هي عزل الخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية (الخزفية) وتحصد من الدهون الفئران العادية بسهولة. أوراق الرابطة يمكن إنشاؤها باستخدام هندسة الخلايا--ورقة ويمكن زرعها في زوكر الجرذان الدهنية السكري العارضة كامل-سمك الجلد العيوب مع العظام مكشوفة ومغطاة ثم بيلايير جلد الاصطناعي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إنشاء وزرع للخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية (ASC) ورقة في نموذج التئام السكري
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الجلد الاصطناعي حققت نتائج علاجية كبيرة في الممارسة السريرية. ومع ذلك، قد يطول علاجات البشرة الاصطناعية للجروح في مرضى السكري مع تدفق الدم إعاقة أو الجروح الكبيرة. ظهرت العلاجات المستندة إلى الخلية كتقنية جديدة لعلاج قرح السكري، وهندسة خلية ورقة تحسنت فعالية زرع الخلايا. وقد اقترح عدد من التقارير أن الدهنية المستمدة من الخلايا الجذعية (الخزفية)، نوع من خلايا mesenchymal stromal (MSC)، يحمل إمكانات العلاج بسبب هذه الوفرة النسبية في الأنسجة الدهنية، وإمكانية الوصول لمجموعة بالمقارنة مع MSCs من الأنسجة الأخرى. ولذلك، يبدو الخزفية مصدرا جيدا لخلايا الجذع للاستخدام العلاجي. في هذه الدراسة، إنشاء أوراق الرابطة من الدهون الدهنية البربخيه العادي لويس الفئران بنجاح باستخدام أطباق الثقافة المراعية لدرجة الحرارة والمتوسطة الثقافة العادية التي تحتوي على حمض الأسكوربيك. أوراق الرابطة تم زرعها في الجرذان الدهنية السكري (زد دي إف) زوكر، نموذج الفئران من مرض السكري من النوع 2 والبدانة، أن المعرض تقلص التئام الجروح. تم إنشاؤه بجرح على سطح الجمجمة الخلفية وأوراق ASC تم زرعها في الجرح وجلد اصطناعي بلير كان يستخدم لتغطية الأوراق. زد دي إف الفئران التي تلقت أوراق الرابطة كان أفضل التئام الجروح من الفئران زد دي إف دون زرع أوراق ASC. وكان هذا النهج محدودة نظراً لأن الرابطة أوراق حساسة للظروف الجافة، التي تتطلب الحفاظ على بيئة الجرح رطبة. ولذلك، استخدم لتغطية الورقة ASC لمنع تجفيف الجلد الاصطناعي. زرع allogenic أوراق ASC في تركيبة مع الجلد الاصطناعي يمكن أن ينطبق أيضا على غيرها قرح مستعصية على الحل أو حروق، مثل تلك التي لوحظت مع أمراض الشرايين الطرفية وأمراض الكولاجين، وقد تدار للمرضى الذين يعانون من سوء التغذية أو يتم استخدام المنشطات. وهكذا، هذا العلاج قد يكون الخطوة الأولى نحو تحسين الخيارات العلاجية لمرضى السكري الجرح الشفاء.
المقدمة
سكان مرضى السكري يتزايد في جميع أنحاء العالم، ووصلت إلى 400 مليون بحلول عام 20151؛ ما يقدر 15-25 ٪ من المرضى الذين يعانون من مرض السكري هم في خطر من تطور قرحة السكري السفلي أقصى2. قرحة السكري السفلي أقصى مستعصية على الحل، وقد تتطلب فترة علاجية طويلة مع إعادة التأهيل التدريب بعد الشفاء الكامل. فترة علاج طويلة وكثيراً ما ينتج عن انخفاض كبير في نوعية حياة المريض. وبالتالي، يجب تطوير علاجات جديدة أن تقليل أو منع تفاقم لعلاج الجروح السكري. نحن الأمثل لتقييم التئام الجرح السكري، قرحة السكري التئام نموذجا في الفئران، الذي يحاكي الظروف السريرية العملية، وتقييم ما إذا كان زرع الخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية (ASC) الأوراق باستخ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية المعروضة أدناه من قبل لجنة رعاية التابعة لكلية الطب بجامعة طوكيو الطبية النسائية والتزمت بجميع متطلبات المبادئ التوجيهية لإجراء التجارب على بشكل سليم.
< p class = "jove_title" >1. تحضير والأدوات ووسائط الثقافة والأطباق- تحضير وسط استزراع كامل باستخدام الحد الأدنى من ألفا المتوسط الأساسي الذي يحتوي على 20٪ مصل بقري جنيني (FBS) و 1٪ بنسلين / ستربتومايسين. قم بتخزينه لعدة أشهر عند 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.
- استخدم ذكور الفئران ZDF البالغة كنموذج من النوع 2 للسمنة السكرية. استخدم الوسادة الدهنية لذكور فئران لويس لعزل الأنسجة الدهنية لتحضير صفائح الخلايا.
2. عزل ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
حاول هذا البروتوكول وضع علاج يستند إلى الخلية جديدة لجروح السكري مستعصية على الحل. بإيجاز (كما هو موضح في الشكل 1)، تم إنشاؤها من الفئران العادية باستخدام هندسة الخلايا-ورقة أوراق مراجعة الحسابات متمكنة وتم زرع ثم استخدام بلير للجلد الاصطناعي على عيب كامل-سمك جلد في الفئران السكري. صور المجهر الخفيفة مثال جيد لورقة مراجعة الحسابات (الشكل 2A) ومثالا سيئاً لورقة مراجعة الحسابات (الشكل 2) مبينة في الشكل 2. عندما يتم مطلي الخ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
أن الخطوات الأكثر أهمية لنجاح استزراع ورقة مراجعة الحسابات كما يلي: 1) يجب الحفاظ على درجة الحرارة عند حوالي 37 درجة مئوية خلال استزراع على أطباق الثقافة المراعية لدرجة الحرارة. أثناء إنشاء ورقة مراجعة الحسابات، تم تنفيذ كل إجراء من الإجراءات على صفيحة حرارية 37 درجة مئوية، وقد ارتفعت درجة حرارة كل كاشف إلى 37 درجة مئوية لمنع الخلايا من فصل عفويا من الطبق31. 2) ويجب رصد على الفئران زد دي إف المتلقية منع إزالة الملابس غير لاصقة، هو أمر حاسم لنجاح زرع أوراق مراجعة الحسابات. إذا تمت إزالة الملابس، يج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب التالية تكشف عن العلاقات المالية ذات الصلة لهذا المنشور: اوكانو تيرو هو مؤسس ومدير مجلس إدارة شركة البذور الخلية, وتراخيص التكنولوجيا وبراءات الاختراع من جامعة "طوكيو النسائية" الطبية، واوكانو تيرو وياماتو ماسايوكي هم أصحاب المصلحة في الجامعة الطبية خلية البذور وشركة طوكيو "المرأة" يتلقى أموالا للبحث من شركة البذور الخلية تعلن مؤلفين آخرين أن لم يكن لديهم العلاقات المالية ذات الصلة لهذا المنشور.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون الدكتور يوكيكو كوجا الإدارة من البلاستيك وجراحة، "كلية الطب جامعة جونتيندو"، لتقديم المشورة العملية. ونشكر أيضا السيد هيدكازو موراتا من "مركز السكري من النساء طوكيو الطبية كلية الطب بجامعة" للدعم الفني الممتاز. وأيد "إنشاء مراكز الابتكار" هذه الدراسة "المتقدم البرنامج مجالات البحوث المتعددة التخصصات" المشروع لنظم الابتكار النامية "خلية ورقة الأنسجة الهندسة مركز (كستيك)" من وزارة التربية والتعليم، والثقافة والرياضة، والعلوم والتكنولوجيا (يأمرون) في اليابان.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| &-MEM glutamax | Invitrogen | 32571-036 | Carlsbad, CA |
| مصل الأبقار الجنينية (FBS)اليابان | Bioserum المحدودة. | S1650-500 | |
| البنسلين / الستربتومايسين | لايف تكنولوجيز | 15140-122 | |
| كولاجيناز أ | روش للتشخيص | 10 103 578 001 | مانهايم ، ألمانيا |
| 60 سم < سوب >2< / سوب> طبق زراعة الأنسجة بريماريا | BD Biosciences | 353803 | بحيرات فرانكلين ، نيوجيرسي |
| دولبيكو محلول ملحي للفوسفات (PBS) | لايف تكنولوجيز | 1490-144 | |
| 0.25٪ حمض رباعي الأسيتيك تريبسين إيثيلين ديامين (EDTA) | Life Technologies | 25200-056 | |
| L-حمض الأسكوربيك فوسفات ملح المغنيسيوم n-hydrate | واكو | 013-19641 | |
| طبق ثقافة مستجيب لدرجة الحرارة مقاس 35 مم (UpcellTM< / sup>) CellSeed | NUNC-174904 | طوكيو ، اليابان | |
| لوحة Microwarm (MP-1000) | Kitazato Science Co.، Ltd. | 1111 | |
| جهاز التنفس الصناعي الميكانيكي للقوارض | Stoelting | # 50206 | Wood Dale ، IL |
| 4٪ isoflurane | Pfizer Japan | 114-13340-3 | طوكيو ، اليابان |
| بشرة اصطناعية (Pelnac & reg ؛ < / sup>) | سميث & أمبير ابن أخ | PN-R40060 | طوكيو ، اليابان |
| ضمادة غير لاصقة (Hydrosite plus & reg ؛ < / sup>) | سميث & أمبير ابن أخ | 66800679 | المعروف باسم Allevyn non-sticksing® < / sup> في الولايات المتحدة |
| خياطة نايلون 5-0 | Alfresa | EP1105NB45-KF2 | |
| 20 CELLSTAR TUBES | Greiner bio-one | 227 261 | |
| 15 مل أنبوب الطرد المركزي | Corning | Incorporated 430791 | |
| 14 GOLDMAN-FOX PERIOSTEAL | HU-FRIEDY | P14 | شيكاغو ، إلينوي |
المراجع
- International Diabetes Federation. IDF Diabetes Atlas, 7 ed.. , International Diabetes Federation. Brussels, Belgium. Available from: http://www.diabetesatlas.org/ (2015).
- Boulton, A. J., Vileikyte, L., Ragnarson-Tennvall, G., Apelqvist, J. The global burden of diabetic foot disease. Lancet. 366 (9498), 1719-1724 (2005).
- Zannettino, A. C., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
