يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إنشاء خلايا التكاثري رباعي الصيغة الصبغية من Nontransformed الخلايا الليفية الإنسان

6.9K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/55028

⸱

يناير 8, 2017

 , 
1Division of Morphological Science, Biomedical Research Center, Saitama Medical University, 2Department of Pathology, International Medical Center, Saitama Medical University

في هذه المقالة

ملخص

على الرغم من أن الخلايا متعددة الصبغيات التكاثرية ضرورية لتحليل عدم استقرار الكروموسومات للخلايا متعددة الصبغيات ، إلا أن إنشاء مثل هذه الخلايا من خلايا بشرية غير متحولة ليس بالأمر السهل. يصف هذا التقرير إجراءات بسيطة نسبيا لإنشاء خلايا رباعية الصيغة الصبغية تكاثرية خالية من مجموعات ثنائية الصبغيات من الخلايا الليفية البشرية الطبيعية.

الملخص

غالبا ما لوحظت < p class = 'jove_content'> الخلايا متعددة الصغاميات (معظمها رباعي الصبغيات) في آفات ما قبل الأورام في الأنسجة البشرية ويعتبر عدم استقرار الكروموسومات مسؤولا عن التسرطن في هذه الأنسجة. على الرغم من أن الخلايا متعددة الصبغيات التكاثرية ضرورية لتحليل عدم استقرار الكروموسومات للخلايا متعددة الصبغيات ، إلا أن إنشاء مثل هذه الخلايا من خلايا بشرية غير متحولة يمثل تحديا إلى حد ما. عادة ما يؤدي تحريض رباعي الصبغيات بواسطة العوامل الكيميائية إلى مزيج من المجموعات ثنائية الصبغيات ورباعية الصبغيات ، واستخدمت معظم الدراسات فرز الخلايا المنشطة بالفلورة أو الاستنساخ عن طريق الحد من التخفيف لفصل الخلايا رباعية الصبغيات عن الخلايا ثنائية الصبغيات. ومع ذلك ، فإن هذه الإجراءات تستغرق وقتا طويلا وشاقة. يصف هذا التقرير بروتوكولا بسيطا نسبيا للحث على الخلايا التكاثرية رباعية الصبغيات من الخلايا الليفية البشرية الطبيعية مع الحد الأدنى من التلوث بالخلايا ثنائية الصبغيات. باختصار ، يتكون البروتوكول من الخطوات التالية: إيقاف الخلايا في الانقسام عن طريق الديميكولسين (DC) ، وجمع الخلايا الانقسامية بعد التخلص منها ، واحتضان الخلايا المجمعة بالتيار المستمر لمدة 3 أيام إضافية ، واحتضان الخلايا في وسط خال من المخدرات (يستأنفون التكاثر كخلايا رباعية الصبغيات في غضون عدة أيام). اعتمادا على نوع الخلية ، قد يتم حذف مجموعة الخلايا الانقسامية عن طريق التخلص منها. يوفر هذا البروتوكول طريقة بسيطة ومجدية لإنشاء خلايا رباعية الصيغة الصبغية التكاثرية من الخلايا الليفية البشرية الطبيعية. يمكن أن تكون الخلايا رباعية الصبغيات التي تم إنشاؤها بهذه الطريقة نموذجا مفيدا لدراسة عدم استقرار الكروموسوم وإمكانات الأورام للخلايا البشرية متعددة الصبغيات.

المقدمة

وقد لوحظ تعدد الصيغ الصبغية ليس فقط في الأنسجة المتخصصة من أنواع الثدييات ولكن أيضا في مجموعة متنوعة من الحالات المرضية، مثل السرطان والأمراض التنكسية. وغالبا ما يلاحظ المتعددة الصبغيات (ومعظمهم من رباعي الصيغة الصبغية) الخلايا في preneoplastic الآفات من الأنسجة البشرية، مثل المريء 1،2 أو الحرشفية الآفات باريت داخل الظهاري لعنق الرحم 3،4، وكان ينظر إلى أن يكون مصدرا للخلايا مختل الصيغة الصبغية الخبيثة في تلك الأنسجة 5 (6). على الرغم من أن يقترح تحويل رباعي الصيغة الصبغية إلى خلايا مختل الصيغة الصبغية يمكن أن يكون حدثا بالغ الأهمية في المراحل المبكرة من تكون الأورام، والآليات التي تشارك في هذه العملية ليست مفهومة تماما. ويرجع هذا جزئيا لا يوجد نموذج في المختبر كانت متاحة حيث nontransformed الخلايا البشرية المتعددة الصبغيات أن ينتشر.

قد يسببها بعض الباحثين الرباعي في الخلايا الظهارية الإنسان nontransformed من خلال توليد خلايا binucleated من يلعنهibiting السيتوبلازمي 7-9. في هذه الطريقة، ومع ذلك، يجب القضاء على الخلايا مضاعفا غير الضرورية التي كتبها مضان تنشيط الخلايا الفرز (FACS) 7،8 أو الاستنساخ عن طريق الحد من تخفيف 9. لأن هذه الإجراءات هي شاقة وليس من السهل القيام بها، ابسط الطرق لإقامة المرغوب فيها خلايا رباعي الصيغة الصبغية nontransformed للبحث في هذا المجال.

في هذا التقرير، وصفنا بروتوكول لإنشاء خلايا رباعي الصيغة الصبغية التكاثري من الخلايا الليفية الإنسان العادي أو الخلايا الليفية الإنسان، خلدت التيلوميراز بإجراءات بسيطة نسبيا. إجراءات استخدام المغزل demecolcine السم (DC) إلى اعتقال خلايا مضاعفا في الانقسام، والخلايا الإنقسامية التي جمعتها تنفض تعامل مع مزيد من العاصمة. الخلايا الإنقسامية مضاعفا تعامل مع العاصمة لفترة طويلة من الوقت تحول إلى خلايا G1 رباعي الصيغة الصبغية، وهذه الخلايا تتكاثر الخلايا كما رباعي الصيغة الصبغية بعد اعتقال النمو لعدة أيام بعد إزالة المخدرات. يوفر هذا البروتوكولوسيلة فعالة لخلق نموذجا مفيدا لدراسة العلاقة بين عدم الاستقرار كروموسوم وإمكانات أنكجنيك من الخلايا البشرية المتعددة الصبغيات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. خلية ثقافة

  1. الحصول على خلايا للحث على الرباعي. ولم يتم حتى الآن التأكيد على أن هذه التقنية يمكن تطبيقها على خطوط الخلايا الليفية الإنسان TIG-1، BJ، معدل وفيات الرضع 90 وخلد التيلوميراز-TIG-1 (TIG-HT).
  2. زراعة خلايا في الدنيا والمتوسطة أساسيا مع تعديل α أو أي وسيلة زراعة الخلايا الأخرى مناسبة لنوع الخلية المراد دراستها تستكمل مع 10٪ (ت / ت) للحرارة المعطل مصل بقري جنيني (FBS) التي يحتضنها في 5٪ (ت / ت) CO 2 الغلاف الجوي عند 37 درجة مئوية. خلايا مرور كل 3 أو 4 أيام لا تتجاوز كثافة subconfluent.
    ملاحظة: سكان مستوى مضاعفة (PDL) يجب حساب كل الوقت في الركض لتقييم نمو الخلايا وعمر الخلية. ويمكن حساب PDL من عدد الخلايا المصنفة في طبق (N1) وعدد الخلايا التي تحصد في الركض المقبل (N2) باستخدام الصيغة التالية (X هو PDL الأولي). PDL = X + (تسجيل N1 - تسجيل N2) / تسجيل 2

2. الحث وتهتblishment من خلايا رباعي الصيغة الصبغية من مضاعفا الخلايا الليفية

  1. حمل الرباعي دون هزة حالا.
    ملاحظة: بعض سلالات الخلايا (مثل TIG-1) يمكن أن تصبح رباعي الصيغة الصبغية تماما تقريبا عن طريق العلاج المستمر مع demecolcine (DC) على النحو التالي.
    1. خلايا مرور إلى واحد أو اثنين من 100 أطباق ملم في اليوم قبل العلاج للحث على الرباعي. عادة، وإعداد 5 × 05-1 أكتوبر × 10 6 خلايا في طبق لتحريض الخلايا رباعي الصيغة الصبغية.
    2. علاج الخلايا تنمو باطراد مع المتوسط ​​تحتوي على 0.1 ميكروغرام / مل العاصمة لمدة 4 أيام.
    3. استبدال DC-تحتوي على المتوسط مع المتوسط خال من المخدرات واحتضان الخلايا في 5٪ (ت / ت) CO 2 الغلاف الجوي عند 37 درجة مئوية. عادة تستأنف تكاثر الخلايا في غضون أسبوع 1.
  2. حمل الرباعي مع هزة حالا.
    ملاحظة: أصبحت معظم الخلايا خليط من السكان مضاعفا ورباعي الصيغة الصبغية نتيجة للعلاج بسيط مع العاصمة المذكورة أعلاه (2.1). لذلك، بعض التعديلات من عrocedure للقضاء ضرورية لسكان مضاعفا على النحو التالي (الشكل 1).
    1. خلايا مرور إلى عدة T75 قارورة في اليوم قبل العلاج للحث على الرباعي. عادة، وإعداد لا يقل عن 5 × 10 6 خلايا (1 × 10 6 خلايا في قارورة) لتحريض الخلايا رباعي الصيغة الصبغية.
    2. علاج الخلايا تنمو باطراد مع المتوسط ​​تحتوي على 0.1 ميكروغرام / مل العاصمة ل16-18 ساعة للقبض على الخلايا في الانقسام. الوقت اللازم لاعتقال الخلايا في الانقسام قد تعتمد على الخلايا المستهدفة وينبغي أن تحدد من خلال التجارب الأولية للحصول على العديد من الخلايا الإنقسامية وقت ممكن. على سبيل المثال، ينبغي أن يعامل نمو الخلايا أبطأ مع العاصمة لوقت أطول من خلايا تنمو بشكل أسرع.
      ملاحظة: إذا كان يتم التعامل مع الخلايا لفترة طويلة جدا في هذه الخطوة، لأنها قد تخضع انزلاق الإنقسامية والتمسك سطح الطبق، مما يجعل من المستحيل جمع الخلايا الإنقسامية عن اهتزاز حالا في الخطوة التالية.
    3. جمع الخلايا الإنقسامية القبض على العاصمة من قبل طريقة للاهتزاز قبالة، في ملحقالتراث الثقافي غير المادي يتم جمع الخلايا الإنقسامية الالتزام فضفاضة عن طريق هز لطيف قوارير وغسل المتوسطة تليها الطرد المركزي (300 x ج، 5 دقائق). عد عدد الخلايا باستخدام أسلوب المناسب في هذه الخطوة.
    4. RESEED الخلايا الإنقسامية التي تم جمعها في أطباق ثقافة 60 ملم وعلاج الخلايا مع 0.1 ميكروغرام / مل العاصمة لمدة 3 أيام إضافية. البذور أكثر من 1 × 10 6 خلايا الإنقسامية في طبق، لأن أقل من 10٪ من الخلايا يمكن أن يعيش هذا العلاج.
    5. استبدال DC-تحتوي على المتوسط ​​مع المتوسط ​​خال من المخدرات وانتظر الخلايا لاستئناف انتشار الأسلحة النووية، والذي يحدث عادة في حدود 1 في الاسبوع.
  3. خلايا مرور نحو مماثل لخلايا مضاعفا الأصلية.

3. فحص الصيغة الصبغية الحمض النووي

ملاحظة: هذا هو الإجراء راسخة ودليل تقني ينبغي أن تحال إلى إجراءات مفصلة ونصائح تقنية.

  1. حصاد الخلايا (5 × 05-01 أكتوبر × 10 6) التي يحتضنها الخلايا مع يخدع الحلtaining 0.05٪ التربسين و 0.02٪ EDTA لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية، وتحييد التربسين التي كتبها المتوسطة التي تحتوي على 10٪ FBS.
  2. خلايا الطرد المركزي في المتوسط ​​وغسلها عن طريق إعادة التعليق في 5 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) تليها الطرد المركزي (300 x ج، 5 دقائق).
  3. إعداد الخلايا لتحليل الحمض النووي عن طريق واحدة من الطريقتين التاليتين
    1. وهناك طريقة لتحليل الخلايا غير المثبتة 10
      ملاحظة: يمكن أن يتم تنفيذ هذه الطريقة باستخدام طقم المتاحة تجاريا لتحليل دورة الخلية. وينبغي تحليل عينات أعدت مع هذا الأسلوب فورا، لأن الخلايا ليست ثابتة في الإجراء وملطخة سوف نوى أصبحت تالفة مع مرور الوقت.
      1. غسل الخلايا مع 40 ملي العازلة سيترات تحتوي على 250 ملي السكروز. وفي وقت لاحق علاج الخلايا مع 250 ميكرولتر من 0.1٪ (ت / ت) P40 Nonidet و 30 ميكروغرام / مل التربسين في 200 ميكرولتر من 40 ملي العازلة سيترات تحتوي على 250 ملي السكروز لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
      2. إضافة 200 ميكرولتر من 0.5 ميكروغرام / INH التربسين ملibitor و 0.1 ميكروغرام / مل ريبونوكلياز ألف في 40 ملي العازلة سيترات تحتوي على 250 ملي السكروز، واحتضان الخلايا لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
      3. إضافة 200 ميكرولتر من 0.4 ملغ / مل يوديد propidium (PI) في المخزن سيترات 40MM تحتوي على 250 ملي السكروز، واحتضان الخلايا لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وصمة عار نواة الخلية.
    2. وهناك طريقة لتحليل خلايا ثابتة
      1. إصلاح الخلايا مع 80٪ من الإيثانول من خلال تعليق الخلايا في 1 مل من برنامج تلفزيوني، إضافة 4 مل من 100٪ ETOH قطرة قطرة في حين خلط تعليق خلية وتركها في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. الخلايا في هذا مثبت ويمكن تخزين في درجة حرارة -20 درجة مئوية لعدة أسابيع.
      2. غسل الخلايا عن طريق إعادة التعليق عليها في 5 مل من برنامج تلفزيوني تليها الطرد المركزي (300 x ج، 5 دقائق). علاج الخلايا مع 0.5 ملغ / مل ريبونوكلياز ألف وصمة عار لهم مع 50 ميكروغرام / مل يوديد propidium (PI) (475 ميكرولتر من 0.5 ملغ / مل ريبونوكلياز ألف و25 ميكرولتر من 1 ملغ / مل PI) لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  4. تحليل محتوى الحمض النووي رانه الخلايا باستخدام تدفق عداد الكريات مع ليزر 488 نانومتر، وتصفية الانبعاثات القناة الحمراء (تمر فترة طويلة> 610 نانومتر). تحليل عينة مرجعية أعدت من الخلايا مضاعفا حقيقية في نفس الوقت لتقييم الصيغة الصبغية من الخلايا المستهدفة.
    1. بدلا من ذلك، إضافة حبات القياسية مضان لتقييم نسبة كثافة مضان من الخلايا مضاعفا مقابل الخرز. استخدام 'ارتفاع النبض عرض النبضة مقابل "خيار قياس التدفق الخلوي للتمييز بين الخلايا وكتل من الخلايا مضاعفا 11 رباعي الصيغة الصبغية واحدة.

4. فحص التهم كروموسوم وتحليل النمط النووي

ملاحظة: هذه كلها إجراءات راسخة ودليل تقني أو بروتوكولات الشركة المصنعة ينبغي أن تحال إلى إجراءات مفصلة ونصائح تقنية.

  1. علاج الخلايا تنمو باطراد مع 0.1 ميكروغرام / مل العاصمة لمدة 4 ساعات إلقاء القبض على خلايا في الطورية.
  2. إعداد الشرائح كروموسوم.
      حصاد الخلايا (لا يقل عن 5 × 10 5 خلايا) من خلال trypsinization وتعليق في المتوسط تحتوي على FBS.
    1. خلايا الطرد المركزي في المتوسط ​​(300 x ج، 5 دقائق) وعلاج مع محلول ناقص التوتر (5 مل من 0.075 M بوكل) عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة.
    2. إصلاح وتعليق الخلايا في تثبيتي Carnoy في (الميثانول: حمض الخليك = 3: 1).
    3. انتشار الخلايا على شريحة زجاجية عن طريق إسقاط حجم صغير (25-35 ميكرولتر) من التعليق الخلية. خطوات إضافية مثل التعرض للبخار الساخن قد تكون ضرورية لزيادة كروموسوم الانتشار.
  3. خلايا وصمة عار على التهم كروموسوم أو تحليل النمط النووي أو مضان متعدد الألوان في الموقع التهجين (mFISH).
    1. التهم كروموسوم.
      1. خلايا وصمة عار مع 5٪ محلول بالغيمزا (أو 5 ميكروغرام / مل PI تحتوي على 0.5 ملغ / مل ريبونوكلياز وللفحص المجهري مضان) عن 15-20 دقيقة.
      2. رقميا تصوير لا يقل عن 50 خلايا الطورية.
      3. عد عدد الكروموسومات في كل خلية باستخدام softwa تحليل الصورإعادة بعد فصل اليدوي للمس وتداخل الكروموسومات باستخدام برامج تحرير الصور. على الرغم من أن عدد الصبغيات يمكن سجل يدويا، فمن المستحسن محوسب التهديف.
    2. تحليل النمط النووي
      ملاحظة: يجب أن يتم تنفيذ هذا التحليل من قبل فني مدرب أو شركة مهنية.
      1. خلايا وصمة عار وفقا لتقنية G-النطاقات القياسية 12.
      2. تحليل الكروموسومات لجعل karyograms مستوى 12.
    3. mFISH
      ملاحظة: هذه الخطوة اختيارية ويجب القيام إذا لزم الأمر.
      1. خلايا وصمة عار باستخدام تحقيقات FISH متعدد الألوان للصبغيات الإنسان وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة 13.
      2. تحليل الكروموسومات باستخدام المجهر مضان مع مرشحات مناسبة وبرنامج لتحليل mFISH 13.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

في تجربتنا، TIG-1 خلايا ويمكن إجراء رباعي الصيغة الصبغية تماما تقريبا عن طريق العلاج المستمر بسيطة مع 0.1 ميكروغرام / مل العاصمة لمدة 4 أيام (الشكل 2A). في المقابل، سلالات الخلايا الليفية الأخرى، مثل BJ أو معدل وفيات الرضع 90، والخلايا TIG-HT، أصبح خليط من مضاعفا والسكان رباعي الصيغة الصبغية التالية بنفس المعاملة، وعزل الخلايا الإنقسامية من طريقة للاهتزاز من الضروري أثناء العلاج العاصمة (عادة 16-18 ساعة بعد بدء العلاج) (الأ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وثمة مشكلة رئيسية في تحريض الرباعي من الخلايا مضاعفا عن عوامل كيميائية، إما عن طريق مثبطات السيتوبلازمي أو مثبطات المغزل، غير أن الخلايا غالبا ما تصبح خليط من السكان مضاعفا ورباعي الصيغة الصبغية، ويجب فصل الخلايا رباعي الصيغة الصبغية من الخلايا مضاعفا. النهج الأكثر شيوعا لعزل السكان رباعي الصيغة الصبغية خالية من الخلايا مضاعفا استخدام نظام مراقبة الأصول الميدانية أو الاستنساخ عن طريق الحد من التخفيف. ومع ذلك، فإن هذه الإجراءات هي شاقة وليس من السهل القيام بها. في هذا التقرير، نقدم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصلحة مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

نشكر السيدة ماتسوموتو على المساعدة الفنية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
MEM- & ألفا;Sigma-AldrichM8042-500ML
Trypsin-EDTASigma-AldrichT4174
FBSSigma-Aldrich172012-500ML
محلول Demecolcine (10 & mu; جم / مل في HBSS)Sigma-AldrichD1925-10ML
BD CycleTES Plus DNA Reagent KitsBD Biosciences#340242لفحص صبغة الحمض النووي عن طريق قياس التدفق الخلوي
كروموسوم بشري متعدد الألوان مسبار FISH 24XCyteMetaSystems#D-0125-060-DIالمرشحات المتخصصة والبرامج لتحليل mFISH ضرورية
لنظام تصوير إيزيس مع برنامج mFISH   & nbsp ؛مجموعة التحقيقات المتخصصةMetaSystems
مجموعة ضرورية

المراجع

  1. Rabinovitch, P., et al. Predictors of progression in Barrett's esophagus III: baseline flow cytometric variables. Am. J. Gastroenterol. 96 (11), 3071-3083 (2001).
  2. Galipeau, P., et al. NSAIDs modulate CDKN2A, TP53, and DNA content risk for progression to esophageal adenocarcinoma. PLoS Med. 4 (2), e67(2007).
  3. Olaharski, A., et al. Tetraploidy and chromosomal instability are early events during cervical carcinogenesis. Carcinogenesis. 27, 337-343 (2006).
  4. Liu, Y., et al. p53-independent abrogation of a postmitotic checkpoint contributes to human papillomavirus E6-induced polyploidy. Cancer Res. 67, 2603-2610 (2007).
  5. Davoli, T., de Lange, T. The causes and consequences of polyploidy in normal development and cancer. Annu Rev Cell Dev Biol. 27, 585-610 (2011).
  6. Fox, D., Duronio, R. Endoreplication and polyploidy: insights into development and disease. Development. 140, 3-12 (2013).
  7. Fujiwara, T., et al. Cytokinesis failure generating tetraploids promotes tumorigenesis in p53-null cells. Nature. 437, 1043-1047 (2005).
  8. Ganem, N., et al. Cytokinesis failure triggers hippo tumor suppressor pathway activation. Cell. 158 (4), 833-848 (2014).
  9. Kuznetsova, A., et al. Chromosomal instability, tolerance of mitotic errors and multidrug resistance are promoted by tetraploidization in human cells. Cell cycle. 14 (17), 2810-2820 (2015).
  10. Vindeløv, L., Christensen, I. Detergent and proteolytic enzyme-based techniques for nuclear isolation and DNA content analysis. Methods Cell Biol. 41, 219-229 (1994).
  11. Darzynkiewicz, Z., Juan, G. DNA content measurement for DNA ploidy and cell cycle analysis. Curr Protoc Cytom. , Chapter 7: Unit 7.5(2001).
  12. Knutsen, T., Bixenman, H., Lawce, H., Martin, P. Chromosome analysis guidelines preliminary report. Cancer Genet Cytogenet. 52 (1), 11-17 (1991).
  13. Liehr, T., et al. Multicolor FISH probe sets and their applications. Histol. Histopathol. 19 (1), 229-237 (2004).
  14. Ohshima, S., Seyama, A. Formation of bipolar spindles with two centrosomes in tetraploid cells established from normal human fibroblasts. Hum. Cell. 25 (3), 78-85 (2012).
  15. Ohshima, S., Seyama, A. Establishment of proliferative tetraploid cells from normal human fibroblasts. Front. Oncol. 3, 198(2013).
  16. Ohshima, S., Seyama, A. Establishment of proliferative tetraploid cells from telomerase-immortalized normal human fibroblasts. Genes, Chromosome Cancer. 55 (6), 522-530 (2016).
  17. Di Leonardo, A., et al. DNA rereplication in the presence of mitotic spindle inhibitors in human and mouse fibroblasts lacking either p53 or pRb function. Cancer Res. 57, 1013-1019 (1997).
  18. Andreassen, P., Lohez, O., Lacroix, F., Margolis, R. Tetraploid state induces p53-dependent arrest of nontransformed mammalian cells in G1. Mol. Biol. Cell. 12, 1315-1328 (2001).
  19. Vogel, C., et al. Crosstalk of the mitotic spindle assembly checkpoint with p53 to prevent polyploidy. Oncogene. 23, 6845-6853 (2004).
  20. Aylon, Y., Oren, M. p53: Guardian of ploidy. Mol. Oncol. 5 (4), 315-323 (2011).
  21. Uetake, Y., Sluder, G. Cell cycle progression after cleavage failure : mammalian somatic cells do not possess a "tetraploidy checkpoint". J. Cell Biol. 165, 609-615 (2004).
  22. Ganem, N., Pellman, D. Limiting the proliferation of polyploid cells. Cell. 131, 437-440 (2007).
  23. Ho, C., Hau, P., Marxer, M., Poon, R. The requirement of p53 for maintaining chromosomal stability during tetraploidization. Oncotarget. 1 (7), 583-595 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

إنشاء خلايا التكاثري رباعي الصيغة الصبغية من Nontransformed الخلايا الليفية الإنسان
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.