخلايا الليمفاوية المعوية بسبب الاعتراف المتزايد بأن هذه الخلايا تلعب دورا مهما في مجموعة متنوعة من الأمراض المعوية والجهازية. في هذا البروتوكول ، نصف كيفية عزل مجموعات الخلايا المفردة من مقصورات الأمعاء الدقيقة المختلفة لتوصيف التدفق الخلوي اللاحق.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأمعاء - والتي تحتوي على أكبر عدد من الخلايا المناعية من أي جهاز في الجسم - تتعرض باستمرار لمستضدات أجنبية، سواء الميكروبية والغذائية. نظرا فهم متزايد بأن هذه المضادات اللمعية تساعد في تشكيل استجابة مناعية وأن التعليم من الخلايا المناعية داخل الأمعاء أمر بالغ الأهمية لعدد من الأمراض الجهازية، هناك اهتمام متزايد في وصف نظام المناعة في الأمعاء. ومع ذلك، العديد من البروتوكولات المنشورة شاقة وتستغرق وقتا طويلا. نقدم هنا بروتوكول مبسط لعزل الخلايا الليمفاوية من المخصوصة صغيرة في الأمعاء الصفيحة، طبقة داخل الظهاري، وبقع باير، على أن يكون سريع ومفيد، ولا يتطلب التدرجات Percoll شاقة. على الرغم من أن البروتوكول يركز على الأمعاء الدقيقة، بل هو أيضا مناسبة لتحليل القولون. وعلاوة على ذلك، فإننا نسلط الضوء على بعض الجوانب التي قد تحتاج إلى التحسين إضافية تبعا لسؤال كان علمي محددنشوئها. وقد أدى هذا النهج في عزل أعداد كبيرة من الخلايا الليمفاوية قابلة للحياة التي يمكن بعد ذلك أن تستخدم لتحليل تدفق cytometric أو وسائل بديلة لالتوصيف.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وغالبا ما تعتبر المهمة الرئيسية من الأمعاء الدقيقة لتكون عملية الهضم وامتصاص المواد الغذائية 1. في حين أن هذا ظيفة التمثيل الغذائي أمر ضروري بشكل واضح، والأمعاء الدقيقة لديه دورا هاما على قدم المساواة في حماية المضيف من وابل متواصل من المضادات البيئية الموجودة داخل التجويف 2. الأمعاء يفصل بين العالم الخارجي (على سبيل المثال، المضادات اللمعية) من البيئة الداخلية للمضيف مع طبقة الظهارية التي ليست سوى طبقة خلية واحدة سميكة. على هذا النحو، والجهاز المناعي الصغيرة الأمعاء لديه مهمة هائلة من موازنة عتبته للتفاعل، مما يسمح المستضدات الأجنبية من النظام الغذائي والمتعايشة الميكروبات لدخول الغشاء المخاطي مع الحد الأدنى، إن وجدت، استجابة مناعية بينما تصاعد ردا قويا ضد غزو الجراثيم و غيرها من مستضدات "الضارة". الاستجابات المناعية المفرطة أو غير لائقة لهذه المستضدات يمكن أن يؤدي إلى مرض مرضية (على سبيل المثال، inflammaمرض المحافظين الأمعاء، نوع الأول من مرض السكري، والتصلب المتعدد) ويجب تجنب 3-6.

وبشكل عام، يعتقد أن الجهاز الهضمي لتمثيل أكبر جهاز المناعة في الجسم، وتحتوي على أكثر من 70٪ من جميع الخلايا المفرزة للأجسام المضادة 7. ويتكون الجهاز المناعي الصغيرة الأمعاء من 3 المقصورات الرئيسية - الصفيحة المخصوصة (LP)، وطبقة داخل الظهاري، وبقع باير ل(PPS) - أن كل يحتوي على مجموعة مميزة من الخلايا الليمفاوية 2. الخلايا اللمفية ليرة لبنانية (LPLs) هي في المقام الأول خلايا TCRαβ + T مع ~ الخلايا البائية 20٪. الخلايا الليمفاوية داخل الظهاري (IELs) تحتوي على عدد قليل جدا من الخلايا البائية مع المزيد من الخلايا TCRγδ + T من الخلايا TCRαβ + T. وذكر المكتب الصحفى، وهما جهازان اللمفاوية الثانوية جزءا لا يتجزأ من جدار الأمعاء الصغيرة، تحتوي على حوالي 80٪ الخلايا البائية. على الرغم من أن كل من هذه المناطق التشريحية وظائف متميزة قليلا والقواعد وجودي، أنها تعمل في آهالأزياء armonized لحماية المضيف من الشتائم المسببة للأمراض.

وعلاوة على ذلك، هناك إدراك متزايد بأن الجراثيم عامل حاسم لتطوير نظام المناعة في الأمعاء، مع زيادة الاعتراف علاقة المشابهة بين الميكروبات محددة وتطور الجنين معينة الأنساب الخلية 8،9. وعلاوة على ذلك، بالنظر إلى أن التعليم من نظام المناعة في الأمعاء يؤثر على الاستجابات المناعية في مواقع بعيدة تشريحيا (على سبيل المثال، التهاب المفاصل، والتصلب المتعدد، والتهاب رئوي)، أصبح من الواضح أن تطوير نظام المناعة المعوية هي ذات الصلة لمزيد من عمليات المرض مما هو معروف في السابق 10 -12. على هذا النحو، وقد امتد الاهتمام تقييم كمي لجهاز المناعة المعوية وراء التفاعلات المضيف الممرض لتشمل الآن التفاعلات المضيف المتعايشة والتسبب في العديد من الأمراض الجهازية كذلك.

ونظرا لتنوع الأساليب المتبعة حاليا فيعزل الخلايا الليمفاوية المعوية، وهو الأسلوب الذي هو الأمثل لالعائد، والسلامة، والاتساق حين تحقيق التوازن بين الوقت المطلوب أمر بالغ الأهمية على نحو متزايد. البروتوكولات التي تنطوي على التدرجات Percoll هي الوقت والعمل المكثف ويحتمل أن تكون أكثر عرضة للخطأ البشري، مما أدى إلى العائد المتغير وقدرتها على البقاء 13. هنا، ونحن نقدم بروتوكول الأمثل لعزل وتوصيف الخلايا الليمفاوية من جميع المقصورات المناعة الصغيرة المعوية 3. بالإضافة إلى ذلك، نظرا لتزايد الاهتمام في التعديلات التي يسببها ميكروب في الجهاز المناعي المخاطي، ندرج الخطوات التي يمكن أن تستخدم للسماح لنقل أفقي من الكائنات الحية الدقيقة بين الفئران لتقييم مدى تؤثر هذه التغييرات على الكمية جهاز المناعة المعوية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأجريت جميع الدراسات تحت المراجعة الدقيقة والمبادئ التوجيهية وفقا للجنة المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في كلية الطب بجامعة هارفارد، والذي يلبي المعايير البيطرية التي وضعتها الجمعية الأمريكية لمختبر علم الحيوان (AALAS).

1. أفقي انتقال البكتيريا عبر شركة الإسكان (اختياري)

  1. للحد من التلوث الخارجية (خاصة إذا باستخدام الفئران معروف المعايشات)، وممارسة تقنية العقيم في حين تجميع أقفاص القابل للتصرف العقيمة، وذلك باستخدام المواد الغذائية والمياه التي على حد سواء تم تعقيمها.
  2. استخدام اللكمات الأذن أو علامات للاحتفال بشكل فردي 6 أسابيع من العمر C57BL / 6 الفئران التي تأوي microbiotas مختلفة وإيوائهم في نفس القفص. وبالنظر إلى أن الفئران هي اكل البراز وتأكل الكريات البرازية من الطابق القفص، ومن الطبيعي أن تنتقل الميكروبات أفقيا بين الفئران.
  3. الفئران منزل المشارك ل≥1 الأسبوع لإتاحة الوقت لنقل الجراثيم والتغيير المناعية قبل التحليل.

    4. 2. إعداد تعليق خلية واحدة من طبقة داخل الظهاري الصغيرة المعوية والصفيحة المخصوصة

    1. إعداد حلول
      1. إعداد وسائل الاعلام استخراج (في الأمعاء الدقيقة): 30 مل RPMI + 93 ميكرولتر 5٪ (ث / ت) dithiothreitol (DTT) + 60 ميكرولتر 0.5 M EDTA + 500 ميكرولتر الجنين مصل بقري (FBS). إضافة DTT مباشرة قبل الاستعمال.
      2. إعداد وسائل الاعلام الهضم (في الأمعاء الدقيقة): 25 مل RPMI + 12.5 ملغ dispase + 37.5 ملغ كولاجيناز الثاني + 300 ميكرولتر FBS. إضافة dispase وكولاجيناز مباشرة قبل الاستعمال.
      3. لجميع حضانات أجريت في 37 درجة مئوية، والحلول prewarm إلى 37 درجة مئوية.
    2. الموت ببطء الماوس عن طريق CO 2 الخنق تليها خلع عنق الرحم.
    3. وضع الجانب الظهري الماوس إلى أسفل ورش البطن مع الايثانول 70٪. استخدام المقص لإجراء عملية فتح البطن عن طريق خفض بالتتابع الجلد واللفافة ثم البريتوني على طول خط الوسط بطني جيئة وذهابام والارتفاق العانة لعملية الخنجري، مما يعرض التجويف البريتوني.
    4. استخدام المقص لفصل الأمعاء الدقيقة من المعدة عن طريق transecting العضلة العاصرة البوابية. إزالة بلطف الأمعاء الدقيقة من الصفاق، إغاظة بعيدا الدهون المساريقي.
      1. لإزالة تماما الأمعاء الدقيقة، وجعل قطع الثاني عند تقاطع اللفائفي الأعور. ضع الأمعاء الدقيقة المعزولة في البرد (أي، 4 ° C) RPMI تحتوي على 10٪ FBS لتعظيم بقاء الخلية.
    5. إزالة بلطف قطع كبيرة من الدهون باستخدام ملقط المنحنية. توخي الحذر لتجنب تمزق الأنسجة المعوية نفسها أثناء محاولة إزالة الدهون.
    6. لإزالة محتويات الأمعاء، والأمعاء تدفق بلطف مع 15-20 مل من برنامج تلفزيوني الباردة باستخدام إبرة التغذية 18 G الملصقة على حقنة.
    7. استخدام مقص لاستئصال ذكر المكتب الصحفى، ووضعها في RPMI الباردة تحتوي على 5٪ FBS. وتقع ذكر المكتب الصحفى على الجانب مقابل المساريق للأمعاء الدقيقة وتبدو وكأنها متعددة مفصص الأبيضكتلة. اعتمادا على سلالة معينة، والفأر لديه عادة 8-12 ذكر المكتب الصحفى.
    8. قطع الأمعاء الدقيقة 3-4 شرائح بوصة.
    9. إزالة الدهون المتبقية من قبل المتداول كل جزء صغير الأمعاء على منشفة ورقية مبللة مع RPMI، باستخدام مشرط مملة لندف الدهون بعيدا عن الأنسجة.
    10. تحويل الأنسجة داخل من قبل cannulating قطاعات المعوية مع ملقط المنحنية واستيعاب نهاية البعيدة للأنسجة. ثم استخدام زوج من ملقط على التوالي لإزالة بلطف قطاع النسيج من ملقط المنحنية (ابتداء من نهاية الداني)، مما أدى إلى الأنسجة التي مقلوب.
    11. وضع شرائح الأنسجة في كوب تحتوي على 30 مل من وسائل الاعلام استخراج وبقضيب. تأمين غطاء على الكأس، ويقلب في 500 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية. وينبغي أن يكون التحريك قوي ولكن ليس المضطرب.
    12. بعد الحضانة، واستخدام مصفاة الصلب لفصل قطعة نسيج من طاف التي تحتوي على ظهارة، والتي يجب أن تظهر غائم. هذا طاف يحتوي طالخلايا الليمفاوية ntraepithelial التي يمكن تحليلها، إذا رغبت في ذلك، من خلال الشروع في تصفية عينة في الخطوات 2،18-2،23.
    13. تستنهض الهمم يدويا قطعة نسيج في RPMI ليغسل وسائل الاعلام استخراج المتبقية.
    14. وضع النسيج على منشفة ورقية جافة والوجه أن تنتهي خلال نهاية عدة مرات لتسهيل إزالة المخاط المتبقية التي لم تتحرر من قبل متوسطة الاستخراج.
    15. وضع شظايا الأنسجة في أنبوب 1.5 مل مع 600 ميكرولتر من المتوسطة الهضم.
    16. استخدام المقص لتخطر على الأنسجة حتى قطع لم يعد التمسك مقص والحل يبدو متجانسا. هذه الخطوة مهمة لضمان الهضم الأنزيمي كاملة من الأنسجة.
    17. إضافة الأمعاء الدقيقة المفروم إلى كوب تحتوي على 25 مل من وسائل الاعلام الهضم. إثارة في 500 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. في منتصف الطريق من خلال عملية الهضم (أي، في 15 دقيقة)، الماصة صعودا ونزولا مع الماصة المصلية للمساعدة في تفريق أي أجزاء كبيرة من الأنسجة.
    18. مرشح النسيج هضمها (أو epithطبقة elial من الخطوة 2.12 إذا IELs التجهيز) من خلال مصفاة الخلية 100 ميكرومتر في أنبوب 50 مل. شطف مصفاة مع 20 مل من RPMI تحتوي على 10٪ FBS.
    19. أجهزة الطرد المركزي الحل تصفيتها في 500 x ج لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية.
    20. بعناية صب طاف و resuspend بيليه في 1 مل من RPMI تحتوي على 10٪ FBS.
    21. مرشح معلق الخلايا من خلال مصفاة 40 ميكرومتر الخلية في أنبوب 50 مل. شطف مصفاة مع 20 مل من RPMI تحتوي على 10٪ FBS.
    22. أجهزة الطرد المركزي تصفية حل في 500 x ج لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية.
    23. بعناية صب طاف، وبيليه resuspend في 1 مل من RPMI تحتوي على 2٪ FBS.

    3. إعداد تعليق خلية واحدة من بقع باير ل

    1. نقل يستأصل ذكر المكتب الصحفى للكوب مع 25 مل من وسائل الاعلام الهضم وبقضيب. غطاء آمن، وتدور في 500 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
    2. هضمها مرشح ذكر المكتب الصحفى من خلال مصفاة 40 ميكرومتر الخلية في أنبوب 50 مل. إن وجدت ريما كتلفي، الضغط عليها من خلال مصفاة باستخدام نهاية شقة من المكبس من حقنة 1 مل.
    3. شطف مصفاة مع 10 مل من RPMI تحتوي على 10٪ FBS.
    4. أجهزة الطرد المركزي تصفية حل في 500 x ج لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية.
    5. بعناية صب طاف، وبيليه resuspend في 1 مل من RPMI تحتوي على 2٪ FBS.

    4. تلطيخ السطح لالتدفق الخلوي

    1. قسامة حجم مناسب من الخلايا (على سبيل المثال، 200 ميكرولتر من LPLs) في لوحة ذهابا والقاع 96-جيدا.
    2. أجهزة الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. صب طاف بواسطة قلب اللوحة.
    3. Resuspend الخلايا في 90 ميكرولتر من RPMI تحتوي على 2٪ FBS والتخفيف 1: 100 CD16 المضادة لل/ 32 (كتلة بورتو). احتضان لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية.
    4. إضافة 10 ميكرولتر برنامج تلفزيوني. أجهزة الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. صب طاف بواسطة قلب اللوحة.
    5. Resuspend الخلايا في 250 ميكرولتر برنامج تلفزيوني. أجهزة الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. طاف صب من قبلقلب اللوحة.
    6. (اختياري) خلايا وصمة عار مع صبغة الجدوى، إذا رغبت في ذلك، باتباع بروتوكول الشركة المصنعة.
    7. Resuspend الخلايا في 100 ميكرولتر 1٪ من الفورمالين لإصلاح الخلايا. احتضان لمدة 1 ساعة في الظلام في 4 درجات مئوية.
    8. إضافة 200 ميكرولتر برنامج تلفزيوني. أجهزة الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. صب طاف بواسطة قلب اللوحة.
    9. Resuspend الخلايا في 250 ميكرولتر برنامج تلفزيوني. أجهزة الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. صب طاف بواسطة قلب اللوحة.
    10. Resuspend الخلايا في 200 ميكرولتر برنامج تلفزيوني. تحليل الخلايا باستخدام قياس التدفق الخلوي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تحليل تدفق cytometric من تعليق خلية واحدة من الخلايا الليمفاوية الصغيرة الأمعاء يجب أن تسفر عن السكان منفصلة من الخلايا التي لها خصائص مماثلة إلى الأمام والجانب مبعثر كما splenocytes (الشكلان 1A و 1B). قد تبدأ الخلايا الليمفاوية للموت إذا لم يتم الحفاظ على الأنسجة عند 4 درجات مئوية خلال المراحل الأولى من العزلة، مما أدى إلى السكان لمفاوية وجود مبعثر إلى الأمام أقل ويكون أكثر صعوبة في فصل من الخلايا الظهارية والميتة الأخرى (...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم بروتوكول لعزل وتوصيف تدفق cytometric من الخلايا الليمفاوية الصغيرة الأمعاء، بما في ذلك LPLs، IELs، والخلايا الليمفاوية في ذكر المكتب الصحفى. للراغبين في تقييم كيف يمكن للتغييرات في الجراثيم التي تؤثر على نظام المناعة الصغيرة الأمعاء، ونحن بالتفصيل الخطوات واضحة المشاركة في نقل الأفقي للكائنات الحية بين الفئران إيواء microbiotas مختلفة. على الرغم من أن هذا البروتوكول يركز على الأمعاء الدقيقة، والإجراء هو نفسه لتحليل الأمعاء الغليظة، مع الفارق الوحيد هو أنه لا توجد ذكر المكتب ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لم يتم الإعلان عن تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NKS مدعوم من قبل جائزة المعاهد الوطنية للصحة K08 AI108690.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
قفازات معقمةكيمبرلي كلارك555092
قفص فأر معقميحتوي مبتكرMS2-ADعلى غطاء وقاع قفص وفراش ألفا دري
مغذي معدنيM-FEED
بطاقةCRD-HLD-H
قوارض قابلة للتعقيم تشاو (NIH-31M)زيجلر4131207530
RPMI متوسط 1640جيبكو11875-119
ديثيوثريتول (DTT)سيجماD5545-5G
0.5 م EDTA (درجة الحموضة 8.0) AmbionAM9262
مصل الأبقار الجنينية (FBS)GemBio100-510
Dispase IIInvitrogen17105-041يعتمد التركيز في البروتوكول على مستوى نشاط 1.878 U / mg
كولاجيناز ، النوع الثاني & nbsp ؛Invitrogen17101-015يعتمد التركيز في البروتوكول على مستوى نشاط 245 U / mg
مقص تشريحRobozRS-5882
إبرة تغذية (18 جم ، طول 2 بوصة)RobozFN-7905
10 مل حقنةBD305482
PBSGibco14190-250
مشرط يمكن التخلص منه (15 شفرة)ملقط منحني Miltex4-415
RobozRS-5211
ملقط مستقيمRobozRS-5132
أكواب متعددة الأغراض ، 120 ملVWR89009-662
قضيب التحريكVWR58949-062
لوحة تحريك متعددة المواضع ، 9 أوضاعVWR12621-048
مخروطي من الفولاذ المقاوم للصدأ مصفاة ، 3 بوصة & nbsp ؛RSVP
1.5 مل أنبوبEppendorf0030 125.150
100 & م مصفاة الخليةفالكون08-771-19
40 & m مصفاة خليةفالكون08-771-1
50 مل أنبوب مخروطيفالكون352098
1 مل حقنةBD309659
96 بئر صفيحة ، دائرية القاعCorning3799
مضاد للفأر CD16 / 32 (كتلة Fc)Biolegend101320
(اختياري) صبغة قابلة للإصلاح eFluor 780eBiosciences65-0865-18
10٪ فورمالين ، محايدThermo Scientific5725
زجاجة مياه مبتكرة حامل مبتكرة مخزن

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cummings, D. E., Overduin, J. Gastrointestinal regulation of food intake. J Clin Invest. 117 (1), 13-23 (2007).
  2. Mowat, A. M., Agace, W. W. Regional specialization within the intestinal immune system. Nat Rev Immunol. 14 (10), 667-685 (2014).
  3. Round, J. L., Mazmanian, S. K. The gut microbiota shapes intestinal immune responses during health and disease. Nat Rev Immunol. 9 (5), 313-323 (2009).
  4. Sartor, R. B. Microbial influences in inflammatory bowel diseases. Gastroenterology. 134 (2), 577-594 (2008).
  5. Tlaskalova-Hogenova, H., et al. Commensal bacteria (normal microflora), mucosal immunity and chronic inflammatory and autoimmune diseases. Immunol Lett. 93 (2-3), 97-108 (2004).
  6. Wen, L., et al. Innate immunity and intestinal microbiota in the development of Type 1 diabetes. Nature. 455 (7216), 1109-1113 (2008).
  7. Pabst, R., Russell, M. W., Brandtzaeg, P. Tissue distribution of lymphocytes and plasma cells and the role of the gut. Trends Immunol. 29 (5), author reply 209-210 206-208 (2008).
  8. Surana, N. K., Kasper, D. L. The yin yang of bacterial polysaccharides: lessons learned from B. fragilis PSA. Immunol Rev. 245 (1), 13-26 (2012).
  9. Surana, N. K., Kasper, D. L. Deciphering the tete-a-tete between the microbiota and the immune system. J Clin Invest. 124 (10), 4197-4203 (2014).
  10. Gauguet, S., et al. Intestinal microbiota of mice influences resistance to Staphylococcus aureus pneumonia. Infect Immun. , (2015).
  11. Ochoa-Reparaz, J., et al. A polysaccharide from the human commensal Bacteroides fragilis protects against CNS demyelinating disease. Mucosal Immunol. 3 (5), 487-495 (2010).
  12. Wu, H. J., et al. Gut-residing segmented filamentous bacteria drive autoimmune arthritis via T helper 17 cells. Immunity. 32 (6), 815-827 (2010).
  13. Goodyear, A. W., Kumar, A., Dow, S., Ryan, E. P. Optimization of murine small intestine leukocyte isolation for global immune phenotype analysis. J Immunol Methods. 405, 97-108 (2014).
  14. Chung, H., et al. Gut immune maturation depends on colonization with a host-specific microbiota. Cell. 149 (7), 1578-1593 (2012).
  15. Resendiz-Albor, A. A., Esquivel, R., Lopez-Revilla, R., Verdin, L., Moreno-Fierros, L. Striking phenotypic and functional differences in lamina propria lymphocytes from the large and small intestine of mice. Life Sci. 76 (24), 2783-2803 (2005).
  16. Carrasco, A., et al. Comparison of lymphocyte isolation methods for endoscopic biopsy specimens from the colonic mucosa. J Immunol Methods. 389 (1-2), 29-37 (2013).
  17. Van Damme, N., et al. Chemical agents and enzymes used for the extraction of gut lymphocytes influence flow cytometric detection of T cell surface markers. J Immunol Methods. 236 (1-2), 27-35 (2000).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة