يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

في فيفو التحقيق من مضادات الميكروبات العلاج الضوء الأزرق للمقاومة للأدوية المتعددة baumannii الراكدة حرق العدوى عن طريق تلألؤ بيولوجي التصوير

8.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/54997

⸱

أبريل 28, 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Wellman Center for Photomedicine, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, 2Department of Medical Oncology, Beijing Institute of Translational Medicine, Chinese Academy of Sciences, 3Cancer Center, Aviation General Hospital, Beijing, 4Infectious Disease Service, Brooke Army Medical Center

في هذه المقالة

ملخص

برزت العدوى التي تسببها السلالات البكتيرية المقاومة للأدوية المتعددة (MDR) كتهديد خطير للصحة العامة ، مما يستلزم تطوير علاجات بديلة. نقدم بروتوكولا لتقييم فعالية العلاج بالضوء الأزرق المضاد للميكروبات (aBL) لعدوى Acinetobacter baumannii MDR في حروق الفئران باستخدام التصوير الحيوي

.

الملخص

حرق العدوى ما زالت أحد أهم أسباب الاعتلال والوفيات. وقد أدى تزايد ظهور (MDR) البكتيريا المقاومة للأدوية المتعددة إلى الفشل المتكرر من العلاج بالمضادات الحيوية التقليدية. هناك حاجة ماسة إلى علاجات بديلة لمعالجة البكتيريا MDR.

نهجا مبتكرا غير المضادات الحيوية، وقد أظهرت مضادات الميكروبات الضوء الأزرق (ABL) والفعالية واعدة ضد الالتهابات MDR. آلية عمل ABL ليست مفهومة جيدا حتى الآن. والافتراض الشائع أن تحدث بشكل طبيعي حاملات ضيائيا الذاتية في البكتيريا (على سبيل المثال، البورفيرنيات خالية من الحديد، flavins، الخ) وولع ABL، التي تنتج بدورها السامة للخلايا أنواع الاكسجين التفاعلية (ROS) من خلال عملية الضوئية.

وخلافا للنهج آخر يستند خفيفة مضادة للميكروبات، والعلاج الضوئي مضادات الميكروبات (aPDT)، والعلاج ABL لا يتطلب ضلوع photosensitiz خارجية المنشأإيه. وكل ما تحتاجه لتصبح نافذة المفعول هي أشعة الضوء الأزرق. وبالتالي، فهي بسيطة وغير مكلفة. المستقبلات ABL هي الضيائية الخلوية المحلية في البكتيريا، بدلا من DNA. وهكذا، ويعتقد المحمول جوا لتكون أقل من ذلك بكثير السمية الوراثية لاستضافة خلايا من (UVC) أشعة فوق البنفسجية-C، والذي يسبب مباشرة الحمض النووي من التلف في الخلايا المضيفة.

في هذه الورقة، نقدم بروتوكول لتقييم فعالية العلاج ABL للعدوى baumannii MDR الراكدة في نموذج الفأر من حروق. باستخدام سلالة إضاءة الحيوية هندسيا، كنا قادرين على مراقبة noninvasively مدى الإصابة في الوقت الحقيقي في الحيوانات الحية. هذا الأسلوب هو أيضا أداة فعالة لرصد التوزيع المكاني للالتهابات في الحيوانات.

المقدمة

تواصل حرق الالتهابات، والتي كثيرا ما ذكرت بسبب الإصابات الحرارية الجلدية، ليكون أحد أهم أسباب الاعتلال والوفيات 1. إدارة التهابات الحروق تم اختراق مزيدا من تزايد ظهور المقاوم للأدوية المتعددة (MDR) سلالات بكتيرية 2 بسبب الاستخدام المكثف للمضادات الحيوية. واحد البكتيريا سالبة الجرام MDR المهمة هي baumannii الراكدة، والذي يعرف لتترافق مع جروح المعركة الأخيرة ومقاومة للمضادات الحيوية المتاحة كلها تقريبا 3. تم الإبلاغ عن وجود الأغشية الحيوية في بؤر المصاب 4 و 5 و يعتقد أن تفاقم التسامح للمضادات الحيوية ودفاع المضيف 6 و 7 و يسبب العدوى المستمرة 8 و 9. لذلك، هناك pressinز بحاجة لتطوير العلاجات البديلة. في الاستراتيجية الوطنية لمكافحة البكتيريا للمضادات الحيوية المقاوم أعلنت في الآونة الأخيرة، وقد لوحظ تطوير علاجات بديلة للمضادات الحيوية كما فعل من قبل حكومة الولايات المتحدة (10).

النهج المضادة للميكروبات المستندة الخفيفة، كما يدل على ذلك اسمها، تتطلب أشعة الضوء مع أو من دون غيرها من العوامل. وتشمل هذه الأساليب العلاج المضادة للميكروبات الضوئي (aPDT)، الأشعة فوق البنفسجية-C (UVC) التشعيع، والضوء الأزرق مضادات الميكروبات (ABL). في الدراسات السابقة، فقد أظهرت فعالية واعدة في قتل MDR سلالات بكتيرية 11 و 12 و 13. ومن بين الأساليب الثلاث التي تتخذ من الضوء، وقد اجتذب ABL اهتماما متزايدا في السنوات الأخيرة نظرا لخصائص مضادة للجراثيم الجوهرية من دون استخدام الضيائية 14. في comparison إلى aPDT، ABL ينطوي فقط على استخدام الضوء، في حين يتطلب aPDT مزيج من الضوء والضيائي. ولذلك، ABL هي بسيطة وغير مكلفة 14. بالمقارنة مع UVC، ويعتقد المحمول جوا لتكون أقل من ذلك بكثير السامة للخلايا والسمية الوراثية إلى الخلايا المضيفة (15).

والهدف من هذا البروتوكول هو تحقيق فعالية ABL لعلاج التهابات الحروق الناجمة عن MDR A. baumannii في نموذج الفأر. نحن نستخدم البكتيريا المسببة للأمراض إضاءة الحيوية لتطوير نماذج الماوس الجديدة من العدوى الحرق التي تسمح للمراقبة غير الغازية من عبء البكتيرية في الوقت الحقيقي. مقارنة مع الطريقة التقليدية لأخذ العينات السوائل في الجسم / الأنسجة والطلاء لاحق ومستعمرة عد 16، توفر هذه التقنية نتائج دقيقة. عملية أخذ العينات الأنسجة يمكن إدخال مصدر آخر من الخطأ التجريبي. منذ شدة استضاءة البكتيرية يتناسب خطيا إلى corresالبرك البكتيري CFU 17، يمكننا قياس مباشرة بقاء البكتيريا بعد جرعة معينة من أشعة الضوء. من خلال رصد عبء البكتيرية في الحيوانات التي تعيش تلقي العلاج الخفيفة في الوقت الحقيقي، وحركية قتل البكتيريا يمكن أن توصف باستخدام عدد أقل بكثير من الفئران.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. إعداد الثقافة البكتيرية

  1. إضافة 7.5 مل من الدماغ القلب تسريب (BHI) متوسطة إلى أنبوب الطرد المركزي 50 مل. البذور خلايا A. baumannii في المتوسط BHI ثم احتضان الثقافة A. baumannii في حاضنة المدارية (37 درجة مئوية) لمدة 18 ساعة.
  2. أجهزة الطرد المركزي ثقافة الخلايا في 3500 × ز لمدة 5 دقائق، وإزالة طاف، ويغسل الكريات في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS).
  3. اعادة تعليق الكريات البكتيريا في برنامج تلفزيوني جديد وماصة بدقة تعليق.
  4. جمع 100 ميكرولتر من تعليق البكتيرية وجعل تخفيف 01:10 باستخدام برنامج تلفزيوني جديد.
  5. نقل التخفيف إلى 1.5 مل كفيت شبه الصغيرة وقياس الكثافة الضوئية (OD) عند طول موجي 600 نانومتر (OD 600 نانومتر).
  6. حساب OD 600 نانومتر من (مخفف) تعليق الأصلي في برنامج تلفزيوني وفقا لOD 600 نانومتر القيمة المقاسة للتخفيف وعامل التخفيف (10).
  7. ضبط عشره تعليق الأصلي في برنامج تلفزيوني لOD 600 نانومتر = 0.6 (المقابلة لكثافة خلية من 10 8 CFU / مل).

2. نموذج الفأر من العدوى الناجمة عن حرق إضاءة الحيوية A. baumannii

  1. أنثى استخدام الكبار BALB / ج الفئران تتراوح أعمارهم بين 7-8 أسابيع وزنها 17-19 غ. السماح للفئران إلى التأقلم على ظروف المختبر لمدة 3 أيام على الأقل قبل بدء التجربة. الحفاظ على الفئران في 12 ساعة دورة الضوء / الظلام تحت درجة حرارة الغرفة من 21 ℃ ومنحهم الغذاء والماء بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية.
  2. تخدير الفئران مع حقنة داخل الصفاق من كوكتيل الكيتامين زيلازين (100 ملغ / كغ - 20 ملغ / كلغ). مسة خفيفة على الجفن من كل فأر مع مسحة القطن. غياب المنعكس الجفني يدل على وجود عمق التخدير المناسب. تغطية عيون الماوس مع مرهم بيطري لمنع العينين من الجفاف أثناء التخدير.
  3. حلق الفئران على ظهره لفضح الكثير من الجلد ممكن باستخدام 50 شفرة المقص الشعر.
  4. وضع غطاء 35 مم طبق بيتري تحت البطن من الفئران للحفاظ على ظهورهم في وضع أفقي نسبيا.
  5. الماء يغلي في 250 مل دورق (80٪ كاملة) باستخدام 10 "× 10"، 220 VAC موقد. تزج كتلة من النحاس الأصفر (1 سم × 1 سم المقطع العرضي) في الدورق حتى يتم التوصل إلى موازنة الحرارية مع الماء. موازنة الحرارية عادة ما يستغرق <5 دقائق وأشارت قبل إعادة الغليان من الماء في الكأس.
  6. قبل خلق حروق وإدارة المسكنات وقائية (الحقن تحت الجلد من 0.1mg / البوبرينورفين كغم) لتخفيف الألم.
  7. بعد عشر دقائق من المسكنات وقائية، اضغط بلطف كتلة النحاس ساخنة لمنطقة حلق على الجزء الخلفي من الفئران لمدة 7 الصورة للحث على الحروق.
    ملاحظة: لتجنب الإصابة الحرارية إلى العاملين، وارتداء قفازات مقاومة الحرارية عند تنفيذ الإجراء حرق.
  8. إدارة 0.5 مل من محلول ملحي معقم من خلال subcutaneouالصورة حقن لمنع الجفاف.
  9. خمس دقائق بعد تحريض من الإصابة الحرارية، وتطعيم 50 ميكرولتر من تعليق البكتيرية تحتوي على 5 × 10 6 CFU في برنامج تلفزيوني على الحروق الماوس باستخدام ماصة. عن طريق تحريك قطعة من القطن المعقمة في حركة متعرجة على الجلد، وتشويه أجزاء مأخوذة على الحروق لتوزيع الخلايا البكتيرية في المنطقة المحروقة بشكل متساو قدر الإمكان.
  10. مباشرة بعد التلقيح البكتيرى، نفذ التصوير تلألؤ بيولوجي للحروق المصابة، كما هو موضح في القسم 4.
  11. وضع الفئران على سرير العمليات الجراحية-تسخين المياه (37 ° C، ومنطقة الشفاء) حتى استعادت الفئران تماما من التخدير. بيت الفئران مع أكبر عدد ممكن من 5 في قفص في السلامة الأحيائية المستوى 2 غرفة الحيوان.
  12. إدارة المسكنات (حقن تحت الجلد من 0.1 ملغم / كغم البوبرينورفين) مرتين يوميا لمدة الأيام الثلاثة الأولى بعد حروق.

3. مضادات الميكروبات العلاج الضوء الأزرق لA. & #160؛ العدوى baumannii في الفئران

  1. بدء العلاج ABL في 24 ساعة بعد التلقيح البكتيرى.
  2. استخدام الصمام الثنائي الباعثة للضوء (LED) مع الانبعاثات ذروتها عند 415 نانومتر لABL التشعيع. جبل الصمام على امتصاص الحرارة لمنع التأثيرات الحرارية على المنطقة المعرضة للإشعاع في الفئران (18). إصلاح الصمام إلى قضيب الدعم الضوئية مع موصلات كليب للسماح للLED للتحرك صعودا وهبوطا.
  3. بدوره على السلطة / متر الطاقة واضغط على زر لتحديد الطول الموجي 415 نانومتر. إعادة السلطة متر / الطاقة لطرح الخلفية (الإضاءة المحيطة).
  4. وضع السلطة متر / الطاقة اليمين تحت LED. ارتداء نظارات زرقاء ضوء واقية. بدوره على ضوء LED وضبط المسافة بين فتحة الصمام (العدسة التي يتقاطع ضوء من LED) وجهاز استشعار الضوء (2 سم في القطر) للمتر الطاقة / الطاقة بحيث بقعة ضوء تغطي كامل مساحة مستشعر الضوء.
  5. بعناية ضبط سائق الصمام وتسجيل قراءة بويص / متر الطاقة. حساب الإشعاع وفقا لقراءة: الإشعاع = القراءة (W) / المساحة (سم 2). ضبط الإشعاع من الصمام إلى 100 ميغاواط / CM2 من ضبط سائق الصمام.
  6. إيقاف LED. قياس المسافة بين فتحة الصمام وجهاز استشعار الضوء للمتر الطاقة / الطاقة.
  7. تخدير الفئران مع حقنة داخل الصفاق من كوكتيل الكيتامين زيلازين (100 ملغ / كغ - 20 ملغ / كلغ). غياب المنعكس الجفني يدل على وجود عمق التخدير المناسب.
  8. عشوائيا تقسيم الفئران إلى المجموعة التي عولجت ABL (ن = 10) وجماعة غير المعالجة التحكم (ن = 10).
  9. لمجموعة تعامل ABL، تغطية أعين الفئران مع رقائق الألومنيوم لتجنب التعرض المفرط للضوء. ضع الماوس حروق مباشرة تحت LED، مع غطاء طبق بتري 35 ملم تحت البطن الماوس للحفاظ على ظهورهم في وضع أفقي.
  10. استبدال السلطة متر / الطاقة المذكورة في الخطوة 3.5 مع الماوس على بتري دي مربعش. ضبط ارتفاع الماوس إلى وضع يمكنها من حيث المسافة بين فتحة الصمام وسطح حرق الماوس تساوي ما بين فتحة الصمام ومستوى مستشعر الضوء من / متر الطاقة الكهربائية (كما هو مبين في الخطوة 3.5).
  11. أشرق الحروق المصابة في والإشعاع من 100 ميغاواط / سم 2. تقديم ABL في جرعة من 72 J / سم 2 حتى جرعة من مجموع 360 يتم التوصل إلى J / سم 2 (على سبيل المثال، 0، 72، 144، 216، 288 و 360 J / سم 2). بعد كل جرعة خفيفة، نفذ التصوير تلألؤ بيولوجي للفئران، كما نوقش في القسم 4.
  12. لمجموعة المراقبة غير المعالجة، نفذ التصوير تلألؤ بيولوجي من حروق الماوس، كما نوقش في القسم 4، وذلك باستخدام فترات زمنية نفس المستخدمة في المجموعة التي تلقت العلاج ABL.
  13. قبل الانتعاش من الفئران، ووضع الفئران على السرير الجراحية ساخنة المياه لمنع فقدان الحرارة وانخفاض حرارة الجسم. مراقبة النشاط ومنعكس الجفن من الفئران حتى الشفاء. بعد عشرالانتعاش (ه) من الفئران، وإيوائهم 2-3 في قفص.
  14. بعد العلاج ABL، نفذ التصوير تلألؤ بيولوجي، كما نوقش في القسم 4، يوميا لمدة 3 أيام الأولى ثم في أيام بديلة لمراقبة الزمني الحيوي عبء العدوى في الفئران.

4. ضوء بارد التصوير من التهابات في الفئران

  1. صورة الفئران باستخدام نظام التصوير الإضاءة المنخفضة يتضمن كاميرا كثفت إلى جانب المسؤول عن الجهاز، وحدة تحكم الكاميرا، وغرفة العينة، ومعالج الصور (19).
  2. تخدير الفئران مع حقنة داخل الصفاق من كوكتيل الكيتامين زيلازين (100 ملغ / كغ - 20 ملغ / كلغ). مسة خفيفة على جفني من الفئران مع مسحة القطن. غياب المنعكس الجفني يدل على وجود عمق التخدير المناسب.
  3. بدء برامج التصوير الحي. في لوحة التحكم التي تظهر، انقر فوق تهيئة. انتظر حتى لون مربع درجة الحرارة اللون الأخضر، مشيرا إلى أن درجة الحرارة في مرحلةفي غرفة عينة وصلت 37 درجة مئوية.
  4. وضع الفئران على المسرح (37 ° C) في غرفة عينة من نظام التصوير، مع الحروق المصابة مباشرة تحت الكاميرا.
    ملاحظة: تلألؤ بيولوجي من البكتيريا يمكن أن تقلل عندما تصبح الحروق الجافة. ولذلك، فمن المستحسن لترطيب الحروق الماوس مع برنامج تلفزيوني قبل التصوير.
  5. في لوحة التحكم، ووضع علامة الاختيار بجانب "التلألؤ." حدد "تعرض تلقائي" بحيث يكون الأمثل للوقت التعرض للتصوير بواسطة برنامج التصوير الحي على أساس شدة تلألؤ بيولوجي.
  6. حدد "C" من القائمة المنسدلة "مجال الرؤية". حدد الخيار "مسح منتصف النطاق" للسماح للبرنامج تحديد المسافة البؤرية. وضع علامة الاختيار بجانب تراكب.
  7. انقر على "الحصول على" لالتقاط صورة. في مربع "تحرير صورة تسمية"، انقر فوق "موافق"؛ وعلى "نافذة صورة" و "مكس لوحة" تظهر.
  8. تعيين المعلمات السيارات ROI لصناعة السيارات في الاختيار.
  9. قياس شدة تلألؤ بيولوجي وحدات التلألؤ النسبية (RLUs) وعرض تلألؤ بيولوجي في نطاق مموهة الألوان تتراوح بين الوردي (أشده) إلى اللون الأزرق (أقل كثافة) 19، 20.
  10. حساب نسبة بقاء البكتيريا في حروق الماوس متفاوتة في نقطة زمنية استنادا إلى تحليل تلألؤ بيولوجي كثافة. جزء بقاء البكتيريا في نقطة زمنية معينة = شدة تلألؤ بيولوجي قياسها في تلك المرحلة الزمنية / شدة تلألؤ بيولوجي قياس الحق قبل ABL تعرض 17.

5. القتل الرحيم من الفئران

  1. في النهاية التجربة هي كما يلي: (أ) قرار من العدوى كما يتضح من فقدان تلألؤ بيولوجي على النحو الذي يحدده التصوير. (ب) حدوث التهابات منهجية كما يدل على ذلك انتشار تلألؤ بيولوجي خارج حرق لا؛ (ج) فقدان ≥15٪ من وزن الجسم بالمقارنة مع الفئران في العمر كعينة العادية، أو المعاناة من الألم والضيق كما يدل على ذلك عدم استجابتها لتحفيز اليدوي، والجمود، وعدم القدرة على تناول الطعام أو الشراب. وخلال الدراسة، إذا واجهنا وضعا ما نحن فيه غير متأكد ما إذا كان الفأر قد وصلت بالكامل حالة الاحتضار، كما حددها تعريفنا، و / أو أننا غير متأكدين إذا نحن بحاجة إلى الموت ببطء، ونحن سوف نتصل الموظفين البيطري CCM لوضع خطة العمل؛ (د) وإلا سوف يتم التخلص من الفئران بعد 30 يوما من بدء الدراسة.
  2. انتقال الفئران في أقفاص مغلقة خصيصا للقتل الرحيم والموت ببطء الفئران عن طريق تقديم ثاني أكسيد الكربون (CO 2) الغاز المضغوط في أقفاص.
    1. فتح CO 2 خزان أو صمام منظم لبدء تدفق الغاز. تحقق من أن منظم يقرأ رطل الصحيح (جنيه لكل بوصة مربعة) بناء على تعليمات أرسلت بواسطة وحدة، وضبط إعادةgulator للرطل الصحيح حسب الحاجة، وعادة ما لا يزيد عن 5 رطل.
    2. ملء ببطء. معدل التدفق يجب أن تحل لا يزيد عن 30٪ من حجم الغرفة / قفص لكل دقيقة (للقفص الفأر العادي، ~ 2 لتر / دقيقة، لقفص الفئران، ~ 7.5 لتر / دقيقة).
    3. انتظر حوالي 3-5 دقائق للحيوان لوقف التحرك أو التنفس. عيون ينبغي أن تكون ثابتة والمتوسعة. إيقاف CO 2 خزان أو صمام منظم لوقف تدفق CO 2.
    4. تأكد من أن القلب لا ينبض عن طريق الشعور الصدر بين الإبهام والسبابة. ضمان عدم وجود أي رد فعل طرفة عن طريق لمس مقلة العين.
      1. إذا كان هناك ضربات القلب أو لا ارادي وميض، كرر عملية القتل الرحيم أو استخدام المقص لفتح تجويف الصدر لإنشاء استرواح الصدر (يجب أن يكون الحيوان غير استجابة لقرصة اصبع القدم قبل تنفيذ هذا الإجراء).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

سلالة A. baumannii التي استخدمناها هو عزل السريري MDR، كما ذكرت سابقا 12 و 17. وقدم سلالة بكتيرية إضاءة الحيوية التي ترنسفكأيشن من luxCDABE أوبرا 11. ويبين الشكل 1A للالمتعاقبة الصور التلألؤ البكتيرية من ماوس تمثيلي حرق المصابة مع 5 × 10 6 A. baumannii وتتعرض لالتعرض ABL واحد في 24 ساعة بعد التلقيح البكتيرى. A غر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ABL هو طريقة جديدة لعلاج الالتهابات. منذ آلية عملها هي مختلفة تماما عن تلك التي العلاج الكيميائي، وهو أكثر من العلاج الطبيعي. وكيل التي تتوسط تأثير مضاد للميكروبات باللون الأزرق أشعة الضوء (400-470 نانومتر). مع تطور المصابيح الزرقاء، حصلنا على الوصول إلى نهج المضادة للجراثيم فعال وبسيط قائم على ضوء للعدوى MDR.

في هذا البروتوكول، التي وصفناها تطوير نموذج الفأر من التهابات الحروق التي تسببها سلالة إضاءة الحيوية من ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل مركز تكامل الطب والتكنولوجيا المبتكرة (CIMIT) بموجب الاتفاقية التعاونية لنشاط الاستحواذ على البحوث الطبية للجيش الأمريكي (CIMIT رقم 14-1894 إلى TD) والمعاهد الوطنية للصحة (1R21AI109172 إلى TD). تم دعم YW من خلال منحة أبحاث الطلاب ASLMS (BS. S02.15). نحن ممتنون لطيبة حسن ، دكتوراه في مركز ويلمان لإرشادها المشترك ل YW.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
IVIS PerkinElmer Inc, Waltham, MAIVIS Lumina Series IIIقبل السريرية in vivo< em> تصوير
الصمام الثنائي الباعث للضوء LEDVieLight Inc, تورنتو, كندا 415نانومتر مصدر الضوء للإضاءة
عداد الطاقة / الطاقةThorlabs، Inc. ، نيوتن ، نيوجيرسيPM100Dكاشف إشعاع الضوء
الماوس   ؛مختبرات نهر تشارلز ، ويلمنجتون ، ماساتشوستسBALB / ج7-8 أسابيع العمر ، 17-19 جم الوزن
<م > Acinetobacter baumannii   ؛ < / em>مركز بروك الطبي للجيش ، فورت سام هيوستن ، تكساسعزل سريريسلالة مضيئة هندسيا
محاقن الأنسولينفيشر Scientific14-826-79BD Lo-Dose U-100 محاقن الأنسولين للحقن
كلوريد الصوديومفيشرScientific 7210160.9٪ كلوريد الصوديوم
فوسفات محلول ملحي مخزن ، 1x محلولفيشر ScientificBP24384  ؛مخزن مؤقت قياسي للفوسفات يستخدم في العديد من الإجراءات الجزيئية الحيوية
ضخ قلب الدماغفيشر ScientificB11059وسط ثقافة بكتيرية
فالكون 15 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطيةفيشر Scientific14-959-70Cلجهاز الطرد المركزي للتعليق البكتيري
مختبر الهزازات المدارية المحتضنة، Inc ، Atkinson ، NH & nbsp ؛Incu-Shaker Miniلزراعة حلقات تلقيح البكتيريا
فيشر Scientific22-363-605   ؛  لتلطيخ الجرثومة البكتيرية على سطح حروق الفئران
فيشر Scientific Redi-Tip Pipet Tips ، 1-200 & micro ؛ Lفيشر العلمي02-707-502نصائح ماصة
الحرارية العلمية  Sorvall Legend X1 الطرد المركزيفيشر Scientific75-004-220لفصل التعليق البكتيري
Brass BlockSmall Parts، Inc. ، ميامي ، فلوريدا10 مم × 10 مم   ؛لخلق الحروق في الفئران
قفازات Extreme Dragon PBI / Kevlar عالية الحرارةSuperior Glove Works Ltd ، Cheektowaga ، نيويوركPBI83514 قفازات مقاومة للحرارة
أطباق GreinerSigma-Aldrich Co. LLCP5112-740EA35 مم ومرات ؛ 10 مم
كورنينج الرقمية لوحة ساخنةكول بارمر للأدوات شركة ، LLCUX-84301-6510 "× 10" ، 220 فولت تيار متردد ، لغلي الماء   ؛
الفأر / الفئران رقيقة الخط المياه ساخنة السرير الجراحيEZ-211يمنع فقدان الحرارة وانخفاض حرارة الجسم أثناء الجراحة
مرهم بيطريS & # 38 ؛ K Pharma ، GmbHKerato Biciron 5٪ ،مرهم Augensalbe للعيون لمنع جفاف العين
شبكة توريد أنظمة

المراجع

  1. Gibran, N. S. Summary of the 2012 ABA Burn Quality Consensus conference. J Burn Care Res. 34 (4), 361-385 (2013).
  2. Sommer, R., Joachim, I., Wagner, S., Titz, A. New approaches to control infections: anti-biofilm strategies against gram-negative bacteria. Chimia (Aarau). 67 (4), 286-290 (2013).
  3. Peleg, A. Y., Seifert, H., Paterson, D. L. Acinetobacter baumannii: emergence of a successful pathogen. Clin Microbiol Rev. 21 (3), 538-582 (2008).
  4. Uppu, D. S. Amide side chain amphiphilic polymers disrupt surface established bacterial bio-films and protect mice from chronic Acinetobacter baumannii infection. Biomaterials. 74, 131-143 (2016).
  5. Schaber, J. A. Pseudomonas aeruginosa forms biofilms in acute infection independent of cell-to-cell signaling. Infect Immun. 75 (8), 3715-3721 (2007).
  6. Hoiby, N., Bjarnsholt, T., Givskov, M., Molin, S., Ciofu, O. Antibiotic resistance of bacterial biofilms. Int J Antimicrob Agents. 35 (4), 322-332 (2010).
  7. Lebeaux, D., Ghigo, J. M., Beloin, C. Biofilm-related infections: bridging the gap between clinical management and fundamental aspects of recalcitrance toward antibiotics. Microbiol Mol Biol Rev. 78 (3), 510-543 (2014).
  8. Akers, K. S. Biofilms and persistent wound infections in United States military trauma patients: a case-control analysis. BMC Infect Dis. 14, 190(2014).
  9. Burmolle, M., et al. Biofilms in chronic infections - a matter of opportunity - monospecies biofilms in multispecies infections. FEMS Immunol Med Microbiol. 59 (3), 324-336 (2010).
  10. National strategy on combating antibiotic-resistant bacteria. , https://www.whitehouse.gov/sites/default/files/docs/carb_national_strategy.pdf (2014).
  11. Dai, T. Photodynamic therapy for Acinetobacter baumannii burn infections in mice. Antimicrob Agents Chemother. 53 (9), 3929-3934 (2009).
  12. Zhang, Y. Antimicrobial blue light therapy for multidrug-resistant Acinetobacter baumannii infection in a mouse burn model: implications for prophylaxis and treatment of combat-related wound infections. J Infect Dis. 209 (12), 1963-1971 (2014).
  13. Dai, T., et al. Ultraviolet C light for Acinetobacter baumannii wound infections in mice: potential use for battlefield wound decontamination? J Trauma Acute Care Surg. 73 (3), 661-667 (2012).
  14. Dai, T. Blue light for infectious diseases: Propionibacterium acnes, Helicobacter pylori, and beyond? Drug Resist Updat. 15 (4), 223-236 (2012).
  15. Yin, R. Light based anti-infectives: ultraviolet C irradiation, photodynamic therapy, blue light, and beyond. Curr Opin Pharmacol. 13 (5), 731-762 (2013).
  16. Haisma, E. M. Inflammatory and antimicrobial responses to methicillin-resistant Staphylococcus aureus in an in vitro wound infection model. PLoS One. 8 (12), e82800(2013).
  17. Wang, Y. Antimicrobial Blue Light Inactivation of Gram-Negative Pathogens in Biofilms: In Vitro and In Vivo Studies. J Infect Dis. 213 (9), 1380-1387 (2016).
  18. Chen, D., Shen, Y., Huang, Z., Li, B., Xie, S. Light-Emitting Diode-Based Illumination System for In Vitro Photodynamic Therapy. Int J Photoenergy. 2012 (2), (2012).
  19. Demidova, T. N., Gad, F., Zahra, T., Francis, K. P., Hamblin, M. R. Monitoring photodynamic therapy of localized infections by bioluminescence imaging of genetically engineered bacteria. J Photochem Photobiol B. 81 (1), 15-25 (2005).
  20. Hamblin, M. R., Zahra, T., Contag, C. H., McManus, A. T., Hasan, T. Optical monitoring and treatment of potentially lethal wound infections in vivo. J Infect Dis. 187 (11), 1717-1725 (2003).
  21. Rowan, M. P. Burn wound healing and treatment: review and advancements. Critical Care. 19, 243(2015).
  22. Marx, D. E., Barillo, D. J. Silver in medicine: The basic science. Burns. 40 (Supplement 1), S9-S18 (2014).
  23. Heyneman, A., Hoeksema, H., Vandekerckhove, D., Pirayesh, A., Monstrey, S. The role of silver sulphadiazine in the conservative treatment of partial thickness burn wounds: A systematic review. Burns. 42 (7), 1377-1386 (2016).
  24. Roberts, J. A. Individualised antibiotic dosing for patients who are critically ill: challenges and potential solutions. Lancet Infect Dis. 14 (6), 498-509 (2014).
  25. Dai, T. Blue light eliminates community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus in infected mouse skin abrasions. Photomed Laser Surg. 31 (11), 531-538 (2013).
  26. Uppu, D. S. Amide side chain amphiphilic polymers disrupt surface established bacterial bio-films and protect mice from chronic Acinetobacter baumannii infection. Biomaterials. 74, 131-143 (2016).
  27. Donlan, R. M., Costerton, J. W. Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms. Clin Microbiol Rev. 15 (2), 167-193 (2002).
  28. Olsen, I. Biofilm-specific antibiotic tolerance and resistance. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. , (2015).
  29. Song, H. H. Phototoxic effect of blue light on the planktonic and biofilm state of anaerobic periodontal pathogens. J Periodontal Implant Sci. 43 (2), 72-78 (2013).
  30. Rosa, L. P., da Silva, F. C., Viana, M. S., Meira, G. A. In vitro effectiveness of 455-nm blue LED to reduce the load of Staphylococcus aureus and Candida albicans biofilms in compact bone tissue. Lasers Med Sci. 31 (1), 27-32 (2015).
  31. Guffey, J. S., Wilborn, J. In vitro bactericidal effects of 405-nm and 470-nm blue light. Photomed Laser Surg. 24 (6), 684-688 (2006).
  32. Enwemeka, C. S., Williams, D., Enwemeka, S. K., Hollosi, S., Yens, D. Blue 470-nm light kills methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in vitro. Photomed Laser Surg. 27 (2), 221-226 (2009).
  33. Bumah, V. V., Masson-Meyers, D. S., Cashin, S. E., Enwemeka, C. S. Wavelength and bacterial density influence the bactericidal effect of blue light on methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Photomed Laser Surg. 31 (11), 547-553 (2013).
  34. Maclean, M., MacGregor, S. J., Anderson, J. G., Woolsey, G. Inactivation of bacterial pathogens following exposure to light from a 405-nanometer light-emitting diode array. Appl Environ Microbiol. 75 (7), 1932-1937 (2009).
  35. Kim, M. Optical lens-microneedle array for percutaneous light delivery. Biomedical Optics Express. 7 (1o), 4220-4227 (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

نموذج فئرانبكتيريا مقاومة للأدوية المتعددةأنواع الأكسجين التفاعليةعملية كيميائية ضوئيةسلامة الخلايا المضيفة
في فيفو التحقيق من مضادات الميكروبات العلاج الضوء الأزرق للمقاومة للأدوية المتعددة baumannii الراكدة حرق العدوى عن طريق تلألؤ بيولوجي التصوير
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.