التوصيف المظهري لالضامة من الكلى الجرذ بواسطة التدفق الخلوي

Alfonso Rubio-Navarro; Melania Guerrero-Hue; Beatriz Martín-Fernandez; Isabel Cortegano; Elena Olivares-Alvaro; Natalia de las Heras; Mario Alía; Belén de Andrés; María Luisa Gaspar; Jesús Egido; Juan Antonio Moreno

doi:10.3791/54599

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التوصيف المظهري لالضامة من الكلى الجرذ بواسطة التدفق الخلوي

14.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/54599

⸱

أكتوبر 18, 2016

Alfonso Rubio-Navarro¹ , Melania Guerrero-Hue¹ , Beatriz Martín-Fernandez² , Isabel Cortegano³ , Elena Olivares-Alvaro² , Natalia de las Heras² , Mario Alía³ , Belén de Andrés³ , María Luisa Gaspar³ , Jesús Egido¹ , Juan Antonio Moreno¹

¹Renal, Vascular and Diabetes Research Lab, IIS-Fundaciòn Jiménez Dìaz, Autonoma University, ²Department of Physiology, Faculty of Medicine, Complutense University, ³Department of Immunology, Centro Nacional de Microbiologìa, Instituto de Salud Carlos III (ISCIII)

في هذه المقالة

ملخص

توضح هذه المخطوطة بروتوكول مفصلة عن المظهرية والتحليل الكمي الضامة المقيمين من الكلى الفئران عن طريق التدفق الخلوي. الخلايا الملون الناتجة يمكن أن تستخدم أيضا لتطبيقات أخرى، بما في ذلك فرز الخلايا، تحليل التعبير الجيني أو الدراسات الوظيفية، وبالتالي زيادة المعلومات التي تم الحصول عليها في النموذج التجريبي.

الملخص

هناك أدلة متزايدة تشير إلى الدور المهم للالتهاب ، وبالتالي البلاعم في تطور وتطور أمراض الكلى. الضامة هي خلايا غير متجانسة متورطة في إصابة الكلى. يمكن تصنيف البلاعم إلى نمطين ظاهريين مختلفين: البلاعم المنشطة كلاسيكيا (الضامة M1) ، التي تطلق السيتوكينات المؤيدة للالتهابات وتعزز التليف. وبدلا من ذلك ، يتم تنشيط الضامة (M2 الضامة) المرتبطة بوظائف تنظيم المناعة وإعادة تشكيل الأنسجة. تحتاج هذه الأنماط الظاهرية للبلاعم إلى التمييز وتحليلها لتحديد مساهمتها في إصابة الكلى. ومع ذلك ، هناك دراسات نادرة تشير إلى معلومات متسقة من النمط الظاهري والوظيفي حول الأنواع الفرعية للبلاعم في نماذج أمراض الكلى الالتهابية ، خاصة في الفئران. قد تكون هذه الحقيقة مرتبطة بعلامات البلاعم المحدودة المستخدمة في الفئران ، على عكس الفئران. لذلك ، فإن الاستراتيجيات الجديدة ضرورية لتحديد وتوصيف المحتوى الكلوي لهذه الخلايا المتسللة بطريقة موثوقة. توضح هذه المخطوطة بالتفصيل بروتوكولا لهضم الكلى والمزيد من التحليل الظاهري والكمي للبلاعم من كلى الفئران عن طريق قياس التدفق الخلوي. باختصار ، تم تحضين الكلى بالكولاجيناز وتم تحديد البلاعم الكلية وفقا للوجود المزدوج ل CD45 (مستضد الكريات البيض المشترك) و CD68 (علامة البلاعم PAN) في الخلايا الحية. تبع ذلك تلطيخ سطح CD86 (علامة M1) و CD163 (علامة M2). تم استخدام البلاعم البريتونية للفئران كعنصر تحكم إيجابي للكشف عن علامات البلاعم عن طريق قياس التدفق الخلوي. أدى بروتوكولنا إلى انخفاض معدل الوفيات الخلوية وسمح بتوصيف علامات البروتين المختلفة داخل الخلايا والسطحية ، مما يحد من فقدان السلامة الخلوية التي لوحظت في البروتوكولات الأخرى. علاوة على ذلك ، يسمح هذا الإجراء باستخدام البلاعم لمزيد من التقنيات ، بما في ذلك فرز الخلايا ودراسات mRNA أو التعبير البروتيني ، من بين أمور أخرى.

المقدمة

مرض الكلى هو مشكلة صحية عالمية ، مع زيادة الانتشار ، ويرتبط بارتفاع معدلات المراضة والوفيات¹. يعد الالتهاب من أهم الآليات المشاركة في تطور وتطور إصابة الكلى ، والذي يسببه البلاعم بشكل أساسي. تلعب البلاعم دورا محوريا في العديد من الأمراض الالتهابية ، بما في ذلك اضطرابات الكلى². وبالتالي ، تم الإبلاغ عن وجود مرتفع للضامة المتسللة في خزعات المرضى الذين يعانون من إصابة الكلى الحادة (AKI) أو أمراض الكلى المزمنة (CKD) ^3،4. تشير الدراسات الحديثة إلى أن النتيجة طويلة المدى لمرض الكلى يمكن السيطرة عليها بواسطة البلاعم^5،6. استجابة للبيئة المكروية المحلية ، قد تتمايز البلاعم إلى أنماط ظاهرية مختلفة تلعب وظائف بيولوجية^{متنوعة 7}