تم تكييف بروتوكول لفحص نشاط الغدد الصماء في المستخلصات العضوية لعينات المياه ، بما في ذلك النفايات السائلة لمياه الصرف الصحي المعالجة والمياه السطحية (المستقبلة) ، باستخدام المقايسات الحيوية المتوفرة تجاريا ("التجميد والذوبان") في المختبر.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الكشف عن آخر الغدد الصماء في المياه عن طريق المتاحة تجاريا
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في اختبارات بيولوجية transactivation المختبر أظهرت وعد كأدوات مراقبة نوعية المياه، لكن اعتمادها وتطبيقها على نطاق واسع وعرقل ويرجع ذلك جزئيا إلى عدم وجود طرق موحدة وتوفر تكنولوجيا قوية وسهلة الاستخدام. في هذه الدراسة، كانوا يعملون المتاحة تجاريا، وخطوط الخلايا القبض تقسيم للكشف كمي للنشاط الغدد الصماء من المواد الكيميائية الموجودة في عينات المياه التي تهم المهنيين جودة البيئة. A، بروتوكول موحد واحد التي شملت ضمان الجودة الشاملة / مراقبة الجودة تم تطوير (QA / QC) الشيكات للنشاط الاستروجين وجلايكورتيكود مستقبلات (ER وGR، على التوالي) باستخدام فحص خلية القاعدة نقل الإسفار الرنين الطاقة (الحنق). عينات من المياه المعالجة مياه الصرف الصحي البلدية والمياه السطحية من نظم المياه العذبة في ولاية كاليفورنيا (الولايات المتحدة الأمريكية) واستخراج، وذلك باستخدام الاستخلاص في الطور الصلب وتحليلها لنشاط الغدد الصماء باستخدام بروتو موحدالعقيد. اجتمع الخلفية والجرعة والاستجابة للمواد الكيميائية مرجعية نقطة النهاية المحددة المبادئ التوجيهية QA / QC تعتبر ضرورية لقياس موثوق بها. وكان الرد الأحيائي لفحص عينات المياه السطحية إلى حد كبير لا يمكن اكتشافها. في المقابل، كان عينات النفايات السائلة من محطات المعالجة الثانوية أعلى نشاط للقياس، مع تركيز يعادل الأحيائي التقديري (BEQs) ما يصل إلى 392 نانوغرام ديكساميثازون / L ل GR و 17 نانوغرام 17β استراديول / L لER. وكان الرد الأحيائي لعينة مياه الصرف التعليم العالي أقل من أن قياس لمياه الصرف الثانوية، مما يشير إلى المتبقية أقل من المواد الكيميائية الغدد الصماء نشطة بعد العلاج المتقدمة. وأظهر هذا البروتوكول أنه في اختبارات بيولوجية transactivation المختبر التي تستخدم المتاحة تجاريا، خلية القبض تقسيم "مجموعات"، يمكن تكييفها للكشف عن نشاط الغدد الصماء في الماء.
المقدمة
ويستند مراقبة جودة المياه الحالية على القدرة على قياس بدقة وعلى وجه التحديد وقوع الملوثات الكيميائية، وكيل التعرض للحياة البرية والبشر. ومع ذلك، هذا الرصد الكيميائي من قبل والكيميائية ونموذج التقييم لا يمكن مواكبة الكون الكيميائية المتغيرة باستمرار التي نواجهها. ونحن نتعلم المزيد عن مصير وآثار المواد الكيميائية الاصطناعية والطبيعية، ونحن نواصل البحث عن أدوات القياس التي تعالج المتوقع التأثيرات البيولوجية، والتي في نفس الوقت ليست محصنة ضد التغيرات في إنتاج المواد الكيميائية واستخدام ومدخلات بيئية. هذه الأدوات هي ذات الصلة وخاصة لفهم ما إذا كانت المواد الكيميائية غير معروفة أو جديدة، ومنتجات التحول، تستحق اهتمامنا. وعلاوة على ذلك....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. جمع ومعالجة المياه عينة (معدلة من ايشر وآخرون. 9)
- ملء زجاجة العنبر نظيفة 1 لتر تحتوي على 1 غرام أزيد الصوديوم، و 50 ملغ حامض الاسكوربيك إلى الأعلى مع عينة مياه من الفائدة. عينة تخزينها في 4 درجة مئوية، وعملية في غضون 72 ساعة.
ملاحظة: أزيد الصوديوم عالية السمية ويجب التعامل معها بحذر. استخدام واقية (العين / الوجه، والقفازات والملابس) وتزن في عملها بشكل صحيح الدخان غطاء محرك السيارة. لا تستخدم ملعقة معدنية لوزنها. - تمرير العينة من خلال 1.6 ميكرومتر مرشح الألياف ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
في هذه الدراسة، تم اختيار 4X 24 ساعة عينات مركب من المياه المعالجة مياه الصرف البلدية، 6 عينات الاستيلاء على المياه السطحية من نظم المياه العذبة في جنوب كاليفورنيا والحقل فارغا تتكون من الماء عالى النقاء لتوضيح هذا البروتوكول. 3 من عينات مياه الصرف الصحي 4 كانوا من محطات توليد الكهرباء التقليدية تنشيط الحمأة مياه الصرف الصحي ( "النفايات السائلة الثانوي")، والرابع من محطة معالجة مياه الصرف الصحي متقدمة مع ترشيح الرمل / الكربون بعد العلاج ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وقوة موثقة جيدا من هرمون الاستروجين البيئية، مثل 17β استراديول (E2)، مذكرات الكشف عن هذه المواد الكيميائية في نانوغرام تركيزات / L 23،24. في هذه الدراسة، واستجابة ER عن المياه المستعملة (المدى بيك: 2،3 حتي 17 نانوغرام E2 / L) كان أعلى إلى حد ما مما ذكر عن النفايات السائلة الثانوي من وتبس الاسترالية 20، في حين أن BEQs للمياه السطحية (<0،5-4 نانوغرام E2 / L ) كانت ضمن المدى المبلغ عنه السطحية ومياه الأمطار في مكان آخر (<1-11 نانوغرام E2 / L) 16.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم توفير التمويل من قبل مجلس مراقبة الموارد المائية بالولاية (الاتفاقيتان رقم 10-096-250 و 14-090-270). نشكر S. Abbasi و M. Connor و S. Engelage و K. North و J. Armstrong و S. Asato, M. Dojiri, D. Schlenk, S. Snyder, S. Westerheide, B. Escher, F. Leusch, G. Pelanek, K. Bi, and J. Printen. يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح ، والإشارة إلى الأسماء التجارية لا تعني التأييد.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| تتضمن مجموعة فحص GeneBLAzer ER alpha DA | مجموعة ThermoFisher | K1393 | خلايا تم القبض عليها من قسم ER (DA) ومجموعة تحميل LiveBLAzer FRET. |
| تتضمن مجموعة فحص GeneBLAzer GR DA | ThermoFisher | K1391 | Kit خلايا تم القبض عليها من قسم الموارد الوراثية (DA) ومجموعة تحميل LiveBLAzer FRET. |
| كاشف بقاء الخلية PrestoBlue | ThermoFisher | A-13261 | |
| Trypan blue ، 0.4٪ في PBS | Sigma-Aldrich & nbsp ؛ | T8154 | متوفر أيضا في ThermoFisher |
| Corning 96-well جدار أسود ، لوحة قاع شفاف | Corning | 3603 | ملفوفة بشكل فردي ، معقمة مع غطاء |
| مرشحات الألياف الزجاجية Whatman ، GF / A ، 1.6 & micro ؛ M | Sigma-Aldrich | WHA1820025 | |
| ختم الألومنيوم Microplate | E & K Scientific | T592100 | |
| Oasis HLB 6 cc خرطوشة ، 200 ملغ مياه ماصة | WAT106202 | ||
| 17 & بيتا ؛ Estradiol | Sigma-Aldrich | E2758 | CAS # 50-28-2 |
| حمض الأسكوربيك | فيشر Scientific | A61-100 | متاح أيضا في Sigma-Aldrich |
| Dexamethasone | سيجما ألدريتش | D4902 | CAS # 50-02-2 |
| ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) | سيجما ألدريتش ؛ | D8418 | الجزيئية |
| (الأسيتون ، الهكسان ، الميثانول) | فيشر العلمي | HPLC الصف | |
| أزيد الصوديوم | سيجما-ألدريتش & nbsp ؛ | S2002 | Chemical شديد السمية ويجب التعامل معه بحذر. استخدم ملابس واقية ووزنها تحت غطاء الدخان. متوفر أيضا في EMD Millipore. |
| عداد الخلايا الآلي أو مقياس الدم | مختلف * | يشمل الموردون Bio-Rad و Fisher Scientific و Sigma-Aldrich و ThermoFisher. | |
| خزانة السلامة البيولوجية من الفئة الثانية | مختلفة * | ||
| CO2< / sub > حاضنة | مختلفة * | ||
| فريزر مبرد ؛ | مختلف * | يوصى باستخدام تخزين النيتروجين السائل dewar. | |
| قارئ الألواح الدقيقة الفلورية | مختلف * | يجب أن يتمتع القارئ بقدرات القراءة السفلية. | |
| * لا يوجد مصدر موصى به ، يعتمد اختيار هذا الجهاز على الميزانية وتكرار الاستخدام ومساحة المختبر. |
المراجع
- Dix, D. J., Houck, K. A., Martin, M. T., Richard, M. A., Setzer, R. W., Kavlock, R. J. The ToxCast program for prioritizing toxicity testing of environmental chemicals. Toxicol. Sci. 95 (1), 5-12 (2007).
- Reif, D. M., et al. Endocrin....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
