يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إعداد المستعمرات وحيد الفوج وهرمون علاج نحل العسل عامل لتحليل علم وظائف الأعضاء المصاحبة لدور و / أو نظام الغدد الصماء

15.3K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/54240

⸱

سبتمبر 6, 2016

 ,  , 
1Department of Biological Sciences, Graduate School of Sciences, The University of Tokyo, 2Faculty of Pharmaceutical Sciences, Doshisha Women's College

في هذه المقالة

ملخص

نحن هنا وصف بروتوكول مفصلة لدينا لإعداد طوائف نحل العسل-فوج واحدة - أداة مفيدة لتحليل علم وظائف الأعضاء العامل المرتبط الدور. وصفنا أيضا بروتوكولات وإجراءات تفصيلية لعلاج العاملين مع هرمون الشباب وإكديسون لتقييم مشاركة هذه الهرمونات في تنظيم السلوك عامل و / أو علم وظائف الأعضاء.

الملخص

يشارك عمال نحل العسل في مهام مختلفة تتعلق بالحفاظ على نشاط المستعمرة. تتغير مهام العمال وفقا لأعمارهم (تقسيم العمل المرتبط بالعمر). يعمل العمال الشباب في رعاية الحضنة (ممرضة النحل) ، بينما يعمل العمال الأكبر سنا في البحث عن الرحيق وحبوب اللقاح (الباحثين عن الطعام). تتغير فسيولوجيا العمال بالتزامن مع هذا التحول في الدور. على سبيل المثال ، تتغير الوظيفة الرئيسية للغدد البلعومية (HPGs) من إفراز بروتينات غذاء ملكات النحل الرئيسية (MRJPs) إلى إفراز إنزيمات استقلاب الكربوهيدرات. نظرا لأن مهام العمال تتغير مع تقدم العمال في العمر في المستعمرات النموذجية ، فمن الصعب التمييز بين التغيرات الفسيولوجية التي تحدث مع الشيخوخة وتلك التي تحدث مع تحول الدور. لدراسة التغيرات الفسيولوجية في الأنسجة العاملة ، بما في ذلك HPGs ، جنبا إلى جنب مع تحول الدور ، سيكون من المفيد التلاعب بمستعمرات نحل العسل عن طريق إعداد مستعمرات أحادية المجموعة حيث يؤدي العمال من نفس العمر تقريبا مهام مختلفة. نصف هنا بروتوكولا مفصلا لإعداد مستعمرات أحادية المجموعة لهذا التحليل. بعد ستة إلى ثمانية أيام من إعداد مستعمرة المجموعة الواحدة ، يظهر الباحثون عن الطعام المبكر الذين يؤدون مهام البحث عن الطعام في وقت أبكر من المعتاد في المستعمرة. أشارت النتائج التمثيلية إلى التغيرات المرتبطة بالدور في التعبير الجيني ل HPG ، مما يشير إلى وظيفة HPG المرتبطة بالدور. بالإضافة إلى التلاعب بسكان المستعمرات ، يعد تحليل نظام الغدد الصماء مهما للتحقيق في علم وظائف الأعضاء المرتبط بالدور. هنا ، نصف أيضا بروتوكولا مفصلا لعلاج العمال ب 20-hydroxyecdysone (20E) ، وهو شكل نشط من ecdysone ، والميثوبرين ، وهو نظير هرمون الأحداث. كان معدل بقاء النحل المعالج كافيا لفحص التعبير الجيني في HPGs. لوحظت تغييرات في التعبير الجيني استجابة لعلاج 20E و / أو الميثوبرين ، مما يشير إلى أن العلاجات الهرمونية تحفز تغييرات فسيولوجية في HPGs. بروتوكول العلاج الهرموني الموصوف هنا مناسب لفحص التأثيرات الهرمونية على فسيولوجيا العمال.

المقدمة

نحل العسل الأوروبي، mellifera أبيس، هو حشرة eusocial مع مجتمع منظم للغاية 1. ويشارك نحل العسل عامل (الطبقة العاملة) في المهام المختلفة للحفاظ على النشاط مستعمرة، وتغيير هذه المهام وفقا لعمر النحل العامل بعد eclosion، والتي يشار اليها على انها تقسيم المرتبطة بالعمر العمل 2-4. العمال الشباب (<13 يوما) رعاية الحضنة في الخلية عن طريق إفراز غذاء ملكات النحل (النحل ممرضة)، في حين أن العمال كبار السن (> 15 يوما من العمر) جمع الرحيق وحبوب اللقاح خارج الخلية (علافات) 2-4. علم وظائف الأعضاء من العمال يتغير بالاشتراك مع هذا التحول الدور. على سبيل المثال، وظيفة الغدد البلعوم السفلي (HPGs)، إقران الغدد خارجية الإفراز تقع في الرأس، والتغيرات بالتعاون مع تحول الدور من التمريض لتستخدم علفا 2،5. HPGs ممرضة النحل أساسا توليف البروتين غذاء ملكات النحل الكبرى، والتي هي المكونات الرئيسية للحليب النحل. من ناحية أخرى، HPGs المؤن بشكل رئيسيتركيب إنزيمات استقلاب الكربوهيدرات، مثل α جلوكوزيد الثالث، لمعالجة الرحيق إلى عسل عن طريق تحويل السكروز إلى جلوكوز وفركتوز. كشفت دراساتنا السابقة أن التعبير عن mrjp2، الذي يشفر بروتين غذاء ملكات النحل كبير، وHbg3، الذي يشفر الفا جلوكوزيد الثالث، والتغيرات خلال تحويل دور 6-9.

لتحديد ما إذا كانت التغيرات الفسيولوجية في الأنسجة عامل، بما في ذلك HPGs، ويرتبط مع تحول دور أو مع سن العمال، سيكون من المفيد لمعالجة التركيبة السكانية من مستعمرة نحل العسل، مثل لإعداد وحيدة الفوج المستعمرات التي عمال تقريبا نفس الفئة العمرية تنفيذ مهام مختلفة 10،11. روبنسون وآخرون (1989) ووصف طريقة لإقامة مستعمرة نموذجية واحدة (10). وتضم المستعمرات واحد-فوج البداية ملكة والعمال القديم 0-2 يوم. بعد عدة أيام من إقامة المستعمرات، عمال ALMمعاهدة الفضاء الخارجي في نفس العمر تولي مهام مختلفة. بعض العمال على أداء مهام التمريض كما هو الحال في مستعمرات نموذجية، في حين أن غيرهم من العمال أداء المهام تستخدم علفا للوقت أبكر من المعتاد، وبالتالي فهي تسمى علافات قبل الاوان. سوف مقارنات التعبير الجيني بين النحل ممرضة وعلافات قبل الاوان توفير معلومات مفيدة عن علم وظائف الأعضاء المرتبط دور الأنسجة عامل 12-16. هنا، نحن تصف بروتوكول مفصلة لإعداد المستعمرات فوج واحدة لتحليل علم وظائف الأعضاء role- و / أو المرتبط بالعمر من HPGs 16. نحن أيضا وصف موجز كيفية فحص التعبير الجيني من mrjp2 وHbg3 التي كتبها الكمي العكسي سلسلة من ردود الفعل النسخ-البلمرة (RT-PCR) لتقييم HPG علم وظائف الأعضاء.

بالإضافة إلى تحليل علم وظائف الأعضاء العاملين في المستعمرات فوج واحد، النظر في نظام الغدد الصماء مهم لتحليل الآليات التنظيمية المرتبطة دور علم وظائف الأعضاء عامل. هرمون الشباب (JH)، الذي كنوسفل مثل هرمون "الوضع الراهن" في يرقات الحشرات، ويسرع التحول في الدور من التمريض إلى البحث عن الطعام في نحل العسل عامل 11. وعلاوة على ذلك، إكديسون، والذي يعرف باسم هرمون طرح الريش أثناء التحول، قد يكون متورطا في تحويل دور للجينات التي ترميز إكديسون يشير الجزيئات التي أعرب عنها في الهيئات الفطر، مركزا أعلى من الدماغ عامل 17-19. ولذلك، فإننا أيضا وصف بروتوكول مفصلة تستخدم في دراستنا السابقة 16 لعلاج العاملين مع 20E، وهو شكل نشط من إكديسون، والميثوبرين، والتماثلية JH، لتحليل تأثير نظام الغدد الصماء في HPG علم وظائف الأعضاء (التعبير عن mrjp2 وHbg3).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. إعداد المستعمرات وحيد الفوج

  1. إعداد ثلاث مستعمرات نحل العسل لإنشاء اثنين من المستعمرات فوج واحد والحصول على عدد كاف من العمال ظهرت حديثا.
    1. تأكد من أن بعض الشرانق في الخلايا الطرفية توج في أمشاط يكون بني العينين وبشرة المصطبغة عن طريق فتح أمشاط توج باستخدام الملقط. في حالة وجود هذه الشرانق في الخلايا مشط الطرفية، والأكثر من الشرانق في أمشاط كلها تظهر في حوالي 1-3 أيام.
    2. وفي وقت لاحق، وجمع أمشاط التي تحتوي على هذه الشرانق بعد أن يتم نقل جميع النحل الكبار ملتصقة مع فرشاة، ومزيج أمشاط من المستعمرات الثلاث لتقليل التباين بين المستعمرات.
  2. وضع أمشاط التي تم جمعها في مربع خلية فارغة واحتضان عند 33 درجة مئوية تحت الظروف الرطبة (> 60٪ الرطوبة النسبية). جمع ما يقرب من 6000 عامل ظهرت حديثا على مدى 3 أيام (3،000 العمال في مستعمرة) من أمشاط التي تم جمعها.
  3. تحديد كمية المصنوعالتمرير على أساس الوزن من خمسة عمال ظهرت حديثا جمعها عشوائيا من المستعمرات unmanipulated.
    1. تزن خمسة عمال ظهرت حديثا جمعها عشوائيا من المستعمرات unmanipulated باستخدام آلات وزنها.
      ملاحظة: وزن خمسة عمال ظهرت حديثا عموما 500-600 ملغ.
    2. تقدير كمية من عمال جمع بقسمة الوزن من العمال التي جمعتها متوسط ​​وزن خمسة عمال ظهرت حديثا.
  4. تطبيق علامات الطلاء على thoraces ما يقرب من 1800 عامل (900 عمال في مستعمرة) باستخدام علامات الطلاء ملصق المياه القائمة.
    ملاحظة: علامة قابل للغسل والذي يستخدم لتطبيق الطلاء وهي مدرجة في جدول المواد.
  5. إدخال ملكة وحوالي 3000 من العمال القديم 0-2 يوم إلى مربع خلية الجديد الذي يحتوي على اثنين من أمشاط، ومشط واحدة تحتوي على العسل وغبار الطلع كما الأطعمة المحفوظة ومشط فارغة آخر لوضع البيض من قبل الملكة. جمع المشط التي تحتوي على العسل وحبوب اللقاح الابام تتم إزالة مستعمرة unmanipulated أخرى بعد كل النحل ملتصقة.
    ملاحظة: من المستحسن استخدام مربع خلية النووي (صغير الحجم مربع خلية).
  6. جمع النحل ممرضة وعلافات قبل الاوان مع علامات الطلاء 6-8 أيام بعد إنشاء المستعمرات فوج واحدة.
    1. إلى جمع النحل ممرضة، والتقاط العمال أن يضعوا رؤوسهم في خلايا مشط لرعاية الحضنة. استخدام ملاقط لجمع النحل ممرضة من أمشاط التي تحتوي على العديد من الحضنة والكبار العمال.
      ملاحظة: إذا وضعت HPGs العمال جمعها عند تشريح كما هو موضح في الخطوة 1.7، يتم تعريف هؤلاء العمال كما النحل ممرضة. عقد thoraces بواسطة ملاقط ينصح لالتقاط العمال من أمشاط.
    2. لجمع علافات، استخدام صافي الحشرات للقبض على العمال أن العودة الى خلاياه مع الأحمال حبوب اللقاح على أرجلها الخلفية.
      ملاحظة: إذا HPGs العمال القبض تظهر تقلصت عند تشريح كما هو موضح في الخطوة 1.7، يتم تعريف هؤلاء العمال كما علافات.
  7. كلاسسيفي في HPG إلى ثلاث مجموعات، 'تطوير'، 'المتوسط'، و 'منكمش من خلال تشريح تحت مجهر تشريحي.
    1. تخدير 10-15 النحل في قفص الحشرات في الثلاجة لمدة 10-15 دقيقة حتى النحل لا يمكن أن تطير أو المشي. بعد ذلك، نقل النحل على الجليد وإكمال التخدير على الجليد لمدة 5 دقائق.
      ملاحظة: يستغرق حوالي 15-20 دقيقة الكلي لتحقيق التخدير. إذا كان الوقت التخدير يحتاج إلى تقصير، ينبغي خفض عدد النحل في قفص 1-3 النحل في قفص.
    2. تشريح الرأس عن الجسم مع مقص وملاقط. إصلاح الرأس على الشمع الأسنان وضعها على طبق بيتري مع دبابيس. إدراج اثنين من المسامير في الأسس التي قامت عليها هوائيات لإصلاح الرأس. نقع رؤساء الثابتة في المياه المالحة الحشرات (130 ملي مول كلوريد الصوديوم، 5 مم بوكل، 1 ملم CaCl 2).
    3. إزالة الجانب الأمامي للبشرة الرأس باستخدام الملقط غرامة وسكين الجراحية تحت المجهر مجهر.
      ملاحظة: HPGs يمكن العثور عليها بسهولة في الرأس بعد إزالة جuticle. وHPG هي هيئة عنقودي موجود في جميع أنحاء الدماغ في الرأس.
    4. إزالة الأنسجة القصبة الهوائية وهو نسيج غشائي بيضاء تحت بشرة. ثم، تشريح HPGs من الرأس عن طريق سحب ببطء لهم مع ملاقط.
    5. تصنيف HPGs مع عنيبات ​​كبير ودائري باسم 'المتقدمة'. تصنيف HPGs مع عنيبات ​​صغيرة ومشوهة باسم 'منكمش. تصنيف HPGs المقابلة لولا "تطوير" ولا "منكمش" على أنه "المتوسطة".
      ملاحظة: الصور التمثيلية التي تظهر يشار إلى هذه الفئات الثلاث من الدول HPG في الشكل 2.
    6. الموضوع 'المتقدمة' وHPGs "منكمش" لاستخراج الحمض النووي الريبي باسم 'ممرضة HPGs النحل "و" HPGs المؤن، على التوالي، والمقارنة بين التعبير الجيني في HPGs بين النحل ممرضة وعلافات (القسم 4).

2. حقن 20E

  1. جمع النحل ممرضة من المستعمرات النموذجية كما أن described في الإجراء 1.6.1.
    ملاحظة: لا يمكن فحص HPGs في هذه النحل كما سيتم تربيتها النحل.
  2. تخدير النحل في 4 درجات مئوية في الثلاجة (وليس على الجليد).
    ملاحظة: يستغرق حوالي 30 دقيقة لتحقيق التخدير. إذا تم تقصير الوقت التخدير، ينبغي خفض عدد النحل في قفص 1-3 النحل في قفص.
  3. باستخدام الملقط، لشل حركة النحل على الشمع الأسنان وضعها على طبق بيتري.
  4. حقن 1 ميكرولتر من حل 20E في الجانب الأمامي من الرأس باستخدام طرف حقن مصنوعة من micropipette الشعرية معايرة باستخدام مجتذب الزجاج إبرة.
    1. حل 20E في المياه المالحة الإيثانول الحشرات (130 ملي مول كلوريد الصوديوم، 5 مم بوكل، 1 ملم CaCl 2) خليط (1: 4) عند 2.5 ميكروغرام / ميكرولتر.
    2. قم بتوصيل طرف الحقن لأنبوب المطاط، وربط طرف micropipette الأصفر إلى الجانب الآخر من الأنبوب.
    3. وضع 1 ميكرولتر من حل 20E على بارافيلم باستخدام micropipette، أمسك طرف micropipette الأصفر في الفم، وهود رسم الحل في غيض الحقن.
    4. إدراج غيض الحقن في قاعدة هوائيات، وحقن محلول التي تهب من خلال طرف micropipette الأصفر.
      ملاحظة: بروتوكول هو مبين في هذه الخطوة هو طريقة الحقن تمثيلا، ولكن ينصح باستخدام آلة الحقن الآلي للسلامة عند الضرورة 20.
  5. الخلفي النحل حقن في أقفاص الحشرات في 33-36 درجة مئوية (درجة الحرارة المثالية هي 35 درجة مئوية) تحت الظروف المظلمة والرطبة (> 60٪ الرطوبة النسبية) لمدة 1 أو 3 أيام. العرض خليط الماء والعسل (1: 1) النحل. إذا لزم الأمر، الاعتماد على قيد الحياة النحل بعد الحقن.

3. تطبيق ميثوبرين

  1. جمع أمشاط التي تحتوي على الشرانق من المستعمرات نموذجية بعد أن يتم إزالة جميع النحل الكبار ملتصقة مع فرشاة. احتضان أمشاط في 33-36 درجة مئوية (درجة الحرارة المثالية هي 35 درجة مئوية) في الظروف الرطبة (> 60٪ الرطوبة النسبية) لمدة تصل إلى 1 يوم.
    2. جمع النحل ظهرت حديثا من أمشاط جمعها وتطبيق علامات الطلاء لthoraces الخاصة بهم باستخدام الطلاء الملصق كما هو موضح في بروتوكول لإعداد المستعمرات فوج واحدة. العودة النحل ملحوظ لمستعمراتها.
  2. بعد 6 أيام، وجمع العمال رسمت (عمره 6 أيام) من المستعمرات. التقاط العمال رسمت من أمشاط من خلال عقد thoraces مع ملاقط.
  3. تخدير النحل في 4 درجات مئوية في الثلاجة (وليس على الجليد) كما في الإجراء 2.2. باستخدام الملقط، لشل حركة النحل على الشمع الأسنان وضعها على طبق بيتري وتطبيق 1-5 ميكرولتر من محلول الميثوبرين (50-250 ميكروغرام / ميكرولتر) المذاب في الاسيتون على رؤوسهم باستخدام micropipette. استخدام الفلتر التي هي مقاومة للالأسيتون.
    ملاحظة: الأسيتون قد يكون لها آثار ضارة على النحل يؤدي إلى الموت. إذا لوحظ ارتفاع معدل الوفيات من النحل، فمن المستحسن الحد من حجم الأسيتون إلى 1 ميكرولتر في الحد الأدنى.
  4. الخلفي النحل في أقفاص الحشرات في 33-36 درجة مئوية (ر المثاليemperature هو 35 درجة مئوية) لمدة 7 أيام تحت الظروف المظلمة والرطبة (> 60٪ الرطوبة النسبية). العرض خليط الماء والعسل (1: 1) النحل. إذا لزم الأمر، الاعتماد على قيد الحياة النحل بعد التطبيق الموضعي.
    ملاحظة: في هذه المقالة، تحسب النحل على قيد الحياة بعد 7 أيام التطبيق (الجدول 3).

4. استخراج الحمض النووي الريبي والكمية RT-PCR

  1. تخدير النحل وتشريح HPGs كما هو موضح في الخطوات 1.7.1 إلى 1.7.4.
  2. جمع HPGs تشريح في أنبوب microcentrifuge على الثلج الجاف ومخزن في -80 درجة مئوية حتى الاستخدام.
  3. إضافة 400 ميكرولتر من كاشف لتمسخ البروتين.
    ملاحظة: هذا كاشف متاح تجاريا (انظر جدول المواد).
  4. تجانس الأنسجة HPG باستخدام باليد خلاط كهربائي مع مدقة التجانس الذي يناسب داخل أنبوب microcentrifuge. التجانس في سرعة دوران ما يقرب من 300 دورة في الدقيقة لمدة 1 دقيقة على الجليد لكسر وخلايا الأنسجة ليز.
    ملاحظة: باليد خلاط كهربائي متاح تجاريا (انظر جدول المواد).
  5. إضافة 80 ميكرولتر الكلوروفورم وتخلط جيدا. احتضان لمدة 5 دقائق على RT.
  6. أنابيب الطرد المركزي microcentrifuge في 14170 x ج لمدة 15 دقيقة على 4 درجات مئوية. نقل المرحلة المائية لأنبوب جديد. إضافة حجم مساو من الأيزوبروبانول و1 الجليكوجين ميكرولتر (5 ملغ / مل). احتضان عند -20 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة على الأقل.
  7. أنابيب الطرد المركزي microcentrifuge في 14170 x ج لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية، وإزالة طاف.
  8. إضافة 400 ميكرولتر من الايثانول 75٪ لبيليه وتخلط جيدا، الطرد المركزي أنابيب microcentrifuge في 14170 x ج لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية، وإزالة طاف. كرر هذه الإجراءات مرة أخرى.
  9. الهواء الجاف وبيليه لمدة 5-10 دقائق ثم حله في 10 المياه خالية من ريبونوكلياز ميكرولتر.
    ملاحظة: تجفيف كاملة من بيليه قد يسبب بإينسولبيلايزيشين من بيليه RNA في الماء. وهكذا، فإن بيليه الذي هو الرطب قليلا مناسب لتذويب.
  10. قياس تركيز الحمض النووي الريبي باستخدام معمل مثل معمل NanoDrop أو ما شابه ذلك.
  11. علاج 500 نانوغرام من الحمض النووي الريبي مجموع مع 2.0 U من الدناز أنا التي يحتضنها عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة للحط من أي الحمض النووي الجيني تلوث.
  12. عكس نسخ 200 نانوغرام من الحمض النووي الريبي تعامل I-الدناز وتنفيذ الوقت الحقيقي PCR باستخدام مجموعات المتاحة تجاريا (انظر القائمة في جدول المواد والكواشف) والاشعال الجينات المحددة (mrjp2، 5'-AAATGGTCGCTCAAAATGACAGA-3، و 5 "-ATTCATCCTTTACAGGTTTGTTGC-3"، Hbg3، 5'-TACCTGGCTTCGTGTCAAC-3 "و 5'-ATCTTCGGTTTCCCTAGAGAATG-3 '). أداء PCR على النحو التالي: [95 ° C × 30 ثانية + (95 ° C × 5 ثانية + 60 ° C × 15 ثانية + 72 ° C × 20 ثانية) × 45-55 دورات].
  13. تطبيع كمية من نسخة مع أن عامل استطالة 1α-F2 (EF1α˗F2) أو الريباسي بروتين 49 (rp49) 9،16،21،22. هذه الجينات هي السيطرة موثوق زأنيس لتحليل التعبير الجيني في HPGs باستخدام QRT-PCR.
  14. إجراء عمليتين الذيل اختبار t للكشف عن اختلافات كبيرة بين مجموعتين التجربة (النحل ممرضة مقابل علافات قبل الاوان، النحل المعالجة 20E مقابل النحل السيطرة، والنحل المعالجة الميثوبرين مقابل النحل السيطرة) باستخدام البرامج الإحصائية.
    ملاحظة: إذا كان يفترض F-اختبار تجانس التباين، تي الطالب اختبار يمكن استخدامها. إذا لم يكن كذلك، اختبار t ولش يمكن استخدامها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

ويتضح لمحة عامة عن بروتوكول لإعداد المستعمرات فوج واحد في الشكل 1A. يظهر الوقت طبعا التجارب من إعداد المستعمرات فوج واحد لأخذ عينات جمع في الشكل 1B. تم جمع العمال التي استوفت المعايير السلوكية للسلوك التمريض أو السلوك تستخدم علفا من المستعمرات فوج واحد، وقدر تنمية HPG في هؤلاء العمال ويبين الجدول 1 تصنيف للتنمية HPG إلى ثلاث مجموعات؛ 'تطوير'، 'المتوسط'، و 'منكمش "وفقا لحجم....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

إعداد المستعمرات فوج واحدة

نحن هنا وصف البروتوكول المستخدم في دراستنا السابقة 16 إلى إعداد المستعمرات فوج واحدة لتحليل HPG علم وظائف الأعضاء المرتبطة التحول في دور الشغالات. وقد لوحظت النحل ممرضة وعلافات قبل الاوان أن استوفت المعايير المحددة في إجراءات 1،6-1،7 والشكل 2 في المستعمرات فوج واحد (الجدول 1). أن الصور في الشكل 2 أن تكون مفيدة في تصنيف HPG ين...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من خلال منحة مساعدة للبحث العلمي (B) ومنحة مساعدة للبحث العلمي في المجالات المبتكرة "أخلاقيات الأنظمة الجزيئية" من وزارة التعليم والثقافة والرياضة والعلوم والتكنولوجيا (MEXT) اليابانية. حصل T.U. على منحة من الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم للعلماء الشباب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
UNIPOSCAMitsubishi قلمPC-5Mقلم تحديد لتطبيق العلامات على النحل    
20-hydroxyecdysoneSigma AldrichH5142
MethopreneSigma Aldrich33375
حالة تربية حشرةIRIS OHYAMACP-SS
Electromotion mixier  ISO23M-R25تجانس الأنسجة
كاشف TRIZolInvitrogen15596-026الكاشف لاستخراج الحمض النووي الريبي
الكلي DNase I & nbsp ؛Takara2270A
PrimeScript RTTakaraRR037Aكاشف النسخ العكسي
SYBR Premix ExTaq IITakaraRR820Aكاشف PCR
LightCycle 1.2 InstrumentRoche 12011468001أداة الشعيرات الدموية PCR LightCycle في الوقت الفعلي
(20 & mu; ل)روش4929292001المواد لتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي
رصاص طقم كاشف

المراجع

  1. Wilson, E. O. The insect societies. , Harvard university press. (1971).
  2. Winston, M. L. The biology of the honey bee. , Harvard university press. (1987).
  3. Lindauer, M. Ein Beitrag zur Frage der Arbeitsteilung im Bienenstaat. Zeitschrift für vergleichende Physiologie. 34 (4), 299-345 (1952).
  4. Sakagami, S. Untersuchungen uber die Arbeitsteilung in einen Zwergvolk der Honigbienen. Beitrage zur Biologie des Bienenvolkes, Apis mellifera L. I. Jap J Zool. 11, 117-185 (1953).
  5. Kubo, T., et al. Change in the expression of hypopharyngeal-gland proteins of the worker honeybees (Apis mellifera L.) with age and/or role. J Biochem. 119 (2), 291-295 (1996).
  6. Ohashi, K., Natori, S., Kubo, T. Change in the mode of gene expression of the hypopharyngeal gland cells with an age-dependent role change of the worker honeybee Apis mellifera L. Eur J Biochem. 249 (3), 797-802 (1997).
  7. Ohashi, K., Natori, S., Kubo, T. Expression of amylase and glucose oxidase in the hypopharyngeal gland with an age-dependent role change of the worker honeybee (Apis mellifera L). Eur J Biochem. 265 (1), 127-133 (1999).
  8. Ohashi, K., Sawata, M., Takeuchi, H., Natori, S., Kubo, T. Molecular cloning of cDNA and analysis of expression of the gene for alpha-glucosidase from the hypopharyngeal gland of the honeybee Apis mellifera L. Biochem Biophys Res Commun. 221 (2), 380-385 (1996).
  9. Ueno, T., Nakaoka, T., Takeuchi, H., Kubo, T. Differential gene expression in the hypopharyngeal glands of worker honeybees (Apis mellifera L.) associated with an age-dependent role change. Zoolog Sci. 26 (8), 557-563 (2009).
  10. Robinson, G. E., Page, R. E., Strambi, C., Strambi, A. Hormonal and genetic control of behavioral integration in honey bee colonies. Science. 246 (4926), 109-112 (1989).
  11. Sullivan, J. P., Fahrbach, S. E., Robinson, G. E. Juvenile hormone paces behavioral development in the adult worker honey bee. Horm Behav. 37 (1), 1-14 (2000).
  12. Ben-Shahar, Y., Robichon, A., Sokolowski, M. B., Robinson, G. E. Influence of gene action across different time scales on behavior. Science. 296 (5568), 741-744 (2002).
  13. Lehman, H. K., et al. Division of labor in the honey bee (Apis mellifera): the role of tyramine beta-hydroxylase. J Exp Biol. 209 (Pt 14), 2774-2784 (2006).
  14. Mutti, N. S., Wang, Y., Kaftanoglu, O., Amdam, G. V. Honey bee PTEN--description, developmental knockdown, and tissue-specific expression of splice-variants correlated with alternative social phenotypes). PLoS One. 6 (7), e22195(2011).
  15. Whitfield, C. W., Cziko, A. M., Robinson, G. E. Gene expression profiles in the brain predict behavior in individual honey bees. Science. 302 (5643), 296-299 (2003).
  16. Ueno, T., Takeuchi, H., Kawasaki, K., Kubo, T. Changes in the Gene Expression Profiles of the Hypopharyngeal Gland of Worker Honeybees in Association with Worker Behavior and Hormonal Factors. PLoS One. 10 (6), e0130206(2015).
  17. Paul, R. K., Takeuchi, H., Matsuo, Y., Kubo, T. Gene expression of ecdysteroid-regulated gene E74 of the honeybee in ovary and brain. Insect Mol Biol. 14 (1), 9-15 (2005).
  18. Takeuchi, H., et al. Identification of a novel gene, Mblk-1, that encodes a putative transcription factor expressed preferentially in the large-type Kenyon cells of the honeybee brain. Insect Mol Biol. 10 (5), 487-494 (2001).
  19. Takeuchi, H., Paul, R. K., Matsuzaka, E., Kubo, T. EcR-A expression in the brain and ovary of the honeybee (Apis mellifera L). Zoolog Sci. 24 (6), 596-603 (2007).
  20. Yamane, T., Miyatake, T. Reduced female mating receptivity and activation of oviposition in two Callosobruchus species due to injection of biogenic amines. Journal of Insect Physiology. 56 (3), 271-276 (2010).
  21. Ben-Shahar, Y., Leung, H. T., Pak, W. L., Sokolowski, M. B., Robinson, G. E. cGMP-dependent changes in phototaxis: a possible role for the foraging gene in honey bee division of labor. J Exp Biol. 206 (Pt 14), 2507-2515 (2003).
  22. Danforth, B. N., Ji, S. Elongation factor-1 alpha occurs as two copies in bees: implications for phylogenetic analysis of EF-1 alpha sequences in insects. Mol Biol Evol. 15 (3), 225-235 (1998).
  23. Pandey, A., Bloch, G. Juvenile hormone and ecdysteroids as major regulators of brain and behavior in bees. Current Opinion in Insect Science. 12, 26-37 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

شغالات نحل العسلالغدد تحت المريئية20 هيدروكسي إيكديسونتطبيق الميثوبرينتحليل التعبير الجينيالنحل المربيالنحل السارِعتحضير الطائفة
إعداد المستعمرات وحيد الفوج وهرمون علاج نحل العسل عامل لتحليل علم وظائف الأعضاء المصاحبة لدور و / أو نظام الغدد الصماء
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.