مقالة منهجية

تصوير لايف لدراسة أنيبيب عدم الاستقرار الديناميكي في سرطان الثدي المقاومة للالتاكسين

7.4K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/55027

⸱

فبراير 20, 2017

 ,  , 
1Department of Medical Genetics, Signal Transduction Research Group, Faculty of Medicine and Dentistry, University of Alberta

في هذه المقالة

ملخص

في هذه الورقة ، أبلغنا عن بروتوكول يصف طريقة في الجسم الحي لقياس عدم الاستقرار الديناميكي للأنابيب الدقيقة في خلايا سرطان الثدي المقاومة للدوسيتاكسيل (MCF-7TXT). في هذه الطريقة ، يتم استخدام نظام التصوير المجهري لإزالة الالتفاف للكشف عن التعبير عن توبولين GFP في الخلايا المستهدفة.

الملخص

تنتمي التاكسان مثل docetaxel إلى مجموعة من العوامل المستهدفة للأنابيب الدقيقة (MTAs) التي يتم الاعتماد عليها عادة لعلاج السرطان. ومع ذلك ، فإن مقاومة التاكسان في الخلايا السرطانية تقلل بشكل كبير من فعالية استخدام الأدوية على المدى الطويل. تشير الأدلة المتراكمة إلى أن الآليات الكامنة وراء مقاومة التاكسان تشمل كلا من الآليات العامة ، مثل تطوير مقاومة الأدوية المتعددة بسبب الإفراط في التعبير عن بروتينات تدفق الأدوية ، والآليات الخاصة بالتاكسان ، مثل تلك التي تنطوي على ديناميكيات الأنابيب الدقيقة.

نظرا لأن التاكسان يستهدف الأنابيب الدقيقة للخلايا ، فإن قياس عدم الاستقرار الديناميكي للأنابيب الدقيقة يعد خطوة مهمة في تحديد آليات مقاومة التاكسان ويوفر نظرة ثاقبة حول كيفية التغلب على هذه المقاومة. في التجربة ، تم استخدام طريقة في الجسم الحي لقياس عدم الاستقرار الديناميكي للأنابيب الدقيقة. تم التعبير عن α-tubulin الموسومة ب GFP ودمجها في الأنابيب الدقيقة في خلايا MCF-7 ، مما يسمح بتسجيل ديناميكيات الأنابيب الدقيقة عن طريق الفاصل الزمني باستخدام كاميرا حساسة. أظهرت النتائج أنه ، على عكس خلايا MCF-7CC الأبوية غير المقاومة ، فإن ديناميكيات الأنابيب الدقيقة لخلايا MCF-7TXT المقاومة للدوسيتاكسيل غير حساسة لعلاج الدوسيتاكسيل ، مما يسبب مقاومة التوقف الانقسامي الناجم عن الدوسيتاكسيل وموت الخلايا المبرمج. ستحدد هذه الورقة طريقة في الجسم الحي لقياس عدم الاستقرار الديناميكي للأنابيب الدقيقة.

المقدمة

السبب الرئيسي لوفيات سرطان الثدي هو ورم خبيث من خلال 1، 2. Taxanes، مثل DOCETAXEL وباكليتاكسيل، وتستخدم حاليا منصب نظم الخط الأول في علاج سرطان الثدي النقيلي 2، 3، 4، 5، 6. وهم جزء من مجموعة من العوامل التي تستهدف أنيبيب (الاتفاقات التجارية المتعددة الأطراف) التي تعطل ديناميات أنيبيب. ومع ذلك، واحدة من أكبر التحديات التي تواجه استخدام taxanes في العلاج العلاجية هو تطور مقاومة التاكسين في الخلايا السرطانية، الأمر الذي يؤدي إلى تكرار المرض 7. حسابات مقاومة العقاقير لأكثر من 90٪ من مجموع وفيات بين المرضى الذين يعانون من سرطان الثدي النقيلي 7.

تتشكل الأنابيب الدقيقة عن طريق بلمرة heterodimers ألفا و-β تويولينالطبقة = "XREF"> 8 و 9. تنظيم دقيق للديناميات أنيبيب مهم للعديد من الوظائف الخلوية، بما في ذلك الاستقطاب الخلايا، تقدم دورة الخلية والنقل داخل الخلايا، وإشارات الخلية. سوف ديسريغولاتيون من الأنابيب الدقيقة وديناميتها تعطيل وظائف الخلايا ويؤدي إلى موت الخلايا 10 و 11. اعتمادا على الكيفية التي تسبب هذه التقلبات، والمخدرات MTA يمكن أن تصنف على أنها إما أنيبيب استقرار وكلاء (أي taxanes) أو وكلاء أنيبيب-destabalizing (أي قلويدات فينكا أو الموقع الكولشيسين وكلاء ملزمة) 20. وعلى الرغم من آثار عكسية على كتلة أنيبيب، في جرعة كافية، يمكن أن كلتا الفئتين تقتل الخلايا السرطانية عن طريق تأثيرها على ديناميات أنيبيب 21.

Taxanes تعمل في المقام الأول عن طريق تثبيت المغزل أنيبيب 12، مما أدى إلىاختلال الكروموسومات. تفعيل دائم لاحق من حاجز الجمعية المغزل (SAC) يعتقل خلية في الانقسام. ثم يسبب اعتقال الإنقسامية لفترات طويلة موت الخلايا المبرمج 13 و 14. التاكسين تتفاعل مع الأنابيب الدقيقة من خلال موقع التاكسين ملزم على β تويولين 8 و 15، التي هي موجودة فقط في تويولين تجميعها 16.

وقد تم اقتراح آليات متعددة للمقاومة التاكسين 9، 17. وتشمل هذه الآليات على حد سواء المقاومة للأدوية المتعددة العامة بسبب overexpression من البروتينات هروب رأس المال من المخدرات والتاكسين محددة المقاومة 5، 9، 18، 19. على سبيل المثال، الخلايا السرطانية مقاومة للالتاكسين قد غيرت التعبير وظيفة الحوض β معينفي Ulin isotypes 5، 9، 19، 20، 21، 22، 23. باستخدام الأسلوب في الجسم الحي لقياس أنيبيب عدم الاستقرار الديناميكي، وتبين لنا أن، بالمقارنة مع غير مقاومة لل، الوالدين قدم مكعبة-7 خلايا CC 17، وديناميات أنيبيب من خلايا MCF-7 TXT مقاومة للDOCETAXEL لا تعير اهتماما للعلاج DOCETAXEL.

من أجل فهم أفضل وظيفة من الاتفاقات التجارية المتعددة الأطراف والآلية الدقيقة لالتاكسين المقاومة في الخلايا السرطانية، لا بد من قياس ديناميات أنيبيب. هنا، ونحن التقرير وسيلة في الجسم الحي للقيام بذلك. باستخدام التصوير الحي في تركيبة مع التعبير عن تويولين الموسومة GFP في الخلايا، يمكننا قياس ديناميات أنيبيب من قدم مكعبة-7 TXT وMCF-7 خلايا CC مع ووايthout العلاج DOCETAXEL. فإن النتائج يمكن أن تساعدنا في تصميم أدوية أكثر فعالية التي يمكن التغلب على مقاومة التاكسين.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. إعداد خلايا للتصوير لايف

  1. زراعة الخلايا والبذر
    1. استخدام خلايا MCF-7 سرطان الثدي تم اختيارها لمقاومة DOCETAXEL (قدم مكعبة-7 TXT) وغير مقاومة للخلية خط الوالدين من (قدم مكعبة-7 CC). وقد وصفت عملية اختيار مفصلة وتوصيف هذه السطور الخلية المحددة سابقا 24.
    2. تنمو جميع الخلايا في أطباق ثقافة 10 سم عند 37 درجة مئوية في المتوسط ​​تتكون من 90٪ من متوسط ​​المعدل النسر Dulbecco وفي (DMEM) و 10٪ من مصل بقري جنيني (FBS) وتستكمل مع الأحماض الأمينية غير الأساسية. الحفاظ على المتوسط في 5٪ CO 2 الغلاف الجوي. الحفاظ على خلايا MCF-7 TXT في 5 نانومتر DOCETAXEL.
    3. خلايا البذور coverslips على التصوير الحي. تعقيم 24 ملم coverslips الزجاج المطلي بولي-L-يسين قبل الشطف لهم 70٪ من الكحول ومن ثم تعريضها للأشعة فوق البنفسجية بين عشية وضحاها. ضع لل coverslips إلى لوحة الثقافة 6 جيدا من 35 مم. ررالآس ساترة واحد في كل بئر.
    4. إزالة المتوسطة من الطبق ثقافة 10 سم، وغسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني. إضافة 0.5 مل من التربسين-EDTA إلى الطبق لفصل الخلايا من الطبق. إضافة 5 مل من مستنبت على طبق لتحييد التربسين التالية مفرزة من الخلايا.
    5. عدد الخلايا مع عدادة الكريات لتحديد عدد من الخلايا لكل وحدة حجم.
    6. إضافة ما يقرب من 10 5 خلايا لكل الجيد اعتمادا على عدد الخلايا لكل وحدة حجم. بعد الهز برفق، ووضع لوحة العودة إلى الحاضنة للسماح للخلايا إرفاق لل coverslips.
  2. التعبير عن GFP الموسومة ألفا تويولين
    1. لفحص ديناميات أنيبيب، تنبيغ الخلايا مع GFP الموسومة ألفا تويولين مع سيطرة تنبيغ GFP التجاري (على سبيل المثال، BacMam) وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة.
    2. ثقافة الخلايا في البئر لمدة 36 ساعة في حاضنة 37 درجة مئوية الثقافة خلية للسماح كومأمراض لغة التكلم التصاق و 60٪ التقاء.
    3. حساب حجم مناسب من GFP الموسومة α تويولين إضافة إلى كل بئر، وفقا للمعادلة التالية:
      figure-protocol-1
      عدد الخلايا هو العدد الإجمالي المقدر للخلايا في البئر في وقت الوسم وقدرة شرائية المطلوب هو عدد الجزيئات في خلية.
      ملاحظة: بذر خلايا MCF-7 يجب أن تضاعف عدد خلايا من 5-2 أكتوبر × 10 5 مع قدرة شرائية المرجوة من 20، وحجم اللازمة لكل ساترة بالتالي هو 40 ميكرولتر. للخلايا المختلفة، وحجم تحسب على أساس الصيغة الموضحة أعلاه قد لا تكون الأفضل. ينبغي تعديل حجم المحدد وفقا لمستوى التعبير الفعلي للGFP تويولين.
    4. خلط الموسومة GFP-α تويولين عدة مرات من قبل انعكاس لضمان حل متجانسة. لا الدوامة.
      ملاحظة: للحصول على السيطرة، وفارغة (مراقبة) كاشف يفتقر إلى أي الوراثية الثديياتالعناصر، ويمكن استخدامها للمساعدة في تحديد الآثار بوساطة الفيروسة العصوية المحتملة ومضان الخلفية. يمكن أيضا استخدام عنصر تحكم التنبيغ غير المستهدفة GFP، والتي سوف تضيء الخلية بأكملها.
    5. استبدال مستنبت مع المتوسط ​​الطازجة. إضافة 2 مل من هذه الوسيلة الجديدة و 40 ميكرولتر من GFP الموسومة α تويولين إلى كل بئر.
    6. يهز لوحة بلطف للسماح للخلط كاملة من GFP الموسومة ألفا تويولين مع مستنبت. العودة إلى لوحة حاضنة الثقافة واحتضان لمدة 24 ساعة للسماح للتعبير عن GFP تويولين.
  3. خلايا تعامل مع DOCETAXEL
    ملاحظة: هذه التجربة لاختبار تأثير DOCETAXEL على أنيبيب عدم الاستقرار الديناميكي. وبالتالي، يتم التعامل مع الخلايا مع التركيز المطلوب من DOCETAXEL.
    1. إعداد المتوسطة يتكون من 90٪ من DMEM و 10٪ من FBS وتستكمل مع الأحماض الأمينية غير الأساسية. استخدام DMEM بدون أحمر الفينول لأن الفينول الأحمر قد تتداخل مع fluorescenم من GFP تويولين. إضافة تركيز المطلوب من DOCETAXEL (تتراوح بين 10 نانومتر إلى 10 ميكرومتر). محلول المخزون من DOCETAXEL هو 10 ملم في سلفوكسيد ثنائي ميثيل ([دمس]).
    2. قبل تدفئة المتوسطة التي تحتوي على DOCETAXEL إلى 37 درجة مئوية في نسيج الثقافة الحاضنة.
    3. استبدال مستنبت طبيعي مع المتوسطة التي تحتوي على DOCETAXEL واحتضان لمدة 30 دقيقة في نسيج الثقافة الحاضنة. ينبغي أن يكون هناك على الأقل 3 coverslips لكل بئر لكل تركيز DOCETAXEL.

2. تصوير لايف لدراسة أنيبيب عدم الاستقرار الديناميكي

  1. إعداد نظام
    1. إجراء تجارب في غرفة الحفاظ على 37 درجة مئوية و 5٪ CO 2. الحصول على صور مضان من قبل الفاصل الزمني مع نظام المجهري مجهزة 60X، 1.42 NA النفط عدسة الهدف على مجهر مضان مقلوب مع وجود كاميرا CCD.
    2. إعداد خلايا للتصوير الحية. قبل دافئ كل من صاحب العينة والمتوسط ​​إلى 37 درجة مئوية. اختيار ساترة لدراسة. جبل ساترة الفائدة على صاحب العينة واحتضان مع 1 مل من متوسطة تحتوي على DOCETAXEL أعدت في الخطوة 1.3.1.
  2. تصوير مباشر من أنيبيب عدم الاستقرار الديناميكي
    1. تحديد الخلايا التي سيتم استخدامها للتصوير. يجب أن تكون مسطحة، لديها كثافة مضان عالية من أعرب عن GFP تويولين، ولها هياكل أنيبيب واضحة.
    2. اختيار خلية واحدة من مجموعة من الخلايا التي تم تحديدها من الخطوة 2.2.1 لفحص أولا. التركيز على المنطقة الحدودية للخلية التي تم تحديدها. إعداد برنامج لمدة التعرض وتيرة الحصول على الصور. مع مرور الوقت تعرض عادة 0.5 ثانية، سيتم الحصول على الصور كل اثنين من ليالي.
    3. سماح 20 دقيقة إضافية للخطوات من 1.33 إلى 2.2.3. وهكذا، بالضبط 50 دقيقة بعد إضافة DOCETAXEL، كما هو موضح في الخطوة 1.3.3، بدء التصوير (هذا هو لتوحيد).
    4. تسجيل أنيبيب دynamics لمدة 2 دقيقة، مع صورة كل 2 ثانية. في المجموع، والحصول على 60 صورة للخلية التي تم تحديدها.
    5. انتقال إلى الخلية المحددة التالية وكرر الخطوات من 2.2.2 إلى 2.2.4. كرر الإجراء حتى يتم تصويرها 5 خلايا. لا بد من القيام بذلك قبل وقت يصل 70 دقيقة بعد إضافة DOCETAXEL، كما هو موضح في الخطوة 1.3.3.
    6. لكل حالة علاج، كرر الخطوات من 2.2.1 إلى 2.2.5 لمدة 3 coverslips مختلفة. في المجموع، صورة 15 الخلايا، وهو ما يكفي من البيانات لقياس أنيبيب عدم الاستقرار الديناميكي.

3. معالجة الصور وتحليل البيانات

  1. Deconvolution من الصور
    1. Deconvolve الصور المكتسبة لتحقيق جودة عالية. فتح برنامج deconvolution مزودة بنظام المجهر.
    2. انقر على "عملية" وحدد "Deconvolve." اسحب ملف صورة إلى إطار "الإدخال" ثم انقر على "دو" سيتم deconvolved ملف الصورة، وسيتم حفظ ملف deconvolved كملف جديد تلقائيا.
  2. جيل من أشرطة الفيديو
    1. انقر فوق ملف الصورة deconvolved لفتح مع برنامج التجهيز.
    2. انقر فوق "ملف" واختر "حفظ باسم الفيلم." حدد "شكل الفيلم" بأنه "AV" و "أسلوب الرسوم المتحركة" كما "إلى الأمام". تعيين "جودة ضغط" إلى "100٪" و "معدل الإطار" إلى "5 / ثانية."
    3. ضع علامة في المربع من "تحريك عبر الزمن" وانقر على "القيام بذلك." سيتم إنشاء الفيديو.
  3. قياس تقصير أنيبيب ومعدل النمو
    1. التعرف على الأنابيب الدقيقة التي سيتم استخدامها لقياس. لكل خلية، وفقط عدد قليل من الأنابيب الدقيقة تكون قادرة على تقصير أو النمو جاء بوضوح وبشكل كامل.
    2. فحص كل إطار من الفيديو لتحديد الإطار الذي يدل على طول الانطلاق من أنيبيب لالثاني الإطار مع أنيبيب أكثر تمديد أو تقصير. قياس التغير في الطول بين اثنين من الأنابيب الدقيقة والوقت المنقضي بين إطارين.
    3. حساب معدل النمو أو تقصير بقسمة التغير في طول من الوقت (الوحدة ميكرون / ثانية). لكل حالة علاج، اتبع لا يقل عن 10 الخلايا وقياس لا يقل عن 20 الأنابيب الدقيقة.
    4. حساب متوسط ​​والخطأ المعياري لكل حالة العلاج. تحليل الفرق الإحصائي بين الشروط باستخدام اختبار الطلاب. عن البيانات في جدول و / أو في الرسم البياني.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

باستخدام بروتوكول المقدمة هنا، قمنا بدراسة آثار DOCETAXEL على ديناميات أنيبيب من المعتاد (قدم مكعبة-7 CC) ومقاومة للDOCETAXEL (قدم مكعبة-7 TXT) خلايا سرطان الثدي. مجموعتين من الصور تظهر آثار DOCETAXEL (0.5 ميكرومتر) على النمو أنيبيب وتقصير في قدم مكعبة-7 CC وMCF-7 TXT الخلايا (الشكل 1A).

...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هناك طريقتان الرئيسية لقياس أنيبيب عدم الاستقرار الديناميكي: في التجارب المختبرية والحية. في هذه الطريقة في المختبر، يتم استخدام تويولين تنقيته لقياس أنيبيب عدم الاستقرار الديناميكي مع مرور الزمن المجهر التفاضلية التدخل النقيض محسنة الكمبيوتر. في طريقة في الجسم الحي، microinjected تويولين الفلورسنت، أو التعبير GFP تويولين، وهو مدرج في الأنابيب الدقيقة. ثم يتم تسجيل ديناميات (النمو وتقصير) من الأنابيب الدقيقة من الوقت الفاصل باستخدام كام...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

هذا البحث مدعوم بتمويل من CBCF (إلى ZW).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)Sigma-AldrichD5796
الأحماض الأمينية غير الأساسيةLife Technologies ، Invitrogen11140-050
FBSGibco ، Invitrogen12483
Anti-Anti (100x)Life Technologies ، Invitrogen15240-062
docetaxelSigma-Aldrich01885-5 ملغ-F
DMEM الفينول الخالي من الأحمرGibco ، كاشف Invitrogen21063
CellLight * BacMam 2.0 * GFP-tubulinThermoFisher ScientificC10613كاشف رئيسي للتعبير عن توبولين GFP في الخلايا
كاشف CellLight * BacMam 2.0 * GFPThermoFisher ScientificB10383التحكم
ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) سيجماألدريتش + B9: AA9472301لتفكيك decetaxel
زجاج 22 مم CoveslipFisher Scientifics12-545-101
لوحة ثقافة 6 آبارGreiner Bio-One International6 Well Celi Culture Plate
DeltaVision أنظمة التصوير المجهريGE Healthهذا النظام مجهز بمحطة طقس للتحكم في درجة الحرارة وثاني أكسيد الكربون. كما أنها مجهزة ببرنامج Worx لفك الالتواء والتحكم في الفاصل الزمني.
Trypsin-EDTA (0.25٪) ،ThermoFisher Scientific25200056
الخط الساطع ، Hausser ScientificHausser Scientific ، تم توزيعها بواسطة VWRرقم المورد: 1492 رقم VWR: 15170-172
في مجموعة مقياس الدم ذات

المراجع

  1. Kamangar, F., Dores, G. M., Anderson, W. F. Patterns of cancer incidence, mortality, and prevalence across five continents: defining priorities to reduce cancer disparities in different geographic regions of the world. J Clin Oncol. 24 (14), 2137-2150 (2006).
  2. Yardley, D. A. Drug resistance and the role of combination chemotherapy in improving patient outcomes. Int J Breast Cancer. 2013, 137414(2013).
  3. Jassem, J., et al. Doxorubicin and paclitaxel versus fluorouracil, doxorubicin, and cyclophosphamide as first-line therapy for women with metastatic breast cancer: final results of a randomized phase III multicenter trial. J Clin Oncol. 19 (6), 1707-1715 (2001).
  4. Nabholtz, J. M., et al. Docetaxel and doxorubicin compared with doxorubicin and cyclophosphamide as first-line chemotherapy for metastatic breast cancer: results of a randomized, multicenter, phase III trial. J Clin Oncol. 21 (6), 968-975 (2003).
  5. Zelnak, A. Overcoming taxane and anthracycline resistance. Breast J. 16 (3), 309-312 (2010).
  6. Rivera, E. Implications of anthracycline-resistant and taxane-resistant metastatic breast cancer and new therapeutic options. Breast J. 16 (3), 252-263 (2010).
  7. Longley, D. B., Johnston, P. G. Molecular mechanisms of drug resistance. J Pathol. 205 (2), 275-292 (2005).
  8. Downing, K. H., Nogales, E. Crystallographic structure of tubulin: implications for dynamics and drug binding. Cell Struct.Funct. 24 (5), 269-275 (1999).
  9. McGrogan, B. T., Gilmartin, B., Carney, D. N., McCann, A. Taxanes, microtubules and chemoresistant breast cancer. Biochim.Biophys.Acta. 1785 (2), 96-132 (2008).
  10. Kamath, K., Oroudjev, E., Jordan, M. A. Determination of microtubule dynamic instability in living cells. Methods Cell Biol. 97, 1-14 (2010).
  11. Dumontet, C., Jordan, M. A. Microtubule-binding agents: a dynamic field of cancer therapeutics. Nat Rev Drug Discov. 9 (10), 790-803 (2010).
  12. Jordan, M. A., Wilson, L. Microtubules as a target for anticancer drugs. Nat.Rev.Cancer. 4 (4), 253-265 (2004).
  13. Gascoigne, K. E., Taylor, S. S. How do anti-mitotic drugs kill cancer cells? J.Cell Sci. 122 (15), 2579-2585 (2009).
  14. Kavallaris, M. Microtubules and resistance to tubulin-binding agents. Nat.Rev.Cancer. 10 (3), 194-204 (2010).
  15. Diaz, J. F., Valpuesta, J. M., Chacon, P., Diakun, G., Andreu, J. M. Changes in microtubule protofilament number induced by Taxol binding to an easily accessible site. Internal microtubule dynamics. J.Biol.Chem. 273 (50), 33803-33810 (1998).
  16. Abal, M., Andreu, J. M., Barasoain, I. Taxanes: microtubule and centrosome targets, and cell cycle dependent mechanisms of action. Curr Cancer Drug Targets. 3 (3), 193-203 (2003).
  17. Wang, H., et al. Multiple mechanisms underlying acquired resistance to taxanes in selected docetaxel-resistant MCF-7 breast cancer cells. BMC Cancer. 14 (37), (2014).
  18. Lal, S., Mahajan, A., Chen, W. N., Chowbay, B. Pharmacogenetics of target genes across doxorubicin disposition pathway: a review. Curr. Drug Metab. 11 (1), 115-128 (2010).
  19. Murray, S., Briasoulis, E., Linardou, H., Bafaloukos, D., Papadimitriou, C. Taxane resistance in breast cancer: mechanisms, predictive biomarkers and circumvention strategies. Cancer Treat.Rev. 38 (7), 890-903 (2012).
  20. Kamath, K., Wilson, L., Cabral, F., Jordan, M. A. BetaIII-tubulin induces paclitaxel resistance in association with reduced effects on microtubule dynamic instability. J.Biol.Chem. 280 (13), 12902-12907 (2005).
  21. Banerjee, A. Increased levels of tyrosinated alpha-, beta(III)-, and beta(IV)-tubulin isotypes in paclitaxel-resistant MCF-7 breast cancer cells. Biochem.Biophys.Res.Commun. 293 (1), 598-601 (2002).
  22. Wiesen, K. M., Xia, S., Yang, C. P., Horwitz, S. B. Wild-type class I beta-tubulin sensitizes Taxol-resistant breast adenocarcinoma cells harboring a beta-tubulin mutation. Cancer Lett. 257 (2), 227-235 (2007).
  23. Iseri, O. D., Kars, M. D., Arpaci, F., Gunduz, U. Gene expression analysis of drug-resistant MCF-7 cells: implications for relation to extracellular matrix proteins. Cancer Chemother.Pharmacol. 65 (3), 447-455 (2010).
  24. Hembruff, S. L., et al. Role of drug transporters and drug accumulation in the temporal acquisition of drug resistance. BMC.Cancer. 8, 318(2008).
  25. Yenjerla, M., Lopus, M., Wilson, L. Analysis of dynamic instability of steady-state microtubules in vitro by video-enhanced differential interference contrast microscopy with an appendix by Emin Oroudjev. Methods Cell Biol. 95, 189-206 (2010).
  26. Sammak, P. J., Gorbsky, G. J., Borisy, G. G. Microtubule dynamics in vivo: a test of mechanisms of turnover. J Cell Biol. 104 (3), 395-405 (1987).
  27. Walker, R. A., et al. Dynamic instability of individual microtubules analyzed by video light microscopy: rate constants and transition frequencies. J Cell Biol. 107 (4), 1437-1448 (1988).
  28. Desai, A., Mitchison, T. J. Microtubule polymerization dynamics. Annu Rev Cell Dev Biol. 13, 83-117 (1997).
  29. Walczak, C. E. Microtubule dynamics and tubulin interacting proteins. Curr Opin Cell Biol. 12 (1), 52-56 (2000).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

GFP

مقالات ذات صلة