مقالة منهجية

وبسيطة خطوة واحدة بروتوكول تشريح لجبل لالجامع إعداد الكبار ذبابة الفاكهة أدمغة

DOI:

10.3791/55128

⸱

ديسمبر 1, 2016

 ,  ,  , 
1Center for Metabolic and Degenerative Diseases, The Brown Foundation Institute of Molecular Medicine, Programs in Human and Molecular Genetics and Neuroscience, The Graduate School of Biomedical Sciences at Houston, The University of Texas Health Science Center at Houston, 2Department of Natural Sciences, University of Houston - Downtown, 3Department of Neurobiology and Anatomy, McGovern Medical School, The University of Texas Health Science Center at Houston

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ذبابة الفاكهة الدماغ الكبار هو نظام القيم لدراسة الدوائر العصبية، وظائف الدماغ العليا، واضطرابات معقدة. وسيلة فعالة لتشريح أنسجة المخ كله من الرأس ذبابة صغيرة وتسهيل الدراسات القائمة على الدماغ. نحن هنا وصف، بروتوكول تشريح خطوة واحدة بسيطة من أدمغة البالغين مع التشكل الحفاظ عليها جيدا.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هناك اهتمام متزايد في استخدام ذبابة الفاكهة لنموذج الدماغ من الأمراض التنكسية الإنسان، خريطة circuitries العصبية في أدمغة البالغين، ودراسة الأسس الجزيئية والخلوية من وظائف المخ العليا. وإعداد كامل جبل أدمغة البالغين مع التشكل المحفوظة جيدا أمر بالغ الأهمية لمثل هذه الدراسات القائمة على الدماغ كله، ولكن يمكن أن يكون تحديا وتستغرق وقتا طويلا من الناحية الفنية. يصف هذا البروتوكول نهج تشريح خطوة واحدة سهلة لتعلم، من رأس الذبابة في أقل من 10 ثانية، مع الحفاظ على الدماغ سليمة تعلق على بقية الجسم لتسهيل خطوات المعالجة اللاحقة. الإجراء يساعد على إزالة معظم أنسجة العين والقصبة الهوائية التي ترتبط عادة مع الدماغ التي يمكن أن تتداخل مع خطوة التصوير في وقت لاحق، ويضع أيضا أقل من الطلب على نوعية ملقط تشريح. بالإضافة إلى ذلك، نحن تصف طريقة بسيطة التي تسمح التقليب مريحة للعينات الدماغ التي شنت على ساترة، وهو أمر مهم لتصوير جانبي بالأمطار مع كثافة إشارة مماثلة والجودة. وكمثال على ذلك البروتوكول، نقدم تحليلا لالدوبامين (DA) الخلايا العصبية في أدمغة البالغين من WT (ث 1118) الذباب. فعالية عالية في طريقة تشريح يجعلها مفيدة بشكل خاص للدراسات تستند الدماغ الكبار على نطاق واسع في ذبابة الفاكهة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكائن الحي نموذج ذبابة الفاكهة، والمعروف باسم ذبابة الفاكهة، منذ فترة طويلة قيمتها لأدوات الوراثية الأنيقة، وأحيانا الإنجابية قصيرة، وحفظها للغاية المسارات الجزيئية والخلوية. وقد استخدمت ذبابة الفاكهة بنجاح لتشريح مسارات أساسية الإشارات، وآليات الزخرفة من الكائنات متعددة الخلايا، وكذلك الآليات الكامنة وراء تطوير الخلايا العصبية، وظائف، وأمراض 1،2. مع التطورات الحديثة في تقنيات وضع العلامات الخلية والتصوير، وأصبح الدماغ ذبابة الفاكهة قوية خاصة في رسم الخرائط على ما يرام من الدوائر العصبية وفي تشريح الأساس الجزيئي والخلوي وظائف الدماغ العليا، مثل التعلم والذاكرة، وإيقاع الساعة البيولوجية 1،3، 4،5،6،7،8.<....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الحلول المستخدمة لالدماغ تشريح وتلطيخ مناعي

  1. تشريح الكبار يطير العقول في اصطناعية السائل الشوكي الدماغي (ACSF): 119 مم كلوريد الصوديوم، 26.2 ملم NaHCO 3، 2.5 ملي بوكل، 1 ملم ناه 2 ص 4، 1.3 ملي MgCl 2 و 10 ملي الجلوكوز. قبل الاستخدام، والغاز ACSF مع 5٪ CO 2/95٪ O 2 ل10-15 دقيقة، وارتفاع 2.5 ملي CaCl 2. تعقيم الحل ACSF من خلال تصفية من خلال مرشح 0.22 ميكرون الغشاء.
    ملاحظة: مخزن ACSF في 4 درجات مئوية لمنع التلوث الجرثومي. ويمكن أيضا أن يطير....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويوضح الشكل (1) والإجراءات الرئيسية لتشريح الدماغ الكبار، على النحو المبين أعلاه أرقام 2 و 3 هي صور تمثيلية من العمر 3-يوم-WT. (الوراثي: ث 1118) الكبار يطير العقول، التي costained مع الأجسام المضادة ضد هيدروكسيلاز التيروزين (TH والملون باللون الأحمر في الشكل 2 والأبيض في الشكل 3)، علامة تستخدم عادة لتسمية الخلايا العصبية DA 11، بالإضا.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مع اهتمام متزايد في استخدام الكبار ذبابة الفاكهة الدماغ لدراسة الأمراض التي تصيب الإنسان الدماغ، الدوائر العصبية، وظائف المخ العليا، فمن الضروري لتطوير أساليب بسيطة وسريعة للحصول على العقول ذبابة سليمة لتحليل كامل جبل، وهو أمر مهم خصوصا للواسع حجم شاشات القائم على الدماغ. يوفر طريقة لدينا بسيطة وسهلة لتعلم نهج لتشريح من رأس الذبابة (غالبا في أقل من 10 ثانية مع الخبرة) مع التشكل المحفوظة جيدا أن أخلى إلى حد كبير من الأنسجة المرتبطة بها. كما لا تزال تعلق أدمغة تشريح لبقية ا.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن نعترف السيد أنيس محمد، السيدة كيارا اندرادي، السيدة بيلار رودريجيز، كريس كوك، والسيدة دانا سورة غافر للحصول على الدعم الهائل لهذا المشروع.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
w*;   بارك < سوپ > دلتا ؛ 21/TM3,  P{GAL4-Kr.C}DC2,  P{UAS-GFP. S65T}DC10,  Sb1تم تحويل Bloomington Tذبابة الفاكهة Stock Center51652Balancer إلى TM6B
PBac{WH}parkf01950Exelixis في كلية الطب بجامعة هارفاردf01950تم تحويله إلى TM6C
NaCl Fisher ScientificS640-500
بيكربونات الصوديوم (NaHCO3)  فيشر ساينتفيك02-003-990
كلوريد البوتاسيوم (KCl)فيشر سينتيفكBP366-500
فوسفات الصوديوم ، أحادي الهيدرات أحادي القاعدة (NaHCO3< / sub>) فيشرساينتفيك02-004-198
كلوريد المغنيسيوم (MgCl2< / sub>) فيشرساينتفيك02-003-265
D-SorbitolSigma-AldrichS1876-500Gيحل محل ثنائي هيدرات كلوريد الكالسيوم الجلوكوز
(CaCl2< / sub>)Sigma-AldrichC5670-500G
EMD Millipore  ؛ مرشحات غشاء Durapore PVDF: محبة للماء: 0.22 & م حجم المسامفيشر GVWP14250
الحل الفورمالين العلمي ، 10٪ (نسيجيا)فيشر ScientificSF98-20
فوسفات البوتاسيوم ، ثنائي الأساس ، مسحوق ، كاشف حيوي فائق النقاءفيشر Scientific02-003-823
Tween-20Fisher ScientificBP337-500
ملاقط Excelta Precision مع نقاط دقيقة جدافيشر Scientific17-456-055لا يتطلب البروتوكول نقاطا دقيقة جدا. 
الأجسام المضادة للتيروزين هيدروكسيلازPel-Freez BiologicalsP40101
Rat-Elav-7E8A10 المضادة للدراساتالتنموية استنساخ بنك الورم الهجين7E8A10
الماعز المضاد للفئران IgG (H + L) الجسم المضاد الثانوي ، Alexa Fluor 647 المترافقThermoFisher ScientificA-21247
الماعز المضاد للأرانب IgG (H + L) الجسم المضاد الثانوي ، Alexa Fluor 594 المترافقThermoFisher محلول ScientificA-11037
DAPI (1 مجم / مل) ThermoFisherScientific62248
مسحوق بروبيل غالاتSigma-AldrichP3130-100G
كاشف Glycerol ACS ، & ge ؛ 99.5٪Sigma-AldrichG7893-500ML
Zeiss Axioimager Z1ZeissQuote
Zeiss Apotome.2ZeissQuote
Zen Lite softwareQuote

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wangler, M. F., Yamamoto, S., Bellen, H. J. Fruit flies in biomedical research. Genetics. 199, 639-653 (2015).
  2. Bellen, H. J., Yamamoto, S. Morgan's legacy: fruit flies and the functional annotation of conserved genes. Cell. 163, 12-14 (2015).
  3. Aso, Y., et al.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Drosophila Brain DissectionWhole Mount PreparationAdult Fly BrainDissection ProtocolBrain Morphology PreservationImmunohistochemistry StainingDopaminergic Neuron AnalysisConfocal Microscopy ImagingParaformaldehyde FixationAnti fade Mounting Medium

مقالات ذات صلة