Method Article

منهجية لدراسة نقل أفقي جين في المكورات العنقودية الذهبية

DOI:

10.3791/55087

⸱

March 10th, 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Biomedical Science, Faculty of Medicine, University of Tsukuba, 2Department of Basic Biomedical Science, Universidad Europea de Madrid, 3Human Biology Program, School of Integrative and Global Majors, University of Tsukuba, 4Laboratory of Nosocomial Infections, Department of Bacteriology, Centro Nacional de MicrobiologÍa, Instituto de Salud Carlos III, 5Division of Microbiology, Department of Medicine, School of Medicine, Universidad Complutense, 6Biology of Gram-Positive Pathogens, Department of Microbiology, Institut Pasteur, Paris, France, 7ERL3526, CNRS, Paris, France

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وصفنا هنا ثلاثة بروتوكولات مختلفة للتحقيق في المختبر من الاقتران، التنبيغ، والتحول الطبيعي في المكورات العنقودية الذهبية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

واحدة سمة هامة من سمات رئيسية الممرض البشري الانتهازية المكورات العنقودية الذهبية هي قدرة غير عادية للاستحواذ بسرعة مقاومة للمضادات الحيوية. تكشف الدراسات الجينومية أن بكتريا المكورة العنقودية البرتقالية يحمل العديد من الجينات الفوعة ومقاومة تقع في العناصر الوراثية المتنقلة، مما يشير إلى أن نقل الجينات الأفقي (HGT) يلعب دورا حاسما في تطور الذهبية س. ومع ذلك، وصفا كاملا ومفصلا عن المنهجية المستخدمة لدراسة HGT في العنقودية الذهبية لا يزال غير موجود، خاصة فيما يتعلق التحول الطبيعي، الذي تم الإبلاغ مؤخرا في هذه البكتيريا. يصف هذا العمل ثلاثة بروتوكولات التي هي مفيدة للتحقيق في المختبر من HGT في بكتريا المكورة العنقودية البرتقالية: الاقتران، التنبيغ فج، والتحول الطبيعي. لتحقيق هذا الهدف، والجينات CFR (الكلورامفينيكول / المقاومة florfenicol)، الذي يضفي على Phenicols، Lincosamides، Oxazolidinones، Pleuromutilins، وStreptogramin ألف (PhLOPSأ) -resistance النمط الظاهري، تم استخدامها. فهم الآليات التي من خلالها بكتريا المكورة العنقودية البرتقالية نقل المواد الوراثية لسلالات أخرى لا بد من فهم سرعة اكتساب المقاومة ويساعد على توضيح طرق نشر عنها في برامج المراقبة أو لمزيد من التنبؤ وضع تنتشر في المستقبل.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المكورات العنقودية الذهبية هي موجبة الجرام البكتيريا المتعايشة التي تسكن بشكل طبيعي في الجلد، وتجويف الأنف من البشر والحيوانات. هذه الأنواع البكتيرية هي السبب الرئيسي للعدوى المستشفيات في المستشفيات ومرافق الرعاية الصحية. وعلاوة على ذلك، جعلت قدرته على تطوير مقاومة المركبات المضادة للميكروبات مختلفة إدارة الالتهابات التي تسببها هذه البكتيريا إلى الاهتمام العالمي.

ومن المعروف مسارين الرئيسية التي تشارك في انتشار الظواهر المقاومة: نشر نسيلي من المورثات المقاومة ونشر المحددات الوراثية بين تجمع البكتيريا. في حالة بكتريا المكورة العنقودية البرتقالية،

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: يتم سرد السلالات والمواد المستخدمة في هذا العمل في الجدول رقم 1 وجدول المواد، على التوالي. في التجارب نقل، استخدمت N315 والعقيد CFR المشتقات -positive الجهات المانحة من الجين CFR (N315-45 وCOL-45). تم الحصول على هذه السلالات من قبل الاقتران، وذلك باستخدام مثل المانحة معدل إماتة الحالات السريرية -positive Staphyloccocus البشروية سلالة (ST2)، بعد بروتوكول اقتران القياسية (أنظر أدناه). يضمر هذه السلالة الجين CFR على pSCFS7 مثل بلازميد 7.

1. الإقتران باستخدام أسلوب تصفي....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

النتائج كانت الممثلة هنا تنطبق (مقتبس من مرجع 7 بإذن من الناشر). درسنا مسارات انتقال محتملة من الجين CFR، الذي يسبب مقاومة ينزوليد على مستوى منخفض والتعبير عن النمط الظاهري PhLOPSA مقاومة 14 و 15 في سلالات بكتريا المكورة العنقودية البرتقالية، من خلال التحقيق في ثلاث آليات HGT.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا العمل الطرق الرئيسية الثلاث لدراسة HGT المحددات الوراثية في العنقودية الذهبية. على الرغم من أن التنبيغ والاقتران تم دراستها على مدى عقود، وجود تحول الطبيعي تم الاعتراف مؤخرا فقط 2. وهكذا، تم تجهيز العنقودية الذهبية مع كل من وسائط الثلاثة الرئيسية من HGT، واختبار كل منهم هو مطلوب لتوضيح مسارات نشر الممكنة من المحددات الوراثية. والهدف من هذا العمل هو تجميع البروتوكولات الكاملة وتوفير معلومات عملية عن المنهجيات المستخدمة في الأع.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل مؤسسة تاكيدا للعلوم ومساهمة فايزر الأكاديمية وزمالة ما بعد الدكتوراه JSPS للباحثين الأجانب (FC).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
مرق الصويا الترابسي (TSB) Becton Dickinson 211825
تسريب قلب الدماغ (BHI)Becton Dickinson مرق المغذيات 211059
رقم 2OxoidCM0067
أجار دم الأغنامEiken Chemical Co.، Ltd.E-MR96أجار الصويا Tryptic المضافة مع 5٪ (v / v) دم الأغنام وفقا للشركة المصنعة.
مسحوق أجارواكو بيور للصناعات الكيماوية010-08725
سترات الصوديوم (ثنائي هيدرات سترات ثلاثي الصوديوم)واكو للصناعات الكيماويةالنقية 191-01785
السليلوز إستر الشبكي 0.45 مو ؛ L HAWG filterMerck MiliporeHAWG 02500
QIAfilter طقم بلازميد ميديQIAGEN12243

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lindsay, J. A. Genomic variation and evolution of Staphylococcus aureus. IJMM. 300, 98-103 (2010).
  2. Morikawa, K., et al. Expression of a cryptic secondary sigma factor gene unveils natural competence for DNA transformation in Staphyloco....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Horizontal Gene TransferStaphylococcus aureusConjugation ProtocolPhage TransductionNatural TransformationAntibiotic Resistance GenesColony PCRMIC AnalysisTryptic Soy BrothSheep Blood Agar

Related Articles