Method Article

المتلازم الخفيفة والمجهر الإلكتروني عن طريق الكم دوت النانوية

DOI:

10.3791/54307

⸱

August 7th, 2016

 , 
1South Western Sydney Clinical School, Faculty of Medicine, University of New South Wales Australia, 2School of Medicine, Western Sydney University, 3Correlative Microscopy Group, Ingham Institute for Applied Medical Research, 4Electron Microscopy Laboratory, Department of Anatomical Pathology, Sydney South West Pathology Service, New South Wales Health Pathology, 5School of Medical Sciences, Faculty of Medicine, University of New South Wales Australia

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = 'jove_content'> يتم وصف طريقة يمكن من خلالها استخدام الجسيمات النانوية للنقاط الكمومية (QD) للدراسات الكيميائية المناعية المترابطة لأنسجة الأمراض البشرية المضمنة في الإيبوكسي. نحن نستخدم QDs المترافقة لجزء الأجسام المضادة التجارية التي يتم تصورها بواسطة المجهر الضوئي الفلوري واسع المجال والفحص المجهري الإلكتروني للإرسال.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ووصف طريقة حيث الكم نقطة (QD) النانوية يمكن أن تستخدم للدراسات immunocytochemical المترابطة من الأنسجة علم الأمراض البشرية باستخدام widefield مضان المجهر الضوئي والمجهر الإلكتروني انتقال (تيم). للتدليل على بروتوكول قمنا immunolabeled أقسام الايبوكسي سامسونج الورم ورم سوماتوستاتيني البشري باستخدام الأجسام المضادة الأولية لالسوماتوستاتين، تليها الضد الثانوية المعقدة البيروكسيديز والتصور مع streptavidin مترافق 585 نانومتر الكادميوم والسيلينيوم (سيلينيد الكادميوم) نقاط الكم (نقاط الكمية). هي التي شنت المقاطع على تيم شبكة عينة ثم توضع على شريحة زجاجية للمراقبة من قبل widefield المجهر الضوئي مضان. المجهر الضوئي تكشف عن 585 نانومتر QD وضع العلامات، مضان برتقالية زاهية تشكيل نمط محبب داخل سيتوبلازم الخلية السرطانية. في منخفض للتضخم متوسطة المدى بواسطة المجهر الضوئي نمط العلامات يمكن التعرف عليه بسهولة ومستوى وضع العلامات غير محددة أو خلفية تقييمها. هذا هو حرجةخطوة للتفسير لاحق من نمط immunolabeling بواسطة تيم وتقييم سياق الصرفي. ونشف القسم نفسه ثم الجافة وينظر إليها من قبل تيم. وينظر تحقيقات QD لضمها الى مواد غير متبلور الواردة في حبيبات إفرازية الفردية. يتم الحصول على الصور من نفس المنطقة ذات الاهتمام (ROI) التي اطلعت عليها المجهر الضوئي لتحليل مترابط. المقابلة الصور من كل طريقة قد تكون ثم المخلوطة لتراكب البيانات مضان على تيم التركيب الدقيق للمنطقة المقابلة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ضوئية مترابط والمجهر الإلكتروني (كليم) هو طريقة فعالة لتحليل أحداث دينامية عابرة 1، والأحداث النادرة 2 و 3 و معقدة أنظمة 4. هناك العديد من التباديل التقنية المختلفة المتاحة 5 اعتمادا على السؤال المطروح ولكن شرط شيوعا هو أن نفس هيكل في عينة واحدة 6 وتصوير بطرائق المجهر متعددة. وقد وضعت لدينا نهج معين لكليم لدراسة أرشيفية الأنسجة أمراض الإنسان وقضية المستخدمة هنا اتسمت بشكل جيد ونشرت سابقا 7. وكان الهدف أولا، إلى تحقيق أقصى قدر من البيانات التحليلية من خزعة واحدة أو عينة جراحية، وثانيا، لاستخدام ضوء مضان المجهر للمساعدة في توضيح سياق نمط العلامات immunocytochemical....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الأنسجة تشريح والتثبيت

  1. الأنسجة تشريح
    1. تشريح قطعة نسيج من مقطوعة جراحيا ورم عينة أو خزعة الأنسجة.
      ملاحظة: الأنسجة المستخدمة في هذه الدراسة تم إصلاح بشكل روتيني في الفورمالين ولكن أنسجة جديدة هي أيضا مناسبة. اخترنا مساحة أكد وذكرت من قبل الطبيب الشرعي التشريحي لاحتواء الورم ورم سوماتوستاتيني بعد تلطيخ النسيجية الروتيني والمناعية المضادة للالسوماتوستاتين (لا يظهر).
    2. استخدام قطعة ن....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عينة ورم سوماتوستاتيني الورم المستخدمة في هذه الدراسة شكلت الخلايا السرطانية تشكيل الهياكل الأقنية مختلطة مع الأنسجة الفغرة الكولاجينية. بواسطة مضان المجهر الضوئي، الخلايا السرطانية الفردية التي تحتوي على حبيبات إفرازية وفيرة وأظهرت العلامات الإيجابية لهرمون السوماتوستاتين. ظهر نوى الثقوب والظلام مع الحد الأدنى من العلامات غير محددة كشفها (الشكل 1). في تكبير منخفضة، وكان ينظر مكثفة بنسب مختلفة مضان حبيبات البرتقال في السيتوبلازم من.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد أثبتت هذه الدراسة الفائدة المحتملة من نقاط الكمية كما تحقيقات العالمية للدراسات كليم. وأظهرت النانوية نانومتر QD 585 تستخدم مضان مشرق ومستقر عند عرضها بواسطة المجهر الضوئي widefield ولوحظت بسهولة من قبل تيم. وقد أظهرت دراسة سابقة أجراها أحد مؤلفي الحالية نقاط الكمية أيضا أن تكون مناسبة لفائقة الدقة المجهر الضوئي (7). كان صمود بهم مفيدة بشكل خاص لفترات المشاهدة الموسعة والتعرض التصوير الطويلة. ويمكن أيضا أن تستخدم نقاط الكمية لالمناعية متعددة مع تحقيقات مختلفة الحجم .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يرغب المؤلفون في الإعراب عن تقديرهم لدعم Xiao Juan Wu (مختبر الكيمياء المناعية) وقسم علم الأمراض التشريحي ، خدمة علم الأمراض في جنوب غرب سيدني (SSWPS) ، علم الأمراض الصحية في نيو ساوث ويلز ، ليفربول ، نيو ساوث ويلز ، أستراليا.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
كاكوديلات الصوديومProscitechC0205مادة كيميائية ضارة
أوزميوم رابعProscitechC010استخدم فقط في غطاء الدخان
أسيتات اليورانيلUnivar-Ajax569مادة كيميائية خطرة
إيثانول 100٪فرونينJJ008
أسيتون 100٪فرونينJJ006
ERL 4221ProscitechC056
DER 732ProscitechC047
NSAProscitechC059
DMAEProscitechC050
ميتابريدات الصوديومAnalar BDH10259
الأجسام المضادة المضادة للسوماتوستاتينداكوA0566
مخفف الأجسام المضادةداكوS3022
Qdot 585 Streptavidin Conjugate InvitrogenQ10113MP
البيوتينيل الماعز المضاد للأرانب IgG الأجسام المضادةSigmaB7389-1ML
Glutaraldehyde 50٪EMS16320
مصل الماعز العاديInvitrogenPCN5000
PBS "Dulbecco A"Oxoid   ؛BR0014G
BSAc (10٪) Aurion900.022
ParafilmPechiney PPM
شرائط مؤشر الأس الهيدروجيني (الرقم الهيدروجيني 2.0 - 9.0)ميرك1.09584.0001
MicromouldsProscitechRL063
سكين الماسDiatomeUltra 45
مجهر إلكتروني ناقلالحركة FEIMorgagni 268D
مجهر ضوئي مضانكارل زايسأكسيوسكوب A1
شبكات 300 شبكة نيكل (شريط رفيع)Agar ScientificG2740N
UltramicrotomeRMCPowertome
برنامج التحكم في الكاميرا TEMنظام التصوير الناعمAnalySISالإصدار 3.0
برامج معالجة الصورAdobe Systems مدمجفي Photoshop CS2
أكسيد

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kukulski, W., Schorb, M., Welsch, S., Picco, A., Kaksonen, M., Briggs, J. A. Correlated fluorescence and 3D electron microscopy with high sensitivity and spatial precision. J Cell Biol. 192 (1), 111-119 (2011).
  2. Introduction to correlative light and electron micr....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Correlative Light Electron MicroscopyQuantum Dot NanoparticlesImmunocytochemical StudiesTransmission Electron MicroscopyWidefield Fluorescence MicroscopySomatostatinoma Tumor TissueStreptavidin Conjugated QDsNickel Grid PreparationAntibody Labeling ProtocolFluorescence TEM Overlay

Related Articles