مقالة منهجية

وبسيطة خطوة واحدة بروتوكول تشريح لجبل لالجامع إعداد الكبار ذبابة الفاكهة أدمغة

DOI:

10.3791/55128

⸱

ديسمبر 1, 2016

 ,  ,  , 
1Center for Metabolic and Degenerative Diseases, The Brown Foundation Institute of Molecular Medicine, Programs in Human and Molecular Genetics and Neuroscience, The Graduate School of Biomedical Sciences at Houston, The University of Texas Health Science Center at Houston, 2Department of Natural Sciences, University of Houston - Downtown, 3Department of Neurobiology and Anatomy, McGovern Medical School, The University of Texas Health Science Center at Houston

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ذبابة الفاكهة الدماغ الكبار هو نظام القيم لدراسة الدوائر العصبية، وظائف الدماغ العليا، واضطرابات معقدة. وسيلة فعالة لتشريح أنسجة المخ كله من الرأس ذبابة صغيرة وتسهيل الدراسات القائمة على الدماغ. نحن هنا وصف، بروتوكول تشريح خطوة واحدة بسيطة من أدمغة البالغين مع التشكل الحفاظ عليها جيدا.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هناك اهتمام متزايد في استخدام ذبابة الفاكهة لنموذج الدماغ من الأمراض التنكسية الإنسان، خريطة circuitries العصبية في أدمغة البالغين، ودراسة الأسس الجزيئية والخلوية من وظائف المخ العليا. وإعداد كامل جبل أدمغة البالغين مع التشكل المحفوظة جيدا أمر بالغ الأهمية لمثل هذه الدراسات القائمة على الدماغ كله، ولكن يمكن أن يكون تحديا وتستغرق وقتا طويلا من الناحية الفنية. يصف هذا البروتوكول نهج تشريح خطوة واحدة سهلة لتعلم، من رأس الذبابة في أقل من 10 ثانية، مع الحفاظ على الدماغ سليمة تعلق على بقية الجسم لتسهيل خطوات المعالجة اللاحقة. الإجراء يساعد على إزالة معظم أنسجة العين والقصبة الهوائية التي ترتبط عادة مع الدماغ التي يمكن أن تتداخل مع خطوة التصوير في وقت لاحق، ويضع أيضا أقل من الطلب على نوعية ملقط تشريح. بالإضافة إلى ذلك، نحن تصف طريقة بسيطة التي تسمح التقليب مريحة للعينات الدماغ التي شنت على ساترة، وهو أمر مهم لتصوير جانبي بالأمطار مع كثافة إشارة مماثلة والجودة. وكمثال على ذلك البروتوكول، نقدم تحليلا لالدوبامين (DA) الخلايا العصبية في أدمغة البالغين من WT (ث 1118) الذباب. فعالية عالية في طريقة تشريح يجعلها مفيدة بشكل خاص للدراسات تستند الدماغ الكبار على نطاق واسع في ذبابة الفاكهة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكائن الحي نموذج ذبابة الفاكهة، والمعروف باسم ذبابة الفاكهة، منذ فترة طويلة قيمتها لأدوات الوراثية الأنيقة، وأحيانا الإنجابية قصيرة، وحفظها للغاية المسارات الجزيئية والخلوية. وقد استخدمت ذبابة الفاكهة بنجاح لتشريح مسارات أساسية الإشارات، وآليات الزخرفة من الكائنات متعددة الخلايا، وكذلك الآليات الكامنة وراء تطوير الخلايا العصبية، وظائف، وأمراض 1،2. مع التطورات الحديثة في تقنيات وضع العلامات الخلية والتصوير، وأصبح الدماغ ذبابة الفاكهة قوية خاصة في رسم الخرائط على ما يرام من الدوائر العصبية وفي تشريح الأساس الجزيئي والخلوي وظائف الدماغ العليا، مثل التعلم والذاكرة، وإيقاع الساعة البيولوجية 1،3، 4،5،6،7،8.

ميزة واحدة معينة من نظام ذبابة الفاكهة هو حجمها الصغير نسبيا، مما يسمح كله جبل إعداد وفحص الدماغ باستخدام مركب العادية أو المجهر متحد البؤر. ثيتمكن الصورة ميزة تحليلات مفصلة التشريحية والوظيفية للدوائر العصبية، أو حتى الخلايا العصبية واحدة، عند مستويات الخلوية والتحت خلوية، في سياق أنسجة المخ بأكملها، وبالتالي تقديم كل نظرة شمولية لدرس الموضوع وهندسته بدقة داخل كله الدماغ. ومع ذلك، وبالنظر إلى حجم مصغر بدلا من الدماغ، ويعرض أيضا تحديا تقنيا في تشريح بكفاءة على أنسجة المخ سليمة من اقية حالة رئيس الهيكل الخارجي في ذبابة الكبار. وقد وصفت مختلف وسائل فعالة وبسيطة نسبيا تشريح في التفاصيل، التي عادة ما تنطوي على الحذر وخطوة حكيمة شطب القضية الرأس والأنسجة المرتبطة بما في ذلك العينين والقصبة الهوائية، والدهون من الدماغ السليم 9 و 10. هذه الأساليب تشريح المجهرية في كثير من الأحيان تفرض ضغوطا صارمة بدلا من ذلك على نوعية ملقط تشريح، والاعتماد على ملقط مع غرامة نصائح متماشية بشكل جيد يمكن أن تتلف بسهولة. وعلاوة على ذلك، كما أدمغة تشريح غالبا ما تكون separatإد من بقية الجسم، والعقل يمكن أن تضيع بسهولة خلال عمليات تلطيخ والغسيل لاحقة بسبب أحجامها الصغيرة وشفافيتها في المخزن المؤقت المعالجة. هنا، نحن تصف بروتوكول تشريح خطوة واحدة بسيطة نسبيا وسهلة لتعلم، لأدمغة البالغين التي تحافظ على العقول تشريح تعلق على الجذع. عملية تشريح في كثير من الأحيان مسح بسهولة بعيدا معظم الأنسجة المرتبطة الدماغ مثل العين والقصبة الهوائية ويقلل من الطلب على ملقط تشريح ذات نوعية جيدة.

بالإضافة إلى ذلك، عندما تصوير الدماغ تحت المجهر المركب الفلورسنت أو المجهر متحد البؤر، إلى جانب الدماغ الذي هو بعيدا عن مصدر ضوء الفلورسنت غالبا ما تنتج إشارة أضعف والصور أقل وضوحا بسبب سماكة الدماغ كله جبل. هنا، ونحن أيضا تصف طريقة تركيب بسيط يسمح التقليب السهل من العينات الدماغ، مما يتيح سهولة التصوير من كلا الجانبين من المخ مع intensi إشارة مماثلةتاي والجودة.

ونتيجة لإثبات صحة مفهوم لتطبيق هذا الأسلوب لدراسة الدماغ الكبار، درسنا كذلك وجود الخلايا العصبية DA في أدمغة ث 1118 الذباب. النمط الجيني التي كثيرا ما تستخدم كخط الوالدين لتوليد الذباب المعدلة وراثيا والسيطرة wildtype في العديد من الدراسات ذبابة الفاكهة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الحلول المستخدمة لالدماغ تشريح وتلطيخ مناعي

  1. تشريح الكبار يطير العقول في اصطناعية السائل الشوكي الدماغي (ACSF): 119 مم كلوريد الصوديوم، 26.2 ملم NaHCO 3، 2.5 ملي بوكل، 1 ملم ناه 2 ص 4، 1.3 ملي MgCl 2 و 10 ملي الجلوكوز. قبل الاستخدام، والغاز ACSF مع 5٪ CO 2/95٪ O 2 ل10-15 دقيقة، وارتفاع 2.5 ملي CaCl 2. تعقيم الحل ACSF من خلال تصفية من خلال مرشح 0.22 ميكرون الغشاء.
    ملاحظة: مخزن ACSF في 4 درجات مئوية لمنع التلوث الجرثومي. ويمكن أيضا أن يطير العقول أن تشريح في حل مخزنة الفوسفات المالحة (PBS)، على الرغم من مقارنات تفصيلية من آثار الحلول تشريح اثنين على جودة التصوير النهائية من أدمغة تشريح لم يتم تنفيذها.
  2. استخدام 4٪ بارافورمالدهيد (PFA) التي أعدت في برنامج تلفزيوني 1X هو الحل تثبيتي، والتي عادة aliquoted وتخزينها في -20 درجة مئوية.
    Cautioن: PFA غير سامة، وتآكل، وينبغي التعامل معها بحذر.
  3. استخدام برنامج تلفزيوني 1X لشطف PFA من العقول وبعد الخطوة غسل الماضية، خلال تلوين مناعي من أدمغة تشريح. إعداد برنامج تلفزيوني 1X من 10X حل PBS الأسهم (1.37 م كلوريد الصوديوم، و 27 ملي بوكل، 100 ملي نا 2 هبو 4، و 18 ملي KH 2 PO 4).
  4. استخدام 0.3٪ توين 20 في برنامج تلفزيوني 1X (1X PBT) لجميع الخطوات اللاحقة غسل خلال تلوين مناعي من أدمغة تشريح.

2. المجهرية تشريح رؤساء الكبار يطير

ملاحظة: يتم توضيح إجراء تشريح في الشكل 1.

  1. تخدير الذباب الكبار مع CO 2. باستخدام ملقط، والتقاط ذبابة لفترة وجيزة dewax بشرة عن طريق غمس في 70٪ من الإيثانول ل3-5 الصورة. هذا يضمن أن أي فقاعات تلتزم بشرة ذبابة عندما منغمسين في ACSF أو برنامج تلفزيوني 1X حل تشريح.
  2. تحتتشريح المجهر مع مصدر الضوء في زاوية لن يكون قد تم حظره من قبل الأيدي، تعيين عدسة موضوعية للوصول الى رؤية واضحة للذبابة (1.2X التكبير). استخدام ملقط مع جهة غير السائد لشل حركة الحيوانات وتزج الطاير في حل تشريح الباردة مع بطنها متجهة لأعلى، كما هو مبين في الشكل 1A.
  3. الحفاظ على ملقط في 160 - زاوية درجة 170 فيما يتعلق وحة التشريح، في حين تمارس قوة صغيرة على بطن الذبابة (كما هو موضح السهام في الشكل 1A). وهذه الخطوة شل الطاير واجبارها على تحريك الرأس الى الوراء من خلال 15 - 25 درجة في حين تمتد خرطوم صعودا. في هذه العملية، ومنطقة لينة وشفافة للبشرة، تحت خرطوم، يجب أن تصبح واضحة. زيادة التكبير وضبط البؤري على هذه المنطقة.
    ملاحظة: لا تضع ملقط محكم جدا، بل مجرد شركة كافيا لتحقيق الاستقرارالذبابة. أيضا الكثير من القوة سوف يتسبب في أجهزة الداخلية لتمزق في الحل.
  4. استخدام اليد المهيمنة للضغط على ملقط تشريح بحيث يتم إغلاق النصائح، والتي سوف تولد قوة مقاومة خفيفة على نصائح من ملقط، حتى أن ملقط والربيع الطلق عندما يتم تحرير الضغط من ناحية عقد. وضع ملقط عموديا على ملقط عقد الطاير، كما هو مبين في الشكل 1B.
    1. بيرس النصائح مغلقة من ملقط تشريح من خلال المنطقة لينة وشفافة للبشرة تحت خرطوم، كما يتضح من السهم الأحمر في الشكل 1B. ومن المهم عدم اختراق ملقط عميقا جدا أن يلمس الدماغ. الدماغ السليم ينبغي أن تصبح مرئية. الحفاظ على فهم ثابت للالطاير مع جهة غير السائد.
  5. بسرعة ولكن بثبات، والإفراج عن نصائح من ملقط تشريح بالقوة الخاصة والاعتماد على الزخم من هذا الإصدار المسيل للدموع بعيدا ركان الهيكل الخارجي الذي يحيط رأس ذبابة. دماغ سليمة السليم ينبغي أن تصبح مرئية (الأنسجة البيضاء مباشرة فوق غيض من forcep القاع في الشكل 1C) متابعة خط وهمي لتوجيه الزخم من النصائح forcep صدر (كما هو موضح السهام الحمراء الخارج هو مبين في الشكل 1C). سيؤدي هذا إلى إزالة بلطف الهيكل الخارجي والأكثر من العين المرتبط الدماغ والقصبة الهوائية من الدماغ. التوقيت المناسب وقوة تطبيق لفتح والهيكل الخارجي أن يعتمد على خبرة المحقق.
    ملاحظة: هذه هي الخطوة الأكثر أهمية أثناء تشريح. ومن المهم أن الاعتماد على القوة الطبيعية الناتجة عن زخم ملقط الانفتاح على إزالة الهيكل الخارجي بينما يترك الدماغ يتعرض تبقى تعلق على بقية الجسم.
  6. استخدام الملقط في اليد المهيمنة لإزالة بعناية الأنسجة ملحق المتبقية، مثل القصبة الهوائية التي تظهر عن الهياكل الألياف البيضاء remainiتعلق نانوغرام إلى الدماغ. يجب الحرص على عدم سحب أو تلف في الدماغ السليم.

3. مناعي يلطخ من العقل

  1. إصلاح عينات الدماغ تشريح مع الجذوع المرتبطة بها في حوالي 1 مل من 4٪ PFA ل40 - 60 دقيقة.
    ملاحظة: للحصول على هذا واللاحقة الخطوات، والحفاظ على أنابيب أو لوحات مع عينات على nutator لمزيج صحيح العينات في الحل.
  2. شطف مع 1 مل من برنامج تلفزيوني 1X قبل pipetting الحل صعودا وهبوطا 3 مرات. يجب الحرص على عدم نضح العقول بعيدا.
  3. يغسل 5 مرات مع 1X PBT لمدة 5 دقائق لكل منهما. الحفاظ على عينات على nutator خلال الحضانة.
  4. احتضان مع الأجسام المضادة الأولية في التخفيف يا سليم / N عند 4 درجات مئوية.
  5. في اليوم التالي، وإزالة الأجسام المضادة الأولية، وغسل العينات 5 مرات مع 1X PBT. ترك العينات لمدة 5-10 دقائق في حل 1X PBT بين كل غسل. الحفاظ على عينات على nutator خلال الحضانة.
  6. احتضان غسلهاالعينات في الأجسام المضادة الثانوية المناسبة مع تخفيف ووقت حضانة المقترحة.
  7. غسل العينات ست مرات مع 1X PBT مع حضانة 10 دقيقة بين كل غسل.
    هذه الخطوة هو أمر حاسم لإزالة الأجسام المضادة الثانوية ملزمة nonspecifically من العينة.
  8. احتضان في 1: 10000 التخفيف من 1 ملغ / مل 4 "، 6'-diamidino-2-phenylindole (دابي) في 1X حل PBT لمدة 30 دقيقة. دابي هو صبغ الحمض النووي التي تربط لمناطق AT من الحمض النووي ويمكن استخدامها للكشف عن التشكل العام للدماغ.
  9. شطف ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني 1X.
  10. عينات نقل إلى طبق التشريح، وفصل العقول من الجثث في طبق تشريح باستخدام ملقط.
  11. بعد تلطيخ وغسل الخطوات، تركيب أدمغة بين اثنين coverslips ووضع لل coverslips على أعلى شريحة متزايدة. في هذه الطريقة، وعينات الدماغ يمكن أن انقلبت بسهولة بحيث أن كلا الجانبين من الدماغ يمكن تصوير مع كثافة إشارة مماثلة.
    ملاحظة: تركيب الدماغ على ساترة بدلا من مباشرة على الشريحة المتزايدة يسمح التقليب من التوجه العينة بحرية. وأوضح عملية التركيب في مزيد من التفاصيل أدناه.
    1. وضع ساترة 18 × 18 ملم على أعلى شريحة متزايدة. توسيع افتتاح طرف ماصة مع شفرة واستخدامه لنقل أدمغة في حل PBS 1X على ساترة 18 × 18 مم.
    2. وضع العقول في منتصف ساترة، وإزالة السائل حول أدمغة مع طرف ماصة على ما يرام، ثم إضافة 20 آخرين - 40 ميكرولتر من مكافحة تتلاشى المتوسطة المتزايدة (0.2٪ (ث / ت) ن ن غالاتي في 99.5 ٪ ACS الجلسرين درجة) على العقول.
      ملاحظة: مقدار تصاعد أضاف المتوسطة يعتمد على عدد من العقول فحصها.
    3. نشر بلطف من أدمغة بينما تهجير المتوسطة المتزايدة اللزج الخارج. ضع الثانية ساترة 18 × 18 ملم على أعلى العقول عن طريق خفض أولا الشريحة من جانب واحد حتى أنه يجعل الاتصال معسطح انزلاق تصاعد، ومن ثم تتراجع ببطء الجانب الآخر للحد من اتصال الدماغ مع فقاعات الهواء.
      ملاحظة: ليست هناك حاجة لاستخدام فاصل بين لل coverslips اثنين، حيث بلغ حجم والمتوسطة المتزايدة، وينبغي أن أدمغة توفر مساحة كافية لفصل لل coverslips اثنين.
    4. السماح للشرائح ليستقر. إزالة السائل الزائد التي تخرج من الجانبين من زلات بمنديل مختبر.
    5. لمنع لل coverslips مع العقول التي شنت من السقوط في شريحة متزايدة أثناء النقل، واستخدام قطعة صغيرة من الشريط إرفاق لل coverslips إلى الشريحة المتزايدة.
      ملاحظة: العقول التي شنت في بين الشرائح يمكن تصوير فورا أو الحفاظ عليها عند 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى واحد من دون خسائر كبيرة في إشارة الفلورسنت، دون الحاجة إلى استخدام أي تسرب لختم الشرائح. للحفاظ على المدى الطويل من أدمغة الملون، إلى جانب قسائم اثنين يمكن أن تكون مختومة ثإيث طلاء الأظافر وتخزينها في الثلاجة -20 درجة مئوية، على الرغم من أن أدمغة الملون قد تفقد إشاراتها مع مرور الوقت. لا ينصح بذلك.
  12. استخدام المجهر المركب الفلورسنت المناسب أو المجهر متحد البؤر لصورة العقول.
    1. أولا، الحصول على صورة من جانب من الدماغ أقرب إلى الهدف، ثم الوجه بعناية لل coverslips الحصول على عينات تقع في الوسط. هذه الخطوة تسهل الحصول على صورة من الجانب الآخر من نفس الدماغ.
    2. استخدام تستقيم المجهر المركب الفلورسنت و20X عدسة الهدف لصورة كاملة الدماغ (الأمثلة في الشكل 2) وهدف 40X إلى مناطق أصغر صورة من الدماغ، مثل الخلايا العصبية DA في المنطقة مجموعة تقرن الأمامي الإنسي (PAM) (أمثلة في الشكل 3).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويوضح الشكل (1) والإجراءات الرئيسية لتشريح الدماغ الكبار، على النحو المبين أعلاه أرقام 2 و 3 هي صور تمثيلية من العمر 3-يوم-WT. (الوراثي: ث 1118) الكبار يطير العقول، التي costained مع الأجسام المضادة ضد هيدروكسيلاز التيروزين (TH والملون باللون الأحمر في الشكل 2 والأبيض في الشكل 3)، علامة تستخدم عادة لتسمية الخلايا العصبية DA 11، بالإضا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مع اهتمام متزايد في استخدام الكبار ذبابة الفاكهة الدماغ لدراسة الأمراض التي تصيب الإنسان الدماغ، الدوائر العصبية، وظائف المخ العليا، فمن الضروري لتطوير أساليب بسيطة وسريعة للحصول على العقول ذبابة سليمة لتحليل كامل جبل، وهو أمر مهم خصوصا للواسع حجم شاشات القائم على الدماغ. يوفر طريقة لدينا بسيطة وسهلة لتعلم نهج لتشريح من رأس الذبابة (غالبا في أقل من 10 ثانية مع الخبرة) مع التشكل المحفوظة جيدا أن أخلى إلى حد كبير من الأنسجة المرتبطة بها. كما لا تزال تعلق أدمغة تشريح لبقية ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن نعترف السيد أنيس محمد، السيدة كيارا اندرادي، السيدة بيلار رودريجيز، كريس كوك، والسيدة دانا سورة غافر للحصول على الدعم الهائل لهذا المشروع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
w*;   بارك < سوپ > دلتا ؛ 21/TM3,  P{GAL4-Kr.C}DC2,  P{UAS-GFP. S65T}DC10,  Sb1تم تحويل Bloomington Tذبابة الفاكهة Stock Center51652Balancer إلى TM6B
PBac{WH}parkf01950Exelixis في كلية الطب بجامعة هارفاردf01950تم تحويله إلى TM6C
NaCl Fisher ScientificS640-500
بيكربونات الصوديوم (NaHCO3)  فيشر ساينتفيك02-003-990
كلوريد البوتاسيوم (KCl)فيشر سينتيفكBP366-500
فوسفات الصوديوم ، أحادي الهيدرات أحادي القاعدة (NaHCO3< / sub>) فيشرساينتفيك02-004-198
كلوريد المغنيسيوم (MgCl2< / sub>) فيشرساينتفيك02-003-265
D-SorbitolSigma-AldrichS1876-500Gيحل محل ثنائي هيدرات كلوريد الكالسيوم الجلوكوز
(CaCl2< / sub>)Sigma-AldrichC5670-500G
EMD Millipore  ؛ مرشحات غشاء Durapore PVDF: محبة للماء: 0.22 & م حجم المسامفيشر GVWP14250
الحل الفورمالين العلمي ، 10٪ (نسيجيا)فيشر ScientificSF98-20
فوسفات البوتاسيوم ، ثنائي الأساس ، مسحوق ، كاشف حيوي فائق النقاءفيشر Scientific02-003-823
Tween-20Fisher ScientificBP337-500
ملاقط Excelta Precision مع نقاط دقيقة جدافيشر Scientific17-456-055لا يتطلب البروتوكول نقاطا دقيقة جدا. 
الأجسام المضادة للتيروزين هيدروكسيلازPel-Freez BiologicalsP40101
Rat-Elav-7E8A10 المضادة للدراساتالتنموية استنساخ بنك الورم الهجين7E8A10
الماعز المضاد للفئران IgG (H + L) الجسم المضاد الثانوي ، Alexa Fluor 647 المترافقThermoFisher ScientificA-21247
الماعز المضاد للأرانب IgG (H + L) الجسم المضاد الثانوي ، Alexa Fluor 594 المترافقThermoFisher محلول ScientificA-11037
DAPI (1 مجم / مل) ThermoFisherScientific62248
مسحوق بروبيل غالاتSigma-AldrichP3130-100G
كاشف Glycerol ACS ، & ge ؛ 99.5٪Sigma-AldrichG7893-500ML
Zeiss Axioimager Z1ZeissQuote
Zeiss Apotome.2ZeissQuote
Zen Lite softwareQuote

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wangler, M. F., Yamamoto, S., Bellen, H. J. Fruit flies in biomedical research. Genetics. 199, 639-653 (2015).
  2. Bellen, H. J., Yamamoto, S. Morgan's legacy: fruit flies and the functional annotation of conserved genes. Cell. 163, 12-14 (2015).
  3. Aso, Y., et al. The neuronal architecture of the mushroom body provides a logic for associative learning. Elife. 3, 04577(2014).
  4. Reiter, L. T., Potocki, L., Chien, S., Gribskov, M., Bier, E. A systematic analysis of human disease-associated gene sequences in Drosophila melanogaster. Genome Res. 11, 1114-1125 (2001).
  5. Yamagata, N., et al. Distinct dopamine neurons mediate reward signals for short- and long-term memories. Proc Natl Acad Sci U S A. 112, 578-583 (2015).
  6. Nern, A., Pfeiffer, B. D., Rubin, G. M. Optimized tools for multicolor stochastic labeling reveal diverse stereotyped cell arrangements in the fly visual system. Proc Natl Acad Sci U S A. 112, 2967-2976 (2015).
  7. Waddell, S. Neural Plasticity: Dopamine Tunes the Mushroom Body Output Network. Curr Biol. 26, 109-112 (2016).
  8. Wolff, T., Iyer, N. A., Rubin, G. M. Neuroarchitecture and neuroanatomy of the Drosophila central complex: A GAL4-based dissection of protocerebral bridge neurons and circuits. J Comp Neurol. 523, 997-1037 (2015).
  9. Sweeney, S. T., Hidalgo, A., de Belle, J. S., Keshishian, H. Dissection of adult Drosophila brains. Cold Spring Harb Protoc. 2011, 1472-1474 (2011).
  10. Wu, J. S., Luo, L. A protocol for dissecting Drosophila melanogaster brains for live imaging or immunostaining. Nat Protoc. 1, 2110-2115 (2006).
  11. Mao, Z., Davis, R. L. Eight different types of dopaminergic neurons innervate the Drosophila mushroom body neuropil: anatomical and physiological heterogeneity. Front Neural Circuits. 3, 5(2009).
  12. White, K. E., Humphrey, D. M., Hirth, F. The dopaminergic system in the aging brain of Drosophila. Front Neurosci. 4, 205(2010).
  13. Yang, Y., et al. Mitochondrial pathology and muscle and dopaminergic neuron degeneration caused by inactivation of Drosophila Pink1 is rescued by Parkin. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 10793-10798 (2006).
  14. Greene, J. C., et al. Mitochondrial pathology and apoptotic muscle degeneration in Drosophila parkin mutants. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 4078-4083 (2003).
  15. Whitworth, A. J., et al. Increased glutathione S-transferase activity rescues dopaminergic neuron loss in a Drosophila model of Parkinson's disease. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 8024-8029 (2005).
  16. Pesah, Y., et al. Drosophila parkin mutants have decreased mass and cell size and increased sensitivity to oxygen radical stress. Development. 131, 2183-2194 (2004).
  17. Trinh, K., et al. Decaffeinated coffee and nicotine-free tobacco provide neuroprotection in Drosophila models of Parkinson's disease through an NRF2-dependent mechanism. J Neurosci. 30, 5525-5532 (2010).
  18. Kim, K., Kim, S. H., Kim, J., Kim, H., Yim, J. Glutathione s-transferase omega 1 activity is sufficient to suppress neurodegeneration in a Drosophila model of Parkinson disease. J Biol Chem. 287, 6628-6641 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Drosophila Brain DissectionWhole Mount PreparationAdult Fly BrainDissection ProtocolBrain Morphology PreservationImmunohistochemistry StainingDopaminergic Neuron AnalysisConfocal Microscopy ImagingParaformaldehyde FixationAnti fade Mounting Medium

مقالات ذات صلة