الغرض من هذه المخطوطة هو تقديم طريقة لقياس البلعمة الوحيدة والخلايا الحبيبية ونشاط الانفجار التأكسدي في عينات الدم البشري.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
قياس الحبيبية والوحيدات البلعمة ومؤكسد آخر انفجار في الدم البشري
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يمكن استخدام مقايسة نشاط الخلايا المحببة والخلايا الوحيدة والانفجار التأكسدي (OB) لدراسة الجهاز المناعي الفطري. توفر هذه المخطوطة المنهجية اللازمة لإضافة هذا الاختبار إلى ترسانة علم المناعة للتمرين. تتمثل الخطوة الأولى في هذا الاختبار في تحضير قطعتين ("H" و "F") من الدم الكامل (الهيبارين). بعد ذلك ، يضاف ثنائي هيدروإيثيديوم إلى H aliquot ، ويتم تحضين كلا الجزأين في حمام مائي دافئ متبوعا بحمام ماء بارد. بعد ذلك ، المكورات العنقودية الذهبية (المكورات العنقودية الذهبية) يضاف إلى H aliquot ويضاف المكورات العنقودية الذهبية المسمى بالفلورسين isothiocyanate إلى F aliquot (البكتيريا: البلعمة = 8: 1) ، ويتم تحضين كلا القسمين في حمام مائي دافئ متبوعا بحمام ماء بارد. بعد ذلك ، يضاف التريبان الأزرق إلى كل كمية لإخماد التألق خارج الخلية ، ويتم غسل الخلايا بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات. بعد ذلك ، يتم تحلل خلايا الدم الحمراء ، ويتم إصلاح خلايا الدم البيضاء. أخيرا ، يتم استخدام مقياس التدفق الخلوي وبرنامج التحليل المناسب لقياس البلعمة المحببة والخلايا الوحيدة ونشاط OB. تم استخدام هذا الاختبار لأكثر من 20 عاما. بعد مجهود ثقيل ومطول ، يعاني الرياضيون من زيادة كبيرة ولكنها عابرة في البلعمة وانخفاض ممتد في نشاط البلعمة. ترتبط الزيادة بعد التمرين في البلعمة بالالتهاب. على عكس الأفراد ذوي الوزن الطبيعي ، فإن البلعمة المحببة والخلايا الوحيدة مرتفعة بشكل مزمن لدى المشاركين الذين يعانون من زيادة الوزن والسمنة ، ويرتبط ارتباطا متواضعا بالبروتين التفاعلي C. باختصار ، يقيس هذا الاختبار القائم على قياس التدفق الخلوي البلعمة ونشاط البلعمة ونشاط البلعمة ويمكن استخدامه كمقياس إضافي للالتهاب الناجم عن ممارسة الرياضة والسمنة.
المقدمة
ومحببة والوحيدات البلعمة / التأكسدي انفجار (OB) النشاط الاختبار هو بسيط، وتقنية مستقيم إلى الأمام التي كثيرا ما تستخدم لجمع المعلومات عن وظيفة المناعة الفطرية التالية ممارسة طويلة ومكثفة. 1-4 عند دراسة استجابة الجهاز المناعي ل حافز، المحببة وحيدات ذات أهمية خاصة لأنها تلعب دورا محوريا في الدفاع المضيف وهي الخلايا المناعية الأولى لتتراكم في موقع الإصابة. 5 العدلات، وهو نوع من محببة، هي الخلايا الأولى للنقل من داخل العضلات التالفة الأنسجة التالية ممارسة مكثفة. 6 البلعمة والنشاط OB هي التدابير الأكثر شيوعا من المحببات والوحيدات وظيفة و 7 و يفضل كمؤشرات للالفطرية وظيفة الخلايا ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: أجريت جميع إجراءات جمع الدم وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعتها جامعة ولاية الآبالاش (ASU) لجنة المراجعة المؤسساتية (IRB).
1. إعداد الفحص
- جمع وإعداد وتنظيم المواد المحددة لإجراء العملية (يرجى الرجوع إلى جدول المواد معينة / المعدات).
- تسمية 12 × 75 ملم أنابيب.
- التسمية أنبوبين لكل مشارك: أنبو....
- تسمية 12 × 75 ملم أنابيب.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ممارسة طويلة ومكثفة لها آثار عميقة على وظيفة المناعة الفطرية، بما في ذلك الطبيعية وظيفة القاتل الخلية، استجابة بلعم بوساطة خلوى للعدوى الفيروسية، ومحببة والبلعمة الوحيدات والنشاط OB. وتشير دراسات متعددة أن محببة والوحيدات زيادة البلعمة بشكل كبير بعد ممارسة، والتي تعكس الالتهاب الناجم عن تلف العضلات ومطالب الأيضية. في المقابل، يقلل محببة وOB الوحيدات النشاط بعد ممارسة الرياضة وقد يكون مؤشر المناعة واحد من زيادة التعرض للعدوى. على سبيل المثال،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
توفر هذه المخطوطة بروتوكول خطوة بخطوة لتحديد مؤشرين للمحببة وظيفة الوحيدات. لقد حددنا بعض الخطوات التي تعتبر بالغة الأهمية لنجاح هذا الاختبار. واحدة من هذه الخطوة هي حضانة الجليد حمام الذي يحدث مباشرة قبل إضافة البكتيريا. سوف تبريد شامل لجميع عينات تقليل تأثير درجة الحرارة على البلعمة وOB النشاط. خطوة حاسمة أخرى هي إضافة البكتيريا على كل عينة. و8: 1 البكتيريا: نسبة بلعمية تنتج أفضل النتائج. لكن باحثين آخرين قد تجد أن هذه النسبة سوف تحتاج إلى تعديل لتحقيق نتائج مناسبة. خطوة حاسمة أ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
فإن الكتاب أن نعترف زاك شو كيسي جون، ولين Cialdella كام على المساعدة التي قدموها خلال الاستفادة المثلى من هذا الإجراء.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أنابيب 12 × 75 مم ، مع غطاء | VWR | 20170-579 | ستحتاج إلى أنبوبين لكل عينة ("H" و "F") بالإضافة إلى 3 أنابيب لكل دفعة (لعناصر التحكم في الفحص ؛ "F" و "H" و "Blood فقط"). |
| PBS (10x) ، درجة الحموضة 7.4 | Life Technologies | 70011-044 | |
| سطح الزجاجة 0.2 & micro ؛ م مرشح أسيتات السليلوز (سعة 500 مل) | فيشر ساينتيك | 09-741-07 | |
| الجلوكوز ، مسحوق | Life Technologies | 15023-021 | |
| حامض الستريك (اللامائي ، تم اختبار زراعة الخلايا ، واختبار زراعة الخلايا النباتية) | سيجما-ألدريتش | C2404-100G | |
| سترات الصوديوم ثلاثي القاعدة ثنائي الهيدرات | سيجما-ألدريتش | S4641-25G | |
| ثنائي هيدرو إيثيديوم (هيدروإيثيدين) (HE) | Life Technologies | D11347 | |
| ثنائي الميثيل سلفوكسيد (DMSO) تقنيات الحياة اللامائية | D12345 | ||
| المكورات العنقودية الذهبية ( سلالة الخشب بدون بروتين أ) الجسيمات الحيوية ، الفلورسين المترافق (FITC) Life | Technologies | S2851 | |
| المكورات العنقودية الذهبية ( سلالة الخشب بدون بروتين أ) الجسيمات الحيوية ، محلول | Life Technologies | S-2859 | |
| Trypan Blue غير المسمى ، 0.4٪ | Life Technologies | 15250-061 | |
| 4.0 مل vacutainer يحتوي على 7.2 مجم K2< / sub>EDTA ، VWR المجفف بالرش | BD367861 | ستحتاج إلى 1 K2< / sub>EDTA أنبوب جمع الدم لكل عينة. | |
| 4.0 مل فراغ يحتوي على 68 وحدة USP ليثيوم هيبارين ، | VWR | مطلي بالرش BD367884 | ستحتاج إلى 1 أنبوب ليثيوم هيبارين لجمع الدم لكل عينة. |
| كولتر تيار متردد & middot ؛ T 5diff CP | Beckman Coulter | 6605705 | i.e.< / em> ، محلل أمراض الدم |
| COULTER AC & middot ؛ T 5diff شطف | بيكمان كولتر | 8547167 | |
| كولتر AC & middot ؛ T 5diff Fix | Beckman Coulter | 8547171 | |
| COULTER AC & middot ؛ T 5diff WBC Lyse | Beckman Coulter | 8547170 | |
| كولتر AC & middot; T 5diff Hgb Lyse | Beckman Coulter | 8547168 | |
| COULTER AC & middot ؛ T 5diff Cal Calibrator | Beckman Coulter | 7547175 | |
| COULTER AC & middot ؛ T 5diff Control Plus | Beckman Coulter | 7547198 | |
| AcT 5diff Diluent | Beckman Coulter | 8547169 | |
| 200 & micro ؛ ل أطراف ماصة ممتدة | الطول VWR | 37001-526 | |
| وعاء ثلج معزول | VWR | 89198-980 | لحمام الماء المثلج. |
| رف أنبوب معدني مفتوح | VWR | 60916-702 | |
| تقنيات مصل الجنين | 26140-111 | ||
| TQ-Prep محطة عمل | بيكمان كولتر | 6605429 | i.< / em> ، محطة عمل تحضير ليز الخلية الآلي |
| نظام كاشف ImmunoPrep | Beckman Coulter | 7546999 | i.< / em> ، نظام كاشف إصلاح RBC Lyse / WBC |
| نظام قياس التدفق الخلوي Cytomics FC500 MCL مع برنامج CXP | Beckman Coulter | 626553 | |
| IsoFlow غمد السائل | بيكمان كولتر | 8547008 | |
| كولتر كلينز | بيكمان كولتر | 8546929 | |
| فحص التدفق الفلوروسفير ؛ | بيكمان كولتر | 6605359 | i.< / em> ، المحاذاة والتحقق من السوائل الفلوروسفير |
| FlowJo | FlowJo | FlowJo Flow | em على سبيل المثال < / em> ، برنامج تحليل قياس التدفق |
| برنامج Excel | Microsoft Microsoft | Excel | أي < / em> ، برنامج جداول البيانات الإلكترونية |
المراجع
- Nieman, D. C., et al. Influence of pistachios on performance and exercise-induced inflammation, oxidative stress, immune dysfunction, and metabolite shifts in cyclists: a randomized, crossover trial. PLoS One. 9, e113725(2014).
- Knab, A. M., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
