يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

في المختبر وفي النماذج الحية لدراسة الانتقال القرنية غشائي-الوسيطة

7.6K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/54329

⸱

أغسطس 20, 2016

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Ophthalmology, Far Eastern Memorial Hospital, 2Institute of Clinical Medicine, National Taiwan University, 3Department of Ophthalmology, National Taiwan University Hospital, 4College of Medicine, National Taiwan University

في هذه المقالة

ملخص

تم استخدام الثقافة الابتدائية الخلايا البطانية القرنية البقري للتحقيق في آلية القرنية الانتقالية البطانية الوسيطة. وعلاوة على ذلك، تم استخدام الفئران بطانة القرنية نموذج cryoinjury لإثبات القرنية الانتقالية البطانية الوسيطة في الجسم الحي.

الملخص

تلعب الخلايا البطانية القرنية (CECs) دورا مهما في الحفاظ على صفاء القرنية من خلال الضخ النشط. قد يؤدي انخفاض عدد CEC إلى وذمة القرنية وانخفاض حدة البصر. ومع ذلك ، فإن CECs البشرية عرضة لخطر إمكانات التكاثر. علاوة على ذلك ، غالبا ما يكون تحفيز نمو الخلايا معقدا بسبب الانتقال البطاني الوسيط التدريجي (EnMT). لذلك ، فإن فهم آلية EnMT ضروري لتسهيل تجديد CECs ذات الوظيفة المختصة. في هذه الدراسة ، قمنا بإعداد مزرعة أولية لمراكز التحكم المركزية البقرية عن طريق تقشير CECs بغشاء Descemet من زر القرنية وأظهرنا أن CECs البقرية أظهرت عملية EnMT ، بما في ذلك التغيير الظاهري ، والانتقال النووي ل β-catenin ، ومنظمات EMT الحلزون والسبيكة ، في الثقافة المختبرية. علاوة على ذلك ، استخدمنا نموذج إصابات بطانة القرنية بالتبريد للفئران لإثبات عملية EnMT في الجسم الحي. بشكل جماعي ، توفر الثقافة الأولية في المختبر لمراكز التحكم في الأبقار ونماذج إصابات بطانة القرنية في الجسم الحي منصات مفيدة للتحقيق في آلية EnMT.

المقدمة

تلعب الخلايا البطانية القرنية (CECs) دورا حيويا في الحفاظ على صفاء القرنية وبالتالي حدة البصر من خلال تنظيم حالة ترطيب سدى القرنية من خلال الضخ النشط1. بسبب الإمكانات التكاثرية المحدودة ل CECs البشرية ، يتناقص عدد الخلايا مع تقدم العمر ، وعادة ما يتم إصلاح الجروح البطانية للقرنية بعد الإصابة من خلال تضخم الخلايا وهجرتها ، بدلا من انقسام الخلايا2. عندما ينخفض عدد CEC إلى ما دون عتبة حوالي 500 خلية / مم2 ، لا يمكن الحفاظ على حالة الجفاف في سدى القرنية ، مما يؤدي إلى اعتلال القرنية الفقاعي وضعف البصر3،4.

تعزى الإمكانات التكاثرية المحدودة ل CECs البشرية إلى عدة عوامل ، بما في ذلك انخفاض التعبير عن عامل نمو البشرة ومستقبله في الخلايا الشيخوخة5 ، و TGFβ2 المضاد للتكاثر في الخلط المائي6 ، وتثبيط الاتصال2،7. على الرغم من أن بعض عوامل النمو ، مثل عامل نمو الخلايا الليفية الأساسية (bFGF) ، يمكن أن تزيد من التكاثر في بطانة القرنية البشرية المستنبتة ، إلا أن كفاءة الثقافة تظلمحدودة 8،9. علاوة على ذلك ، قد تخضع CECs لتغيير النمط الظاهري أثناء التوسع خارج الجسم الحي ، يشبه الانتقال الظهاري الوسيط (EMT) 10-13. يتميز الانتقال البطاني الوسيط (EnMT) بزعزعة استقرار تقاطع الخلية ، وفقدان القطبية القمية القاعدية ، وإعادة ترتيب الهيكل الخلوي ، وتعبير أكتين العضلات الملساء ألفا ، وإفراز الكولاجين من النوعالأول 14. كل هذه الخصائص قد تلغي الوظيفة الطبيعية ل CECs ، مما يعيق استخدام CECs المستزرعة خارج الجسم الحي في هندسة الأنسجة. علاوة على ذلك ، ارتبط EnMT بالتسبب في العديد من أمراض بطانة القرنية ، بما في ذلك ضمور القرنية البطاني فوكس وتكوين غشاء خلف القرنية15،16. لذلك ، قد يساعد فهم آلية EnMT في التلاعب بعملية EnMT وتسهيل تجديد CECs لتمكين الوظيفة المختصة.

في هذه الدراسة ، وصفنا طريقة لعزل CECs البقرية من زر القرنية. في الثقافة الأولية في المختبر ، لوحظت عملية EnMT ، بما في ذلك تغيير النمط الظاهري ، والانتقال النووي ل β-catenin ، ومنظمات EMT الحلزون والسبيكة. وصفنا كذلك طريقة لإظهار EnMT في الجسم الحي باستخدام نموذج إصابات بطانة القرنية بالتبريد للفئران. باستخدام هذين النموذجين ، أظهرنا أن marimasat ، وهو مثبط للبروتين المعدني واسع الطيف (MMP) ، يمكنه قمع عملية EnMT. تسهل البروتوكولات الموصوفة التحليل التفصيلي لآلية EnMT وتطوير استراتيجيات لمعالجة عملية EnMT لمزيد من التطبيق السريري.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وجاءت جميع الإجراءات في هذه الدراسة يتفق مع جمعية البحوث في الرؤية والعيون بيان لاستخدام الحيوانات في العيون والبحوث الرؤية وتمت الموافقة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي من مستشفى جامعة تايوان الوطنية.

1. عزل، إعداد الثقافة الابتدائية، والمناعية من الأبقار CECS

  1. الحصول على عيون البقر الطازجة من المسالخ المحلية.
  2. تطهير العيون في 10٪ ث / ت حل بوفيدون اليود لمدة 3 دقائق. غسلها بمحلول ملحي (PBS) حل الفوسفات.
  3. حصاد زر القرنية مع مشرط ومقص تحت ظروف معقمة. غشاء قشر ديسميه مع ملقط تشريح تحت المجهر (لاحظ أن في هذه الدراسة، تم منزوعة النواة عيون الأبقار التي المسالخ المحلية، وبالتالي، كان إجراء الدراسة الأولى لتعقيم عيون preenucleated في المختبر).
  4. احتضان غشاء ديسميه في 1 مل من المحاولةpsin عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. جمع CECS البقري عن طريق الطرد المركزي في 112 x ج لمدة 5 دقائق. Resuspend الخلايا في 1 مل من استكمال المتوسطة طلائي الهرموني (شيم) التي تحتوي على كميات متساوية من HEPES مخزنة Dulbecco لتعديل النسر المتوسطة والمتوسطة F12 هام، وتستكمل مع 5٪ مصل بقري جنيني، و 0.5٪ ثنائي ميثيل سلفوكسيد، 2 نانوغرام / مل من البشرة الإنسان عامل النمو، 5 ملغ / مل من الانسولين، 5 ملغ / مل من ترانسفيرين، 5 نانوغرام / مل من السيلينيوم، 1 نانومول / لتر من بكتيريا الكوليرا، 50 ملغ / مل الجنتاميسين، و 1.25 ملغ / مل من أمفوتيريسين B.
  5. البذور الخلايا (حوالي 1 × 10 5 خلايا لكل عين) في طبق 6 سم. ثقافة لهم في SHEM. احتضان الطبق عند 37 درجة مئوية في جو من 5٪ CO 2 في الهواء. تغيير ثقافة المتوسط ​​كل 3 أيام.
  6. وعندما تصل خلايا التقاء، غسلها في برنامج تلفزيوني واحتضان لهم في 1 مل من التربسين عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. جمعها بواسطة الطرد المركزي في 112 x ج لمدة 5 دقائق. إعادة تعليق بيليه خلية في 1 مل من SHEM.
    1. عد الخلايا في عدادة الكريات. البذور الخلايا على الشرائح غطاء في مناطق ذات كثافة من 1 × 10 4 لكل بئر في 24 لوحة جيدا، والثقافة الخلايا في SHEM. للتحقيق في تأثير EnMT-قمع من marimastat، واحتضان الخلايا في SHEM مع 10 ميكرومتر من marimastat إضافتها إلى مستنبت، وتغيير ثقافة المتوسط ​​كل 3 أيام.
  7. إصلاح الخلايا في مرحلة الزمنية المشار إليها مع 250 ميكرولتر من 4٪ لامتصاص العرق، ودرجة الحموضة 7.4، لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. Permeabilize مع 250 ميكرولتر من 0.5٪ تريتون X-100 لمدة 5 دقائق. منع مع 10٪ البقري ألبومين المصل لمدة 30 دقيقة.
  8. احتضان الخلايا مع الأجسام المضادة الأولية ضد نشط بيتا كاتينين (ABC)، الحلزون، وسبيكة بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية. التخفيف من الأجسام المضادة الأولية المستخدمة هي 1: 200. والمخفف الأجسام المضادة في مخفف الأجسام المضادة تتكون من 10 ملي PBS، 1٪ ث / ت زلال المصل البقري، و0.09٪ ث / ت أزيد الصوديوم.
  9. غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 15 دقيقة، واحتضانم مع الأجسام المضادة اليكسا فلور مترافق الثانوية (1: 100 في مخفف الضد) في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة.
  10. مباين نواة الخلية التي تغطي الخلايا مع 2 ميكروغرام / مل من 4، 6 diamidino-2-phenylindole، وغسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 15 دقيقة، وجبل لهم مكافحة يتلاشى حل المتصاعدة.
  11. الحصول على صور مناعي في موجات الإثارة من 405 و 488 نانومتر باستخدام ليزر المسح المجهر متحد البؤر مع 20X التكبير موضوعي.

نموذج 2. الجرذ القرنية البطانة Endothelium Cryoinjury وIntracameral حقن

  1. تخدير الفئران الذكور سبراغ داولي القديمة الأسبوع ال 12 مع الحقن في العضل من 2٪ زيلازين (5.6 ملغ / كلغ) وتلييتامين بالإضافة إلى zolazepam (18 ملغ / كلغ). قرصة بلطف على جلد الحيوانات لتأكيد التخدير المناسبة في غياب الوخز الجلد.
  2. غرس قطرة واحدة من 0.5٪ بروباراكايين هيدروكلوريد للعين اليمنى من كل الفئران للحد من ألم في العين والتصرفات طرفة. غرسالتتراسيكلين مرهم للعين اليسرى لمنع جفاف القرنية.
  3. تبريد التحقيق الفولاذ المقاوم للصدأ (القطر = 3 ملم) في النيتروجين السائل. تطبيق مسبار الفولاذ المقاوم للصدأ إلى القرنية المركزية في العين اليمنى لمدة 30 ثانية. كثيرا ما غرس في برنامج تلفزيوني للعين اليمنى خلال الإجراء لمنع جفاف القرنية.
  4. غرس 0.1٪ الأتروبين و 0.3٪ كبريتات الجنتاميسين على الفور بعد cryoinjury ومرة ​​واحدة يوميا لتخفيف الألم العين الناتجة عن تشنج الهدبية، ومنع العدوى.
    1. بعد العملية، والحفاظ على الفئران الحارة باستخدام مصباح الحرارة، ومراقبة شفائهم كل 15 دقيقة بعد التخدير حتى يستعيد التحكم في المحركات. بالإضافة إلى ذلك، تطبيق التتراسيكلين مرهم للعين اليمنى لمنع جفاف القرنية خلال فترة النقاهة.
  5. كرر cryoinjury القرنية لمدة 3 أيام متتالية.
  6. لتقديم marimastat أو bFGF في الغرفة الأمامية للعين الفئران، تخدير الفئران كما هو موضح سابقا. غرس قطرة واحدة0.5٪ بروباراكايين هيدروكلوريد في العين اليمنى للتقليل من ألم في العين والتصرفات طرفة.
  7. لري سطح العين مع برنامج تلفزيوني العقيمة. أداء الأمامي بزل غرفة تحت المجهر التشغيل عن طريق إدخال إبرة 30 G تعلق على حقنة 1 مل في القرنية واضحة paralimbal في طائرة أعلاه وبالتوازي مع القزحية.
  8. تحويل إبرة شطبة يصل، وخفض قليلا الجرح القرنية لاستنزاف بعض الخلط المائي وتقليل الضغط داخل العين. حقن 0.02 مل من المخدرات intracamerally. ضغط بلطف الجهاز إبرة مع طرف القطن خلال سحب الإبرة.
  9. تصوير العين الخارجية في مرحلة الزمنية المشار إليها تحت المجهر التشغيل.

3. حصاد الجرذ زر القرنية والمناعية

  1. إلى الموت ببطء الفئران، ووضعها في غرفة القتل الرحيم ويبث 100٪ CO 2 بمعدل ملء من 10-30٪ من حجم الغرفة في الدقيقة الواحدة. الحفاظ CO 2 ضخ لدقيقة إضافية بعد عدم وجود التنفس وتلاشى لون العين.
  2. اختراق العين الفئران في حوف بشفرة حادة. قطع القرنية مع مقص القرنية على طول حوف. تسطيح القرنية على شريحة. جعل شقوق شعاعي إضافية إذا القرنيات عقص.
  3. إصلاح القرنيات مع 250 ميكرولتر من 4٪ لامتصاص العرق، ودرجة الحموضة 7.4، لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. Permeabilize مع 250 ميكرولتر من 0.5٪ تريتون X-100 لمدة 5 دقائق، ومنع مع 10٪ البقري ألبومين المصل لمدة 30 دقيقة.
  4. احتضان القرنيات مع الأجسام المضادة الأولية ضد ABC بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية مع التخفيف من 1: 200 في مخفف الأجسام المضادة. غسل القرنيات مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 15 دقيقة، واحتضان لهم مع الأجسام المضادة الثانوية (1: 100 في مخفف الضد) في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة. مباين نواة الخلية التي تغطي الخلايا مع 2 ميكروغرام / مل من 4، 6 diamidino-2-phenylindole، وغسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 15 دقيقة.
  5. جبل القرنيات في مكافحة يتلاشى حل المتصاعدة. أوبتين الصور مناعي في موجات الإثارة من 405 و 561 نانومتر مع المسح الضوئي ليزر متحد البؤر المجهر في 20X التكبير موضوعي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

بعد عزل CECS الأبقار، كانت الخلايا المستزرعة في المختبر الشكل 1 يعرض الصور الطوري من CECS البقري. وأشار شكل سداسي الخلايا في التقاء أن الخلايا لم تكن ملوثة الليفية انسجة القرنية خلال العزلة خلية الشكل 2 يصور المناعية التي تم تنفيذها باستخدام أجسام مضادة ضد اي بي سي، الحلزون، وعريانة في مرحلة الزمنية المشار إليها. وبصرف النظر عن التغيرات المظهرية في الثقافة في المختبر، لوحظ وجود النبات النووي المقا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ومن المعروف CECS لميلها للخضوع EnMT خلال تكاثر الخلايا. لوضع استراتيجيات لقمع عملية EnMT لأغراض علاجية، فهم دقيق لآلية EnMT ضروري. وصفنا 2 نماذج للتحقيق EnMT، وهي لجنة الانتخابات المركزية البقري في نموذج الثقافة المختبر والفئران بطانة القرنية نموذج cryoinjury. أظهرت نتائجنا عملية EnMT في كلا النموذجين. وعلاوة على ذلك، تمت إعادة إظهار تأثير قمع EnMT من marimastat في كلا النموذجين، مما يشير إلى أن هذه النماذج 2 تشترك في نفس آلية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين مصالح مالية متنافسة للإعلان.

شكر وتقدير

نشكر موظفي المختبر الأساسي الثاني ، قسم البحوث الطبية ، مستشفى جامعة تايوان الوطنية على دعمهم الفني.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
تربسينثيرموفيشر العلمي12604-013
دولبيكو s متوسط النسر المعدل و Ham's F12 متوسطThermoFisher Scientific11330
مصل الأبقار الجنينيThermoFisher Scientific26140-079
ثنائي ميثيل سلفوكسيدSigmaD2650
عامل نمو البشرة البشريThermoFisher ScientificPHG0311
الأنسولين ، ترانسفيرين ، السيلينيوم   ؛ThermoFisher Scientific41400-045
توكسين الكوليراSigmaC8052-1MG
gentamicinThermoFisher Scientific15750-060
أمفوتريسين بThermoFisher Scientific15290-026
علوم المجهر الإلكترونيبارافورمالديهايد111219
Triton X-100SigmaT8787 
ألبومين مصل الأبقارSigmaA7906
marimastatSigmaM2699-25MG
الجسم المضاد المضاد بيتا كاتينين المضاد للنشاطMillpore05-665
الجسم المضاد للحلزونسانتا كروزsc28199
الأجسام المضادة للسبيكةسانتا كروزsc15391
الماعز المضاد للفأر IgG (H + L) الثانوي الجسم المضادThermoFisher ScientificA-11001لتلوين ABC من CECs البقري
الماعز المضاد للفأر IgG (H + L) الجسم المضاد الثانويThermoFisher ScientificA-11003لتلوين ABC من بطانة القرنية الفئران
الماعز المضادة للأرانب IgG (H + L) الجسم المضاد الثانويThermoFisher ScientificA-11008لتلوين الحلزون والسبيكة من الأبقار CECs
مخفف الأجسام المضادةGenemed التقنيات الحيوية10-0001
4',6-diamidino-2-phenylindoleThermoFisher ScientificD1306
تصاعد متوسطمختبرات ناقلاتH-1000
مجهر متحد البؤر للمسح الضوئي بالليزرZEISSLSM510
xylazine بايرN / A
التيتامين بالإضافة إلى زولازيبامVirbac N/ Aالمخدرات البيطرية
بروباراكايين هيدروكلوريد محلول العيونAlconN / Aالمخدرات البيطرية
0.1٪ الأتروبينWu-Fu Laboratories Co., LtdN / Aالمخدرات السريرية  
0.3٪ كبريتات الجنتاميسينمجموعة SinpharN / Aالدواء السريري  
عامل نمو الخلايا الليفية الأساسيةThermoFisher ScientificPHG0024Clinical Drug  

المراجع

  1. Maurice, D. M. The location of the fluid pump in the cornea. J Physiol. 221 (1), 43-54 (1972).
  2. Joyce, N. Proliferative capacity of the corneal endothelium. Progress in Retinal and Eye Research. 22 (3), 359-389 (2003).
  3. Morishige, N., Sonoda, K. H. Bullous keratopathy as a progressive disease: evidence from clinical and laboratory imaging studies. Cornea. 32, Suppl 1 77-83 (2013).
  4. Bates, A. K., Cheng, H., Hiorns, R. W. Pseudophakic bullous keratopathy: relationship with endothelial cell density and use of a predictive cell loss model. A preliminary report. Curr Eye Res. 5 (5), 363-366 (1986).
  5. Wilson, S. E., Lloyd, S. A. Epidermal growth factor and its receptor, basic fibroblast growth factor, transforming growth factor beta-1, and interleukin-1 alpha messenger RNA production in human corneal endothelial cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 32 (10), 2747-2756 (1991).
  6. Chen, K. H., Harris, D. L., Joyce, N. C. TGF-beta2 in aqueous humor suppresses S-phase entry in cultured corneal endothelial cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 40 (11), 2513-2519 (1999).
  7. Senoo, T., Obara, Y., Joyce, N. C. EDTA: a promoter of proliferation in human corneal endothelium. Invest Ophthalmol Vis Sci. 41 (10), 2930-2935 (2000).
  8. Yue, B. Y., Sugar, J., Gilboy, J. E., Elvart, J. L. Growth of human corneal endothelial cells in culture. Invest Ophthalmol Vis Sci. 30 (2), 248-253 (1989).
  9. Peh, G. S., Beuerman, R. W., Colman, A., Tan, D. T., Mehta, J. S. Human corneal endothelial cell expansion for corneal endothelium transplantation: an overview. Transplantation. 91 (8), 811-819 (2011).
  10. Zhu, C., Rawe, I., Joyce, N. C. Differential protein expression in human corneal endothelial cells cultured from young and older donors. Mol Vis. 14, 1805-1814 (2008).
  11. Ko, M. K., Kay, E. P. Regulatory role of FGF-2 on type I collagen expression during endothelial mesenchymal transformation. Invest Ophthalmol Vis Sci. 46 (12), 4495-4503 (2005).
  12. Lee, H. T., Kay, E. P. FGF-2 induced reorganization and disruption of actin cytoskeleton through PI 3-kinase, Rho, and Cdc42 in corneal endothelial cells. Mol Vis. 9, 624-634 (2003).
  13. Pipparelli, A., et al. ROCK Inhibitor Enhances Adhesion and Wound Healing of Human Corneal Endothelial Cells. PloS one. 8 (4), e62095(2013).
  14. Roy, O., Leclerc, V. B., Bourget, J. M., Theriault, M., Proulx, S. Understanding the process of corneal endothelial morphological change in vitro. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (2), 1228-1237 (2015).
  15. Jakobiec, F. A., Bhat, P. Retrocorneal membranes: a comparative immunohistochemical analysis of keratocytic, endothelial, and epithelial origins. Am J Ophthalmol. 150 (2), 230-242 (2010).
  16. Okumura, N., et al. Involvement of ZEB1 and Snail1 in excessive production of extracellular matrix in Fuchs endothelial corneal dystrophy. Lab Invest. 95 (11), 1291-1304 (2015).
  17. Okumura, N., et al. Enhancement on primate corneal endothelial cell survival in vitro by a ROCK inhibitor. Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (8), 3680-3687 (2009).
  18. Zhu, Y. T., Chen, H. C., Chen, S. Y., Tseng, S. C. G. Nuclear p120 catenin unlocks mitotic block of contact-inhibited human corneal endothelial monolayers without disrupting adherent junctions. J Cell Sci. 125 (15), 3636-3648 (2012).
  19. Ho, W. T., et al. Inhibition of Matrix Metalloproteinase Activity Reverses Corneal Endothelial-Mesenchymal Transition. Am J Pathol. 185 (8), 2158-2167 (2015).
  20. Kay, E. D., Cheung, C. C., Jester, J. V., Nimni, M. E., Smith, R. E. Type I collagen and fibronectin synthesis by retrocorneal fibrous membrane. Invest Ophthalmol Vis Sci. 22 (2), 200-212 (1982).
  21. Li, C., et al. Notch Signal Regulates Corneal Endothelial-to-Mesenchymal Transition. Am J Pathol. 183 (3), 786-795 (2013).
  22. Okumura, N., et al. The ROCK Inhibitor Eye Drop Accelerates Corneal Endothelium Wound Healing. Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (4), 2493-2502 (2013).
  23. Mannermaa, E., Vellonen, K. S., Urtti, A. Drug transport in corneal epithelium and blood-retina barrier: emerging role of transporters in ocular pharmacokinetics. Adv Drug Deliv Rev. 58 (11), 1136-1163 (2006).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

Maramastat FGF
في المختبر وفي النماذج الحية لدراسة الانتقال القرنية غشائي-الوسيطة
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.