مقالة منهجية

الآلي الدهن طبقة ثنائية غشاء تشكيل باستخدام ثنائي ميثيل بولي سيلوكسان رقيقة

DOI:

10.3791/54258

⸱

يوليو 10, 2016

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biological Engineering, Inha University, 2Department of Mechanical Engineering, Inha University, 3Biohybrid Systems Research Center (BSRC), Inha University, 4Convergent Research Center for Metabolism and Immunoregulation (CRCMI), Inha University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

علينا أن نظهر، للنقل الدهون نظام تشكيل طبقة ثنائية القابل للتخزين. غشاء الدهون طبقة ثنائية يمكن أن تتشكل داخل 1 ساعة مع معدل نجاح أكثر من 80٪ عندما يتم إحضارها تمهيدا غشاء المجمدة إلى درجة حرارة الغرفة. وهذا النظام يقلل عمليات شاقة والخبرات ذات الصلة القنوات الأيونية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

والدهون طبقة ثنائية مصطنعة، أو أسود الدهون غشاء (بلم)، هو أداة قوية لدراسة القنوات الأيونية والتفاعلات البروتينية، فضلا عن تطبيقات الاستشعار البيولوجي. ومع ذلك، وتقنيات تشكيل بلم التقليدية لها عدة عيوب وغالبا ما تتطلب خبرة معينة وعمليات شاقة. على وجه الخصوص، BLMs التقليدية تعاني من معدلات نجاح تشكيل منخفضة ويتعارض وقت تشكيل غشاء. هنا، علينا أن نظهر نظام تشكيل بلم القابل للتخزين ونقلها مع سيطرة الوقت ترقق بها وتعزيز معدل تشكيل بلم عن طريق استبدال الأفلام المستخدمة تقليديا (تترافلوروإيثيلين، polyoxymethylene، البوليسترين) إلى (PDMS) ثنائي ميثيل بولي سيلوكسان. في هذه التجربة، يتم استخدام البوليمر التي يسهل اختراقها منظم مثل PDMS رقيقة. وبالإضافة إلى ذلك، بدلا من المذيبات المستخدمة تقليديا مع اللزوجة المنخفضة، واستخدام السكوالين يسمح للرقابة الوقت رقيق خارجا عن طريق امتصاص المذيبات بطيء من قبل PDMS، وإطالة غشاء مدى الحياة. في الإعلانdition، باستخدام خليط من السكوالين وسداسي، وقد زاد من نقطة التجمد من الحل الدهون (~ 16 درجة مئوية)، بالإضافة إلى ذلك، تم إنتاج السلائف غشاء التي يمكن تخزينها لأجل غير مسمى ونقلها بسهولة. وقد خفضت هذه السلائف غشاء بلم وقت تشكيل <1 ساعة فيما حقق معدل تكوين بلم من ~ 80٪. وعلاوة على ذلك، أظهرت التجارب قناة أيون مع الجراميسيدين وجدوى نظام الأغشية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الاصطناعي الدهون غشاء طبقة ثنائية، أو أسود الدهون غشاء (بلم)، هو أداة هامة لتوضيح آليات أغشية الخلايا والقنوات الأيونية، وكذلك لفهم التفاعلات بين القنوات الأيونية وأيونات / جزيئات 1-7 على الرغم من أن طريقة التصحيح، المشبك وغالبا ما تعتبر المعيار الذهبي للدراسات غشاء الخلية، فمن شاقة وتتطلب مشغلي درجة عالية من المهارة لقياس القناة الايونية. 8 بينما ظهرت تشكيلها بشكل مصطنع الأغشية الدهنية طبقة ثنائية كأدوات بديلة للدراسات القناة الايونية، 9،10 أنها ترتبط أيضا مع شاقة عمليات وخبرات محددة. وعلاوة على ذلك، الأغشية عرضة للاضطرابات الميكانيكية. التطبيقات العملية وبالتالي، تقنيات طبقة ثنائية الدهون وعرض لتاريخ محدودة. 11

من أجل تعزيز متانة وطول العمر من الأغشية الدهنية طبقة ثنائية، كوستيلو وآخرون. 12، وإيد وياناغيدا 13 وقد وضعت طبقة ثنائية الدهن قائمة بذاتها بدعم من الهلاميات المائية. وعلى الرغم من تعزيز طول العمر ولكن (<24 ساعة)، لم تحسن طبقة ثنائية متانة. جيون وآخرون. 14 ضعت غشاء مغلف هيدروجيل (HEM) مع الحميم هيدروجيل الدهون طبقة ثنائية الاتصال، مما أدى إلى تعزيز طول العمر (تصل إلى عدة أيام). لزيادة عمر HEM، Malmstadt وجيون وآخرون خلق غشاء مغلف هيدروجيل مع هيدروجيل بالدهون ملزمة عبر في الموقع التساهمية الاقتران (cgHEM). 15 وفي كلا النظامين، وزيادة عمر غشاء كبير (> 10 يوما) . ومع ذلك، فإن أنظمة تشكيل غشاء يست قوية بما فيه الكفاية، وأنه لا يمكن تخزينها أو تسليمها عند الحاجة لتحرير الخبرة لاستخدام طبقات ثنائية الدهون.

وقد تمحور تطوير منصة الدهون طبقة ثنائية في المقام الأول حول زيادة متانة وطول العمر من BLMs. وبالرغم من أن طول عمر BLMs سوتعزيز bstantially مؤخرا، وقد اقتصرت طلباتهم بسبب عدم وجود قابلية النقل والقدرة التخزينية. للتغلب على هذه القضايا، جون وآخرون خلق نظام الغشاء القابل للتخزين وعرض السلائف غشاء (MP). 16 لبناء النائبة، وإعداد خليط من ديكان N- وسداسي تحتوي على 3٪ DPhPC (1،2-diphytanoyl- التعطيل -glycero-3-فسفاتيديل) للتحكم في درجة التجمد من الحل الدهون بحيث أنها ستجمد في ~ 14 درجة مئوية (تحت درجة حرارة الغرفة، وفوق درجة حرارة الثلاجة العادية). في هذه التجربة، تم نشر النائب خلال فتحة صغيرة على (PTFE) فيلم تترافلوروإيثيلين وجمدت في وقت لاحق في الثلاجة على 4 درجات مئوية. عندما أحضر النائب إلى درجة حرارة الغرفة، وإذابة النائب وتشكلت تلقائيا طبقة ثنائية المادة الدهنية، والقضاء على الخبرات التي ترتبط عادة مع تشكيل غشاء. ومع ذلك، كان معدل نجاح بلم مصنوعة من النائب منخفضة تصل إلى ~ 27٪، والتشكل الغشاءن الوقت كان يتعارض (30 دقيقة إلى 24 ساعة)، يحد من تطبيقاتها العملية.

في هذه الدراسة، تم استخدام ثنائي ميثيل بولي سيلوكسان (PDMS) رقيقة بدلا من التقليدية لأغشية رقيقة مسعور (PTFE، polyoxymethylene، البوليسترين) إلى (أ) قياس الزمن تلفيق و (ب) زيادة معدل نجاح تشكيل بلم كما ذكرت سابقا من قبل ريو وآخرون. 17 وهنا، وقد سهلت تشكيل غشاء عن طريق استخراج المذيبات نظرا لطبيعة المسامية من PDMS، والوقت اللازم لتشكيل غشاء تمت السيطرة بنجاح في هذه الدراسة. في هذا النظام، كما استوعبت حل الدهون في الفيلم PDMS رقيقة، تم التوصل إلى ثابت وقت تشكيل غشاء. وعلاوة على ذلك، كان لفترة طويلة العمر الغشاء بسبب امتصاص بطيء من المذيبات في PDMS رقيقة، نتيجة لإضافة السكوالين إلى حل الدهون. أجرينا القياسات البصرية والكهربائية للتحقق من أن الأغشية شكلت باستخدام هذه التقنية هي مناسبة لطعلى دراسات القنوات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الحل تحضير

  1. إعداد حل العازلة:
    1. لصياغة حل العازلة، حل 1 م بوكل (كلوريد البوتاسيوم)، و 10 ملي تريس، حمض الهيدروكلوريك (تريس، هيدروكلوريد)، و 1 ملي EDTA (ثنائي أمين الإيثيلين رباعي حمض الخل) في الماء المقطر، وضبط درجة الحموضة إلى 8.0.
    2. تصفية الحل باستخدام فلتر 0.20 ميكرون. لتعقيم، الأوتوكلاف الحل في درجة حرارة 121 مئوية لمدة 15 دقيقة.
  2. إعداد الحل الدهون لمرحلة ما قبل اللوحة:
    1. لصياغة حل الدهون لمرحلة ما قبل اللوحة، حل 3٪ DPhPC (1،2-diphytanoyl- التعطيل -glycero-3-فسفاتيديل) الدهون (ث: ت) في خليط من 2: 8 ن -decane وسداسي (ت: الخامس). يقلب بين عشية وضحاها باستخدام المدورة.
  3. إعداد الحل الدهون لتشكيل غشاء:
    1. لصياغة حل الدهون لتشكيل غشاء، ويحل 0.1٪ DPhPC (1، 2-diphytanoyl- التعطيل -glycero-3-فسفاتيديل) الدهون (ث: ت) في خليط من 2: 8 متر مربعualene وسداسي (ت: ت). يقلب بين عشية وضحاها باستخدام المدورة.

2. تشكيل لPDMS رقيقة

  1. مزيج PDMS وكيل علاج في 9: نسبة 1 (ث / ث) في كوب الخلط لتشكيل prepolymer PDMS. إضافة 5 غرام من PDMS prepolymer إلى طبق بيتري لتشكيل PDMS رقيقة (سمك 200-250 ميكرون). نشر PDMS قبل البوليمر باستخدام المغطي تدور في 800 دورة في الدقيقة لمدة 10 ثانية لتشكيل طبقة رقيقة.
  2. وضع طبق بتري في مجفف فراغ عند ضغط 100 mTorr لمدة 2 ساعة لإزالة فقاعات الهواء. لبلمرة طبقة رقيقة قبل البوليمر، يخبز في الفرن لمدة 5 ساعة عند 70 درجة مئوية.
  3. من أجل جعل PDMS مربع رقيقة، وقطع PDMS بلمرة رقيقة إلى 2 × 2 سم 2 الساحات. استخدام لكمة الدقيقة 500 ميكرون لجعل فتحة في وسط PDMS رقيقة. فتحات قبل الطلاء مع 3٪ حل DPhPC الدهون مختلطة في 2: 8 ديكان N- وسداسي.

3. غرفة تصنيع وAsse وmbly

  1. لافتعال غرفة بلم، تصميم مبنيين متماثل من الغرفة باستخدام 3D برامج الرسم مع الأبعاد الخارجية من 4 سم × 1.5 سم × 1 سم وأبعاد داخلية جيدا من 1.5 سم × 1.3 سم × 0.8 سم 17.
  2. صياغة الغرفة باستخدام كتلة PTFE مع آلة التصنيع باستخدام الحاسب الآلي واتبع تعليمات الشركة الصانعة.

4. الجمعية الغرفة

  1. لتجميع الغرفة، وضع الفيلم رسمت قبل-PDMS رقيقة بين الكتل PTFE اثنين بحيث الفتحة على PDMS رقيقة يتواءم مع ثقب في الغرفة.
  2. ختم الحواف الخارجية للغرفة باستخدام غطاء زجاجي مع الشحوم (تسهيل المراقبة البصرية). شل غرفة تجميعها باستخدام الصواميل والمسامير.
    ملاحظة: تأكد من أن الغرفة بشكل جيد مختومة حتى لا يكون هناك أي تسرب السائل.

5. تشكيل غشاء السلائف مع تشكيل التجميع الذاتي المعجل (MPES)

  1. باستخدام ماصة، إيداع 0.5ميكرولتر من 0.1٪ DPhPC الدهون مختلطة في 2: 8 ن -decane: سداسي على الفتحة من PDMS رقيقة تجميعها مع الغرفة.
  2. قبل استخدام وتخزين غرفة في الفريزر أو الثلاجة أقل من 10 درجة مئوية.

6. تشكيل غشاء والتأكيد

  1. لتشكيل بلم مع MPES، سحب غرفة من الثلاجة وتعليق 2 مل من محلول منظم في كل جانب من الغرفة. تعيين غرفة جانبا ل<10 دقيقة حتى يذوب الغشاء السلائف المجمدة.
  2. مكان الغرفة في الصعود إلى micromanipulator إلى التحكم بدقة في الارتفاع مع الاحترام لمصدر الضوء والمجهر. تسليط الضوء على جانب واحد من غرفة كمصدر ضوء استخدام الهالوجين الألياف البصرية إضاءة لسطع الفتحة من PDMS رقيقة للمراقبة البصرية من عملية تشكيل بلم.
  3. على الجانب الآخر، ووضع المجهر الرقمي عموديا فيما يتعلق مصدر الضوء لمراقبة تشكيل بلم (تكبير بنسبة 200X).
  4. لتأكيد تشكيل بلم، ومراقبة مركز الفتحة حيث يصبح اللون أكثر إشراقا من بالطوق.

7. تسجيل الكهربائية

  1. القياسات الكهربائية، وإعداد الأقطاب حج / الكلور باستخدام سلك الفضة 208 ميكرون سميكة والتبييض في هيبوكلوريت الصوديوم ل> 1 دقيقة. وضع الأقطاب حج / الكلورين في كل جانب من الغرفة عميقة بما يكفي لتكون مغموسة في حل العازلة.
  2. توصيل الأقطاب الكهربائية إلى مكبر للصوت مسرى مكروي. باستخدام برنامج الكهربية، وتطبيق ± 10 فولت الموجي الثلاثي عبر الغشاء في الحصول على موجة مربعة. تعيين تطبيق التيار الكهربائي من خلال النقر على الأسهم المشار إليها في V_clamp (بالسيارات).
  3. تسجيل الخواص الكهربائية للغشاء عن طريق النقر على زر التسجيل (النقطة الحمراء رمز). الشروع في تسجيل حتى لوحظ موجة مربع موحدة. إنهاء التسجيل عن طريق النقر على أيقونة مربع أسود.

8. ايون قناة التأسيس

ليسيحدث الجراميسيدين ألف (GA) دمج عفويا على تشكيل بلم، كما يضاف GA مباشرة إلى الحل الدهون: E.

  1. لمراقبة أنشطة قناة GA، تطبيق 100 بالسيارات عبر الغشاء بمعدل عينة من 5 كيلو هرتز لقياس عقد إمكانات الغشاء. تعيين تطبيق التيار الكهربائي من خلال النقر على الأسهم المشار إليها في V_clamp (بالسيارات).
  2. تسجيل الخواص الكهربائية للدمج GA عن طريق النقر على زر التسجيل (النقطة الحمراء رمز). المضي قدما في تسجيل حتى يلاحظ القفزات الحالية. إنهاء التسجيل عن طريق النقر على أيقونة مربع أسود.
  3. بعد الحصول على البيانات الكهربائية وتصفية البيانات مع انخفاض تمرير مرشح بسل في 100 هرتز باستخدام برنامج الكهربية.
  4. مراقبة يقفز الحالية في عقد البيانات المحتملة التي تمت تصفيتها (كل قفزة الحالي، ~ 0.15 م، يمثل dimerization من قناة أيون GA) للتحقق GA التأسيس.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعظيم الاستفادة من MPES الحل التركيب
تم اختبار تركيبات مختلفة من الدهون والمذيبات لإعادة بنجاح الأغشية الدهنية طبقة ثنائية من MPES. النظام النائب بمزيج من ديكان N- وسداسي تحتوي على 3٪ DPhPC 14 عرضت نسبة نجاح منخفضة من تشكيل غشاء (~ 27٪). وبالإضافة إلى ذلك، كما في الفيلم PDMS استخراج باستمرار حل الدهون، كان من الضروري لتحسين تكوين مذيب للحفاظ على غشاء الدهون طبقة ثنائية سليمة. زاد بالتالي، السكوالين، التي لد...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

توفر تقنية تكوين BLM الخاصة بنا أداة قوية لدراسات غشاء الخلية والقناة الأيونية ، على عكس التقنيات التقليدية التي لديها إمكانات محدودة للاستخدام الصناعي. قمنا بتطوير سلائف غشائية باستخدام غشاء رقيق PDMS ، وابتكرنا سلائف غشاء مجمدة مع تجميع ذاتي معجل.

على عكس طرق تكوين الغشاء التقليدية مع الأفلام الكارهة للماء ، حيث يحدث تكوين الغشاء فقط من خلال التفاعلات السطحية بين الفيلم والمحلول الدهني ، يحدث ترقق الغشاء على أغشية PDMS عن طريق التفاعلات السطحية واستخراج المذيبات بواسطة فيلم PDMS. ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل من قبل برنامج مركز أبحاث الرواد (NRF-2012-0009575) ومنح المؤسسة الوطنية للبحوث (NRF-2012R1A1B4002413 ، NRF-2014R1A1A2059341) من مؤسسة البحوث الوطنية في كوريا. كما تم دعم هذا العمل جزئيا من خلال منحة أبحاث جامعة إنها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
كلوريد البوتاسيومسيجما-ألدريتشP9333للمحلول العازل
Tris-hydrochlorideSigma-Aldrich1185-53-1للمحلول العازل
حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيكسيجما-ألدريتش60-00-4للمحلول العازل
< م > ن < م > ديكانسيجما ألدريتش44074-Uلمحلول الدهون
HexadecaneSigma-Aldrich544-76-3لمحلول الدهون
SqualeneSigma-AldrichS3626لمحلول الدهون
Gramicidin ASigma-Aldrich11029-61-1بروتين غشائي
1،2-diphytanoyl-sn< / em>-glycero-3-phosphocholineAvanti Polar Lipids، Inc.850356لتشكيل membrae
Sylgard 184a و 184b elastromer kitDow Corning Asiaلإنتاج غشاء رقيق PDMS
0.2 & mu ؛ مرشح mSatorius stedim16534----------Kلتصفية محلول العازلة
RotatorFinePCRAGلإذابة الدهون بشكل متجانس
الأوتوكلافBiofreeBF-60ACلتعقيم محلول العازلة
Spin coaterShinu MstSP-60Pلنشر PDMS prepolymer
Vaccum dessiccatorWelch2042-22لإزالة فقاعة الهواء في PDMS prepolymer
500 & mu ؛ m  لكمةHarris Uni-Core0.5لإنشاء فتحة على آلة CNC ذات الأغشية الرقيقة
PDMS SME SME2518لتصنيع غرفة تشكيل الغشاء
الألياف البصرية الهالوجينMoticMLC-150Cلإلقاء الضوء على فتحة الأغشية الرقيقة PDMS للمراقبة البصرية
المجهر الرقميالأزرقQX-5لمراقبة غشاء ثنائي الطبقة الدهنية بصريا تكوين
القطب الكهربائيأنظمةلمراقبة تكوين الغشاء
مضخم القطب الكهربائي الدقيق (مضخم Axopatch)Axon InstrumentsAxopatch 200B مكبر للصوتلقياس سعة الغشاء (الموصوف بأنه مضخم قطب كهربائي دقيق في المخطوطة)
إضاءة AM كهربائيا

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hanke, W., Schulue, W. Planar lipid bilayers: methods and applications. , Academic Press. (2012).
  2. Mirzabekov, T. A., Silberstein, A. Y., Kagan, B. L. Use of planar lipid bilayer membranes for rapid screening of membrane active compounds. Methods Enzymol. 294, 661-674 (1999).
  3. Bayley, H., Cremer, P. S. Stochastic sensors inspired by biology. Nature. 413 (6852), 226-230 (2001).
  4. Fang, Y., Lahiri, J., Picard, L. G protein-coupled receptor microarrays for drug discovery. Drug. Discov. Today. 8 (16), 755-761 (2003).
  5. Majd, S., et al. Applications of biological pores in nanomedicine, sensing, and nanoelectronics. Curr. Opin. Biotechnol. 21 (4), 439-476 (2010).
  6. Kim, Y. R., et al. Synthetic Biomimetic Membranes and Their Sensor Applications. Sensors (Basel). 12 (7), 9530-9550 (2012).
  7. Ryu, H., et al. Investigation of Ion Channel Activities of Gramicidin A in the Presence of Ionic Liquids Using Model Cell Membranes. Sci Rep. 5, (2015).
  8. Wood, C., Williams, C., Waldron, G. J. Patch clamping by numbers. Drug. Discov. Today. 9 (10), 434-441 (2004).
  9. Mueller, P., Rudin, D. O., Tien, H. T., Wescott, W. C. Reconstitution of cell membrane structure in vitro and its transformation into an excitable system. Nature. 194, 979-980 (1962).
  10. Montal, M., Mueller, P. Formation of bimolecular membranes from lipid monolayers and a study of their electrical properties. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 69, 3561-3566 (1972).
  11. Baaken, G., Sondermann, M., Schlemmer, C., Ruhe, J., Behrends, J. C. Planar microelectrode-cavity array for high-resolution and parallel electrical recording of membrane ionic currents. Lab Chip. 8 (6), 938-944 (2008).
  12. Costello, R., Peterson, I., Heptinstall, J., Byrne, N., Miller, L. A robust gel-bilayer channel biosensor. Adv. Mater. Opt. Electron. 8 (2), 47-52 (1998).
  13. Ide, T., Yanagida, T. An artificial lipid bilayer formed on an agarose-coated glass for simultaneous electrical and optical measurement of single ion channels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 265 (2), 595-599 (1999).
  14. Jeon, T. J., Malmstadt, N., Schmidt, J. J. Hydrogel-encapsulated lipid membranes. J Am Chem Soc. 128 (1), 42-43 (2006).
  15. Malmstadt, N., Jeon, T. J., Schmidt, J. J. Long-Lived Planar Lipid Bilayer Membranes Anchored to an In Situ Polymerized Hydrogel. Adv. Mater. 20 (1), 84-89 (2008).
  16. Jeon, T. J., Poulos, J. L., Schmidt, J. J. Long-term storable and shippable lipid bilayer membrane platform. Lab. Chip. 8 (10), 1742-1744 (2008).
  17. Ryu, H., et al. Automated Lipid Membrane Formation Using a Polydimethylsiloxane Film for Ion Channel Measurements. Anal. Chem. 86 (18), 8910-8915 (2014).
  18. Yaws, C. Chemical Properties Handbooks: Physical, Thermodynamic, Environmental, Transport, Safety, and Health Related Properties for Organic and Inorganic Chemicals. , MC GRAW HILL HANDBOOKS. (1999).
  19. Windholz, M., Budavari, S., Stroumtsos, L. Y., Fertig, M. N. The Merck index. An encyclopedia of chemicals and drugs. , Merck & Co. (1976).
  20. Miller, C. Ion Channel Reconstitution. , Springer Science & Business Media. (1986).
  21. Miller, C. Open-state substructure of single chloride channels from Torpedo electroplax. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 299 (1097), 401-411 (1982).
  22. Benz, R., Frohlich, O., Lauger, P., Montal, M. Electrical capacity of black lipid films and of lipid bilayers made from monolayers. Biochim. Biophys. Acta. 394 (3), 323-334 (1975).
  23. Priel, A., Gil, Z., Moy, V. T., Magleby, K. L., Silberberg, S. D. Ionic requirements for membrane-glass adhesion and giga seal formation in patch-clamp recording. Biophys. J. 92 (11), 3893-3900 (2007).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

PDMS

مقالات ذات صلة