مقالة منهجية

الكشف عن آخر الغدد الصماء في المياه عن طريق المتاحة تجاريا في المختبر Transactivation اختبارات بيولوجية

DOI:

10.3791/54725

⸱

ديسمبر 4, 2016

 ,  ,  ,  , 
1Southern California Coastal Water Research Project Authority, 2Department of Physiological Sciences, University of Florida

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تكييف بروتوكول لفحص نشاط الغدد الصماء في المستخلصات العضوية لعينات المياه ، بما في ذلك النفايات السائلة لمياه الصرف الصحي المعالجة والمياه السطحية (المستقبلة) ، باستخدام المقايسات الحيوية المتوفرة تجاريا ("التجميد والذوبان") في المختبر.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في اختبارات بيولوجية transactivation المختبر أظهرت وعد كأدوات مراقبة نوعية المياه، لكن اعتمادها وتطبيقها على نطاق واسع وعرقل ويرجع ذلك جزئيا إلى عدم وجود طرق موحدة وتوفر تكنولوجيا قوية وسهلة الاستخدام. في هذه الدراسة، كانوا يعملون المتاحة تجاريا، وخطوط الخلايا القبض تقسيم للكشف كمي للنشاط الغدد الصماء من المواد الكيميائية الموجودة في عينات المياه التي تهم المهنيين جودة البيئة. A، بروتوكول موحد واحد التي شملت ضمان الجودة الشاملة / مراقبة الجودة تم تطوير (QA / QC) الشيكات للنشاط الاستروجين وجلايكورتيكود مستقبلات (ER وGR، على التوالي) باستخدام فحص خلية القاعدة نقل الإسفار الرنين الطاقة (الحنق). عينات من المياه المعالجة مياه الصرف الصحي البلدية والمياه السطحية من نظم المياه العذبة في ولاية كاليفورنيا (الولايات المتحدة الأمريكية) واستخراج، وذلك باستخدام الاستخلاص في الطور الصلب وتحليلها لنشاط الغدد الصماء باستخدام بروتو موحدالعقيد. اجتمع الخلفية والجرعة والاستجابة للمواد الكيميائية مرجعية نقطة النهاية المحددة المبادئ التوجيهية QA / QC تعتبر ضرورية لقياس موثوق بها. وكان الرد الأحيائي لفحص عينات المياه السطحية إلى حد كبير لا يمكن اكتشافها. في المقابل، كان عينات النفايات السائلة من محطات المعالجة الثانوية أعلى نشاط للقياس، مع تركيز يعادل الأحيائي التقديري (BEQs) ما يصل إلى 392 نانوغرام ديكساميثازون / L ل GR و 17 نانوغرام 17β استراديول / L لER. وكان الرد الأحيائي لعينة مياه الصرف التعليم العالي أقل من أن قياس لمياه الصرف الثانوية، مما يشير إلى المتبقية أقل من المواد الكيميائية الغدد الصماء نشطة بعد العلاج المتقدمة. وأظهر هذا البروتوكول أنه في اختبارات بيولوجية transactivation المختبر التي تستخدم المتاحة تجاريا، خلية القبض تقسيم "مجموعات"، يمكن تكييفها للكشف عن نشاط الغدد الصماء في الماء.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويستند مراقبة جودة المياه الحالية على القدرة على قياس بدقة وعلى وجه التحديد وقوع الملوثات الكيميائية، وكيل التعرض للحياة البرية والبشر. ومع ذلك، هذا الرصد الكيميائي من قبل والكيميائية ونموذج التقييم لا يمكن مواكبة الكون الكيميائية المتغيرة باستمرار التي نواجهها. ونحن نتعلم المزيد عن مصير وآثار المواد الكيميائية الاصطناعية والطبيعية، ونحن نواصل البحث عن أدوات القياس التي تعالج المتوقع التأثيرات البيولوجية، والتي في نفس الوقت ليست محصنة ضد التغيرات في إنتاج المواد الكيميائية واستخدام ومدخلات بيئية. هذه الأدوات هي ذات الصلة وخاصة لفهم ما إذا كانت المواد الكيميائية غير معروفة أو جديدة، ومنتجات التحول، تستحق اهتمامنا. وعلاوة على ذلك، يتم تناول خليط معقد من المواد الكيميائية الموجودة في المياه سيئة من قبل رصد الكيميائي الفردية. وبالتالي، فإننا نواجه التحدي المتمثل في تحديث الأدوات الرصد القائمة إلى عنوان أفضل هذه القضايا في المياه السطحية ثار الحصول تصريف المياه العادمة المعالجة والحضر جريان المياه / مياه الأمطار.

في السنوات الأخيرة، وقد أظهرت تقنيات bioanalytical وعد كأدوات فحص لتقييم نوعية المياه. وعلى وجه الخصوص، اختبارات بيولوجية in'vitro التي تستجيب للمواد الكيميائية التي تعمل عبر معروفة، وطرق عمل محددة 1،2 ذات أهمية كبيرة للمجتمع الرصد البيئي 3. وقد استخدمت العديد من التحقيقات في اختبارات بيولوجية في المختبر لقياس النشاط الغدد الصماء من الشرب، والمياه السطحية ومياه الصرف الصحي 4 -6. وعلاوة على ذلك، هناك عدد من اختبارات بيولوجية تستهدف أحداث الشروع الجزيئية (على سبيل المثال، تنشيط مستقبلات) التي يحتمل أن تكون مرتبطة الآثار الضارة عبر مسار نتائج سلبية يحلل 7،8.

وقد تطور bioscreening لتقييم نوعية المياه سريع نسبيا، مع مئات من مختلف في النهاية الأحيائي المختبر بعد أن تم تقييمها الخاصة بهمفائدة 9،10. حاليا، وقد ثبت سوى عدد قليل من اختبارات بيولوجية لتحقيق الدقة قياس جيدة (داخل المختبرات)، في حين يدل على القدرة على التفريق بين نوعية المياه 5،6. للالمياه العادمة المعالجة على وجه الخصوص، كان وقوع هرمون الاستروجين والمنشطات القشرية السكرية بنجاح شكلت للاستخدام في فحوصات المختبر transactivation 11،12. اختبارات بيولوجية ومع ذلك، فإن معظم الدراسات حتى الآن قد استخدمت الذين خلية خطوط هي ملكية (وبالتالي غير متوفرة على نطاق واسع)، وتتطلب عناية مستمرة والتلاعب، أو كليهما. ونتيجة لذلك، فإن القدرة على توحيد بروتوكولات، وأداء تمارين المعايرة بين المختبرات، وفي نهاية المطاف لنقل هذه التكنولوجيا للفحص لموارد المياه لا يزال المجتمع حال دون.

مورد واحد على الأقل في المختبر اختبارات بيولوجية فحصها من خلال برنامج ToxCast الولايات المتحدة متاح تجاريا 13 في سهلة الاستخدام "التجميد والذوبان4؛ الأشكال. وقد تبين أن هذه الخلايا "مجموعات" اعتقل تقسيم لتكون قوية في قياس نشاط المواد الكيميائية المستخرجة من المياه تمثل مستويات مختلفة من العلاج 14. وعلى الرغم من بروتوكولات بائع المتاحة لفحص النشاط الحيوي للمواد الكيميائية الفردية أو خليط، وبعضها يتطلب تعديل قبل أن يمكن تطبيقها على عينات من المياه. يعالج المياه العادمة 15، جريان مياه الأمطار 16، وتلقي مياه 17،18 وأكثر المعاد تدويرها مؤخرا 19،20 المياه من أفضل الأمثلة على الأوساط المائية التي تهم المجتمع نوعية المياه.

تقدم هذه الدراسة واحدة، بروتوكول موحد لقياس النشاط الغدد الصماء في عينات المياه باستخدام المتاحة تجاريا، تقسيم اعتقل في اختبارات بيولوجية transactivation المختبر. أثبتنا متانة البروتوكول من خلال إجراء تقييم شامل للخلفية، responsivity الجرعة وتكرار الاستجابة لطوماس فيبسالنهاية يا من معين الاستروجين الفائدة وجلايكورتيكود مستقبلات transactivation (ER وGR، على التوالي). تم تطبيق بروتوكول لعينات الشاشة من المياه العادمة المعالجة والمياه السطحية من نظم المياه العذبة في ولاية كاليفورنيا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. جمع ومعالجة المياه عينة (معدلة من ايشر وآخرون. 9)

  1. ملء زجاجة العنبر نظيفة 1 لتر تحتوي على 1 غرام أزيد الصوديوم، و 50 ملغ حامض الاسكوربيك إلى الأعلى مع عينة مياه من الفائدة. عينة تخزينها في 4 درجة مئوية، وعملية في غضون 72 ساعة.
    ملاحظة: أزيد الصوديوم عالية السمية ويجب التعامل معها بحذر. استخدام واقية (العين / الوجه، والقفازات والملابس) وتزن في عملها بشكل صحيح الدخان غطاء محرك السيارة. لا تستخدم ملعقة معدنية لوزنها.
  2. تمرير العينة من خلال 1.6 ميكرومتر مرشح الألياف الزجاجية ومن ثم من خلال خرطوشة شروطا مسبقة الصلبة المرحلة استخراج (SPE) بمعدل تدفق 5-10 مل / دقيقة. ضبط ضغط مضخة فراغ للسيطرة على معدل التدفق.
  3. فراغ تجفيف خرطوشة لمدة 15 دقيقة.
  4. أزل خرطوشة مع 10 مل من الميثانول، تليها 10 مل من الاسيتون: الهكسان (1: 1، ت / ت).
  5. التركيز شطافة إلى ~ 1 مل تحت تيار لطيف من ارتفاع النيتروجين نقاء. مذيبصرف بإضافة 500 ميكرولتر من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) وتبخير استخراج وصولا الى 500 ميكرولتر.
  6. نقل استخراج إلى الاوتوماتيكى قارورة العنبر الزجاج. تخزين في درجة حرارة -20 درجة مئوية.

2. إعداد التخفيفات من الفحص محددة الكيميائية المرجعية واستخراج المياه

  1. إعداد 9 التخفيفات لمنحنى المعايرة.
    1. جعل حل سهم الكيميائية إشارة محددة فحص في 100٪ DMSO. يجب أن يكون التركيز النهائي 2 ميكرومتر 17β استراديول للمقايسة ER، و 100 ميكرومتر ديكساميثازون للمقايسة GR. تخزين حلول السهم عند -20 درجة مئوية.
    2. إضافة 15 ميكرولتر من الأسهم الكيميائية إشارة مناسبة إلى 285 ميكرولتر المتوسطة فحص في أنبوب معقم (أنبوب رقم 1). خلط عينة من pipetting صعودا وهبوطا.
    3. إضافة 200 ميكرولتر من محلول 5٪ DMSO في المتوسط ​​فحص في 8 أنابيب إضافية (أنابيب # 2-9).
    4. نقل قسامة 100 ميكرولتر من أنبوب رقم 1 إلى أنبوب رقم 2 من خلال الحوضالبريد رقم 9 لأداء سلسلة التخفيف 3 أضعاف. كل عينة المخففة يجب أن تكون مختلطة تماما مع ماصة قبل اتخاذ قسامة وإضافته إلى أنبوب المقبل.
  2. إعداد العينة الضابطة المذيبات عن طريق خلط 10 ميكرولتر من DMSO في 190 ميكرولتر من المتوسطة الفحص.
  3. إعداد أربعة التخفيفات لكل استخراج المياه.
    1. في الأنبوب الأول، إضافة 5 ميكرولتر من استخراج المياه في 95 ميكرولتر المتوسطة فحص وتخلط جيدا. إضافة 50 ميكرولتر من DMSO 5٪ في المتوسط ​​فحص في ثلاثة أنابيب أخرى.
    2. إجراء تخفيف 2-أضعاف عن طريق نقل 50 ميكرولتر من محلول من أنبوب واحد إلى آخر.

3. إعداد تعليق خلية لتنفيذ الحنق الأحيائي

  1. إعداد المتوسطة محدد الفحص وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. يجب تخزين فحص المتوسطة في 4 درجات مئوية ودرجة حرارة 37 درجة مئوية في حمام مائي قبل الاستخدام.
  2. خذ قارورة من الخلايا القبض على تقسيم ER أو GR من التجميد مجاناذر وذوبان الجليد الخلايا بسرعة عن طريق وضع القارورة في 37 ° C حمام مائي لمدة 2 دقيقة مع الإثارة لطيف. تطهير القارورة مع الايثانول 70٪ ووضعه في خزانة السلامة البيولوجية من الدرجة الثانية.
  3. فتح القارورة باستخدام تقنيات العقيم ونقل الخلايا إلى 10 مل من المتوسط ​​الفحص.
  4. أجهزة الطرد المركزي في 200 × ز لمدة 5 دقائق.
  5. نضح طاف باستخدام الماصة زجاجية معقمة و resuspend بيليه الخلية في 6 مل من المتوسط ​​الفحص.
  6. مزيج 5 ميكرولتر من تعليق خلية مع 5 ميكرولتر من حل وصمة عار حيوي وإضافة قسامة في غرفة الفرز.
  7. حساب عدد الخلايا الحية باستخدام المجهر الضوئي أو آلية مكافحة الخلايا وتقدير كثافة الخلايا الحية في تعليق خلية. تمييع إذا لزم الأمر للحصول على الكثافة النهائية من 550،000 الخلايا الحية في مل من المتوسط ​​الفحص.

4. خلايا لوحة في 96-جيدا لوحة الأسود ستريت مسح القاع وإضافة المستخلص المائي المخفف

  1. إنشاء لوحةالتخطيط الذي يشتمل على 9 نقاط فحص منحنى معايرة محددة، وعينات QA / QC والتخفيفات متعددة لكل استخراج المياه. ويرد مثال على تخطيط لوحة 96-جيدا في الشكل 1.
  2. إضافة 90 ميكرولتر من المتوسطة فحص للآبار المراقبة خالية من الخلايا تكرار.
  3. صب تعليق خلية في خزان pipetting لالمعقم وإضافة 90 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى الآبار الأخرى باستخدام ماصة الأقنية.
  4. إضافة 10 ميكرولتر من العينات المخففة التي أعدت خلال الخطوة 2 إلى آبار المناسبة. يجب أن يكون تركيز النهائي من DMSO لكل بئر 0.5٪ كحد أقصى.
  5. تغطية لوحة مع غطاء ووضعه في 5٪ CO 2 حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة.

figure-protocol-1
الشكل 1: مثال لتخطيط لوحة 96-جيدا تم تصميم لوحة متعددة أيضا لتشمل منحنى فحص معايرة محددة، 3 أنواعضوابط QA / QC (وسائل الإعلام فقط، والخلايا في وسط نظيف والخلايا في DMSO ارتفعت المتوسطة) و 4 التخفيفات في استخراج المياه. ويتم تحليل كل عنصر تحكم والتخفيف من استخراج المياه في الآبار ثلاث نسخ. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

5. إعداد الحل التحميل وإضافة إلى كل حسنا

  1. بعد الحضانة، والسماح لوحة للتوازن إلى RT. لهذا الأحيائي الحنق، على بعد خطوات 5.2 خلال 5.6 ينبغي أن تتم في غياب الضوء المباشر.
  2. يعد حل 6X تحميل وفقا لتعليمات الشركة الصانعة.
  3. إضافة 20 ميكرولتر من الحل 6X تحميل إلى كل بئر.
  4. إضافة 10 ميكرولتر من كاشف بقاء الخلية على كل بئر لتقييم السمية الخلوية لاستخراج المياه المخفف.
  5. ختم لوحة مع فيلم الألومنيوم لاصق.
  6. احتضان لوحة في الظلام في RT لمدة 2 ساعة.

6. السمسة قياس وآخر استجابة الغدد الصماء

  1. إعداد قارئ صفيحة مع قدرات القاعدة القراءة باتباع إرشادات الشركة المصنعة.
  2. لtransactivation الأحيائي الحنق، وقياس مضان في الزرقاء (409/460 نانومتر، الإثارة (خر) / الانبعاثات (إم) الطول الموجي) والأخضر (409 تحويلة / 530 م نانومتر) القنوات.
  3. لفحص السمية الخلوية، وقياس مضان في 560 تحويلة / 590 م نانومتر.

7. تقييم QA / QC الشيكات لتحديد نوعية البيانات

  1. مقارنة متوسط ​​مضان الخام من خالية من الخلايا (وسائل الاعلام فقط) والخلايا فقط (الخلايا في المتوسط ​​فحص نظيف) الضوابط. يجب أن يكون مضان الخلفية وسائل الإعلام فقط بنسبة 25٪ على الأقل من الاستجابة للسيطرة الخلايا فقط.
  2. معالجة البيانات الحنق الخام. لكل من قواعد البيانات "الخضراء" "الزرقاء"، وطرح متوسط ​​مضان من آبار المراقبة خالية من الخلايا من كل خلية تحتوي أيضا. حسابالزرقاء / الخضراء نسبة لكل بئر تجريبي.
  3. مقارنة زرقاء / خضراء نسبة من الخلايا فقط، وخلايا مع وجود ضوابط DMSO. يجب أن تكون القيم مضان من هذه الضوابط في حدود 15٪ الانحراف المعياري النسبي (RSD).
  4. رسم فحص منحنى معايرة محددة كما زرقاء / خضراء نسبة مقابل تركيز العينة كنسبة الكتلة الجزيئية سجل (تسجيل M). حساب المنحدر، R 2 وسجل EC 50 (50٪ تأثير تركيز). يجب أن تكون المعلمات معايرة ضمن النطاق المتوقع المدرجة في الجدول 1.
  5. حساب RSD لجميع الآبار ثلاث نسخ. وينبغي أن يكون التباين بين مكررات أقل من 20٪.
  6. للحصول على بيانات السمية الخلوية (560 تحويلة / 590 م نانومتر)، طرح سيطرة المتوسط ​​خالية من الخلايا (أي وسائل الإعلام الخلفية) من جميع الآبار التي تحتوي على الخلية.
  7. حساب متوسط ​​مضان طرح الخلفية لكل عينة. رسم البيانات مضان الناتجة كنسبة مئوية من سيطرة DMSO. ينبغي التخفيفات عينة لاتظهر وفيات خلية أكثر من 20٪ مقارنة مع الضوابط الخلايا فقط وDMSO.

8. تحليل البيانات

  1. حساب الحد فحص من الكشف (اللد)، والحد الأدنى للاستجابة معايرة زائد اثنين الانحرافات المعيارية من المتوسط ​​هذا الرد.
  2. لعينات تظهر الاستجابة للجرعة، اشتقاق EC 50   لاستخراج المياه باستخدام منحدر الانحدار الخطي للمنحنى المعايرة بين 10 و 50٪ تركيزات تأثير المادة الكيميائية المرجعية.
  3. حساب تركيز Bioanalytical في حكمهم (بيك) باستخدام المعادلة التالية: بيك = EC 50 من المواد الكيميائية إشارة / EC 50 من عينة المياه.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه الدراسة، تم اختيار 4X 24 ساعة عينات مركب من المياه المعالجة مياه الصرف البلدية، 6 عينات الاستيلاء على المياه السطحية من نظم المياه العذبة في جنوب كاليفورنيا والحقل فارغا تتكون من الماء عالى النقاء لتوضيح هذا البروتوكول. 3 من عينات مياه الصرف الصحي 4 كانوا من محطات توليد الكهرباء التقليدية تنشيط الحمأة مياه الصرف الصحي ( "النفايات السائلة الثانوي")، والرابع من محطة معالجة مياه الصرف الصحي متقدمة مع ترشيح الرمل / الكربون بعد العلاج البيولوجية ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقوة موثقة جيدا من هرمون الاستروجين البيئية، مثل 17β استراديول (E2)، مذكرات الكشف عن هذه المواد الكيميائية في نانوغرام تركيزات / L 23،24. في هذه الدراسة، واستجابة ER عن المياه المستعملة (المدى بيك: 2،3 حتي 17 نانوغرام E2 / L) كان أعلى إلى حد ما مما ذكر عن النفايات السائلة الثانوي من وتبس الاسترالية 20، في حين أن BEQs للمياه السطحية (<0،5-4 نانوغرام E2 / L ) كانت ضمن المدى المبلغ عنه السطحية ومياه الأمطار في مكان آخر (<1-11 نانوغرام E2 / L) 16.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم توفير التمويل من قبل مجلس مراقبة الموارد المائية بالولاية (الاتفاقيتان رقم 10-096-250 و 14-090-270). نشكر S. Abbasi و M. Connor و S. Engelage و K. North و J. Armstrong و S. Asato, M. Dojiri, D. Schlenk, S. Snyder, S. Westerheide, B. Escher, F. Leusch, G. Pelanek, K. Bi, and J. Printen. يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح ، والإشارة إلى الأسماء التجارية لا تعني التأييد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
تتضمن مجموعة فحص GeneBLAzer ER alpha DAمجموعة ThermoFisherK1393خلايا تم القبض عليها من قسم ER (DA) ومجموعة تحميل LiveBLAzer FRET.
تتضمن مجموعة فحص GeneBLAzer GR DAThermoFisherK1391Kit خلايا تم القبض عليها من قسم الموارد الوراثية (DA) ومجموعة تحميل LiveBLAzer FRET.
كاشف بقاء الخلية PrestoBlue  ThermoFisherA-13261
Trypan blue ، 0.4٪ في PBSSigma-Aldrich & nbsp ؛T8154متوفر أيضا في ThermoFisher
Corning 96-well جدار أسود ، لوحة قاع شفافCorning3603ملفوفة بشكل فردي ، معقمة مع غطاء
مرشحات الألياف الزجاجية Whatman ، GF / A ، 1.6 & micro ؛ MSigma-Aldrich WHA1820025
ختم الألومنيوم MicroplateE & K ScientificT592100
Oasis HLB 6 cc خرطوشة ، 200 ملغ مياه ماصةWAT106202
17 & بيتا ؛ EstradiolSigma-Aldrich E2758CAS # 50-28-2
حمض الأسكوربيكفيشر ScientificA61-100متاح أيضا في Sigma-Aldrich
Dexamethasone سيجما ألدريتش D4902CAS # 50-02-2
ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)سيجما ألدريتش   ؛D8418الجزيئية
(الأسيتون ، الهكسان ، الميثانول)فيشر العلميHPLC الصف
أزيد الصوديومسيجما-ألدريتش & nbsp ؛S2002Chemical شديد السمية ويجب التعامل معه بحذر. استخدم ملابس واقية ووزنها تحت غطاء الدخان. متوفر أيضا في EMD Millipore.
عداد الخلايا الآلي أو مقياس الدممختلف *يشمل الموردون Bio-Rad و Fisher Scientific و Sigma-Aldrich و ThermoFisher.
خزانة السلامة البيولوجية من الفئة الثانيةمختلفة *
CO2< / sub > حاضنةمختلفة *
فريزر مبرد   ؛مختلف *يوصى باستخدام تخزين النيتروجين السائل dewar.
قارئ الألواح الدقيقة الفلوريةمختلف *  يجب أن يتمتع القارئ بقدرات القراءة السفلية.
* لا يوجد مصدر موصى به ، يعتمد اختيار هذا الجهاز على الميزانية وتكرار الاستخدام ومساحة المختبر.
فيلم المذيبات

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dix, D. J., Houck, K. A., Martin, M. T., Richard, M. A., Setzer, R. W., Kavlock, R. J. The ToxCast program for prioritizing toxicity testing of environmental chemicals. Toxicol. Sci. 95 (1), 5-12 (2007).
  2. Reif, D. M., et al. Endocrine profiling and prioritization of environmental chemicals using ToxCast data. Environ. Health Perspect. 118 (12), 1714-1720 (2010).
  3. Maruya, K. A., et al. A tiered, integrated biological and chemical monitoring framework for contaminants of emerging concern (CECs) in aquatic ecosystems. Integr. Environ. Assess. Manag. , (2015).
  4. Van der Linden, S. C., et al. Detection of multiple hormonal activities in wastewater effluents, surface water, using a panel of steroid receptor CALUX bioassays. Environ. Sci. Technol. 42 (15), 5814-5820 (2008).
  5. Leusch, F. D. L., et al. Comparison of five in vitro bioassays to measure estrogenic activity in environmental waters. Environ. Sci. Technol. 44 (10), 3853-3860 (2010).
  6. Jarosova, B., et al. Europe-wide survey of estrogenicity in wastewater treatment plant effluents: the need for effect-based monitoring. Environ. Sci. Pollut. Res. 21 (18), 10970-10982 (2014).
  7. Sonneveld, E., et al. Comparison of in vitro and in vivo screening models for androgenic and estrogenic activities. Toxicol. Sci. 89 (1), 173-187 (2006).
  8. Piersma, A. H., et al. Evaluation of an alternative in vitro test battery for detecting reproductive toxicants. Reprod. Toxicol. 38, 53-64 (2013).
  9. Escher, B. I., et al. Benchmarking organic micropollutants in wastewater, recycled water and drinking water with in vitro bioassays. Environ. Sci. Technol. 48 (3), 1940-1956 (2014).
  10. U.S. Environmental Protection Agency (USEPA) Endocrine Disruptor Screening Program. Prioritization of the endocrine disruptor screening program universe of chemicals for an estrogen receptor adverse outcome pathway using computational toxicology tools. , OCSPP/OW/ORD/NCCT. (2012).
  11. Leusch, F. D. L., et al. Assessment of wastewater and recycled water quality: a comparison of lines of evidence from in vitro, in vivo and chemical analyses. Water Res. 50, 420-431 (2014).
  12. Jia, A., Wu, S., Daniels, K. D., Snyder, S. A. Balancing the budget: accounting for glucocorticoid bioactivity and fate during water treatment. Environ. Sci. Technol. 50 (6), 2870-2880 (2016).
  13. Huang, R., et al. Chemical genomics profiling of environmental chemical modulation of human nuclear receptors. Environ. Health Perspect. 119 (8), 1142-1148 (2011).
  14. Mehinto, A. C., et al. Interlaboratory comparison of in vitro bioassays for screening of endocrine active chemicals in recycled water. Water Res. 83, 303-309 (2015).
  15. Ternes, T. A., Joss, A., Siegrist, H. Scrutinizing pharmaceuticals and personal care products in wastewater treatment. Environ. Sci. Technol. 38 (20), 392A-399A (2004).
  16. Tang, J. Y. M., et al. Toxicity characterization of urban stormwater with bioanalytical tools. Water Res. 47, 5594-5606 (2013).
  17. Scott, P. D., et al. An assessment of endocrine activity in Australian rivers using chemical and in vitro analyses. Environ. Sci. Pollut. Res. 21 (22), 12951-12967 (2014).
  18. Vidal-Dorsch, D. E., Bay, S. M., Maruya, K., Snyder, S. A., Trenholm, R. A., Vanderford, B. J. Contaminants of emerging concern in municipal wastewater effluents and marine receiving water. Environ. Toxicol. Chem. 31 (12), 2674-2682 (2012).
  19. WateReuse Research Foundation (WRRF). Direct potable reuse: a path forward. , WRRF. Alexandria, VA. (2011).
  20. Leusch, F. D. L., et al. Assessment of the application of bioanalytical tools as surrogate measure of chemical contaminants in recycled water. Water Res. 49, 300-315 (2014).
  21. Schriks, M., et al. Occurrence of glucocorticoid activity in various surface waters in the Netherlands. Chemosphere. 93 (2), 450-454 (2013).
  22. Suzuki, G., Sato, K., Isobe, T., Takigami, H., Brouwer, A., Nakayama, K. Detection of glucocorticoid receptor agonist in effluents from sewage treatment plants in Japan. Sci. Tot. Environ. 527-528, 328-334 (2015).
  23. Purdom, C. E., Hardiman, P. A., Byea, V. V. J., Enoa, N. C., Tyler, C. R., Sumpter, J. P. Estrogenic effects of effluents from sewage treatment works. Chemistry and Ecology. 8 (4), 275-285 (1994).
  24. Kidd, K. A., et al. Collapse of a fish population after exposure to a synthetic estrogen. Proc. Natl. Acad. Sci. 104 (21), 8897-8901 (2007).
  25. Kojima, H., Katsura, E., Takeuchi, S., Niiyama, K., Kobayashi, K. Screening of estrogen and androgen receptor activities in 200 pesticides by in vitro reporter gene assays using Chinese hamster ovary cells. Environ. Health Perspect. 112 (5), 524-531 (2004).
  26. Kugathas, S., Sumpter, J. P. Synthetic glucocorticoids in the environment: First results on their potential impacts on fish. Environ. Sci. Technol. 45, 2377-2383 (2011).
  27. Van der Linden, S. C., et al. Development of a panel of high-throughput reporter-gene assays to detect genotoxicity and oxidative stress. Mutat. Res. Genet. Toxicol. Environ. Mutagen. 760, 23-32 (2014).
  28. Cwiertny, D. M., Snyder, S. A., Schlenk, D., Kolodziej, E. P. Environmental designer drugs: when transformation may not eliminate risk. Environ. Sci. Technol. 48, 11737-11745 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة