يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

المحفزة الخلايا الجذعية المشتقة خلايا القلب لإصلاح عضلة القلب

8.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/55142

⸱

فبراير 3, 2017

 ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, School of Medicine, School of Engineering, University of Alabama at Birmingham

في هذه المقالة

ملخص

نقدم ثلاثة بروتوكولات جديدة وأكثر كفاءة للتمييز الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها الإنسان إلى العضلية، والخلايا البطانية، وخلايا العضلات الملساء وطريقة التسليم أن يحسن engraftment من الخلايا المزروعة عن طريق الجمع بين حقن الخلايا مع بوساطة التصحيح تسليم خلوى.

الملخص

الناجمة عن النشاط البشري الخلايا الجذعية المحفزة (hiPSCs) يجب أن تكون متمايزة تماما في أنواع معينة من الخلايا قبل الإدارة، ولكن البروتوكولات التقليدية للتمييز hiPSCs إلى العضلية (hiPSC-CMS)، والخلايا البطانية (hiPSC-ECS)، وخلايا العضلات الملساء (SMCS) غالبا ما تكون محدودة بسبب العائد المنخفض، والنقاء، و / أو ضعف الاستقرار المظهرية. هنا، نقدم بروتوكولات جديدة لتوليد hiPSC-مضادة، -ECs، و-SMCs التي هي إلى حد كبير أكثر كفاءة من الطرق التقليدية، فضلا عن طريقة للجمع بين حقن الخلايا مع التصحيح التي تحتوي على خلوى تم إنشاؤها على موقع الإدارة. التصحيح يحسن كلا من الإبقاء على حقن الخلايا، بإغلاق الطريق إبرة لمنع الخلايا من طرده من عضلة القلب، وبقاء الخلية، عن طريق الإفراج عن عامل النمو الذي يشبه الانسولين (IGF) على مدى فترة ممتدة. في نموذج الخنازير من عضلة القلب إصابة نقص التروية، ضخه، كان معدل engraftment أكثر من شقين أكبر عندماكانت تدار الخلايا مع التصحيح التي تحتوي على خلوى مقارنة مع الخلايا دون التصحيح، والمعاملة مع كل من الخلايا والتصحيح، ولكن ليس مع الخلايا وحدها، كان مرتبطا مع تحسينات كبيرة في وظيفة القلب وحجم احتشاء.

المقدمة

الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها الإنسان (hiPSCs) هي من بين العوامل الواعدة لعلاج الخلايا على التجدد لأنها يمكن أن تكون متباينة في مجموعة ويحتمل أن تكون غير محدودة وكمية من الخلايا التي لا يرفضها الجهاز المناعي للمريض. ومع ذلك، قدرتها على النسخ المتماثل الذات والتمايز يمكن أن يؤدي أيضا إلى تشكيل الورم، وبالتالي تحتاج إلى أن تكون متمايزة تماما في أنواع معينة من الخلايا، مثل العضلية (CMS)، والخلايا البطانية (ECS)، وخلايا العضلات الملساء hiPSCs (SMCS )، قبل الإدارة. واحد من أبسط والأكثر شيوعا أساليب إدارة الخلية هو حقن داخل عضلة القلب مباشرة، ولكن عدد الخلايا المزروعة التي المغروسة من قبل الأنسجة القلبية المحلية منخفضة بشكل استثنائي. الكثير من هذا الاستنزاف يمكن أن يعزى إلى البيئة السامة للخلايا الأنسجة الدماغية. ومع ذلك، عندما كانت الفئران الخلايا الجذعية الجنينية (المجالس الاقتصادية والاجتماعية) حقنها مباشرة في عضلة القلب من قلوب لم يصب، سنلي ~ 40٪ من 5 ملايين الخلايا تسليمها تم الاحتفاظ لمدة 3-5 ساعة 1، مما يشير إلى أن نسبة كبيرة من الخلايا تدار خرجت موقع الإدارة، ربما لأنهم يحرمونهم من خلال المسار الإبرة من الضغوط العالية التي تنتج أثناء تقلص عضلة القلب.

هنا، فإننا نقدم طرق جديدة وإلى حد كبير أكثر كفاءة لتوليد العضلية المستمدة hiPSC (hiPSC-CMS) 2، والخلايا البطانية (hiPSC-ECS) 3، وخلايا العضلات الملساء (SMCS) 4. والجدير بالذكر أن هذا البروتوكول hiPSC-SMC هو اول محاولة لتقليد مجموعة واسعة من الخصائص المورفولوجية والوظيفية لوحظ في الجسدية SMCS 5 عن طريق توجيه الخلايا نحو SMC النمط الظاهري في الغالب الاصطناعية أو مقلص. ونحن نقدم أيضا وسيلة لتسليم خلية التي تعمل على تحسين معدل engraftment من حقن الخلايا عن طريق إنشاء التي تحتوي على خلوى الفيبرين صatch على موقع الحقن. ويبدو أن التصحيح لتحسين كل من الاحتفاظ خلية عن طريق ختم المسار إبرة لمنع الخلايا من الخروج من عضلة القلب، وبقاء الخلية، عن طريق الإفراج عن عامل النمو الذي يشبه الانسولين (IGF) على مدى ثلاثة أيام على الأقل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

يتم تنفيذ كافة الإجراءات التجريبية وفقا للمبادئ التوجيهية الحيوان من جامعة ألاباما في برمنغهام.

1. التفريق hiPSCs إلى hiPSC-مضادة

  1. معطف الآبار من لوحة 6 جيدا مع انخفاض النمو عامل تبريد قبل خليط من البروتين هلامي عند 4 درجة مئوية لمدة ليلة وضحاها. نضح خليط من البروتين هلامي قبل الاستخدام. البذور وhiPSCs على لوحات مطلية مسبقا، والثقافة الخلايا (1 × 10 5 خلية لكل بئر) في 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية في mTeSR1 ملحق المتوسط مع 10 ميكرومتر ROCK المانع.
  2. تحديث المتوسطة يوميا حتى الخلايا تصل إلى 90٪ التقاء. ثم، إضافة خفض النمو عامل خليط من البروتين هلامي إلى متوسطة (0.5 ملغ هلامي خليط من البروتين لكل لوحة 6 جيدا، 2 مل المتوسطة لكل بئر)، وثقافة الخلايا لمدة 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية يومين آخرين.
    1. لتحل محل المتوسطة، وتمتص بلطف من المتوسط ​​من طبق بتري عبر فراغ معمن لمس الخلايا، وإضافة وسيلة جديدة باستخدام ماصة نقل.
  3. بدء المفاضلة عن طريق استبدال المتوسطة مع RPMI1640 تستكمل مع نمو عامل تخفيض خليط من البروتين هلامي، B27 دون الانسولين، و 100 نانوغرام / مل Activin A؛ ثقافة الخلايا في 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
  4. استبدال المتوسطة مع RPMI1640 التي تم تستكمل مع B27 دون الانسولين، 10 نانوغرام / مل بروتين morphogenic العظام 4 (BMP-4)، و 10 مل عامل نانوغرام / الأساسي نمو الخلايا الليفية (bFGF)؛ ثقافة الخلايا في 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية لمدة 96 ساعة.
  5. استبدال المتوسطة مع RPMI1640 تستكمل مع B27 ومواصلة ثقافة الخلايا في 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية. تحديث المتوسط ​​كل 3 أيام.
  6. مراقبة مجموعات من التعاقد الخلايا تحت المجهر ~ 3 أيام بعد بدء التمايز. جمع الكتل ~ 7 أيام بعد أن لاحظت أولا تقلصات وغسلها في هانكس محلول ملحي متوازن.
    1. فصل من خلايا عنقودية في لوحة التي يحتضنها منهم في المخزن هانكس تحتوي على 100 وحدة / مل كولاجيناز الرابع لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع طيف تهتز. ثم، تضاف 0.25٪ التربسين في ثنائي أمين الإيثيلين رباعي حمض الخل (EDTA) لمدة 5 دقائق.
    2. تحييد الحل الانزيم مع 10٪ مصل بقري جنيني في RPMI / متوسطة B27 ثم resuspend الخلايا في RPMI / B27 المتوسطة.
    3. حساب عدد الخلايا عدادة الكريات. ثقافة الخلايا على أطباق 10 سم في 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية لمدة لا تقل عن 3 ساعة، والتي سوف تسمح للخلايا غير cardiomyocyte التمسك سطح الطبق الثقافة.
  7. جمع تعليق خلية، والذي يحتوي على hiPSC-مضادة، والحفاظ على الخلايا (حوالي 1 × 10 6 خلايا في صحن 10 سم) من خلال زرع لهم على سطح المغلفة بروتين خليط هلامي.

2. التفريق hiPSCs إلى hiPSC-ECS

  1. فصل السكان hiPSC إلى الخلايا وحيدة التي يحتضنها عشرم مع مخلبية وكيل في 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. نقل الخلايا إلى أنبوب الطرد المركزي 15 مل تحتوي على المتوسط ​​mTeSR1 جديدة.
  2. تدور أسفل الخلايا في 200 x ج لمدة 5 دقائق. resuspend الخلايا في mTeSR1 المتوسطة تستكمل مع 10 ميكرومتر ROCK المانع. تحديد كثافة الخلايا مع عدادة الكريات.
  3. إضافة 250 ميكرولتر من 20 وحدة المعاهد الوطنية للصحة / حل الثرومبين مل إلى جانب واحد من 24 لوحة جيدا.
  4. إضافة 1 × 10 6 hiPSCs إلى 250 ميكرولتر من 12.5 ملغ / مل حل الفيبرينوجين. وإضافة 250 ميكرولتر من حل الفيبرينوجين التي تحتوي على الخلية إلى الثرومبين محملة جيدا. مراقبة خليط يصلب لتشكيل سقالة الفيبرين التي تحتوي على hiPSC داخل دقيقة.
  5. نقل عزز، السقالات التي تحتوي على خلية في الآبار لوحة 6 جيدا مع ملقط غطاء زجاجي، والشروع في التمايز عن طريق زراعة السقالات في 2 مل EBM2 المتوسطة تستكمل مع 2٪ B27 دون الانسولين، activin-A (50 نانوغرام / مل)، و BMP-4 (25 نانوغرام / مل) لمدة 24 ساعة على 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية.
    1. استبدال المتوسطة عن طريق مص بلطف من المتوسط ​​القديم عبر فراغ دون لمس الخلايا. إضافة الوسيلة الجديدة EBM2 تستكمل مع B27 دون الانسولين، وعامل النمو البطاني الوعائي (VEGF، 50 نانوغرام / مل)، الإريثروبويتين (EPO، 100 نانوغرام / مل)، وتحويل β1 عامل النمو (TGFβ1، 10 نانوغرام / مل)، وثقافة السقالات في 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
    2. تحديث السقالات في 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة أخرى متوسطة والثقافة؛ ثم، والإفراج عن الخلايا من سقالة بإضافة 200 U كولاجيناز الرابع (100 U / مل) إلى المتوسطة.
    3. تدور باستمرار الخلايا بعد إطلاق سراحهم. استبدال المتوسطة مع 2 مل EGM2-MV المتوسطة تستكمل مع 2٪ من B27، VEGF-A (50 نانوغرام / مل)، وSB-431542 (10 ميكرومتر). تحديث المتوسطة كل يومين.
    4. وبعد حوالي 10 أيام (أي في يوم 14 ~ بعد بدء التمايز)، فصل الخلايا مع 100 U / مل كولاجيناز الرابع، عزل حIPSC-ECS من السكان من الخلايا المتمايزة عن طريق التدفق الخلوي تحليل للتعبير عن البروتينات علامة EC-محددة (على سبيل المثال، CD31، CD144) 3.
    5. توسيع معزولة hiPSC-ECS عبر بروتوكول المعمول 3.

3. التفريق hiPSCs إلى hiPSC-SMCS

  1. البذور وhiPSCs على لوحات التي تم المغلفة مع خليط من البروتين هلامي، والثقافة الخلايا في mTeSR1 المتوسطة بنسبة 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية، مع تغييرات المتوسطة اليومية، حتى متموجة (~ 2 أيام).
  2. بدء التمايز إلى خلايا أرومية متوسطة-النسب عن طريق زراعة الخلايا مع CHIR99021 (5 ميكرومتر) وBMP-4 (10 نانوغرام / مل) في RPMI1640 متوسطة و 2٪ B27 بالإضافة إلى الأنسولين لمدة 3 أيام.
  3. لإنتاج hiPSC-SMCS مع النمط الظاهري في الغالب الاصطناعية:
    1. ثقافة الخلايا مع VEGF-A (25 نانوغرام / مل)، β عامل نمو الخلايا الليفية (FGFβ، 5 نانوغرام / مل) في RPMI1640 لي dium، و 2٪ B27 ناقص الأنسولين في 5٪ CO 2 و 37 درجة مئوية لمدة 4 أيام.
    2. ثقافة الخلايا في VEGF-A (25 نانوغرام / مل)، FGFβ (5 نانوغرام / مل) في المتوسط RPMI1640، و 2٪ B27 بالإضافة إلى الأنسولين في 5٪ CO 2 و 37 ° مئوية لمدة 2 أيام.
    3. ثقافة الخلايا في β عامل النمو المشتق من الصفيحات (PDGFβ، 10 نانوغرام / مل)، TGFβ (3 نانوغرام / مل) في RPMI1640، و 2٪ B27 بالإضافة إلى الأنسولين في 5٪ CO 2 و 37 ° مئوية لمدة 4 أيام.
  4. لإنتاج hiPSC-SMCS مع النمط الظاهري في الغالب مقلص:
    1. ثقافة الخلايا لمدة 4 أيام مع VEGF-A (25 نانوغرام / مل)، وFGFβ (5 نانوغرام / مل) في RPMI1640 و 2٪ B27 ناقص الأنسولين.
    2. ثقافة الخلايا لمدة 7 أيام مع PDGFβ (5 نانوغرام / مل)، وTGFβ (2.5 نانوغرام / مل) في RPMI1640 و 2٪ B27 بالإضافة إلى الأنسولين.
  5. تنقية النهائي السكان hiPSC-SMC بواسطة زراعة الخلايا في اللاكتات (4 مم) التي تحتوي على RPMI1640 المتوسطة الأيض الخاصة ب ~ 6 أيام.
jove_title "> 4. إنشاء المجهرية التي تحتوي على IGF

  1. نسخن زيت الزيتون إلى 45 درجة مئوية في حمام مائي.
  2. الحرارة 5 مل من 10٪ من محلول الجيلاتين إلى 50 درجة مئوية.
  3. إضافة الجيلاتين إلى زيت الزيتون، وإثارة، ثم تبرد بسرعة إلى 5 درجات مئوية وذلك بإضافة الثلج إلى ماء الحمام.
  4. بعد خمسة وعشرين دقيقة، إضافة المبردة (4 درجة مئوية) الأسيتون لزيت الزيتون للحث على تشكيل microsphere.
  5. الحفاظ على درجة حرارة 5 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. ثم، وجمع المجهرية، غسلها 5 مرات مع الأسيتون تبرد قبل لإزالة زيت الزيتون، والسماح لهم الهواء الجاف في 4 درجات مئوية.
  6. Resuspend والمجهرية في حل 70٪ من الإيثانول و 0.25٪ غلوتارالدهيد بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية للحث عبر ربط، ثم تحييد الخليط مع 100 ملي الجلايسين.
  7. تحميل IGF في المجهرية عن طريق خلط 5 ملغ المجهرية مع 15 ميكرولتر المقطر H 2 O تحتوي على 5 ميكروغرام IGF و 0.1٪ زلال المصل البقري لمدة 30 دقيقة.

5. إنشاء تصحيح على الموقع من الإصابات وحقن خلايا

  1. تعليق المستمدة hiPSC-مضادة (2000000)، SMCS (1000000)، وECS (1000000) معا في 1 مل الحد الأدنى الضروري المتوسطة (MEM).
  2. تعليق 5 ملغ من المجهرية في 1 مل من محلول الفيبرينوجين (25 ملغ / مل).
  3. ملء حقنة واحدة مع الحل التي تحتوي على الخلية، حقنة أخرى مع الحل الفيبرينوجين / microsphere، وحقنة ثالثة مع 1 مل من محلول الثرومبين (80 وحدة المعاهد الوطنية للصحة / مل، تستكمل مع 2 ميكرولتر 400 ملم CaCl 2 و 200 ملي ε أمينوكابرويك حامض).
  4. جراحيا لحث احتشاء عضلة القلب في القلب الخنازير عن طريق ربط الأمامي الأيسر الشريان التاجي النازل كما هو موضح قبل 2.
    ملاحظة: في وجيزة، والخنازير يوركشاير الإناث (~ 13 كجم، 45 يوما من العمر) ومخدرا مع الحقن العضلي من Telazol / زيلازين (4.4 ملغ / كلغ)، ومدخل أنبوب تحت التخدير العام مع isoflurane (0،5-5٪). وinterc 4 تشرينيتم تنفيذ بضع الصدر ostal وترك الأمامي تنازلي الشريان التاجي هو عرضة للخطر. والمغطي الشريان التاجي عن طريق رباط لمدة 60 دقيقة ثم يتم إزالة ربطة. يتم تنفيذ إزالة الرجفان الكهربائية الفورية في حالة الرجفان البطيني.
  5. وضع حلقة بلاستيكية معقمة (~ 2.5 سم) على النخاب المنطقة محتشية من قلوب الخنازير، ومن ثم حقن في وقت واحد الحلول microsphere / الفيبرينوجين والثرومبين إلى الحلبة.
  6. السماح للخليط ليصلب (~ 30 ثانية)، ثم أدخل إبرة الحقنة التي تحتوي على الخلية من خلال خليط طدت في عضلة القلب محتشية وحقن الخلايا. إغلاق طبقات العضلات والأنسجة تحت الجلد، وجدار الصدر مع 3-0 أو 2-0 Monocryl خياطة اعتمادا على حجم الحيوان. البوبرينورفين 0،01-0،02 ملغ / كغ الحقن العضلي كل 8 ساعات سيتم استخدامها للسيطرة على الألم لمدة 3 أيام الأولى بعد الجراحة.
  7. تقييم وظيفة القلب باستخدام الرنين المغناطيسي القلبالتصوير (MRI) قبل إجراء العمليات الجراحية، أسبوع واحد وأربعة أسابيع بعد العملية الجراحية 2، 3، 4. بعد دراسات التصوير بالرنين المغناطيسي النهائية، التضحية الحيوانية ومعالجة قلوبهم للعلم الأنسجة والتحليل الجزيئي 2، 3، 4.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

توصيف متباينة hiPSC-مضادة، -ECs، و-SMCs

القدرة التفاضلية للhiPSCs قيمت 2، 3، 4. تدفق تحليل الخلوي من التروبونين القلبي T التعبير (cTnT) تشير الى ان نقاوة السكان hiPSC-CM النهائي يمكن أن يتجاوز 90٪ (الشكل 1A، 1B، لوحة B1). ما ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تحسين الإنتاجية / الطهارة من hiPSC-مضادة

البروتوكولات التقليدية للتمييز الخلايا الجذعية البشرية في مضادة غالبا ما تكون محدودة بانخفاض المحصول والنقاء. على سبيل المثال، فقط 35-66٪ من HESC-مضادة الحصول عليها عن طريق فصل Percoll وتشكيل هيئة القلب أعرب بطيئة الميوسين السلسلة الثقيلة أو cTnT 6. نقاء متباينة السكان hiPSC-CM يمكن زيادتها بشكل كبير عن طريق اختيار للتعبير عن الجينات مراسل التي تم ربطه...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من خلال منح خدمة الصحة العامة الأمريكية NIH RO1s HL67828 و HL95077 و HL114120 و UO1 HL100407-project 4 (إلى JZ) ، ومنحة تطوير علماء جمعية القلب الأمريكية (16SDG30410018) وجائزة قسيمة البحث من جامعة ألاباما في مركز برمنغهام للعلوم السريرية والتحويلية (إلى WZ).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي>بروتوكول القسم 1< / strong>
mTeSR1تقنيات الخلايا الجذعيةالمتوسطة 5850
علم الحياة المخفض لعاملالنمو 356231
Y-27632تقنيات الخلايا الجذعية72304
B27 ، خالية من المصلفيشر17504044
RPMI1640فيشر العلمي11875-119
Activin AR& د338-AC-010
BMP-4R & د314-BP-010
bFGFR & D232-FA-025
كولاجيناز IVفيشر العلميNC0217889
محلول الملح المتوازن هانكس (سكر العنب ، KCl ، KH2< / sub>PO4< / sub> ، NaHCO3< / sub> ، NaCl ، Na 2< / sub>HPO4< / sub> اللامائية)فيشر 14175079
الجنينفيشر العلمي10438018
6 آبار لوحةكورنينج لايف ساينس356721
طبق 10 سمكورنينج لايف ساينس354732
حاضنة خليةباناسونيكMCO-18AC
قوي>بروتوكول القسم 2< / قوي>
فيرسنفيشر 15040066
العلميسيجما ألدريتشF8630-5g
الثرومبينسيجما ألدريتشT7009-1KU
EMB2 متوسطلونزاCC-3156
VEGFProSpec-TanyCYT-241
EPOLife TechnologiesPHC9431
TGF- &# 946;Peprotech100-21C
EGM2-MV متوسطLonzaCC-4147
SB-431542SelleckchemS1067
CD31BD BioscienceBDB555445
CD144BD Bioscience560411
15 مل أنبوب الطرد المركزيفيشر Scientific12565269
EppendorffEppendorf5702R
Protocol القسم 3< / strong>
CHIR99021الخلايا الجذعية720542
PDGF- &# 946 ؛ProspecCYT-501-10ug
< قوي > القسم 4 < / قوي >
زيت الزيتونسيجما ألدريتشO1514
الجيلاتينسيجما ألدريتشG9391
الأسيتونسيجما ألدريتش179124
الإيثانولفيشر BP2818100
العلميجلوتارالديهايدسيجما ألدريتشG5882
جلايسينسيجما ألدريتشG8898
IGFR & D291-G1-01M
ألبومين مصل الأبقارفيشر 15561020
العلمي لوحة التدفئةفيشر العلميSP88850200
حمام مائيفيشر العلمي15-462-10Q
بروتوكول القسم 5< / strong>
CaCl2< / sub>Sigma-Aldrich223506
&# 949 ؛ -حمض أمينوكابرويكسيجما ألدريتشA0420000
MEM متوسطفيشر ساينتفيك12561-056
حقنةفيشر 1482748
جهاز التنفس الصناعي التخديرDatex-Ohmeda47810
جهاز التنفس الصناعي للتخديرأوهايو ميديكالV5A
مزيل الرجفانPhysiol ControlLIFEPAK 15
1.5 T MRIجنرال إلكتريكSigna Horizon LX
7 T MRIسيمنز10018532
الجادولينيوم التباين المتوسط (Magnevist)Berlex50419-188-02
2-0 خياطة حريريةEthilon685H
3-0 خياطة حريريةEthilon622H
3-0 خياطة أحادية الشعيراتEthilon627H
العلمي الأبقار مصل <الفيبرينوجين تقنيات علمية

المراجع

  1. Qiao, H., et al. Death and proliferation time course of stem cells transplanted in the myocardium. Mol Imaging Biol. 11 (6), 408-414 (2009).
  2. Ye, L., et al. Cardiac repair in a porcine model of acute myocardial infarction with human induced pluripotent stem cell-derived cardiovascular cells. Cell Stem Cell. 15 (6), 750-761 (2014).
  3. Zhang, S., Dutton, J. R., Su, L., Zhang, J., Ye, L. The influence of a spatiotemporal 3D environment on endothelial cell differentiation of human induced pluripotent stem cells. Biomaterials. 35 (12), 3786-3793 (2014).
  4. Yang, L., et al. Differentiation of Human Induced-Pluripotent Stem Cells into Smooth-Muscle Cells: Two Novel Protocols. PLoS One. 11 (1), e0147155(2016).
  5. Rensen, S. S., Doevendans, P. A., van Eys, G. J. Regulation and characteristics of vascular smooth muscle cell phenotypic diversity. Neth Heart J. 15 (3), 100-108 (2007).
  6. Xu, C., Police, S., Hassanipour, M., Gold, J. D. Cardiac bodies: a novel culture method for enrichment of cardiomyocytes derived from human embryonic stem cells. Stem Cells Dev. 15 (5), 631-639 (2006).
  7. Anderson, D., et al. Transgenic enrichment of cardiomyocytes from human embryonic stem cells. Mol Ther. 15 (11), 2027-2036 (2007).
  8. Huber, I., et al. Identification and selection of cardiomyocytes during human embryonic stem cell differentiation. FASEB J. 21 (10), 2551-2563 (2007).
  9. Kita-Matsuo, H., et al. Lentiviral vectors and protocols for creation of stable hESC lines for fluorescent tracking and drug resistance selection of cardiomyocytes. PLoS One. 4 (4), e5046(2009).
  10. Choi, K. D., et al. Hematopoietic and endothelial differentiation of human induced pluripotent stem cells. Stem Cells. 27 (3), 559-567 (2009).
  11. Woll, P. S., et al. Wnt signaling promotes hematoendothelial cell development from human embryonic stem cells. Blood. 111 (1), 122-131 (2008).
  12. Li, Z., Hu, S., Ghosh, Z., Han, Z., Wu, J. C. Functional characterization and expression profiling of human induced pluripotent stem cell- and embryonic stem cell-derived endothelial cells. Stem Cells Dev. 20 (10), 1701-1710 (2011).
  13. Rufaihah, A. J., et al. Endothelial cells derived from human iPSCS increase capillary density and improve perfusion in a mouse model of peripheral arterial disease. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (11), e72-e79 (2011).
  14. Beauchamp, J. R., Morgan, J. E., Pagel, C. N., Partridge, T. A. Dynamics of myoblast transplantation reveal a discrete minority of precursors with stem cell-like properties as the myogenic source. J Cell Biol. 144 (6), 1113-1122 (1999).
  15. Qu, Z., et al. Development of approaches to improve cell survival in myoblast transfer therapy. J Cell Biol. 142 (5), 1257-1267 (1998).
  16. Tang, X. L., et al. Intracoronary administration of cardiac progenitor cells alleviates left ventricular dysfunction in rats with a 30-day-old infarction. Circulation. 121 (2), 293-305 (2010).
  17. Zeng, L., et al. Bioenergetic and functional consequences of bone marrow-derived multipotent progenitor cell transplantation in hearts with postinfarction left ventricular remodeling. Circulation. 115 (14), 1866-1875 (2007).
  18. Davis, M. E., et al. Local myocardial insulin-like growth factor 1 (IGF-1) delivery with biotinylated peptide nanofibers improves cell therapy for myocardial infarction. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (21), 8155-8160 (2006).
  19. Li, Q., et al. Overexpression of insulin-like growth factor-1 in mice protects from myocyte death after infarction, attenuating ventricular dilation, wall stress, and cardiac hypertrophy. J Clin Invest. 100 (8), 1991-1999 (1997).
  20. Wang, L., Ma, W., Markovich, R., Chen, J. W., Wang, P. H. Regulation of cardiomyocyte apoptotic signaling by insulin-like growth factor I. Circ Res. 83 (5), 516-522 (1998).
  21. Chong, J. J., et al. Human embryonic-stem-cell-derived cardiomyocytes regenerate non-human primate hearts. Nature. 510 (7504), 273-277 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

خلايا جذعية متعددة القدراتتمايز الخلايا العضلية القلبيةتوليد الخلايا البطانيةإنتاج خلايا العضلات الملساءنموذج إصلاح عضلة القلبرقعة تحتوي على سيتوكيناتتقنية حقن الخلاياتحليل قياس التدفق الخلويتروپونين ت القلبينموذج نقص تروية الخنازير
المحفزة الخلايا الجذعية المشتقة خلايا القلب لإصلاح عضلة القلب
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.