مقالة منهجية

الانضباطي الهلاميات المائية من الرئوي خارج الخلية مصفوفة للثقافة خلية 3D

DOI:

10.3791/55094

⸱

يناير 17, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, Virginia Commonwealth University, 2Department of Physiology and Biophysics, Virginia Commonwealth University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا هو الأسلوب لإنشاء سقالة زراعة الخلايا 3-الأبعاد من المصفوفة خارج الخلية الرئوية. تتم معالجة الرئة سليمة إلى الهلاميات المائية التي يمكن أن تدعم نمو الخلايا في ثلاثة أبعاد.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن هنا نقدم وسيلة لإنشاء متعددة عنصر الهلاميات المائية زراعة الخلايا في المختبر لزراعة الخلايا في الرئة. بدءا صحية أون أنسجة الرئة كتلة من الخنازير، الفئران، أو الماوس، يتم perfused الأنسجة والمغمورة في المنظفات الكيميائية اللاحقة لإزالة الحطام الخلوي. مقارنة نسيجية للأنسجة قبل وبعد المعالجة تؤكد إزالة أكثر من 95٪ من المزدوج تقطعت بهم السبل تلطيخ الحمض النووي وألفا غالاكتوزيداز تشير تتم إزالة معظم الحطام الخلوي. بعد decellularization، والنسيج هو مجفف بالتجميد ثم cryomilled إلى مسحوق. يتم هضم مسحوق مصفوفة لمدة 48 ساعة في محلول الببسين الهضم الحمضي ثم تحييد لتشكيل حل بريجل. دبق من الحل بريجل يمكن أن يتسبب من قبل الحضانة عند 37 درجة مئوية، ويمكن استخدامها تحييد التالية مباشرة أو تخزينها في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى أسبوعين. الطلاء يمكن تشكيلها باستخدام حل بريجل على طبق من ذهب غير المعالجة لجالذراع المرفق. الخلايا يمكن تعليقها في بريجل قبل التجميع الذاتي لتحقيق ثقافة 3D، مطلي على سطح هلام تشكلت من الخلايا التي يمكن أن تهاجر من خلال منصة الاعدام، أو مطلية على الطلاء. قدمت تعديلات على استراتيجية يمكن أن تؤثر درجة الحرارة دبق، والقوة، أو أحجام جزء من البروتين. ما وراء تشكيل هيدروجيل، يمكن زيادة صلابة هيدروجيل باستخدام genipin.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعد ترجمة النتائج في المختبر إلى العيادة واحدة من أكثر القضايا تحديا التي تواجه الباحثين في الطب الحيوي. يعد البحث في المختبر على بلاستيك زراعة الأنسجة أسهل وأكثر ملاءمة ويحافظ على صلاحية عالية للخلايا. 1 هذا النهج هو نقطة انطلاق معقولة ، لكن النتائج لها ترجمة سريرية محدودة. على نحو متزايد ، تقوم المختبرات بدمج تركيبات ثلاثية الأبعاد لتحل محل الطرق التقليدية ثنائية الأبعاد. تتوفر المراجعات للعديد من البيئات ثلاثية الأبعاد ، من السقالات البيولوجية إلى السقالات البوليمرية. 2,3

يمكن للأطر البيولوجية أن تحاكي خصائص البيئات في الجسم الحي لأنها تحتوي على العديد من مكونات البروتين والجليكوزامينوجليكان في المصفوفة الأصلية وتوفر مواقع ربط مألوفة للخلايا للارتباط بها والتعرف عليها. ثبت أن المواد المشتقة من المصفوفة خارج الخلية (ECM) هي سقالات قادرة على ربط الخلايا وتكاثرها. 4 ينبع أحد التحديات التي تحد من تطبيق منصات الهيدروجيل ECM من خصائصها الميكانيكية الضعيفة بطبيعتها بعد الهلام. غالبا ما يكون للأنسجة الأصلية خصائص ميكانيكية أعلى من الهلاميات المائية. يمكن لعوامل التشابك غير السامة أن تزيد من الخصائص الميكانيكية للهلاميات المائية لتقليد بيئة الأنسجة الأصلية بشكل أفضل. جينيبين هو رابط متشابك طبيعي غير سام مشتق من نباتات الغردينيا مع القدرة على تكييف الخصائص الميكانيكية ECM عن كثب مع التغيرات في تركيز جينيبين5،6.

توجد جميع خلايا الجسم تقريبا في ECM التي تنتجها أو تحافظ عليها وتنظم عليها. أدى التركيز الجديد على الأهمية العالمية لإدارة المحتوى في التنظيم والحالة والوظيفة في كل عضو أو نظام إلى إنتاج منصات قائمة على المصفوفة للتحقيق في المختبر. تحت الغشاء المخاطي للأمعاء الدقيقة في الخنازير هو السقالة المشتقة من الطبيعة الأكثر دراسة على نطاق واسع ، وقد تم استخدامه لتجديد الأوتار والأربطة والعضلات الهيكلية4 وحتى العظام7. أظهرت المصفوفات من الأعضاء الأخرى والأنواع المانحة أيضا إمكانات جيدة لتجديد الأنسجة. يتسبب استخدام مكونات ECM الأجنبية في الحد الأدنى من المشكلات المتعلقة بالتعديل المناعي. بعد التخلص من المادة الخلوية المضيفة ، ستكون ECM المتبقية متشابهة في محتوى الأحماض الأمينية وتنظيمها لجميع أنواع الثديياتالأخرى 8. هناك خط متزايد من التفكير في أن أفضل طريقة لفحص تفاعلات الخلية وإدارة المحتوى في المختبر هي استخدام سقالات ECM الخاصة بالأعضاء. يوفر كل عضو تركيبة فريدة من البروتينات والبروتيوغليكان لإنشاء منافذ خلوية. توفر المنافذ الانهيار الهيكلي والوظيفي وحتى الأنزيمي للمصفوفة خارج الخلية مما يساهم في الإشارات الفيزيائية الحيوية. لتحقيق بيئة مكروية في المختبر تشبه إلى حد كبير البيئة المكروية في الجسم الحي ، فإن استخدام ECM الخاص بالأنسجة من شأنه تحسين المنافذ الخلوية للبحث.

الهدف من هذا البروتوكول هو توفير طريقة لإنشاء سقالة هيدروجيل فريدة من نوعها ل ECM للرئة. توفر هذه الطريقة منصة للبحث في المختبر حول تفاعلات خلايا الرئة وإدارة المحتوى المؤسسي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
حل تصفية العقيمة الاتجاهات
DIH 2 O نعم فعلا DIH 2 O؛ العقيمة التي تمت تصفيتها
0.1٪ تريتون X-100 الحل نعم فعلا تحت غطاء الدخان إضافة 100 ميكرولتر تريتون-X 100 الحل إلى 100 مل DIH 2 O وتستنهض الهمم حتى يذوب.
تصفية العقيمة.
2٪ Deoxycholate الحل نعم فعلا تحت غطاء الدخان إضافة 2 ز حل Deoxycholate الصوديوم
لكل 100 مل DIH 2 O وتستنهض الهمم حتى يذوب. تصفية العقيمة
1 M كلوريد الصوديوم نعم فعلا إضافة 58.44 جم كلوريد الصوديوم إلى 1 لتر من DIH 2 O؛ تستنهض الهمم حتى يذوب.
تصفية العقيمة
حل الدناز نعم فعلا إضافة 12000وحدات الدناز إلى 1 L DIH 2 O؛ إضافة 0.156 ز MgSO 4
(مائي)، و0.222 غ CaCl 2. تستنهض الهمم حتى يذوب. تصفية العقيمة
برنامج تلفزيوني نعم فعلا الجمع بين 27.2 ز نا 2 هبو 4 · 7H 2 O (ثنائي القاعدة مائى)،
80 جم كلوريد الصوديوم، و 2 ز بوكل مع 10 لتر DIH 2 O؛ تستنهض الهمم حتى يذوب. ضبط درجة الحموضة إلى 7.4. تصفية العقيمة

الجدول 1: حلول المطلوبة لDecellularization الأنسجة. جعل الحلول المذكورة أعلاه لعملية decellularization. تخزينها في 4 درجات مئوية. تقريبا سوف تكون هناك حاجة إلى 2.5 لتر للرئة الخنزير واحد.

1. هيدروجيل تشكيل

  1. الخنزير الرئة Decellularization (مقتبس من المراجع 9،10)
    1. الحصول، وهو ككل الرئة الخنازير العادية، من المسلخ، مع القلب وVASCulature سليمة.
    2. استخدام مقص الأنسجة أو مشرط تشريح بعيدا عن القلب، وقطع الأوعية الدموية في أقرب وقت ممكن إلى القلب، وسيتم استخدام ما تبقى الأوعية الدموية في خطوات لاحقة لنضح.
    3. تشريح بعناية بعيدا النسيج الضام المحيطة الرغامى والقصبات الهوائية، والأوعية الدموية باستخدام مشرط أو مقص.
      ملاحظة: تحديد أفضل الرئة لاستخدامه في بقية الإجراء عن طريق اختيار الرئة من دون انقطاع كبيرة أو ثقوب من خلال غشاء الجنب وكميات كبيرة من انخماص أو انسداد الأوعية الدموية التي قد تعوق فعالية عملية decellularization.
    4. قطع الرئة دون المستوى الأمثل ترك القصبات الهوائية بقدر تعلق على القصبة الهوائية ممكن (القلب والأنسجة الضامة وفصوص الرئة إزالة يمكن التخلص منها). يجب أن تكون هناك رئة واحدة تبقى تعلق على القصبة الهوائية والأوعية الدموية.
      ملاحظة: الاحتفاظ أقسام للالأنسجة إذا رغبت في ذلك. 9
    5. إغلاق القصبات قطع مع المشابك أو خياطة إلى pارتجاع الزائدة revent.
    1. إعداد الحلول decellularization وبردت في 4 درجات مئوية لحين الحاجة إليها (الجدول 1).
    2. باستخدام مضخة يدوية مقنى لتناسب الشريان الرئوي، يروي أنسجة الرئة 3 مرات بالماء DI سواء عن طريق الشريان الرئوي والقصبة الهوائية. يروي الأوعية الدموية لأول مرة في كل مرة. تبدأ مع حوالي 1 لتر في الأوعية الدموية و 1.5 L إلى القصبة الهوائية عن كل التروية، ولكن كما تتم إزالة الحطام الخلوي أكثر سيولة يمكن perfused من خلال النظام.
    3. يروي كل من الأوعية الدموية والقصبة الهوائية مع تريتون X-100 حل.
    4. غمر أنسجة الرئة في تريتون X-100 حل لمدة 24 ساعة في 4 درجات مئوية.
    5. يروي الأوعية الدموية والقصبة الهوائية 3 مرات بالماء DI لشطف.
    6. يروي كل من الأوعية الدموية والقصبة الهوائية مع حل deoxycholate.
    7. غمر أقسام الأنسجة في deoxycholate لمدة 24 ساعة في 4 درجات مئوية.
    8. يروي الأوعية الدموية والقصبة الهوائية 3 مرات بالماء DI لشطف.
    9. يروي كل من الأوعية الدموية والقصبة الهوائية مع حل كلوريد الصوديوم.
    10. غمر النسيج في محلول كلوريد الصوديوم تصفيتها لمدة 1 ساعة على 4 درجات مئوية.
    11. يروي الأوعية الدموية والقصبة الهوائية 3 مرات بالماء DI لشطف.
    12. يروي كل من الأوعية الدموية والقصبة الهوائية مع حل الدناز.
    13. غمر الأنسجة في حل الدناز تصفيتها لمدة 1 ساعة على 4 درجات مئوية.
    14. يروي كل من الأوعية الدموية والقصبة الهوائية 5 مرات مع برنامج تلفزيوني.
    15. بعيدا تشريح الأنسجة الغضروفية ملحوظة والقصبة الهوائية وجميع الأنابيب 2 مم أو أكبر في القطر (وجدت في المقام الأول حول نقير وأجزاء سطي للرئتين) من إجراء الهوائية، وترك مناطق الجهاز التنفسي فقط (في المقام الأول المناطق الطرفية).
    16. تشريح الأنسجة داخل 1 بوصة أقسام أو أصغر. اتجاه الأنسجة لا يهم لهذه الخطوة.
    17. تخلصي من الأنسجة السائلة ومكان الزائدة في أنابيب مخروطية 50 مل. تجميد الأنسجة في -80 درجة مئوية.
      ملاحظة: يحتفظ أقسام للالأنسجة لضمان إزالة الخلايا وdebri الخلويالصورة، إذا رغبت في ذلك. نحن نستخدم H & E، α غالاكتوزيداز، picogreen، هيدروكسي، النينهيدرين، الألسيان الزرقاء، SDS-PAGE، وقياس الطيف الكتلي للتميز. 9
  2. معالجة الرئة
    1. إزالة الأغطية من أنابيب المجمدة تحتوي على أنسجة الرئة decellularized.
    2. ضع ورق الترشيح خلال افتتاح أنبوب وآمنة مع الشريط المطاطي.
      يجب أن لا يزال يتم تجميد أنبوب ومحتويات وضع ذلك في -80 درجة مئوية حتى تجميد: ملاحظة.
    3. يجفد الأنسجة حتى يزول كل السائل الزائد، وذلك باستخدام مجفف تجميد وفقا لتوجيهات المصنع. تخزين في -80 درجة مئوية حتى جاهزة للطاحونة.
    4. قبل البدء في إضافة النتروجين السائل لطاحونة الثلاجة لتبرد العزل والمكونات الداخلية لظروف العمل.
    5. إزالة شريط مطحنة المغناطيسي من أنبوب مطحنة وإضافة الأنسجة لتغطية القاع.
    6. استبدال شريط مطحنة وإضافة الأنسجة معبأة فضفاضة. يجب أن شريط مطحنة لا يزال التحرك بحرية.
    7. إغلاق أنبوب مطحنة وجيش التحرير الشعبى الصينىم في طاحونة الفريزر.
    8. ملء النيتروجين السائل إلى خط التعبئة كحد أقصى.
    9. الفريزر مطحنة جميع الأنسجة إلى مسحوق ناعم (حوالي 5 دقائق، ومعدل انحشار ~ 600 دقيقة -1)، في اسطوانة البولي مع المسبار الفولاذ المقاوم للصدأ، وكذلك غير القابل للصدأ المقابس نهاية الصلب باستخدام طاحونة المجمد وفقا لتوجيهات المصنع. تخزين في -80 درجة مئوية لتصبح جاهزة للاستخدام.
  3. الصغيرة التي يسهل اختراقها تشكيل مادة هلامية (8 ملغ / مل) (مقتبس من المراجع 9،11)
    1. إضافة 1٪ (ث / ت) من مسحوق decellularized و 0.1٪ (ث / ت) الببسين إلى 0.01 M حمض الهيدروكلوريك، في إطار التحريض المستمر (يجب أن يكون قادرا على رؤية تدفق على أعلى مستوى من السائل)، في درجة حرارة الغرفة، ل 48 ساعة.
      ملاحظة: تم شحن مسحوق ثابت، لذلك بإضافة حمض الهيدروكلوريك بعد يتيح للمسحوق الفرصة لغسل الزائدة قبالة الجدران أنبوب.
    2. بعد الهضم لمدة 48 ساعة، ووضع حل والكواشف على الجليد لمدة 5 دقائق.
    3. باستخدام المبرد 10٪ (ت / ت) 0.1 M هيدروكسيد الصوديوم، وهود 11.11٪ (ت / ت) 10X برنامج تلفزيوني (لتحقيق حل كامل ل1x أخرى التركيز)، وتحقيق حل البروتين المهضوم لدرجة الحموضة الفسيولوجية 7.4.
      ملاحظة: يمكن الآن أن يتم تخزين الحل في 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى أسبوع واحد. أداء حركية دبق باستخدام rheometry 9 إذا رغبت في ذلك.

2. عبر ربط الهلاميات المائية لتحسين القوة الميكانيكية

  1. تم عن طريق إذابة المبلغ اللازم من مسحوق genipin في 10٪ DMSO إعداد الحلول من 1٪، 0.1٪، و 0.01٪ ث / ت حل genipin يشابك.
  2. دوامة حل كل 15 دقيقة لمدة 1 ساعة.
  3. إضافة حل genipin لتغطية الهلاميات المائية ECM (100 ميكرولتر لكل بئر من لوحة 96 أيضا)، والتي تم تجميعها في الجزء 1.3.4.
  4. ترك كل هيدروجيل ECM لتشعبي لمدة 24 ساعة على 37 درجة مئوية.
  5. شطف هيدروجيل ECM 3 مرات مع برنامج تلفزيوني حتى حل غسل لم يعد الأزرق. والهلاميات المائية crosslinked ثم تكون على استعداد لمزيد من توصيف ومدراسات الثقافة ليرة لبنانية.

3. خلية ثقافة مع الصغيرة التي يسهل اختراقها جل

  1. طلاء ثنائي الأبعاد
    1. باستخدام حل من 1.3.3، إضافة 20 ميكرولتر من حل بريجل إلى كل بئر من لوحة زراعة الأنسجة 96-جيدا غير المعالجة.
    2. بين عشية وضحاها بردت في 4 درجات مئوية للسماح للبروتين الامتزاز على طبق من ذهب.
    3. حل نضح بريجل وشطف مع برنامج تلفزيوني.
    4. خلايا مرور 9.
    5. إضافة 10000 خلية / سم 2 إلى الآبار.
    6. زيادة وسائل الإعلام إلى 100 ميكرولتر لكل بئر واحتضان عند 37 درجة مئوية.
  2. ثلاثة ثقافة الخلية الأبعاد 9
    1. باستخدام محلول من 1.3.3، و resuspend الخلايا مكعبات إلى تركيز 1،000،000 خلية / مل من محلول بريجل.
    2. الاستغناء بسرعة 16 ميكرولتر من تعليق بريجل خلية في كل بئر من لوحة 96-جيدا، لتشكيل هيدروجيل ~ 500 ميكرون سميكة للثقافة الخلية 3D.
    3. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 30دقيقة لهلام لتشكيل.
    4. إضافة 100 ميكرولتر من وسائل الإعلام إلى أعلى الهلاميات المائية شكلت واحتضان عند 37 درجة مئوية.
  3. ثلاثة ثقافة الخلية الأبعاد على المواد الهلامية صلابة متغيرة
    1. باستخدام محلول من 1.3.3، ماصة 100 ميكرولتر من حل بريجل في كل بئر من لوحة 96-جيدا.
    2. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لهلام لتشكيل.
      ملاحظة: عبر ربط خطوات من جزء 2 يمكن استخدامها هنا.
    3. خلايا مرور 9.
    4. إضافة 10000 خلية / سم 2 إلى الآبار.
    5. زيادة وسائل الإعلام إلى 100 ميكرولتر لكل بئر واحتضان عند 37 درجة مئوية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باستخدام هذه الطريقة، لدينا انتاج الهلاميات المائية من الخنزير العادي، الفئران، والرئتين الماوس (الشكل 1). توفر الرئتين معالجة ما يقدر ب 5 ملغ، 40 ملغ، و 10 غراما من مسحوق ECM على التوالي. ويظهر لمحة عامة عن عملية في الشكل 2. تصورات رئيسية خلال عملية تشمل: ظهور الأبيض من الرئتين بعد الشطف deoxycholate. بعد تشكيل بريجل، وينبغي أن يكون الحل غير واضحة ويجب أن يظهر الحل متجانسة لعدة أشهر إذا تخزينها في 4 درجة مئوية. لق...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

واحد من جوانب أساسية في علم الأحياء هو التنظيم الذاتي للجزيئات في الهياكل الهرمية أن تنفيذ مهمة معينة. 13 في المختبر، يعتمد التجميع الذاتي على العديد من العوامل مثل تركيز الملح، ودرجة الحموضة، ومدة الهضم. كما هو مبين، والتنظيم الذاتي أشكال هيدروجيل عندما تعود البروتينات بالفاعلات إلى درجة حرارة الفسيولوجية. هيدروجيل شكلت قادر على تعزيز مرفق الخلوي وانتشار في المختبر.

استجابة الخلايا للإشارات ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونود أن نشكر مزارع سميثفيلد للتبرع أنسجة الرئة الخنازير سليمة. كما نود أن نشكر الدكتور هو جين يانغ، الدكتورة كرستينا تانغ وقسم الجراحة جامعة فرجينيا كومنولث البلاستيك على إتاحة الفرصة لنا لاستخدام معداتها. أعدت هيدروجيل والأنسجة عينات للوزارة شؤون المرأة في وزارة جامعة فرجينيا كومنولث التشريح ومرفق بيولوجيا الأعصاب الميكروسكوب المعتمدة، في جزء منه، بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة NINDS مركز كور غرانت 5 P30 NS047463، وجزئيا، من خلال شكل تمويل المعاهد الوطنية للصحة NCI السرطان مركز دعم جرانت P30 CA016059. SEM التصوير العينات في جامعة فرجينيا كومنولث في تقنية النانو مرفق الأساسية توصيف (NCC). وقد تم تمويل هذا العمل من قبل مؤسسة العلوم الوطنية، CMMI 1351162.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Triton X-100  فيشر ScientificBP151-100استخدم في غطاء الدخان مع حماية العين والقفازات.
ديوكسي كولات الصوديومسيجما-ألدريتشD6750-100 جماستخدم في غطاء المحرك مع حماية العين والقفازات.
كبريتات المغنيسيومسيجما-ألدريتشM7506-500 جراملا يوجد
كلوريد الكالسيومسيجما-ألدريتشC1016-500 جملا شيء
DNaseSigma-AldrichD5025-150KUلا يوجد
حمض الهيدروكلوريكسيجما-ألدريتش258148-500 ملاستخدم مع حماية العين والقفازات.
PepsinSigma-AldrichP6887-5Gاستخدم في غطاء الدخان مع حماية العين والقفازات.
هيدروكسيد الصوديومفيشر العلميBP359-500استخدم مع حماية العين والقفازات.
جينيبينواكو للكيماويات078-03021استخدم في غطاء الدخان مع حماية العين والقفازات.
PBS 10xجودة بيولوجية119-069-151لا شيء
PBSVWR45000-448لا شيء
ورق ترشيحWhatman8519N / A
مضخة يدويةفيشر Scientific10-239-1N / A
دورق الخريجينVitLab445941
CryomillSPEX6700استخدم cryogloves والعين حماية.
استخدام Lyophilizer FTS FlexiDry.
اكتشاف الريومترHR-2استخدم القفازات وحماية العين.
قفازات

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lee, J., Cuddihy, M., Kotov, N. Three-Dimensional Cell Culture Matrices: State of the Art. 14, (2008).
  2. Haycock, J. W. 3D Cell Culture. , Humana Press. (2011).
  3. Walker, J. M., Ed, Epithelial cell culture protocols. , Humana Press: Springer. New York: New York. (2012).
  4. Badylak, S. F., Freytes, D. O., Gilbert, T. W. Extracellular matrix as a biological scaffold material: Structure and function. Acta Biomater. 5 (1), 1-13 (2009).
  5. Koo, H. -J., Lim, K. -H., Jung, H. -J., Park, E. -H. Anti-inflammatory evaluation of gardenia extract, geniposide and genipin. J. Ethnopharmacol. 103 (3), 496-500 (2006).
  6. Jeffords, M. E., Wu, J., Shah, M., Hong, Y., Zhang, G. Tailoring Material Properties of Cardiac Matrix Hydrogels to Induce Endothelial Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells. ACS Appl. Mater. Interfaces. 7 (20), 11053-11061 (2015).
  7. Suckow, M. A., Voytik-Harbin, S. L., Terril, L. A., Badylak, S. F. Enhanced bone regeneration using porcine small intestinal submucosa. J. Invest. Surg. 12 (5), 277-287 (1998).
  8. Brown, B. N., Badylak, S. F. Extracellular matrix as an inductive scaffold for functional tissue reconstruction. Transl. Res. J. Lab. Clin. Med. 163 (4), 268-285 (2014).
  9. Pouliot, R. A., et al. Development and characterization of a naturally derived lung extracellular matrix hydrogel. J.Biomed.Mater.Res.A. , (2016).
  10. Price, A. P., England, K. A., Matson, A. M., Blazar, B. R., Panoskaltsis-Mortari, A. Development of a decellularized lung bioreactor system for bioengineering the lung: the matrix reloaded. Tissue Eng. Part A. 16 (8), 2581-2591 (2010).
  11. Freytes, D. O., Martin, J., Velankar, S. S., Lee, A. S., Badylak, S. F. Preparation and rheological characterization of a gel form of the porcine urinary bladder matrix. Biomaterials. 29 (11), 1630-1637 (2008).
  12. Tilghman, R. W., et al. Matrix rigidity regulates cancer cell growth and cellular phenotype. PloS One. 5 (9), e12905(2010).
  13. Ratner, B. D., Bryant, S. J. Biomaterials: where we have been and where we are going. Annu. Rev. Biomed. Eng. 6, 41-75 (2004).
  14. Fridman, R., Benton, G., Aranoutova, I., Kleinman, H. K., Bonfil, R. D. Increased initiation and growth of tumor cell lines, cancer stem cells and biopsy material in mice using basement membrane matrix protein (Cultrex or Matrigel) co-injection. Nat Protoc. 7 (6), 1138-1144 (2012).
  15. Zhang, W. -J., et al. The reconstruction of lung alveolus-like structure in collagen-matrigel/microcapsules scaffolds in vitro. J. Cell. Mol. Med. 15 (9), 1878-1886 (2011).
  16. Booth, A. J., et al. Acellular Normal and Fibrotic Human Lung Matrices as a Culture System for In Vitro Investigation. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 186 (9), 866-876 (2016).
  17. Matsuda, A., et al. Evidence for human lung stem cells. N. Engl. J. Med. 364 (19), 1795-1806 (2011).
  18. Zuo, W., et al. p63+Krt5+ distal airway stem cells are essential for lung regeneration. Nature. 517 (7536), 616-620 (2015).
  19. Keane, T. J., Londono, R., Turner, N. J., Badylak, S. F. Consequences of ineffective decellularization of biologic scaffolds on the host response. Biomaterials. 33 (6), 1771-1781 (2012).
  20. Neill, J. D., et al. Decellularization of human and porcine lung tissues for pulmonary tissue engineering. Ann Thorac Surg. 96 (3), 1046-1055 (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة