وتبين لنا إجراءات الزرع وتسجيل جراحية لقياس الإشارات الكهربية البصرية من العين (مخطط كهربية) والدماغ (البصرية أثار المحتملة) في الفئران واعية، والتي هي أكثر مشابهة لحالة الإنسان حيث تجرى التسجيلات دون يفند التخدير.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
وتبين لنا إجراءات الزرع وتسجيل جراحية لقياس الإشارات الكهربية البصرية من العين (مخطط كهربية) والدماغ (البصرية أثار المحتملة) في الفئران واعية، والتي هي أكثر مشابهة لحالة الإنسان حيث تجرى التسجيلات دون يفند التخدير.
في مخطط كهربية كامل الحقل (أرج) وأثار احتمال البصرية (VEP) هي أدوات مفيدة لتقييم شبكية العين ووحدة المسار البصرية في كل من المختبرات والمرافق الصحية. حاليا، يتم تنفيذ القياسات أرج وVEP قبل السريرية مع التخدير لضمان مواضع الكهربائي مستقرة. ومع ذلك، فقد ثبت وجود جدا من التخدير لتلويث الاستجابات الفسيولوجية الطبيعية. للتغلب على هذه يفند التخدير، ونحن نطور منصة جديدة لفحص أرج وVEP في الفئران واعية. يتم زرع أقطاب كهربائية جراحيا دون conjunctivally على العين لفحص وأرج وepidurally على القشرة البصرية لقياس VEP. وهناك مجموعة من السعة وحساسية / ويعاير المعلمات توقيت لكل من أرج وVEP في زيادة الطاقات مضيئة. وتظهر إشارات أرج وVEP أن تكون مستقرة ويمكن تكرارها لمدة 4 أسابيع على الأقل زرع بعد الجراحة. هذه القدرة على تسجيل إشارات أرج وVEP بدون تخدير يفند في الصورة قبل السريريةيجب etting توفير الترجمة متفوقة على البيانات السريرية.
وأرج وVEP هي مينيملي في أدوات الجسم الحي لتقييم سلامة مسارات شبكية العين والبصرية على التوالي في كل من مختبر وعيادة. في الميدان الكامل أرج غلة الموجي المميز الذي يمكن تقسيمها إلى مكونات مختلفة، مع كل عنصر يمثلون فئات مختلفة من الخلايا من 1،2 المسار الشبكية. يتكون الكلاسيكية كامل الحقل أرج الموجي من المنحدر الأولي السلبي (أ الموجة)، وهو ما ثبت لتمثيل مبصرة آخر نشاط ضوء التعرض 2-4. ويتبع الموجة من قبل الموجي ايجابي كبير (ب الموجة) والذي يعكس النشاط الكهربائي للشبكية العين المتوسطة، في الغالب الخلايا ON-القطبين 5-7. وعلاوة على ذلك، يمكن للمرء أن تختلف الطاقة مضيئة وبين التحفيز الفاصل الزمني لعزل مخروط من ردود قضيب 8.
فلاش VEP يمثل إمكانات الكهربائية من قشرة الدماغ والبصرية الجذعية ردا على التحفيز ضوء في شبكية العين9،10. هذا الموجي يمكن تقسيمها إلى مكونات المبكرة والمتأخرة، مع مكون في وقت مبكر مما يعكس نشاط الخلايا العصبية في مسار retino-geniculo مخططة 11-13 والراحل عنصر يمثلون معالجة القشرية التي أجريت في مختلف الصفائح V1 في الفئران 11،13. وبالتالي قياس وقت واحد من أرج وVEP بإرجاع تقييم شامل للهياكل المعنية في مسار البصرية.
حاليا، من أجل تسجيل الكهربية في الحيوانات، ويعمل التخدير لتمكين وضع مستقر من الأقطاب الكهربائية. وكانت هناك محاولات لقياس أرج وVEP في الفئران واعية 14-16 ولكن هذه الدراسات استخدمت الإعداد السلكية، التي يمكن أن تكون مرهقة وربما يؤدي إلى إجهاد الحيوان عن طريق تقييد حركة الحيوانات والسلوك الطبيعي 17. مع التطورات الحديثة في مجال التكنولوجيا اللاسلكية بما في ذلك تحسين التصغير وعمر البطارية، فمن الممكن الآن لتنفيذ نهج القياس عن بعد لأرج لد تسجيل VEP، وخفض الإجهاد المرتبطة التسجيلات السلكية وتحسين جدوى على المدى الطويل. وقد أثبتت زرع مستقرة داخليا بالكامل من تحقيقات القياس عن بعد لتكون ناجحة لرصد مزمن في درجة الحرارة وضغط الدم 18، النشاط 19 وكذلك كهربية 20. وهذا التقدم في التكنولوجيا تساعد أيضا مع التكرار والاستقرار التسجيلات واعية، وزيادة فائدة للمنبر للدراسات المزمنة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وأجريت التجارب على الحيوانات وفقا للقانون الاسترالي لرعاية واستخدام الحيوانات لأغراض العلمية (2013): الأخلاق بيان. تم الحصول على موافقة الأخلاق الحيوانية من لجنة أخلاقيات الحيوان، جامعة ملبورن. المواد هنا هي لتجارب معملية فقط، وليس المقصود للاستخدام الطبي أو الطب البيطري.
1. أقطاب إعداد
ملاحظة: يتم استخدام الارسال ثلاث قنوات لزرع الجراحية والتي تمكن 2 أرج وتسجيل 1 VEP التي ستجرى في وقت واحد. لا بد من الطراز قبل في شكل حلقة قبل الزرع من أجل نعلق على العين أقطاب خاملة ثلاثة النشطة وثلاثة. لأغراض تحديد الهوية، وقد أرفقت الشركة المصنعة الأقطاب الفاعلة في نصف أبيض، أغلفة بلاستيكية ملونة نصف في حين يتم تغطية أقطاب خاملة في الأغماد كاملة ملونة. تبقى القطب الأرض (واضح غمد البلاستيك) لم يتغير. لجميع العاملين وغير العاملين بالكهرباءسلوك قصائد الخطوات 1.1، 1.2، 1.3 و 1.7.
2. الارسال زرع
3. السلوك أرج وVEP التسجيلات في الجرذان واعية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يتم تحليل استجابة مستقبلة للضوء عن طريق تركيب تأخر التمويه على الحافة الأمامية من الطرف الهابطة الأولي للاستجابة أرج في أعلى 2 الطاقات مضيئة (1.20، 1.52 سجل CSM -2) لكل حيوان، استنادا إلى نموذج من الحمل وبف 22، صيغت من قبل هود وبيرش 23. ترجع هذه الصيغة اتساع ومعلمة حساسية، (الشكل 1C و1D، على التوالي). تم تركيب وظيفة القطعي للاستجابة للطاقة مضيئة من خلايا ثنائية القطب قضيب لكل حيوان،...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ونظرا لطبيعة الغازية الحد الأدنى من الكهربية البصرية، وتجرى أرج وVEP التسجيلات في المرضى من البشر في ظل ظروف واعية وتتطلب سوى استخدام التخدير الموضعي لوضع قطب كهربائي. في المقابل، يجري الكهربية البصرية في النماذج الحيوانية التقليدية تحت التخدير العام لتمكين مستقر وضع قطب كهربائي من خلال القضاء على العين والجسم الحركات الطوعية. ومع ذلك، التخدير العام المستخدمة عادة تغير الاستجابات أرج وVEP كما يتضح من المنشور السابق لدينا 24 وغيرها 25-27. على هذا النحو تطوير م...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
RG و RF هم موظفان للممول التجاري لهذا البحث (Pfizer Neusentis و Pfizer Global Research). كان MI موظفا في شركة Pfizer Global Research خلال هذا البحث وهو حاليا موظف في Proteostasis Therapeutics (كامبريدج ، الولايات المتحدة الأمريكية).
تود JC أن تعرب عن تقديرها لصندوق ديفيد هاي التذكاري ، جامعة ملبورن للدعم المالي في كتابة هذه المخطوطة. تم توفير تمويل هذا المشروع من خلال 100200129 منحة ARC Linkage (BVB ، AJV ، CTON).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مكبر للصوت الحيوي | ADnstruments | ML 135 | يضخم إشارات ERG و VEP |
| كربوكسي ميثيل سلولوز الصوديوم 1.0٪ | مسببات الحساسية | CAS 0009000-11-7 | الحفاظ على ترطيب القرنية أثناء الجراحة |
| كاربروفين 0.5٪ | مجموعة فايزر لصحة | CAS 53716-49-7 | تسكين ما بعد الجراحة ، مع محلول ملحي عن طريق الحقن لتجديد السوائل |
| كلورهيكسادين 0.5٪ | مختبرات أوريون | 27411 ، 80085 | تطهير أداة جراحية |
| منشط هلام سيانواكريليت | مكونات RS | 473-439 | يجفف بسرعة جل سيانواكريليت |
| جل سيانوكريليت ؛ | مكونات RS | 473-423 | إصلاح مسامير غير قابلة للصدأ للجمجمة |
| لدغ الأسنان | أدوات Storz ، Bausch and Lomb | E0824A | رأس حفر مصغر بقطر ~ 0.7 مم لعمل ثقب صغير في الجمجمة فوق كل نصف كرة لزرع مسامير VEP |
| Drill | Bosch | Dremel 300 series | مثقاب أوتوماتيكي لنقف |
| Enrofloxin | Troy Laboratories | المضاد الحيوي الوقائي جراحية | |
| Ganzfeld دمج حلول | القياس الضوئي الدولية | محفز الضوء المصمم حسب الطلب: قطر 36 مم ، حجم فتحة 13 سم | |
| مسحات شاش | Multigate Medical Products Pty Ltd | 57-100B | يجفف شق جراحي وسطح الجمجمة المكشوف أثناء الجراحة |
| Isoflurane 99.9٪ | Abbott Australasia Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | اسم الملكية: Isoflo (TM) التخدير الاستنشاقي. مخدر استنشاق من الدرجة الصيدلانية ممزوج بغاز الأكسجين لجراحة زرع القطب الكهربائي VEP |
| مرهم Kenacomb | Aspen Pharma Pty Ltd | لتقليل تهيج الجلد والحكة بعد الجراحة | |
| Luxeon LEDs | شركة فيليبس للإضاءة | للتحفيز الضوئي ، عشرون مصباح LED 5 واط واحد 1 واط ، يتم التحكم فيه بواسطة إبرة برنامج | |
| Scope (الجراحة الكبيرة) World | Precision Instruments | 501959 | لخياطة جراحة البطن والرأس ، تستخدم مع خياطة 3 - 0 ، إبرة العين ، حافة القطع 5/16 دائرة الحجم 1 ، حامل إبرة 15 مم |
| (الجراحة الكبيرة) | الدقة العالمية | 500224 | لعقد الإبرة أثناء جراحة |
| البطن والرأسحامل إبرة (جراحة مجهرية) | World Precision Instruments | 555419NT | لتثبيت الإبرة أثناء جراحة العين |
| قسطرة أوبتيفا | سميث ميديكال إنترناشيونال LTD | 16 أو 21 جم | دليل الأقطاب الكهربائية النشطة للقرنية من الجمجمة إلى الملتحمة |
| بوفيدون اليود 10٪ | سانوفي أفنتيس | CAS 25655-41-8 | اسم الملكية: بيتادين ، مطهر لتحضير الجلد المحلوق للجراحة 10٪ ، 500 مل |
| نظام الحصول على البيانات Powerlab | ADInstruments | ML 785 | الحصول على إشارة من جهاز إرسال القياس عن بعد ، مقترنة بمحول بيانات القياس عن بعد |
| Proxymetacaine 0.5٪ | Alcon Laboratories ؛ | CAS 5875-06-9 | تسكين العين الموضعي |
| قطع المصفاة | المصنوع | من الأمام من التقييد مدبب لتقليل حركة الرأس ، ويمكن تعديل الطول لاستيعاب طول الفئران المختلفة ، والقطر الكلي 60 مم. | |
| شفرة سكيبل | R.G. SNSM0206 للمستلزمات الطبية | لمقص الشق الجراحي | |
| (الجراحة الجراحية) | 501225 | الأدوات الدقيقة العالمية | لقطع الأنسجة على مقص الجبهة |
| (الجراحة المجهرية) | الدقة العالمية | 501232 | لتشريح الملتحمة لمرفق القطب الكهربائي |
| برنامج نطاق | ADInstruments | الإصدار 3.7.6 | في نفس الوقت يؤدي إلى تشغيل التحفيز عبر نظام ADI Powerlab ويجمع البيانات |
| ماكينة حلاقة | Oster | Golden A5 | حلاقة الفراء من المناطق الجراحية |
| مسامير streel غير القابل للصدأ | MicroFasteners | L001.003CS304 | قطر عمود 0.7 مم ، طول 3 مم ؛ |
| إطار تجسيمي | ديفيد كوب | موديل 900 | أداة تجسيمية حيوانية صغيرة لتحديد معالم الزرع على الجمجمة |
| ستارة جراحية | مستلزمات طبية حيوية | GM29-612EE | ضمان بيئة معقمة أثناء الجراحة |
| خياطة (جراحة كبيرة) | إبر طبية نينبو | 3-0 | لخياطة جراحة البطن والرأس ، حرير معقم مضفر ، |
| إبرة خياطة 60 سم ( الجراحة المجهرية) | إبر طبية Ninbo | 8-0 أو 9-0 | لجراحة العين بما في ذلك ، خياطة القطب الكهربائي للصلبة وإغلاق جرح الملتحمة ، خياطة النايلون ، 3/8 دائرة 1 & مرات ؛ 5 ، 30 سم |
| محول بيانات القياس عن بعد ؛ | DataSciences International | R08 | لإشارة القياس عن بعد بالتفاعل مع برنامج جمع البيانات |
| مصفوفة تبادل بيانات القياس عن بعد | DataSciences International | تجمع البيانات من أجهزة الإرسال ، وتقترن بجهاز الاستقبال | |
| استقبال بيانات القياس عن بعد | DataSciences International | RPC-1 | يستقبل بيانات القياس عن بعد من جهاز الإرسال |
| القياس عن بعد | DataSciences جهاز | إرسال القياس عن بعد الدولي | F50-EEE |
| تروبيكاميد 0.5٪ | مختبرات الكون | توسيع قزحية | |
| العين (الجراحة الكبيرة) | أدوات الدقة العالمية | 500092 | معالجة الأنسجة أثناء جراحة البطن والرأس |
| ملاقط (جراحة مجهرية) | أدوات الدقة العالمية | 500342 | معالجة الأنسجة أثناء جراحة العين |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.