برزت العدوى التي تسببها السلالات البكتيرية المقاومة للأدوية المتعددة (MDR) كتهديد خطير للصحة العامة ، مما يستلزم تطوير علاجات بديلة. نقدم بروتوكولا لتقييم فعالية العلاج بالضوء الأزرق المضاد للميكروبات (aBL) لعدوى Acinetobacter baumannii MDR في حروق الفئران باستخدام التصوير الحيوي
.يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في فيفو التحقيق من مضادات الميكروبات العلاج الضوء الأزرق للمقاومة للأدوية المتعددة baumannii الراكدة حرق العدوى عن طريق تلألؤ بيولوجي التصوير
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
حرق العدوى ما زالت أحد أهم أسباب الاعتلال والوفيات. وقد أدى تزايد ظهور (MDR) البكتيريا المقاومة للأدوية المتعددة إلى الفشل المتكرر من العلاج بالمضادات الحيوية التقليدية. هناك حاجة ماسة إلى علاجات بديلة لمعالجة البكتيريا MDR.
نهجا مبتكرا غير المضادات الحيوية، وقد أظهرت مضادات الميكروبات الضوء الأزرق (ABL) والفعالية واعدة ضد الالتهابات MDR. آلية عمل ABL ليست مفهومة جيدا حتى الآن. والافتراض الشائع أن تحدث بشكل طبيعي حاملات ضيائيا الذاتية في البكتيريا (على سبيل المثال، البورفيرنيات خالية من الحديد، flavins، الخ) وولع ABL، التي تنتج بدورها السامة للخلايا أنواع الاكسجين التفاعلية (ROS) من خلال عملية الضوئية.
وخلافا للنهج آخر يستند خفيفة مضادة للميكروبات، والعلاج الضوئي مضادات الميكروبات (aPDT)، والعلاج ABL لا يتطلب ضلوع photosensitiz خارجية المنشأإيه. وكل ما تحتاجه لتصبح نافذة المفعول هي أشعة الضوء الأزرق. وبالتالي، فهي بسيطة وغير مكلفة. المستقبلات ABL هي الضيائية الخلوية المحلية في البكتيريا، بدلا من DNA. وهكذا، ويعتقد المحمول جوا لتكون أقل من ذلك بكثير السمية الوراثية لاستضافة خلايا من (UVC) أشعة فوق البنفسجية-C، والذي يسبب مباشرة الحمض النووي من التلف في الخلايا المضيفة.
في هذه الورقة، نقدم بروتوكول لتقييم فعالية العلاج ABL للعدوى baumannii MDR الراكدة في نموذج الفأر من حروق. باستخدام سلالة إضاءة الحيوية هندسيا، كنا قادرين على مراقبة noninvasively مدى الإصابة في الوقت الحقيقي في الحيوانات الحية. هذا الأسلوب هو أيضا أداة فعالة لرصد التوزيع المكاني للالتهابات في الحيوانات.
المقدمة
تواصل حرق الالتهابات، والتي كثيرا ما ذكرت بسبب الإصابات الحرارية الجلدية، ليكون أحد أهم أسباب الاعتلال والوفيات 1. إدارة التهابات الحروق تم اختراق مزيدا من تزايد ظهور المقاوم للأدوية المتعددة (MDR) سلالات بكتيرية 2 بسبب الاستخدام المكثف للمضادات الحيوية. واحد البكتيريا سالبة الجرام MDR المهمة هي baumannii الراكدة، والذي يعرف لتترافق مع جروح المعركة الأخيرة ومقاومة للمضادات الحيوية المتاحة كلها تقريبا 3. تم الإبلاغ عن وجود الأغشية الحيوية في بؤر المصاب 4 و 5 و يعتقد أن تفاقم التسامح للمضادات....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. إعداد الثقافة البكتيرية
- إضافة 7.5 مل من الدماغ القلب تسريب (BHI) متوسطة إلى أنبوب الطرد المركزي 50 مل. البذور خلايا A. baumannii في المتوسط BHI ثم احتضان الثقافة A. baumannii في حاضنة المدارية (37 درجة مئوية) لمدة 18 ساعة.
- أجهزة الطرد المركزي ثقافة الخلايا في 3500 × ز لمدة 5 دقائق، وإزالة طاف، ويغسل الكريات في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS).
- اعادة تعليق الكريات البكتيريا في برنامج تلفزيوني جديد وماصة بدقة تعليق.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
سلالة A. baumannii التي استخدمناها هو عزل السريري MDR، كما ذكرت سابقا 12 و 17. وقدم سلالة بكتيرية إضاءة الحيوية التي ترنسفكأيشن من luxCDABE أوبرا 11. ويبين الشكل 1A للالمتعاقبة الصور التلألؤ البكتيرية من ماوس تمثيلي حرق المصابة مع 5 × 10 6 A. baumannii وتتعرض لالتعرض ABL واحد في 24 ساعة بعد التلقيح البكتيرى. A غر.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ABL هو طريقة جديدة لعلاج الالتهابات. منذ آلية عملها هي مختلفة تماما عن تلك التي العلاج الكيميائي، وهو أكثر من العلاج الطبيعي. وكيل التي تتوسط تأثير مضاد للميكروبات باللون الأزرق أشعة الضوء (400-470 نانومتر). مع تطور المصابيح الزرقاء، حصلنا على الوصول إلى نهج المضادة للجراثيم فعال وبسيط قائم على ضوء للعدوى MDR.
في هذا البروتوكول، التي وصفناها تطوير نموذج الفأر من التهابات الحروق التي تسببها سلالة إضاءة الحيوية من .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل مركز تكامل الطب والتكنولوجيا المبتكرة (CIMIT) بموجب الاتفاقية التعاونية لنشاط الاستحواذ على البحوث الطبية للجيش الأمريكي (CIMIT رقم 14-1894 إلى TD) والمعاهد الوطنية للصحة (1R21AI109172 إلى TD). تم دعم YW من خلال منحة أبحاث الطلاب ASLMS (BS. S02.15). نحن ممتنون لطيبة حسن ، دكتوراه في مركز ويلمان لإرشادها المشترك ل YW.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| IVIS | PerkinElmer Inc, Waltham, MA | IVIS Lumina Series III | قبل السريرية in vivo< em> تصوير |
| الصمام الثنائي الباعث للضوء LED | VieLight Inc, تورنتو, كندا | 415 | نانومتر مصدر الضوء للإضاءة |
| عداد الطاقة / الطاقة | Thorlabs، Inc. ، نيوتن ، نيوجيرسي | PM100D | كاشف إشعاع الضوء |
| الماوس ؛ | مختبرات نهر تشارلز ، ويلمنجتون ، ماساتشوستس | BALB / ج | 7-8 أسابيع العمر ، 17-19 جم الوزن |
| <م > Acinetobacter baumannii ؛ < / em> | مركز بروك الطبي للجيش ، فورت سام هيوستن ، تكساس | عزل سريري | سلالة مضيئة هندسيا |
| محاقن الأنسولين | فيشر Scientific | 14-826-79 | BD Lo-Dose U-100 محاقن الأنسولين للحقن |
| كلوريد الصوديوم | فيشر | Scientific 721016 | 0.9٪ كلوريد الصوديوم |
| فوسفات محلول ملحي مخزن ، 1x محلول | فيشر Scientific | BP24384 ؛ | مخزن مؤقت قياسي للفوسفات يستخدم في العديد من الإجراءات الجزيئية الحيوية |
| ضخ قلب الدماغ | فيشر Scientific | B11059 | وسط ثقافة بكتيرية |
| فالكون 15 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية | فيشر Scientific | 14-959-70C | لجهاز الطرد المركزي للتعليق البكتيري |
| مختبر الهزازات المدارية المحتضنة | ، Inc ، Atkinson ، NH & nbsp ؛ | Incu-Shaker Mini | لزراعة حلقات تلقيح البكتيريا |
| فيشر Scientific | 22-363-605 ؛ | لتلطيخ الجرثومة البكتيرية على سطح حروق الفئران | |
| فيشر Scientific Redi-Tip Pipet Tips ، 1-200 & micro ؛ L | فيشر العلمي | 02-707-502 | نصائح ماصة |
| الحرارية العلمية Sorvall Legend X1 الطرد المركزي | فيشر Scientific | 75-004-220 | لفصل التعليق البكتيري |
| Brass Block | Small Parts، Inc. ، ميامي ، فلوريدا | 10 مم × 10 مم ؛ | لخلق الحروق في الفئران |
| قفازات Extreme Dragon PBI / Kevlar عالية الحرارة | Superior Glove Works Ltd ، Cheektowaga ، نيويورك | PBI83514 | قفازات مقاومة للحرارة |
| أطباق Greiner | Sigma-Aldrich Co. LLC | P5112-740EA | 35 مم ومرات ؛ 10 مم |
| كورنينج الرقمية لوحة ساخنة | كول بارمر للأدوات شركة ، LLC | UX-84301-65 | 10 "× 10" ، 220 فولت تيار متردد ، لغلي الماء ؛ |
| الفأر / الفئران رقيقة الخط المياه ساخنة السرير الجراحي | EZ-211 | يمنع فقدان الحرارة وانخفاض حرارة الجسم أثناء الجراحة | |
| مرهم بيطري | S & # 38 ؛ K Pharma ، GmbH | Kerato Biciron 5٪ ، | مرهم Augensalbe للعيون لمنع جفاف العين |
المراجع
- Gibran, N. S. Summary of the 2012 ABA Burn Quality Consensus conference. J Burn Care Res. 34 (4), 361-385 (2013).
- Sommer, R., Joachim, I., Wagner, S., Titz, A. New approaches to control infections: anti-biofilm strategies against gram-negative bacteria.....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
