نقدم بروتوكولات مفصلة لعزل الشريان الأورطي عن الفأر وقياس معامل المرونة باستخدام الفحص المجهري للقوة الذرية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تشنج الشرايين هو عامل خطر كبير والعلامات البيولوجية لمرض القلب والأوعية الدموية والسمة المميزة للشيخوخة. مجهر القوة الذرية (AFM) هو أداة تحليلية متعددة لوصف الخواص الميكانيكية اللزجة لمجموعة متنوعة من المواد تتراوح ما بين الصلب (البلاستيك والزجاج والمعادن، الخ) السطوح إلى خلايا في أي الركيزة. وقد استخدم على نطاق واسع لقياس صلابة من الخلايا، ولكنها أقل استخداما لقياس صلابة من aortas. في هذه الورقة، فإننا سوف تصف إجراءات استخدام AFM في وضع الاتصال لقياس خارج الجسم الحي معامل مرونة الشرايين الماوس المفرغة. وصفنا إجراءاتنا لعزل aortas الماوس، ثم تقديم معلومات مفصلة لتحليل فؤاد. وهذا يشمل إرشادات خطوة بخطوة لمحاذاة شعاع الليزر، معايرة ثابت الربيع وحساسية انحراف لجنة التحقيق AFM، والحصول على منحنيات القوة. ونحن نقدم أيضا بروتوكول مفصلة لanaly البياناتجهاز الأمن والمخابرات من منحنيات القوة.
المقدمة
< p class = 'jove_content'> تعتبر الخصائص الميكانيكية الحيوية للشرايين محددا حاسما في أمراض القلب والأوعية الدموية (CVD) والشيخوخة. يزداد تصلب الشرايين ، وهو عامل خطر رئيسي مستقل عن الكوليسترول ومؤشر لتطور الأمراض القلبية الوعائية ، مع إصابة الأوعية الدموية وتصلب الشرايين والعمر ومرض السكري1-8. يرتبط تصلب جدار الشرايين بزيادة عدم التمايز والهجرة وتكاثر خلايا العضلات الملساء الوعائية9-12. بالإضافة إلى ذلك ، تم ربط زيادة تصلب الشرايين بتعزيز التصاق البلاعم1 ، ونفاذية البطانة وانتقال الكريات البيض13 ، وإعادة تشكيل جدار الوعاءالدموي 14،15. وبالتالي ، فإن العلاجات التي يمكن أن تمنع تصلب الشرايين في الأمراض القلبية الوعائية أو الشيخوخة قد تكمل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد وافق العمل حيوان في هذه الدراسة من قبل لجان رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي من جامعة ولاية بنسلفانيا. نفذت الطرق وفقا للمبادئ التوجيهية المعتمدة.
1. إعداد الماوس وعزل الشريان الأورطي
- تخدير ماوس مع الكيتامين (80-100 ملغ / كلغ)، زيلازين (8-10 ملغ / كلغ) وآسيبرومازين (1-2 ملغ / كلغ) البريتونى. تأكيد التخدير مع اختبار قرصة الذيل. مرة واحدة يتم تخدير الماوس بشكل كامل، الموت ببطء الماوس عن طريق خلع عنق الرحم.
- ضع الماوس على ظ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويبين الشكل 5A صورة النقيض مرحلة من الشريان الأورطي النازل (الصدر) من العمر 6 أشهر، الذكور C57BL / 6 الماوس. ناتئ فؤاد في مكان مباشرة فوق الأنسجة وجاهزة للتسنن. الأرقام 5B و5C تظهر منحنيات القوة التمثيلية التي حصلت عليها AFM المسافة البادئة في وضع الاتصال. خطوط خضراء هو مبين في الأرقام 5B و5C تمثل أفضل تناسب منحنيات تم الحصول عليها باستخدام نموذج الهرتزية لالمجال. في الشكل 5D،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
فؤاد المسافة البادئة يمكن استخدامها لتوصيف صلابة (معامل المرونة) من الخلايا والأنسجة. في هذه الورقة، ونحن نقدم تفصيلا بروتوكولات خطوة بخطوة لعزل الشريان الأورطي النازل وقوس الأبهر في الماوس وتحديد الرجوعية المرنة من هذه المناطق الشرايين خارج الحي. نحن الآن تلخيص ومناقشة القضايا والقيود الفنية للطريقة المبينة في هذه الورقة.
يمكن أن العديد من القضايا الفنية تنشأ في العزلة وتحليل aortas الماوس نظرا لطبيعتها.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم إجراء تحليل
AFM على الأجهزة التي يدعمها معهد بنسلفانيا للعضلات ومعهد الطب الانتقالي والعلاجات ، كلية بيرلمان للطب ، جامعة بنسلفانيا. تم دعم هذا العمل من خلال منح المعاهد الوطنية للصحة HL62250 و AG047373. تم دعم YHB من خلال زمالة ما بعد الدكتوراه من جمعية القلب الأمريكية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| BioScope Catalyst AFM system | Bruker | ||
| Nikon Eclipse TE 200 مجهر مقلوب | Nikon Instruments نيتريد | ||
| السيليكون AFM مسبار | Novascan Technologies | PT. SI02. SN.1 | 0.06 نيوتن / م ناتئ ؛ 1 & مايكرو ؛ m SiO2< / sub> الجسيمات |
| Dumont # 5 ملقط | أدوات العلوم | الدقيقة 11251-10 | انظر القسم 1.4 |
| ملقط Dumont #5SF | أدوات العلوم الدقيقة | 11252-00 | انظر القسم 1.8 |
| Fine Scissors-ToughCut | Fine Science | Tools 14058-11 | انظر القسم 1.4 (متوسط الحجم) |
| Vannas-T & uuml; مقص زنبركي بينجن | أدوات العلوم | الدقيقة 15008-08 | انظر القسم 1.6 (صغير الحجم) |
| 60 مم طبق ثقافة الخلايا المعالج TC | 353004 | Corning | |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline ، 1x | Corning | 21-031-CM | بدون الكالسيوم والمغنيسيوم |
| Krazy Glue فوري لجميع الأغراض سائل | Krazy | Glue KG58548R | انظر القسم 2.2 |
| نصائح تحميل الجل ، 1 - 200 & micro ؛ ل | فيشر | 02-707-139 | انظر القسم 2.2 |
| تلميح الملقط | علوم المجهر الإلكتروني | 78092-CP | انظر القسم 3.2 |
| 50 مم ، أطباق قاع زجاجية شفافة | TED PELLA | 14027-20 | انظر القسم 4.4 |
المراجع
- Kothapalli, D., et al. Cardiovascular Protection by ApoE and ApoE-HDL Linked to Suppression of ECM Gene Expression and Arterial Stiffening. Cell Rep. 2, 1259-1271 (2012).
- Liu, S. -L., et al. Matrix me....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
