مقالة منهجية

زيكا الفيروسات نظام المعدية خلية الثقافة و

20.5K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/54767

⸱

أغسطس 23, 2016

 , 
1Board of Governors Regenerative Medicine Institute, Cedars-Sinai Medical Center, 2Department of Surgery, Cedars-Sinai Medical Center, 3Department of Surgery, David Geffen School of Medicine, University of California, Los Angeles

في هذه المقالة

ملخص

< p class = 'jove_content'> يرتبط فيروس زيكا (ZIKV) ، وهو أحد مسببات الأمراض الناشئة ، بتشوهات نمو الجنين وصغر الرأس. يعد إنشاء نظام فعال لزراعة الخلايا المعدية أمرا بالغ الأهمية لدراسات تكرار ZIKV وكذلك تطوير اللقاحات والأدوية. في هذه الدراسة ، يتم توضيح ومناقشة العديد من المقايسات الفيروسية المتعلقة ب ZIKV.

الملخص

زيكا فيروس (ZIKV) هو الممرض الناشئة التي يرتبط تشوهات النمو الجنين مثل صغر الرأس، وعيوب العين، وإعاقة النمو. ZIKV هو فيروس RNA من عائلة الفيروسات المصفرة. ينتقل ZIKV أساسا عن طريق البعوض، ولكن يمكن أيضا أن ينتشر عن طريق الأم إلى الجنين انتقال العدوى فضلا عن الاتصال الجنسي. حتى الآن، هناك أي علاج أو لقاح خيارات الموثوقة المتاحة لحماية المصابين بالفيروس. تطوير نظام استنساخه وفعال زيكا الفيروسات المعدية زراعة الخلايا أمر بالغ الأهمية لدراسة الآليات الجزيئية من تكرار ZIKV وكذلك الأدوية واللقاحات التنمية. وفي هذا الصدد، يتم الإبلاغ عن بروتوكول يصف في المختبر زيكا نظام الثدييات خلية القاعدة ثقافة الفيروس لتحليل الإنتاج والنمو الفيروسي هنا. يتم عرض تفاصيل عن تشكيل لويحات فيروس زيكا على أحادي الطبقة الخلية وفحص اللوحة لقياس عيار الفيروسية. حركية تكرار الجينوم الفيروسيويتم تحديد المزدوج تقطعت بهم السبل وسيطة replicatory RNA الجينوم. وقد استخدمت هذه المنصة الثقافة إلى الشاشة ضد مكتبة من مجموعة صغيرة من السيتوكينات مما أدى إلى تحديد الإنترفيرون α (IFN-α)، IFN-β وIFN-γ باسم مثبطات قوية من النمو الفيروسي زيكا. وخلاصة القول إن أظهرت وجود نظام في المختبر المعدية زيكا الفيروسي الثقافة ومختلف فحوصات الفيروسية في هذه الدراسة، والتي لديها القدرة على الاستفادة بشكل كبير من الأوساط البحثية في توضيح مزيد من الآليات المرضية الفيروسية وتطور الفوعة الفيروسية. فيروسات الإنترفيرون ألفا يمكن إجراء مزيد من التقييم باعتباره، بعد التعرض للقائي، وخيار العلاج الوقائي للعدوى فيروس زيكا في السكان المعرضة للخطر، بما في ذلك النساء الحوامل المصابات.

المقدمة

زيكا فيروس (ZIKV) هو الممرض البشري المهم المرتبط صغر الرأس وضعف الحمل أدائهن 1،4. ZIKV ينتمي إلى مجموعة من flaviviruses ذات الصلة طبيا يمكن أن يسبب تشوهات عصبية مثل حمى الضنك وغرب النيل، والفيروسات التهاب الدماغ سانت لويس. الوسيلة الرئيسية لانتقال الفيروس هو من البعوض الناقل الزاعجة المصرية، وبالإضافة إلى ذلك، كما تم الإبلاغ عن الأمراض المنقولة جنسيا 5،6. أصبح ZIKV مشكلة صحية عالمية رئيسية بسبب التوزيع الجغرافي التوسع من البعوض الناقل للمرض وعلاقة قوية مع تشوهات خلقية. تم عزل ZIKV أولا في عام 1947 من قرد هندي صغير خفيرا في الغابة زيكا، أفيد أوغندا وأول حالة بشرية في عام 1952 7،8. الأفراد الذين يصابون بعدوى ZIKV الحاضر مع أعراض خفيفة مثل الحمى والطفح الجلدي، والصداع، والتهاب الملتحمة، والعضلات / آلام المفاصل. النساء الحوامل المصابات يمكن أن تنقل ZIKV إلى الجنين 1. Zكما تم ربط الإصابة IKV لمتلازمة غيلان باريه، والأعصاب الطرفية اضطراب المناعة الذاتية إزالة الميالين 9.

يتكون الجينوم الفيروسي زيكا من الشعور الإيجابي، جزيء RNA واحد الذين تقطعت بهم السبل وهي عبارة عن 10.8 kilobases في الطول. ويتم تنظيم بنية الجينوم كما 5'NCR-C-PRM-E-NS1-NS2A-NS2B-NS3-NS4A-2K-NS4B-NS5-3'NCR، مع المناطق غير المشفرة (NCR) المرافقة منطقة ترميز البروتين 6. وترجم polyprotein واحد (3419 أأ) التي هي المشارك والمشقوق بعد translationally إلى 10 الببتيدات الصغيرة. كل من 5'NCR و3'NCR RNA الهياكل الجذعية حلقة تلعب دورا حاسما في بدء الجينوم ترجمة الفيروسية والتكرار. وتتألف المكونات الهيكلية للجينوم البروتينات قفيصة، غشاء، والمغلف. البروتينات غير الهيكلية حاسمة للنسخ المتماثل الجينوم.

حاليا، يتم تجميع زيكا السلالات الفيروسية إلى ثلاثة أنماط جينية رئيسية هي: غرب أفريقيا، شرق أفريقيا، وآسيا 6،10-13. وقد اقترح أن النسب شرق أفريقيا امتدت إلى غرب أفريقيا وآسيا، حيث أنه في وقت لاحق مزيد من تطور 12. وراثى الآسيوي هو المسؤول عن تفشي الحالية في الأمريكتين. زيكا الفيروس يمكن أن يكون مثقف في كل من البعوض وخلايا الثدييات. الخلايا الليفية الأولية عن طريق الجلد، والخلايا الجذعية غير الناضجة، والخلايا العصبية السلف القشرية، وخلايا فيرو عرضة للزيكا عدوى فيروسية 10،14،15. وقد أظهرت كل من النوع الأول والنوع الثاني إنترفيرون لتقييد نمو ZIKV في الخلايا الليفية الجلد 15. أهداف هذه الدراسة إلى تقديم، بروتوكول تدريجي مفصل لإنتاج ويعاير من النمط الجيني الآسيوية ZIKA السلالة الفيروسية PRVABC59 في نظام زراعة الخلايا الثديية وبيان فائدة هذا النظام الثقافة المعدية كمنصة تطوير العقاقير. هذا المورد لديه القدرة على الاستفادة بشكل كبير من الأوساط البحثية الفيروسي والعصبية زيكا لزيادة توضيح طآليات TS المرضية الفيروسية وتطور الفوعة الفيروسية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: ويرد ملخص تخطيطي لتدفق العمل في الشكل 1.

1. الخلايا

  1. استخدام خلايا فيرو لإنتاج فيروس زيكا وتحليل دورة تكاثر الفيروس.
  2. إعداد وسائل الإعلام كاملة النمو التي تحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني (FBS)، 2 مم L-الجلوتامين، البنسلين (100 وحدة / مل)، الستربتومايسين (100 وحدة / مل)، و 10 ملي HEPES.
  3. ثقافة خلايا فيرو مع متوسط ​​النمو الكامل المحدد عند 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2.

2. زيكا إنتاج الفيروسات

  1. حصاد الخلايا فيرو في كثافة الخلية 80٪ باستخدام 0.25٪ التربسين في T-75 قارورة وعدد الخلايا.
    1. نضح في وسائل الإعلام من الثقافة قارورة T-75 وشطف الخلايا مع 2 مل الفوسفات مخزنة المالحة (PBS).
    2. إضافة 2 مل من 0.25٪ التربسين واحتضان القارورة عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
    3. إضافة 8 مل من مصل يحتوي على متوسط ​​النمو لإبطال نشاط التربسين. الماصة صعودا وهبوطا لسوسخلايا يعتمدون ونقل الخلايا إلى أنبوب 15 مل.
    4. إزالة 10 ميكرولتر من الخلايا وخلط مع كمية مساوية من 0.4٪ التريبان الأزرق. تحميل مزيج استعداد لالشريحة غرفة عد الخلايا والحصول على خلية قابلة للحياة التهم باستخدام عداد الخلية الآلي.
  2. البذور ما مجموعه 7 ملايين الخلايا في حجم 30 مل في قارورة T-160.
  3. في اليوم التالي، إعداد تعدد المناسب للعدوى (0،01-،1 وزارة الداخلية) من اللقاح فيروس زيكا في وسائل الإعلام ثقافة خالية 10 مل مصل في قارورة.
  4. إزالة وسائل الإعلام أمضى من القارورة T-160 ثم قم بإضافة اللقاح الفيروسي الطازجة (10 مل).
  5. احتضان قوارير تلقيح في 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2 لمدة 4-6 ساعة. نشر اللقاح عن طريق إمالة بلطف قوارير جانبية في كل ساعة.
  6. عند الانتهاء من الحضانة، ويحل محل اللقاح مع وسائل الإعلام دافئ تستكمل المصل النمو (30 مل) من أجل كل قارورة. ثم تابع ثقافة الفيروسية للساعة 96 القادمة.
  7. تحقق من تطور فيالخمج (العدوى) من خلال مراقبة ظهور لويحات الفيروسية على أحادي الطبقة الخلية باستخدام النقيض المجهر المرحلة واتخاذ الصور (الشكل 2) حسب الحاجة في 40X و200X تكبير.

figure-protocol-1
الشكل 2: اللوحات التي شكلتها فيروس زيكا على أحادي الطبقة من الخلايا فيرو الصور الحقل مشرق للتكبير مختلفة تظهر زيكا لويحات الفيروسية في 48 HPI. لاحظ وجود بؤر خلية مدورة على أحادي الطبقة. (مقياس بار = 50 ميكرون) الرجاء النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. حصاد supernatants ثقافة الخلية في نقطة زمنية 96 ساعة وأجهزة الطرد المركزي طاف في 300 x ج لمدة 10 دقيقة في 4 درجات مئوية لإزالة الحطام الخلية.
  2. إزالة بعناية طاف دون الحطام مكعبات مقلق ونقل رس 15 مل أنابيب. تنبيذ فائق في 24000 x ج لا يمكن أن يؤديها لتركيز الجسيمات الفيروسية (اختياري).
  3. تخزين supernatants ثقافة الفيروسية في قسامات متعددة في -80 درجة مئوية.

3. قياس زيكا الفيروسات العيار الحجمي بواسطة البلاك الفحص

  1. البذور خلايا الفيرو ساذجة في 1 × 10 5 خلايا لكل بئر في 2 مل حجم باستخدام لوحة ال 12 أيضا.
  2. في اليوم التالي، وإعداد 10 أضعاف التخفيفات المسلسل من supernatants ثقافة الفيروسية التي تم جمعها من قارورة T-160 باستخدام وسائل الإعلام خالية من المصل. إزالة وسائل الإعلام أمضى من كل بئر وإضافة 400 ميكرولتر من اللقاح استعداد على خلايا فيرو في ثلاث نسخ.
  3. احتضان قوارير تلقيح في 37 ° C مع 5٪ CO 2 لمدة 4-6 ساعة. نشر اللقاح عن طريق إمالة بلطف لوحة جانبية في كل ساعة واحدة.
  4. في نهاية الحضانة، ويحل محل اللقاح مع وسائل الاعلام المصل تستكمل (2 مل لكل بئر).
  5. في 48 ساعة بعد التطعيم، والاعتماد على البؤر الفيروسية باستخدام مقاولات المرحلةأست المجهر. حساب عيار الفيروسية وحدات اللوحة تشكيل (PFU) لكل مل. انظر الشكل 3 لفحص اللوحة.
  6. إصلاح وصمة عار على الخلايا في 4٪ الفورمالديهايد و 0.1٪ محلول الكريستال البنفسجي أعدت في 20٪ من الإيثانول لتصور واضح لويحات.

الفحص 4. زيكا الفيروسي الجينوم النسخ المتماثل

  1. البذور خلايا الفيرو ساذجة في 1 × 10 5 خلايا لكل بئر في 2 مل مجلدات باستخدام لوحة ال 12 أيضا. في اليوم التالي، وإعداد قائح الفيروسي (وزارة الداخلية من 0.01 و 0.1، و 400 ميكرولتر / جيد) من انخفاض وارتفاع عيار باستخدام المصل وسائل الإعلام الحرة في ثلاث نسخ. للعدوى وهمية، واستخدام المصل وسائل الإعلام الحرة (400 ميكرولتر / جيد) فقط.
  2. كرر الخطوات 3،2-3،4.
  3. في نقطة زمنية 48 و 96 ساعة، وجمع عينات للRNA ومناعية (ICC).
    1. للحصول على عينات حصاد الحمض النووي الريبي، وإزالة وسائل الإعلام ثم إضافة 400 ميكرولتر من حل تحلل مباشرة إلى كل بئر وجمع لست].
    2. للمحكمة الجنائية الدولية، وإزالة وسائل الإعلام ورالدجاجة إصلاح الخلايا عن طريق إضافة 1 مل من الميثانول إلى كل بئر واحتضان لوحة عند 4 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
    3. من المحللة الخلية، وعزل الحمض النووي الريبي مجموع باستخدام عدة عزل الحمض النووي الريبي فقا لتعليمات الشركة الصانعة. قياس الحمض النووي الريبي باستخدام معمل.
  4. إجراء من خطوتين عكس النسخ الكمي PCR (RT-QPCR) لتحديد محتوى الجينوم ZIKV من الحمض النووي الريبي المقطوع.
    1. على عكس نسخ الحمض النووي الريبي، أولا إعداد مزيج رد فعل 13 ميكرولتر تتألف من 5 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي معزولة، 1 ميكرولتر من dNTPs (10 ملم)، و 1 مسدوس عشوائية ميكرولتر (250 نانوغرام) في أنبوب 0.2 مل. احتضان الأنبوب عند 65 درجة مئوية لمدة 5 دقائق ثم وضعه على الجليد لمدة دقيقة واحدة. وفي وقت لاحق، إضافة 1 ميكرولتر من الناسخ العكسي، 4 ميكرولتر من العازلة التوليف 5X حبلا، 1 ميكرولتر من 0.1 M dithiothreitol، و 1 ميكرولتر من ريبونوكلياز المانع إلى مزيج التفاعل. احتضان الأنبوب لمدة 5 دقائق إضافية عند 25 درجة مئوية، تليها 60 دقيقة عند 50 درجة مئوية وinactivأكل رد فعل عن طريق التسخين إلى 70 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
    2. أداء QPCR باستخدام 1 ميكرولتر من الناتج [كدنا] مع 12.5 ميكرولتر من الصبغة الخضراء 2X مزيج السوبر تحتوي على الحمض النووي بوليميريز و 1 ميكرولتر من 10 ملي الاشعال فردية معينة لفيروس زيكا [زيكا فيروس عموم الوراثي الاشعال (لل: 5'-AARTACACATACCARAACAAAGTGGT-3 " ؛ القس: 5'-TCCRCTCCCYCTYTGGTCTTG-3)، زيكا فيروس الوراثي الآسيوية الاشعال PRVABC59 سلالة (5'-AAGTACACATACCAAAACAAAGTGGT-3 '؛ القس: 5'-TCCGCTCCCCCTTTGGTCTTG-3')]، أو فيروس التهاب الكبد الوبائي (JFH RTQ F: 5 "CTGGGTCCTTTCTTGGATAA-3؛ JFH RTQ R: 5'CCTATCAGGCAGTACCACA-3)، أو الخلوي GAPDH التدبير المنزلي الجينات (لل: 5'-CCACCTTTGACGCTGGG-3 '؛ القس: 5'-CATACCAGGAAATGAGCTTGACA-3") في حجم رد الفعل 25 ميكرولتر.
    3. أداء PCR باستخدام المدى حالة 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية و 60 درجة مئوية لمدة 30 ثانية (40 دورة) في نظام PCR الوقت الحقيقي.
    4. استخدام مستوى التعبير GAPDH بناء على عتبة دورة (CT) قيمة لتطبيع Zإيكا قياس الجينوم الفيروسي. حساب دلتا قيمة ط م (ΔCt) من زيكا الجينوم مقارنة بما كان عليه من GAPDH والحصول على قيمة 2 ΔCt. ثم، حساب التغير أضعاف بأخذ نسبة من تطبيع محتويات الجينوم زيكا بين الخلايا المصابة وغير المصابة في النقاط الزمنية المشار إليها. انظر الشكل 4 للحصول على نتائج تكرار ZIKV الجينوم.
  5. أداء المحكمة باستخدام خلايا الميثانول ثابتة.
    1. غسل الخلايا الثابتة ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني 1X ومنع مع المحكمة عازلة تمنع (3٪ مصل الماعز، 3٪ BSA، 0.1٪ تريتون-× 100 في برنامج تلفزيوني).
    2. استخدام الماوس وحيدة النسيلة المضادة للالرنا المزدوج الجديلة الأجسام المضادة J2 (1 ميكروغرام / مل) في التخفيف من 1: 100 في عرقلة العازلة واحتضان بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
    3. غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني 1X وإضافة الضد الثانوية الماعز المضادة للماوس مفتش-594 (1 ميكروغرام / مل) في التخفيف 1: 1000 العازلة في الحجب واحتضان لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
    4. غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني 1X وصمة عار للنوى باستخدام هويشت صبغ ومراقبة الخلايا باستخدام المجهر الفلورسنت في التكبير 100X (الشكل 4).

5. فحص مكتبة خلوى ضد عدوى فيروس زيكا

  1. البذور خلايا الفيرو ساذجة في 1 × 10 5 خلايا لكل بئر باستخدام لوحة ال 12 أيضا. مرة واحدة يتم إرفاق الخلايا (6 ساعات بعد البذر)، إضافة كل خلوى في تركيزات مبين في التكرارات البيولوجية (2 مل حجم / جيد). تشمل المركبات (PBS) وحدها السيطرة.
  2. في 12 ساعة بعد العلاج، نفذ زيكا عدوى فيروسية (وزارة الداخلية من 0.1 في 400 ميكرولتر لكل بئر). تشمل آبار المراقبة السلبية دون عدوى (وهمية).
  3. في 4 ساعات بعد العدوى، استبدال اللقاح الفيروسي مع وسائل الإعلام خلوى المعالجة (2 مل). احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة إضافية 44 ساعة.
  4. في 48 ساعة بعد العدوى، عد لويحات الفيروسية باستخدام المجهر النقيض من مرحلة والحصول على صور تمثيلية من الخلايا المصابة في 40X التكبير (الشكل 5).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

وقد استخدمت؛ (بنك الجينات عدد الانضمام KU501215 PRVABC59) من النمط الجيني الآسيوية في هذه الدراسة 12 سلالة فيروسية زيكا. واستخدمت خلايا فيرو في 80٪ confluency للتحقيق من جديد زيكا عدوى فيروسية. لإنتاج الفيروسي وتوصيف الفيروسي لاحق، كان يعمل لمرور وقت مبكر (P3) زيكا الفيروس. وقد لوحظت لويحات الفيروسية في اليوم الثاني من العدوى. زيكا السلالات الفيروسية التي صدرت من الخلايا المصابة في البداية يمكن أن ينتشر إلى الخلايا المجاورة، مما...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هنا، يتم تقديم بروتوكول مبسط لزراعة فيروس زيكا في المختبر. الخطوات الحاسمة بما في ذلك تحديد نقاط النهاية المثلى لتوسيع ثقافة الفيروسات، قياس عيار، وقياس تكرار الجينوم قدمت. زيكا الفيروس الممرض البشري، لذلك، في حين أن التعامل مع العوامل المعدية، وإجراءات السلامة الأحيائية هي التي يجب اتباعها بدقة. خط الخلية قرد الكلى، فيرو، وكان يستخدم لإظهار مختلف فحوصات الفيروسية. قد تختلف زيكا حركية تكاثر الفيروس في خلايا الأنسجة المختلفة والأنواع. يمكن استخدام خطوط الخلايا إضافية كما ه...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

نود أن نشكر الدكتور آرون براولت والدكتور براندي راسل من مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها (CDC) بالولايات المتحدة الأمريكية على توفير سلالة زيكا الفيروسية PRVABC59. نشكر نيكولاس تن من جامعة ييل على تحرير هذه المخطوطة. تم دعم هذا العمل من قبل جائزة البحوث البرنامجية المؤسسية لمركز Cedars-Sinai الطبي إلى V.A.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
دولبيكو s النسر المعدل s متوسط (DMEM)Sigma Life ScienceD5796
HEPESLife Technologies15630080
GlutamaxLife Technologies35050061
2.5٪ Trypsin ، 10x [-] Phenol Red & nbsp ؛  كورنينج25-054-C1
تريبان بلو داين 0.4٪Life TechnologiesT10282
كونتيسة & ndash ؛ عداد الخلايا الآليThermoFisher ScientificC10227
عد خلايا الكونتيسة   شرائح الغرفةThermoFisher ScientificC10283
Rneasy Mini KitQiagen74104
Nanodrop 2000Thermo ScientificNanodrop 2000
الماوس أحادي النسيلة المضاد للجسم المضاد للحمض النووي الريبي J2 & nbsp ؛الإنجليزية & الاستشارات العلمية Kft.10010200
الماعز المضادة للأرانب IgG Alexa Fluor 594Life TechnologiesA11020
SUPERSCRIPT III RT لايف تكنولوجيز18080085
SYBR QPCR SUPERMIX مع ROXLife Technologies11744500
QuantStudio12K Flex Real-Time PCR SystemThermo Fischer4471088
DNasePromegaM6101
Vero Cell Line  ATCCCCL-81
سلالة زيكا الفيروسية PRVABC59مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها (CDC) IL-6
Peprotech200-06                         
IL-1 alpha             Peprotech200-01A                   
TNF-alphaPeprotech300-01A                   
إنترفيرون ألفا A   R & D Systems11100-1
Interferon betaPeprotech300-02BC
Interferon gammaPeprotech300-02
جهاز طرد مركزي 5415REppendorf5415R
طرد مركزي 5810REppendorf5810R
Nikon Eclipse Ti مجهر التألق المناعي مع نيكون Intenselight C-HGFIنيكونقم بزيارة نيكون للطلب
جهاز

المراجع

  1. Brasil, P., et al. Zika Virus Infection in Pregnant Women in Rio de Janeiro - Preliminary Report. N Engl J Med. , 1-11 (2016).
  2. Lucey, D. R., Gostin, L. O. The Emerging Zika Pandemic: Enhancing Preparedness. JAMA. 315 (9), 865-866 (2016).
  3. Mlakar, J., et al. Zika Virus Associated with Microcephaly. N Engl J Med. 374 (10), 951-958 (2016).
  4. Schuler-Faccini, L., et al. Possible Association Between Zika Virus Infection and Microcephaly. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 65 (3), Brazil. 59-62 (2015).
  5. Foy, B. D., et al. Probable non-vector-borne transmission of Zika virus, Colorado, USA. Emerg Infect Dis. 17 (5), 880-882 (2011).
  6. Kuno, G., Chang, G. J. Full-length sequencing and genomic characterization of Bagaza, Kedougou, and Zika viruses. Arch Virol. 152 (4), 687-696 (2007).
  7. Dick, G. W. Zika virus. II. Pathogenicity and physical properties. Trans R Soc Trop Med Hyg. 46 (5), 521-534 (1952).
  8. Dick, G. W., Kitchen, S. F., Haddow, A. J. Zika virus. I. Isolations and serological specificity. Trans R Soc Trop Med Hyg. 46 (5), 509-520 (1952).
  9. Oehler, E., et al. Zika virus infection complicated by Guillain-Barre syndrome--case report, French Polynesia. Euro Surveill. 19 (9), 1-3 (2013).
  10. Baronti, C., et al. Complete coding sequence of zika virus from a French polynesia outbreak in 2013. Genome Announc. 2 (3), e00500-e00514 (2014).
  11. Lanciotti, R. S., et al. Genetic and serologic properties of Zika virus associated with an epidemic, Yap State, Micronesia, 2007. Emerg Infect Dis. 14 (8), 1232-1239 (2008).
  12. Lanciotti, R. S., et al. Phylogeny of Zika virus in Western Hemisphere, 2015 [Letter]. Emerg Infect Dis. 22 (5), (2016).
  13. Musso, D., Nilles, E. J., Cao-Lormeau, V. M. Rapid spread of emerging Zika virus in the Pacific area. Clin Microbiol Infect. 20 (10), O595-O596 (2014).
  14. Tang, H., et al. Zika Virus Infects Human Cortical Neural Progenitors and Attenuates Their Growth. Cell Stem Cell. , 1-5 (2016).
  15. Hamel, R., et al. Biology of Zika Virus Infection in Human Skin Cells. J Virol. 89 (17), 8880-8896 (2015).
  16. Faye, O., et al. Quantitative real-time PCR detection of Zika virus and evaluation with field-caught mosquitoes. Virol J. 10, 311(2013).
  17. Chu, D., et al. Systematic analysis of enhancer and critical cis-acting RNA elements in the protein-encoding region of the hepatitis C virus genome. J Virol. 87 (10), 5678-5696 (2013).
  18. Hiratsuka, M., et al. Administration of interferon-alpha during pregnancy: effects on fetus. J Perinat Med. 28 (5), 372-376 (2000).
  19. Ozaslan, E., et al. Interferon therapy for acute hepatitis C during pregnancy. Ann Pharmacother. 36 (11), 1715-1718 (2002).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Vero RT qPCR

مقالات ذات صلة