وتبين لنا كيفية تحضير شرائح مائلة من الحبل الشوكي في الفئران الشابة. هذا الإعداد يسمح لتحفيز الجذور البطنية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
لإعداد المائل الحبل الشوكي شرائح لبطني الجذر تحفيز
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وقد أثبتت التسجيلات الكهربية من شرائح الحبل الشوكي لتكون تقنية قيمة للتحقيق في مجموعة واسعة من الأسئلة، من الخلوية إلى خصائص الشبكة. وتبين لنا كيفية تحضير شرائح مائلة قابلة للحياة من الحبل الشوكي من الفئران الشابة (P2 - P11). في هذا الإعداد، والعصبونات الحركية تحتفظ المحاور التي تخرج من الجذور البطنية من النخاع الشوكي. تحفيز هذه المحاور يثير-نشر يعود إمكانات العمل غزو somas العصبون الحركي ومثيرة الضمانات والعصبون الحركي داخل الحبل الشوكي. تسجيل امكانات العمل معاكسة للمسيرة هو وسيلة فورية، نهائية وأنيقة لتوصيف هوية العصبون الحركي، والذي يتجاوز أساليب هوية أخرى. وعلاوة على ذلك، وحفز الضمانات العصبون الحركي هو وسيلة بسيطة وموثوق بها لإثارة أهداف ضمانات من العصبونات الحركية في النخاع الشوكي، مثل العصبونات الحركية أو R أخرىenshaw الخلايا. في هذا البروتوكول، ونحن تقديم التسجيلات معاكسة للمسيرة من العصبون الحركي somas وكذلك رينشو إثارة الخلية، الناجم عن التحفيز الجذر البطني.
المقدمة
تاريخيا، أجريت التسجيلات العصبون الحركي باستخدام حاد الكهربائي في الجسم الحي على الحيوانات الكبيرة مثل القطط والفئران 1 أو على الحبل الشوكي كله معزولة في الفئران 2. ودعا الوصول المباشر إلى العصبون الحركي ظهور تقنية تسجيل التصحيح، المشبك خلال 1980s، somas كما الختم اللازمة لتحقيقها تحت التوجيه البصري. وهكذا، تم تحقيق الشوكي إعداد الحبل شريحة بسهولة منذ أوائل 1990s 3. ومع ذلك، إعداد شريحة في وقت مبكر في كثير من الأحيان لا تسمح لتحفيز الجذور البطنية. إلى علمنا، وذكرت اثنين فقط من الدراسات التحفيز الناجح لجذور بطني في شرائح عرضية، وتم الحصول على أي من الفئران 4،5.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد أجريت التجارب وفقا للتوجيهات الأوروبية (86/609 / أوروبا الوسطى والشرقية و2010-63-UE) والتشريع الفرنسي، وتمت الموافقة من قبل لجنة الأخلاق جامعة باريس ديكارت.
1. الحبل الشوكي إعداد شريحة
- إعداد الحلول التالية يوميا أو يوم واحد مقدما. إذا كان يحتفظ بها بين عشية وضحاها، فقاعة مع 95٪ O 2 و 5٪ CO 2 و يحفظ في الثلاجة في زجاجة مغلقة بإحكام.
- إعداد منخفضة ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تأكيد العصبون الحركي الهوية باستخدام إمكانيات معاكس للمسيرة العمل
استهداف الخلايا
تم العثور على العصبونات الحركية في القرن البطني (مرئية باللون الأحمر في الشكل 2C). ابدأ من حزمة من المحاور التي تشكل .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تشريح منحرف من الحبل الشوكي هو مهم لأنه يسمح لتحفيز جانب واحد من حمامات العصبون الحركي والخلايا رينشو في الجزء الفقري واحد بطريقة موثوقة وشاملة ومحددة. وعلاوة على ذلك، فإنه يسمح لتحديد سريع، أنيق وغير ملتبس من العصبونات الحركية المسجلة. المقبل، ونحن سوف تسلط الضوء على مزايا هذه التقنية مقارنة مع أساليب إعداد شريحة أخرى، وبعد ذلك سوف نؤكد من المزالق الأكثر شيوعا لتجنب حين تنفيذ هذا الإجراء.
معظم الدراسات التي تستخ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
الكتاب أشكر مارين مانويل وأوليفيا غولدمان Szwajkajzer لمساعدتهم في اتخاذ الصور. أشكر الكتاب أيضا أرجون Masukar وتوبياس بوك لتنقيح الكتابة المخطوطة. وقدمت الدعم المالي من قبل الوكالة الوطنية من أجل لا بحوث (HYPER-الفرقة المتعددة الجنسيات، وكالة الاستخبارات الوطنية-2010-بلان-1429-1401)، والمعاهد الوطنية للصحة NINDS (R01NS077863)، ومؤسسة لاتران تييري (مشروع OHEX)، والجمعية الفرنسية لاعتلال عضلي ( منحة رقم 16026)، والهدف ALS وامتنان. وكان فيليكس ليروي المستفيد من "Contrat الدكتوراه" من مدرسة المعلمين العليا، كاشان.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Na-kynurenate | ABCAM | ab120256 | يذوب بشكل أفضل من العلامات التجارية الأخرى |
| KCl | Sigma | P3911 | |
| NaH2PO4 | Sigma | P5655 | |
| sukrose | سيجما | S9378 | |
| NaHCO3 | سيجما | S6014 | |
| CaCl2 | G Biosciences | R040 | |
| MgCl2 | جودة البيولوجية | 351-033-721 | |
| الجلوكوز | سيجما | G5767 | |
| حمض الأسكوربيك | سيجما | A5960 | |
| Na-pyruvate | سيجما | P2250 | |
| K-gluconate ؛ | سيجما | P1847 | |
| EGTA | سيجما | E3889 | |
| HEPES | سيجما | H4034 | |
| كلوريد الصوديوم | سيجما | S9888 | |
| أجار | سيجما | A9799 | |
| QX-314 | ألومون | Q150 | |
| ملغ-ATP | سيجما | A9187 | |
| CsOH | سيجما | 232041 | |
| Na-GTP | سيجما | 51120 | |
| حمض الجلوكونيك | سيجما | G1951 | |
| محلول هيدروكسيد السيزيوم | Sigma | 232041 | |
| KOH | Sigma | P5958 | |
| Vannas Spring Scissors - 2.5 مم ؛ | FST | 15000-08 | يستخدم فقط لقطع الجافية ، قد يتلف في حالة قطع العظام |
| محفز | النبض المعزول لأنظمة AM موديل 2100 | ||
| Vibratome | Campden | يهتز Microtome 7000 - موديل 7000smz-2 |
المراجع
- Brooks, C. M., Downman, C. B., Eccles, J. C. After-potentials and excitability of spinal motoneurones following antidromic activation. J Neurophysiol. 13 (1), 9-38 (1950).
- Bories, C., Amendola, J., Lamotte d'Incamps, B., Durand, J.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
