تم اقتراح طريقة لتحليل سلامة الحمض النووي في الجزء الطافي الخالي من الخلايا من عينات البول. هذه الطريقة مناسبة للكشف المبكر عن أورام المسالك البولية الخبيثة وقد أثبتت دقتها في التشخيص المبكر لسرطان المثانة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
خلية خالية من الحمض النووي تحليل النزاهة في عينات البول
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
على الرغم من وجود تعميم الحمض النووي خالية من الخلايا في البلازما أو مصل وقد تبين على نطاق واسع أن تكون مصدر مناسب من المؤشرات الحيوية لأنواع عديدة من السرطان، وركزت بعض الدراسات على إمكانية استخدام (UCF) الحمض النووي البول خالية من الخلايا. بدءا من الفرضيات أن الخلايا أفكارك العادية تنتج الحمض النووي مجزأة للغاية وأن الخلايا السرطانية الإفراج أطول الحمض النووي، والدور المحتمل للUCF سلامة الحمض النووي تم تقييم باعتباره علامة التشخيص المبكر قادرة على التمييز بين المرضى الذين يعانون من سرطان البروستاتا أو المثانة والأفراد الأصحاء.
ويقترح تحليل سلامة UCF الحمض النووي على أساس أربعة تقارير إنجاز المشروعات في الوقت الحقيقي الكمية من أربعة سلاسل أطول من 250 سنة مضت: ج-MYC، BCAS1، HER2، وAR. وقد تم اختيار تسلسل أن يكون في كثير من الأحيان زيادة عدد نسخ الحمض النووي في المثانة وسرطان البروستاتا لتحليل، ولكن الأسلوب هو مرن، ويمكن أن تكون بديلا هذه الجينات مع جينات أخرى من الأسواق العالمية ضغطهاراحة. وقد تم بالفعل أظهرت إمكانية الاستفادة من UCF الحمض النووي كمصدر من المؤشرات الحيوية للالأورام الخبيثة المسالك البولية، مما يمهد الطريق لمزيد من الدراسات حول توصيف UCF الحمض النووي. وUCF اختبار سلامة الحمض النووي لديها ميزة كونها غير الغازية، سريعة، وسهلة لأداء، مع عدد قليل فقط ملليلتر من البول اللازمة لإجراء التحليل.
المقدمة
يمكن الكشف عن الحمض النووي خالية من الخلايا في الدم والبول نتيجة لموت الخلايا عن طريق آليات أفكارك أو الميتة. الحمض النووي خالية من الخلايا في الدم وقد درس على نطاق واسع لأغراض التشخيص والنذير في مختلف الأمراض، خاصة سرطان 1. ومع ذلك، لا يعرف الكثير عن دور (UCF) الحمض النووي البولية خالية من الخلايا. UCF الحمض النووي قد تنشأ من مرور الدم من خلال نظام الترشيح الكبيبي أو من الخلايا التي تأتي مباشرة في اتصال مع هذه السوائل في الجسم 2 (على سبيل المثال، خلايا الظهارة البولية أو خلايا البروستاتا). بصورة رئيسية تم التحقيق في استخدام UCF الحمض النووي كمصدر من المؤشرات الحيوية للتشخيص المبكر للالكلى والمثان....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يتبع بروتوكول للمبادئ التوجيهية للجنة أخلاقيات البحوث الإنسان IRST.
ملاحظة: في هذا البروتوكول، ونحن عزل الحمض النووي من عينات البول لإجراء تحليل سلامة UCF الحمض النووي. واستخدمت Lncap والخلايا MRC خطوط لبناء المعايير. تم تنفيذ تقنيات مثل استخراج الحمض النووي، وتحديد الحمض النووي (معمل وفي الوقت الحقيقي PCR لجين السيطرة، STOX1)، والوقت الحقيقي PCR لالمسرطنة محددة (الشكل 1).
1. جمع البول ومعالجة
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
كان مجموع تركيز الحمض النووي مجانية للقياس بواسطة القياس الطيفي لجميع العينات التي تم تحليلها، مما يدل على مدى يتراوح بين 1.51 و 138 نانوغرام / ميكرولتر. استخدمت خمس عينات الرقابة على استنساخ البيانات: تم إجراء تجربتين في الوقت الحقيقي مستقلة لج-MYC، HER2، BCAS1، AR، وSTOX1. ثم تم حساب معاملات الاختلاف (CV) لكل جينة (الجدول 2)، مع وجود درجة جيدة من التكاثر بين اثنين من تجارب مستقلة
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
UCF تحليل سلامة الحمض النووي هو أسلوب جديد، غير الغازية لتقييم سلامة الحمض النووي في البول. واقترح مؤخرا انها لتشخيص مبكر من المثانة (9) وسرطان البروستات 7،8. وتناقش عدد من مزايا وعيوب اختبار سلامة UCF الحمض النووي هنا، جنبا إلى جنب مع آفاق المستقبل.
والميزة الرئيسية لهذا النهج هو أنه يقدم، طريقة غير مكلفة غير الغازية وبروتوكول بسيط لدراسة البول كمصدر محتمل من المؤشرات الحيوية، الأمر الذي يت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح مالية متنافسة.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون Gráinne Tierney و Silvia Bellissimo على مساعدتهما التحريرية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| QIAamp DNA Mini Kit | Qiagen | 51304 | |
| iQ SYBR سوبر مكس أخضر ، 100 × 50 وميكرو ؛ L rxns ، 2.5 مل (2 × 1.25 مل) Biorad | 1708880 | ||
| IDT مخصص DNA oligos ؛ | IDT | تنقية HPLC ، 100nMole DNA oligo | |
| NanoDrop 1000 مقياس الطيف | الحراري العلمي | يمكن أيضا استخدام طرق القياس الطيفي الأخرى لتحديد كمية DNA | |
| Rotor-Gene 6000 | Corbett | أيضا استخدام أداة PCR أخرى في الوقت الحقيقي | |
| طرد | |||
| دقيقة لأنابيب 50 مل | |||
| حاضنة | |||
| 80 درجة ؛ C الفريزر | |||
| -20 درجة ؛ فريزر | |||
| 10 &# 956; ماصة | |||
| 20 &# 956; L ماصة | |||
| 200 &# 956; ماصة | |||
| 1,000 &# 956; أطراف ماصة الماصة | |||
| L (10؛ 20؛ 200؛ 1,000) | |||
| أنابيب سعة 1.5 مل أنابيب | |||
| سعة 50 مل أنابيب | |||
| سعة 15 مل أنابيب | |||
| القرص الدوار 7 | 9018899 | ||
| وأغطية شريطية من القرص الدوار، 0.1 مل (250) | 981103 Qiagen | ||
| أنابيب التجميع (2 مل) | Qiagen | 19201 | |
| Buffer AL (264 مل) | Qiagen | 19075 | |
| Proteinase K (10 مل) | Qiagen | 19133 |
المراجع
- Francis, G., Stein, S. Circulating Cell-Free Tumour DNA in the Management of Cancer. Int.J.Mol.Sci. 16 (6), 14122-14142 (2015).
- Bryzgunova, O. E., Laktionov, P. P. Extracellular Nucleic Acids in Urine: Sources, Structure, Diagnostic Potential. Acta Naturae. <....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
