بيان الأخلاق: تمت الموافقة على الإجراءات التجريبية من قبل لجنة الأخلاق الحيوان من جامعة جنوب تايوان للعلوم والتكنولوجيا مختبر مركز الحيوان، المجلس الوطني للعلوم وجمهورية الصين (تاينان، تايوان).
1. بناء الهيكل تشغيل عجلة
ملاحظة: يجب أن تكون جميع الاكريليك الشفاف. غسل عجلة تفكيكها بالماء، ثم استخدم الكحول لمسح مسار المطاط وأوراق الأكريليك بعد كل استعمال.
- الحصول على عجلة دوارة الاكريليك أن تكون 55 سم وقطرها 15 سم في العرض.
ملاحظة: هذه العجلة أكبر من عجلة التقليدية تشغيل (قطر = 35 سم، العرض = 12 سم) (F igure 1A). - استخدام قطع، وقطع فتح ربع دائرة إلى جانب واحد من عجلة دوارة ليكون بمثابة مدخل ومخرج وكذلك بالنسبة للفئران (الشكل 1B). وضع طبقة من ارتفاع الاحتكاك المطاط المسار في الداخل من ACRعجلة ylic (الشكل 1B).
- وضع قضيب حديدي مع محامل لربط عجلة دوارة (الشكل 1B). وضع عمودين الثلاثي الاكريليك على جانبي عجلة دوارة لتكون بمثابة إطار الدعم (الشكل 1B).
- إرفاق سميكة نصف دائري، الاكريليك ورقة شفافة 1 مم إلى الجانبين الخارجية عمودين الثلاثي باستخدام مسامير. استخدام هذه الورقة لنشر أجهزة الاستشعار بالأشعة تحت الحمراء. تأكد من أن أوراق الأكريليك ما يقرب من 3 سم بعيدا عن كل جانب من عجلة دوارة.
2. نشر مجسات الأشعة تحت الحمراء وتحديد تمرين فعال المنطقة
ملاحظة: يجب الأخذ بعين الاعتبار حجم عجلة دوارة وطول الفئران في تصميم نظام الأشعة تحت الحمراء. فأر يتسبب فقط جهاز استشعار واحد في وقت واحد. في هذه التجربة، الفئران ما بين 20 و 23 سنتيمترا.
- حفر حفرة في أوراق الأكريليك كل (الفترة قوس = 21 سم) 45 درجة، مع المسافةبين اثنين من الثقوب كونه يعادل تقريبا طول فأر اختبار. جعل ثقوب بنفس حجم أجهزة الاستشعار بالأشعة تحت الحمراء (الشكل 2A).
ملاحظة: للحصول على MRWs التقليدية، حفر حفرة كل 70 درجة (الفترة قوس = 21 سم، والشكل 2B). - خلال تجربة PRW، والحفاظ على الفئران في حالة مستقرة الجري بين 0 درجة إلى 135 درجة.
ملاحظة: وهكذا تحدد هذا المجال باعتبارها منطقة الممارسة الفعلية، في حين عرض جميع الفروع الأخرى، حيث إن مناطق ممارسة فعالة. لMRWs التقليدية، وتحديد منطقة الممارسة الفعلية كما الجزء بين 0 درجة إلى 140 درجة (الشكل 2B).
3. قيادة عجلة الجري
- استخدام العاصمة فرش السيارات والمحركات سائق لدفع عجلة دوارة.
- شن 10 سم قرص قطره المطاط على المحور المركزي للمحرك (الشكل 1B).
- باستخدام إطار الحديد والينابيع لدعم المحرك، ربط القرص المطاطي منمحور المحرك المركزي إلى الجانب الخارجي للعجلة دوارة.
ملاحظة: يجب أن الينابيع التعاون مع مسامير للسماح للتعديلات ارتفاع المحرك الديناميكي ومنع القرص المطاطي من يتم قطع الاتصال إلى مسار عجلة دوارة بسبب الينابيع فضفاضة. - تشغيل المحرك لدفع 10 سم قرص قطره المطاط باستخدام متحكم، ومراقبة عجلة تدوير المقرر أن الاحتكاك بين القرص المطاطي ومدرج عجلة، وخلق منصة عجلة دوارة الآلية.
- جبل أربعة أجهزة استشعار الأشعة تحت الحمراء بشكل متتالي بين 0 درجة إلى 135 درجة (الشكل 2A).
ملاحظة: للحصول على MRWs التقليدية، جبل أجهزة استشعار بين 0 درجة إلى 140 درجة (الشكل 2B). - ربط أربعة أزواج من أجهزة الاستشعار بالأشعة تحت الحمراء مثبتة في كل من صفائح الاكريليك دبابيس العامة للمتحكم باستخدام الكابلات الأساسية واحدة، وبالتالي تكوين نظام تحديد المواقع عجلة دوارة.
4. بناء على التكيف Acceleratiعلى المنحنى
- قبل ثلاثة أيام من بدء التمرينات 3 أسبوع الرسمي، وتدريب الفئران عن طريق تشغيل عجلة دوارة يدويا.
ملاحظة: إن الهدف هو السماح للفئران لتصبح مألوفة مع بيئة التشغيل، وهو لاختبار ما إذا كان كل الفئران يمكن أن يدوم على التوالي في 20 م / دقيقة. - أثناء التدريب تشغيلها يدويا، وتسريع تدريجيا سرعة الجري حتى الفئران غير قادر على مواكبة. عندما يحدث هذا، وانخفاض سرعة حتى يستعيد الفئران وتيرة تشغيل ثابتة، ومن ثم زيادة تدريجية في سرعة مرة أخرى حتى يصل الفئران 20 م / دقيقة (الخطوط المتقطعة في الشكل 3). التدريب اليدوي ينطوي على سبعة فئران لبناء منحنيات التدريب.
- باستخدام المعادلة العددية لتتناسب مع البيانات المقاسة في يوم 3 من دليل الاختبار، وحساب منحنيات تسارع الأقرب إلى التدريب اليدوي (منحنى مع الدوائر، الشكل 3). معادلة تناسب 1 إلى البيانات الخام، حيث C INI = 8، C زعنفة = 20 و τ = 30 تمثل السرعة الأولية، والسرعة النهائية ووقت ثابت، على التوالي).
ملاحظة: هذه المعادلة تتكيف مع حالة جسم فأر. لذلك، يرجى الرجوع إلى منحنى تحسب على أنها نموذج للتدريب على تسريع التكيف.
(1) - استخدام المعادلة 1 للأسبوع 1 التدريب الرسمي.
- لأسابيع 2 و 3 من التدريب، وضبط المعلمات من المعادلة 1، وهذا هو القول، وتغير و12-22، للسماح للسرعة لتصل الى 30 م / دقيقة.
5. السيطرة على البرنامج البرمجيات
ملاحظة: حصريا وضع مدونة لتشغيل المحرك القائم على متحكم ولنقل الإشارات من أجهزة الاستشعار بالأشعة تحت الحمراء إلى جهاز كمبيوتر لتحليل البيانات لاحقا.
- استخدام لغة C برمجة لكتابة برنامج مراقبة البرامج التي تحتوي على برنامج رئيسي واحد واثنين من روتين المقاطعة خدمة للتوقيت فيمتحكم 18.
- تأكد من أن البرنامج الرئيسي تهيئة السجل متحكم ويبني نموذج منحنى تسريع التكيف في ذاكرة متحكم في.
- استخدام روتين المقاطعة خدمة لالموقت 0 لتفعيل منحنى تسريع التكيف وحساب مدة التدريب بالكامل.
- استخدام روتين المقاطعة الخدمة من الموقت 1 إلى استخراج البيانات إشارة من أجهزة الاستشعار بالأشعة تحت الحمراء ونقل البيانات إلى جهاز الكمبيوتر.
- استخدام البرنامج الرئيسي لتسجيل موقف 0 س لضبط سرعة عجلة دوارة.
- مرة واحدة يتم تشغيل جهاز استشعار الأشعة تحت الحمراء المتلقي في 0 درجة، تفسر على أنها حالات سقوط، والتي تراكمت من قبل البرنامج الرئيسي. لحظة الأوقات قوع حوادث سقوط يضرب عتبة 10٪ من عدد المكتشفة موقف الفئران، deaccelerate على عجلة دوارة تلقائيا كإجراء وقائي لالفئران المدربة. ملاحظة: سرعة سيتم تخفيض و عجلة تشغيل حتى الفئران يمكن ان يعود الى المنطقة الآمنة (0 س إلى 135 س) والحفاظ على حالة تشغيل مستقرة لتدابير السلامة.
6. التشغيل نظام عجلة دوارة لتحديد المواقع
- بدوره على متحكم والانتظار للحصول على مشغل للضغط على زر لبدء نموذج التدريب كل أسبوع.
- اضغط على زر "ابدأ" لبدء نموذج تدريب للأسبوع 1.
ملاحظة: المحرك تتسارع تلقائيا استنادا إلى منحنى تسريع التكيف حتى يصل إلى 20 م / دقيقة، ويتوقف تلقائيا بعد 30 دقيقة. - اضغط على زر "ابدأ" لبدء نموذج تدريب للأسبوع 2.
ملاحظة: المحرك تتسارع تلقائيا استنادا إلى منحنى تسريع التكيف حتى يصل إلى 30 م / دقيقة، ويتوقف تلقائيا بعد 30 دقيقة. - اضغط على زر "ابدأ" لبدء نموذج تدريب للأسبوع 3.
ملاحظة: المحرك تلقائيا acceleraقسم التدريب والامتحانات على أساس منحنى تسريع التكيف حتى يصل إلى 30 م / دقيقة، ويتوقف تلقائيا بعد 60 دقيقة.
ملاحظة: خلال عملية التدريب برمتها، نقل البيانات إشارة وردت من أجهزة الاستشعار بالأشعة تحت الحمراء إلى جهاز كمبيوتر لاسلكيا.
- استخدام جهاز كمبيوتر، وتحليل بيانات الموقع للحصول على مقياس الممارسة الفعلية لعملية العملية برمتها (
). انظر المعادلة 2.
(2)
ملاحظة: EEE، EED والعبوات الناسفة تمثل المقياس ممارسة فعالة، وفترات الفعالة وغير الفعالة وممارسة، على التوالي.
7. تدريب الفئران
- عشوائيا تقسيم الذكور البالغين فئران سبراغ داولي إلى خمس مجموعات (ن = 9 لكل مجموعة): في الشام، ومراقبة، مطحنة، مخلفات وPRW المجموعات.
- إجراء 3 أسابيع تدريبات لمجموعات ممارسة ثلاثة، أي آرeadmill، مخلفات وPRW مجموعات، في حين لا للخدعة ومجموعات المراقبة.
ملاحظة: 3 أسبوع التمرينات لكل مجموعة التمرين 20 م / دقيقة لمدة 30 دقيقة خلال أسبوع 1، 30 م / دقيقة لمدة 30 دقيقة خلال أسبوع 2 و 30 م / دقيقة لمدة 60 دقيقة خلال أسبوع 3.
8. الحيوانية والسكتة الدماغية نموذج
- كما جاء في ثانية. 7.1 تقسيم عشوائيا كل الذكور البالغين فئران سبراغ داولي المعنية، يتراوح وزنها بين 250-280 غرام، في 5 مجموعات.
- تزن كل الحيوانات لضمان دقة الحسابات جرعة الدواء. تخدير الفئران مع بنتوباربيتال الصوديوم (25 ملغ / كغ، البريتونى [IP]) ومزيج يحتوي على الكيتامين (4.4 ملغ / كغ، العضل [الدردشة])، الأتروبين (0.02633 مغ / كغ، [ايم]) وزيلازين (6.77 ملغ / كغ، [ايم]).
- تقييم عمق التخدير عن طريق رصد معدل التنفس (العادية 70-115 الأنفاس / دقيقة)، والإيقاع، وعمق التنفس، المخاطية لون الغشاء والفحص الدوري من ردود الفعل، وعلى سبيل المثال اصبع القدم قرصة، قرصة الذيل، جفن / رمشوجفني.
- إدراج تحقيقات درجة الحرارة في المستقيم، والحفاظ على درجة حرارة المستقيم بين 37 حتي 37،5 درجة مئوية باستخدام مصابيح التدفئة في فصل.
- حمل نقص التروية التنسيق، عابرة الأوسط الدماغي انسداد الشريان (MCAo) عن طريق إدراج خيوط في الشريان السباتي الداخلي لتسد فوهة الشريان الدماغي الأوسط عبر نهج الشريان السباتي الخارجي 19.
- تؤدي نفس إجراءات التشغيل على الحيوانات الشام التي تديرها، في حين لا إدراج خيوط في الشريان السباتي الداخلي. الحفاظ على نقص التروية الدماغية البؤري لمدة 1 ساعة، وإزالة خيوط، إغلاق شق، ثم ترك 1 سم من الخيط النايلون جاحظ، والتي يمكن سحبها للسماح ضخه.
- إدارة تحت الجلد (SC) حقن مسكن (البوبرينورفين (0.05 ملغ / كغ، الشوري))، في الحيوانات لتسكين مرتين يوميا لمدة 3 أيام.
9. تقييم الأضرار العصبية
- وحدة التقييموظائف uate العصبية والحركية، على التوالي، من قبل نتيجة شدة العصبية (mNSS) 20 واختبار طائرة يميل 21.
ملاحظة: mNSS هو مركب من المحرك (وضع العضلات، وحركة غير طبيعية)، الحواس (البصر، اللمس واستقبال الحس العميق) واختبارات المنعكس. منح نقطة واحدة لعدم أداء هذه المهمة. معدل الوظائف العصبية على مقياس من 0-18 (درجة العادية = 0؛ القصوى درجة العجز = 18). - تقييم جميع الفئران من حيث الأداء السلوكي قبل يوم ويوميا على مدى فترة زمنية من 7 أيام بعد الجراحة.
- قياس قوة قبضة أطرافه الخلفية من الفئران باستخدام تميل الطائرة.
- وضع الفئران على الجهاز تسلق يميل على أساس يومي، والتأقلم الفئران لأجهزة وظروف الاختبار قبل الاختبار 1 أسبوع.
- وضع كل فأر على الجهاز وتشجيع الفئران لتسلق منصة حتى الجزء العلوي من الجهاز خلال فترة التأقلم.
- وضع الفئران فيالجزء العلوي من الجهاز مع رئيس النزولي أثناء الاختبار. تأكد من أن محور الجسم من إقامة الفئران على طول إلى 20 × 20 سم 2 المطاط سطح مضلع على مستوى مائل تبدأ في زاوية من 25 درجة.
- زيادة زاوية حيوي باستخدام الكرة اللولبية على اتصال مع محرك السائر لتحديد زاوية القصوى التي حيوان يمكن أن يحمل إلى الطائرة. زيادة زاوية تميل الطائرة تدريجيا حتى فشل الماوس لعقد على مستوى مائل، ثم الكشف عن الانزلاق إلى أسفل الحدث. درجة الأساس تميل الطائرة هي 25 درجة في البداية.
- طرح اثنين من المراقبين (غافلا عما العلاج قد أعطيت الفئران)، لدراسة مستقلة ويسجل جميع الاختبارات السلوكية، أي متوسط الزوايا القصوى اليسارية واليمين الجانب.
- العجزي فاي م جميع الحيوانات في يوم 7 بعد MCAo. يروي قلوب الحيوانات تحت التخدير العميق (بنتوباربيتال الصوديوم 100 ملغ / كغ، والملكية الفكرية) بمحلول ملحي 22 . إزالة ثم تغمر أنسجة المخ في المياه المالحة الباردة لمدة 5 دقائق، وبعد ذلك شرائح إلى أقسام الاكليلية 2.0 ملم باستخدام تقطيع الأنسجة (22).
- غمر أقسام الدماغ جديدة في 2، 3، 5-triphenyltetrazolium كلوريد (TTC) عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة، ثم نقل شرائح إلى 5٪ محلول الفورمالديهايد لxation فاي في 4 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. وضع شرائح الدماغ الملون على حامل زجاجي.
- تصوير شرائح الملون عقاري مع نطاق ومعايرة باستخدام كاميرا CCD ربط جهاز كمبيوتر شخصي محملة برامج معالجة الصور. استخدام نظام تحليل الصور مؤتمتة شبه كذلك لتقدير المساحة محتشية (مم 2) من كل شريحة الدماغ الملون TTC-23.
- حساب حجم احتشاء الإجمالي لكل شريحة من الجمع من المناطق محتشية من جميع شرائح الدماغ. علامة منطقة غير ملوثين (الدماغ الدماغية) بشكل منفصل على كل جانب من شرائح سميكة 2 مم، ثم حساب حجم احتشاء والقيمة المتوسطة.
- Calcuفي وقت متأخر من حجم احتشاء تصحيح (العاجي) كما
CIV = {LT- (RT- RI)}
د (3)
ملاحظة: أين LT و RT دلالة على مناطق من نصفي الكرة اليمين واليسار في مم 2، على التوالي، RI هو المجال محتشية في مم 2، ود = 2 مم هو سمك شريحة.