مقالة منهجية

وتدفق Cytometric بسيط طريقة لقياس امتصاص الغلوكوز والجلوكوز التعبير الناقل للالقطعان الوحيدات في الدم الكامل

DOI:

10.3791/54255

⸱

أغسطس 12, 2016

 ,  ,  ,  , 
1Centre for Biomedical Research, Macfarlane Burnet Institute for Medical Research and Public Health, 2Department of Infectious Diseases, Monash University, 3Department of Microbiology and Immunology, University of Melbourne, 4Department of Microbiology, The University of the West Indies, 5Division of Experimental Medicine, Department of Medicine, University of California, San Francisco, 6Department of Medicine, Monash University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخلايا الوحيدة هي مكونات لا يتجزأ من الجهاز المناعي الفطري البشري الذي يعتمد على التمثيل الغذائي للسكر عند تنشيطه. نصف بروتوكول قياس التدفق الخلوي لقياس التعبير عن ناقل الجلوكوز وامتصاص الجلوكوز بواسطة الخلايا الوحيدة الكلية والمجموعات السكانية الوحيدة في الدم الكامل الطازج.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حيدات هي الخلايا المناعية الفطرية التي يمكن تفعيلها عن طريق الجراثيم والالتهابات المصاحبة لبعض الأمراض الالتهابية المزمنة. تفعيل حيدات يدفع ظائف المستجيب وتحول ما يصاحب ذلك من التأكسدي للالأيض حال السكر الذي يصحبه زيادة في التعبير الجلوكوز نقل. لوحظ هذا زيادة الأيض حال السكر أيضا للحصانة المدربين من وحيدات، وشكلا من أشكال الذاكرة المناعية الفطرية. على الرغم من أن في المختبر بروتوكولات دراسة التعبير الجلوكوز نقل وامتصاص الغلوكوز من قبل حيدات وقد وصفت، وقد تم فحص أيا من تدفق متعدد حدودي الخلوي في الدم الكامل. نحن تصف بروتوكول تدفق cytometric متعددة حدودي لقياس الفلورسنت الجلوكوز التناظرية 2-NBDG امتصاص في الدم الكامل من قبل مجموع وحيدات الكلاسيكية (CD14 + CD16 -)، وسيطة (CD14 + CD16 +) وغير التقليدية ( CD14 + CD16 + +) الوحيداتالقطعان. هذه الطريقة يمكن استخدامها لدراسة التعبير نقل الجلوكوز وامتصاص الجلوكوز لمجموع وحيدات القطعان الوحيدات خلال التوازن وأمراض التهابات، ويمكن تعديلها بسهولة لدراسة امتصاص الجلوكوز لكريات الدم البيضاء الأخرى، والقطعان الكريات البيض في الدم.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حيدات هي مكون رئيسي من نظام المناعة الفطري البشري التي يتم تعبئتها بسرعة إلى مواقع الإصابة والتهاب 1. تفعيل حيدات أمر بالغ الأهمية للحد من الضرر الحاد عن طريق الجراثيم وأيضا المركزي إلى التسبب في العديد من الأمراض المزمنة، بما في ذلك تصلب الشرايين 2، والسرطان 3، وفيروس نقص المناعة البشرية 4،5.

عملية التمثيل الغذائي للراحة وحيدات تنشيط يختلف بشكل كبير، مع الراحة وحيدات استخدام الأيض المؤكسدة وحيدات تنشيط استخدام الأيض حال السكر (أي تخمر الجلوكوز إلى اللاكتات) 6. تفعيل حيدات يدفع التعبير عن ناقلات الجلوكوز الذي يسمح لزيادة امتصاص الجلوكوز لعملية التمثيل الغذائي حال السكر 7. الوحيدات الجلوكوز نقل 1 (GLUT1) هي واحدة من هذا القبيل نقل upregulated خلال تفعيل ولقد ثبت تعبيرها أن تؤدي إلى إنتاج السيتوكينات الموالية للالتهابات في الخامسitro وفي الأنسجة الدهنية من الفئران السمينة 8. إصابة خط خلية الوحيدات كابوسي ساركوما المرتبطة هربس يؤدي إلى upregulation الخلوي للGLUT1 9، وأظهرنا مؤخرا أنه خلال عدوى مزمنة بفيروس نقص المناعة البشرية زيادة النسبة المئوية من وحيدات، معربا عن GLUT1 موجودة أثناء غير المعالجة والجمع بين المعالجة بمضادات الفيروسات القهقرية علاج العدوى 10. أخذت معا، وتبين هذه الدراسات أن امتصاص الجلوكوز واستقلاب حال السكر حيدات جوانب مهمة من العديد من الأمراض الالتهابية. وهكذا، طريقة بسيطة لقياس التعبير GLUT1 الوحيدات وامتصاص الجلوكوز خلال التوازن ومرض التهاب من المرجح أن تكون ذات فائدة لمجموعة واسعة من الباحثين.

حيدات الإنسان غير متجانسة، التي تتألف من ثلاث مجموعات فرعية المميزة التي يمكن أن يفحصه التعبير التفاضلية من CD14 علامات سطح الخلية وCD16 11،12. حيدات الكلاسيكية تعبر عن مستوى عال من CD14 ولكن لا تعبر CD16 (CD14 + CD16 -)، وحيدات وسيطة تعبر عن مستوى عال من CD14 والمستوى المتوسط ​​من CD16 (CD14 + CD16 +)، وغير الكلاسيكية حيدات تعبر عن مستوى منخفض من CD14 وعلى مستوى عال من CD16 (CD14 + CD16 + +). وتسمى حيدات التي تعبر عن CD16 CD16 + حيدات، والتي بالمقارنة مع CD16 - حيدات لها التعبير عالية من السيتوكينات الالتهابية والقدرة على نحو أكثر فعالية المضادات الحالية 13،14. ما يقرب من 10٪ من وحيدات تعبر عن CD16 خلال التوازن مع نسب أعلى لوحظت خلال التهاب 15. وترتبط القطعان الوحيدات مع الحالات المرضية معينة، ويمكن أن تكون علامات بيولوجية مفيدة من المرض وتطور المرض 16.

وكان لدينا هدف لتحديد الطريقة التي يمكن قياس التعبير نقل الجلوكوز وامتصاص الغلوكوز من قبل حيدات الإنسان والقطعان الوحيدات في ظروف أقرب إلى فيزشروط siological وقت ممكن. وكانت دراسات سابقة قياس التعبير نقل الوحيدات الجلوكوز وامتصاص الغلوكوز 17،18، على الرغم من هذه الأساليب فحص حيدات المعزولة التي يمكن غيرت تعبير البروتين مقارنة مع الظروف الفسيولوجية 19، وأي دراسة سابقة درست القطعان الوحيدات الإنسان. باستخدام التدفق متعدد حدودي الخلوي، نحن تصف طريقة لدراسة التعبير نقل الجلوكوز وامتصاص الجلوكوز التناظرية الفلورسنت 2-NBDG على إجمالي حيدات والقطعان الوحيدات (على أساس CD14 والتعبير CD16) في الدم unmanipulated كله.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: فيروس نقص المناعة البشرية المصابة وجندوا المواضيع بفيروس نقص المناعة البشرية المعافين من وحدة الأمراض المعدية في مستشفى ألفرد في ملبورن، VIC، أستراليا، ومن المجتمع المحلي، على التوالي. تم الحصول على الموافقة المسبقة من جميع المشاركين، وتمت الموافقة على البحث من قبل لجنة البحوث وأخلاقيات مستشفى ألفرد.

1. GLUT1 كشف خلية على سطح الخلايا وحيدة النواة والوحيدات القطعان

  1. جمع الدم في أنابيب مضادة للتخثر سترات ACD-B وتبدأ التجارب في خزانة السلامة البيولوجية داخل 1 ساعة من جمعها.
  2. إضافة 100 ميكرولتر من الدم لأنابيب البولي بروبلين. إضافة 2 مل من 1X الناشر الحل (انظر المواد الجدول) إلى أنابيب في حين على الجليد، pipetting بلطف إلى مزيج. احتضان لمدة 15 دقيقة على الجليد. أجهزة الطرد المركزي في 220 x ج لمدة 5 دقائق.
  3. صب ويغسل مرتين عن طريق إضافة ما يقرب من 2-4 مل من محلول الغسيل (0.5٪ BSA في برنامج تلفزيوني 1X) والطرد المركزي في 220 x ج لمدة 5 دقائق.
  4. استخدام الأنابيبتتي لإزالة بعناية أكبر قدر من محلول الغسيل ممكن. مكان الأنابيب على الجليد وإعادة تعليق في 100 ميكرولتر من محلول الغسيل.
  5. لتحديد الفئات السكانية الوحيدات محددة وصمة عار الخلايا مع حجم التالية من الأجسام المضادة لكل 100 ميكرولتر تعليق الخلية التي أعدت في الخطوة 1.4: 5 ميكرولتر مكافحة CD3-PE، 5 ميكرولتر مكافحة CD14-APC، 5 ميكرولتر مكافحة CD16-PECy7، 5 ميكرولتر GLUT1 -FITC أو IgG2b-FITC (نمط إسوي أنبوب التحكم).
  6. وضع على الجليد لمدة 30 دقيقة في الظلام. اغسل 2 مرات مع محلول الغسيل. إصلاح مع 200-300 ميكرولتر من 0.5٪ الفورمالديهايد المحرز في برنامج تلفزيوني 1X.
  7. تحليل على تدفق عداد الكريات قادرة على اكتشاف 4 ألوان خلال 24 ساعة داخل التالية الإثارة وانبعاث الطول الموجي: FITC (488، 530)، والمؤسسة العامة (488، 575)، PECy7 (488، 780)، APC (633، 660) (10).

2. امتصاص الغلوكوز من قبل وحيدات

  1. ماصة 90 ميكرولتر من الدم التي تم جمعها في الخطوة 1.1 في أنابيب البولي بروبلين. إضافة 10 ميكرولتر من محلول العمل 14.60 ميكرومتر 2-NBDG ل90 ميكرولتر من الدم (1.46 ملي تركيز النهائي) ونفض الغبار بلطف إلى مزيج. فمن الأهمية بمكان للحد 2-NBDG التعرض للضوء من خلال تغطية الأنابيب مع رقائق الألومنيوم.
  2. احتضان عند 37 درجة مئوية في الظلام لمدة 15-30 دقيقة ثم وضع على الفور على الجليد. إضافة 4 مل من 1X FACS الناشر حل لأنابيب بينما على الجليد. أجهزة الطرد المركزي في 220 x ج في 4 ° مئوية لمدة 5 دقائق.
  3. يغسل مرة واحدة عن طريق إضافة 4 مل من محلول الغسيل (0.5٪ BSA في برنامج تلفزيوني 1X). أجهزة الطرد المركزي في 220 x ج في 4 ° مئوية لمدة 5 دقائق. صب ومكان على الجليد.
  4. خلايا وصمة عار مع الأجسام المضادة: 5 ميكرولتر مكافحة CD3-PE، 5 ميكرولتر مكافحة CD14-APC و 5 ميكرولتر مكافحة CD16-PECy7. خلط ووضع على الجليد لمدة 30 دقيقة في الظلام.
    ملاحظة: خلال هذه الفترة تأكد من تدفق غير الكريات استعداد لتحليل فوري. الحصول على الخلايا داخل التالية الإثارة وانبعاث الطول الموجي: 2-NBDG (488، 530)، والمؤسسة العامة (488، 575)، PECy7 (488، 780)، APC (633، 660).
  5. إضافة 4 مل من العازلة الجليد غسل الباردة (0.5٪ BSA في برنامج تلفزيوني 1X) إلى الأنابيب.يغسل مرة واحدة عن طريق الطرد المركزي في 220 x ج في 4 ° مئوية لمدة 5 دقائق. صب وإضافة 200-300 ميكرولتر من الجليد PBS القديمة والحفاظ على الجليد في الظلام (مغطاة بورق الألومنيوم). تحليل على قياس التدفق الخلوي في غضون 10 دقيقة باستخدام الإثارة وتحديد الطول الموجي الانبعاثات كما في الخطوة 2.4.

3. اكتساب وتحليل البيانات

ملاحظة: يفترض ومعرفة التدفق الخلوي وتحليل البيانات.

  1. باستخدام تدفق عداد الكريات قادرة على تحليل ما لا يقل عن 4 لون، مجموعة التعويض باستخدام عينات غير ملوثين وملطخة بشكل فردي.
    ملاحظة: تلطيخ واحد باستخدام CD4 FITC المسمى وCD14 يمكن استخدامها لGLUT1 والتعويض 2-NBDG.
  2. إعداد وتسمية النوافذ المناسبة قبل الحصول على عينات. رسم بوابة حول السكان الوحيدات، والحصول على 100،000 إلى 300،000 الأحداث في العينة في معدل المتوسط. 50000 الأحداث في عينة تعويضات كافية.
    ويمكن إجراء التعويض المسبق لعينة: ملاحظةاكتساب أو في برامج التحليل خلية واحدة، وفقا للإجراءات القياسية.
  3. تصدير وحفظ البيانات في الموقع المناسب. فتح احد برامج التحليل الخلية مثل FlowJo أو غيرها من برامج التحليل (التكميلي الشكل 1)، وسحب وإسقاط عينات كما هو محدد (الشكل التكميلي 2).
  4. انقر نقرا مزدوجا فوق لفتح ملف (التكميلي الشكل 3). رسم دائرة لبوابة حيدات استنادا إلى الأمام وخصائص مبعثر الجانب كما هو مبين في الشكل 1A والتكميلي الشكل 4. انقر نقرا مزدوجا فوق السكان الوحيدات. مراقبة ورسم مربع حول CD3 - السكان (الشكل التكميلي 4).
  5. انقر نقرا مزدوجا فوق CD3 - السكان. لمراقبة القطعان الوحيدات حدد CD14-APC على المحور 'س'، وCD16-PECy7 على 'محور y'-، وتسمية وفقا لذلك (الشكل التكميلي 5).
  6. حيث لا توجد متميزةالسكان الإيجابية والسلبية، وقياس التعبير عن GLUT1 أو امتصاص 2-NBDG في القطعان الوحيدات محددة. تحديد كثافة مضان متوسط ​​(MFI) من GLUT1 و2-NBDG عن طريق طرح نمط إسوي ولا الخلفية 2-NBDG (التكميلي الشكل 6).
  7. حيث توجد أعداد محددة، استخدم IgG2b-FITC لتعيين البوابة، وتحديد الخلايا إيجابية مئوية (الشكل 3).
    ملاحظة: استخدم هذا الإجراء لتحليل إجمالي CD14 + حيدات. منذ وضعت عادة 2-NBDG امتصاص تحولا في مضان كثافة البيانات هو أفضل ممثلة من قبل مؤسسات التمويل الأصغر ورسوم بيانية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يجب إجراء التعويض عن fluorochromes الفردية لمنع امتداد مضان. يتم إثراء حيدات أول مرة من قبل المحاصرة استنادا إلى الأمام والجانب مبعثر. المؤامرات المقدمة هي ممثلي لا يقل عن ستة تجارب مستقلة أجريت على الدم الكامل من ستة أو أكثر من المشاركين كما ذكرت سابقا 10 ويبين الشكل 1A للالنابضة الأولي من حيدات بواسطة مبعثر خلية والإقصاء من الخلايا T من النابضة داخل CD3 - السكان. ثم هي بوابات حيدات للتعبير عن CD14 وحدها أو ب...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بروتوكول الموصوفة هنا تفاصيل طريقة بسيطة لدراسة التعبير نقل الجلوكوز والفلورسنت امتصاص الغلوكوز التناظرية التي كتبها الوحيدات والوحيدات القطعان في الدم الكامل. من خلال تقييم 2-NBDG امتصاص في الدم الكامل، وهذا الأسلوب يسمح للظروف مماثلة لتلك الموجودة في الجسم الحي. وتناولت الدراسة السابقة 6-NBDG امتصاص في حيدات فصل من الدم الكامل من قبل الكثافة الطرد المركزي 17. ومع ذلك، فإن هذه الدراسة لم تفحص القطعان الوحيدات وفصل حيدات من الدم الكامل من المحتمل أن يغير التعبي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تم تمويل هذا البحث من قبل المركز الأسترالي للفيروس نقص المناعة البشرية والتهاب الكبد الفيروسات الأبحاث (ACH 2) ومنحة التنموي 2010 (CNIHR) من جامعة مركز واشنطن لأبحاث الإيدز (CFAR)، وهو برنامج تموله المعاهد الوطنية للصحة تحت رقم جائزة AI027757 الذي تدعمه من قبل المعاهد التالية المعاهد الوطنية للصحة ومراكز (المعهد المذكور، NCI، صحة العقلية، النداء، معاهد الصحة القومية، NHLBI، وكالة الاستخبارات الوطنية). CSP هي المستفيدة من منحة 2 CNIHR ومنظمة العمل ضد الجوع. SMC هي المستفيدة من مجلس صحة و طب القومي للبحوث في استراليا (NHMRC) مدير أبحاث زمالة. والكتاب الامتنان للمساهمة في هذا العمل لبرنامج دعم البنية التحتية التشغيلي الفيكتوري من قبل معهد بيرنت حصل. ونحن نعترف مساعدة جيزا Paukovic وإيفا أورلوسكي-أوليفر من مرفق AMREP التدفق الخلوي الأساسية لالتدفق الخلوي التدريب والمشورة التقنية. نشكر انجوس مورغان للتدريب وسائل الإعلام وتنظيم تبادل لاطلاق النار الفيديو. امتناننالجيسي ماسون وجهاد عبدالعزيز خالد الزهراني للمساعدة مختبر أثناء تصوير الفيديو. نشكر جهود الدكتور ديفيد SIMAR في كلية العلوم الطبية، نيو ساوث ويلز، أستراليا الذي قدم المشورة المنهجية حرجة. سوف CSP أود أن أشكر www.nice-consultants.com للتشاور الرسوم البيانية.

المؤلفين مساهمة:

تصور CSP المشروع وتصميم وتنفيذ التجارب وتحليلها وتفسيرها البيانات، وكتب مخطوطة. JJA تفسير البيانات وكتب مخطوطة. كتب TRB المخطوطة. JMM تفسير البيانات، قدمت اقتراحات الفكرية الهامة، واستعرض المخطوطة. SMC تفسير البيانات، قدمت اقتراحات الفكرية الهامة واستعرض المخطوطة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أنبوب فاكويت 9 مل أنابيب مضادة للتخثر ACD-BGreiner Bio-One GmbH455094
5 مل أنابيب بولي بروبلين معقمة BDBiosciences352063
ألبومين من مصل الأبقار (BSA)Sigma-AldrichA7906
محلول فورمالديهايد 16٪علم المجهر الإلكتروني15710
BD FACS محلول التحلل (10x)BD BD العلوم البيولوجية349202محلول التحلل المخفف BD FACS 1/10 بالماء منزوع الأيونات لتركيز العمل (يخزن لمدة تصل إلى أسبوع واحد عند 4 درجات ؛ ج)
مضاد ل CD3-PEBD Biosciences555340
مضاد ل CD14-APCBD Biosciences555399
مضاد ل CD16-PECy7BD Biosciences557744
مضاد ل Glut1-FITCR & أنظمةD FAB1418F
IgG2b-FITCR & D SystemsIC0041F
2-NBDGLife technologiesN13195تعليق 5 مجم من 2-NBDG في 1 مل من الماء منزوع الأيونات لصنع محلول مخزون 14.60 ملي مولار (احتفظ به لمدة تصل إلى 6 أشهر عند 4 درجات ؛ ج). لجعل تركيز 2-NBDG العامل ، قم بتخفيف المخزون 1/100 مع 1x DPBS. غطيها بورق الألمنيوم. (تخزين لمدة تصل إلى أسبوع واحد عند 4 درجات ؛ ج)
دولبيكو s محلول ملحي مخزن بالفوسفات (1x)تقنيات الحياة14190-144لصنع محلول الغسيل ، أضف 0.5 جم BSA لكل 100 مل DPBS (يخزن لمدة تصل إلى أسبوعين عند 4 درجات ؛ ج)

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Shi, C., Pamer, E. G. Monocyte recruitment during infection and inflammation. Nat Rev Immunol. 11, 762-774 (2011).
  2. Woollard, K. J., Geissmann, F. Monocytes in atherosclerosis: subsets and functions. Nat Rev Cardiol. 7, 77-86 (2010).
  3. Richards, D. M., Hettinger, J., Feuerer, M. Monocytes and macrophages in cancer: development and functions. Cancer Microenviron. 6, 179-191 (2013).
  4. Anzinger, J. J., Butterfield, T. R., Angelovich, T. A., Crowe, S. M., Palmer, C. S. Monocytes as regulators of inflammation and HIV-related comorbidities during cART. J Immunol Res. 2014, 569819(2014).
  5. Palmer, C., Cherry, C. L., Sada-Ovalle, I. Glucose Metabolism in T Cells and Monocytes: New Perspectives in HIV Pathogenesis. EBioMedicine. , (2016).
  6. Cheng, S. C., et al. mTOR- and HIF-1alpha-mediated aerobic glycolysis as metabolic basis for trained immunity. Science. 345, 1250684(2014).
  7. Maratou, E., et al. Glucose transporter expression on the plasma membrane of resting and activated white blood cells. Eur J Clin Invest. 37, 282-290 (2007).
  8. Freemerman, A. J., et al. Metabolic reprogramming of macrophages: glucose transporter 1 (GLUT1)-mediated glucose metabolism drives a proinflammatory phenotype. J Biol Chem. 289, 7884-7896 (2014).
  9. Gonnella, R., et al. Kaposi sarcoma associated herpesvirus (KSHV) induces AKT hyperphosphorylation, bortezomib-resistance and GLUT-1 plasma membrane exposure in THP-1 monocytic cell line. J Exp Clin Cancer Res. 32, 79(2013).
  10. Palmer, C. S., et al. Glucose transporter 1-expressing proinflammatory monocytes are elevated in combination antiretroviral therapy-treated and untreated HIV+ subjects. J Immunol. 193, 5595-5603 (2014).
  11. Wong, K. L., et al. Gene expression profiling reveals the defining features of the classical, intermediate, and nonclassical human monocyte subsets. Blood. 118, e16-e31 (2011).
  12. Ziegler-Heitbrock, L., et al. Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood. Blood. 116, e74-e80 (2010).
  13. Belge, K. U., et al. The proinflammatory CD14+CD16+DR++ monocytes are a major source of TNF. J Immunol. 168, 3536-3542 (2002).
  14. Frankenberger, M., Sternsdorf, T., Pechumer, H., Pforte, A., Ziegler-Heitbrock, H. W. Differential cytokine expression in human blood monocyte subpopulations: a polymerase chain reaction analysis. Blood. 87, 373-377 (1996).
  15. Ziegler-Heitbrock, L. The CD14+ CD16+ blood monocytes: their role in infection and inflammation. J Leukoc Biol. 81, 584-592 (2007).
  16. Ziegler-Heitbrock, L. Macrophages: Biology and Role in the Pathology of Diseases. , Springer. 3-36 (2014).
  17. Dimitriadis, G., et al. Evaluation of glucose transport and its regulation by insulin in human monocytes using flow cytometry. Cytometry A. 64, 27-33 (2005).
  18. Fu, Y., Maianu, L., Melbert, B. R., Garvey, W. T. Facilitative glucose transporter gene expression in human lymphocytes, monocytes, and macrophages: a role for GLUT isoforms 1, 3, and 5 in the immune response and foam cell formation. Blood Cells Mol Dis. 32, 182-190 (2004).
  19. Stibenz, D., Buhrer, C. Down-regulation of L-selectin surface expression by various leukocyte isolation procedures. Scand J Immunol. 39, 59-63 (1994).
  20. Ahmed, N., Kansara, M., Berridge, M. V. Acute regulation of glucose transport in a monocyte-macrophage cell line: Glut-3 affinity for glucose is enhanced during the respiratory burst. Biochem J. 327 (Pt 2), 369-375 (1997).
  21. Cutfield, W. S., Luk, W., Skinner, S. J., Robinson, E. M. Impaired insulin-mediated glucose uptake in monocytes of short children with intrauterine growth retardation). Pediatr Diabetes. 1, 186-192 (2000).
  22. Yoshioka, K., et al. A novel fluorescent derivative of glucose applicable to the assessment of glucose uptake activity of Escherichia coli. Biochim Biophys Acta. 1289, 5-9 (1996).
  23. Speizer, L., Haugland, R., Kutchai, H. Asymmetric transport of a fluorescent glucose analogue by human erythrocytes. Biochim Biophys Acta. 815, 75-84 (1985).
  24. Palmer, C. S., et al. Increased glucose metabolic activity is associated with CD4+ T-cell activation and depletion during chronic HIV infection. AIDS. 28, 297-309 (2014).
  25. Palmer, C. S., Ostrowski, M., Balderson, B., Christian, N., Crowe, S. M. Glucose metabolism regulates T cell activation, differentiation, and functions. Frontiers in immunology. 6, (2015).
  26. Palmer, C. S., et al. Regulators of glucose metabolism in CD4 and CD8 T cells. International reviews of immunology. , 1-12 (2015).
  27. Palmer, C. S., Crowe, S. M. How does monocyte metabolism impact inflammation and aging during chronic HIV infection? AIDS research and human retroviruses. 30, 335-336 (2014).
  28. McFadden, K., et al. Metabolic stress is a barrier to Epstein-Barr virus-mediated B-cell immortalization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, E782-E790 (2016).
  29. Gamelli, R. L., Liu, H., He, L. K., Hofmann, C. A. Augmentations of glucose uptake and glucose transporter-1 in macrophages following thermal injury and sepsis in mice. Journal of leukocyte biology. 59, 639-647 (1996).
  30. Yin, Y., et al. Glucose Oxidation Is Critical for CD4+ T Cell Activation in a Mouse Model of Systemic Lupus Erythematosus. Journal of immunology. , 80-90 (2016).
  31. Yang, Z., Matteson, E. L., Goronzy, J. J., Weyand, C. M. T-cell metabolism in autoimmune disease. Arthritis research & therapy. 17, 29(2015).
  32. Yin, Y., et al. Normalization of CD4+ T cell metabolism reverses lupus. Science translational medicine. 7, 274ra218(2015).
  33. Barbera Betancourt, A., et al. Inhibition of Phosphoinositide 3-Kinase p110delta Does Not Affect T Cell Driven Development of Type 1 Diabetes Despite Significant Effects on Cytokine Production. PloS one. 11, e0146516(2016).
  34. Barron, C. C., Bilan, P. J., Tsakiridis, T., Tsiani, E. Facilitative glucose transporters: Implications for cancer detection, prognosis and treatment. Metabolism: clinical and experimental. 65, 124-139 (2016).
  35. Hegedus, A., Kavanagh Williamson, M., Huthoff, H. HIV-1 pathogenicity and virion production are dependent on the metabolic phenotype of activated CD4+ T cells. Retrovirology. 11, 98(2014).
  36. Taylor, H. E., et al. Phospholipase D1 Couples CD4+ T Cell Activation to c-Myc-Dependent Deoxyribonucleotide Pool Expansion and HIV-1 Replication. PLoS Pathog. 11, e1004864(2015).
  37. Loisel-Meyer, S., et al. Glut1-mediated glucose transport regulates HIV infection. Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 2549-2554 (2012).
  38. Palmer, C. S., et al. Emerging Role and Characterization of Immunometabolism: Relevance to HIV Pathogenesis, Serious Non-AIDS Events, and a Cure. J Immunol. 196 (11), 4437-4444 (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

2 NBDG CD14 CD16

مقالات ذات صلة