إعداد شرائح أفقية من الكبار شبكية العين الفأر للدراسات الكهربية

ملخص

وضعنا إعداد شريحة الأفقي للشبكية العين الكبار الثدييات مع الطائرة من باجتزاء موازية لسطح الشبكية. لم اقتطاع الحقول الجذعية من الخلايا العصبية للشبكية موجهة nonradially، والسماح للدراسة معالجة الإشارات مع تقنيات التصحيح، المشبك والتصوير.

الملخص

يتم وضع الاستعدادات شريحة رأسية أيضا لدراسة الدوائر ونقل الإشارات في الكبار شبكية الثدييات. الطائرة من باجتزاء في هذه الاستعدادات هي عمودي على سطح الشبكية، مما يجعلها مثالية لدراسة الخلايا العصبية الموجهة شعاعيا مثل خلايا مستقبلة للضوء والخلايا القطبين. ومع ذلك، فإن العرش شجيري كبيرة من الخلايا الأفقية، وخلايا عديم الاستطالات واسعة المجال، وخلايا العقدة هي في معظمها مبتورة، وترك انخفضت بشكل ملحوظ النشاط متشابك في هذه الخلايا. في حين أن خلايا العقدة والخلايا عديم الاستطالات المشردين يمكن دراستها في إعداد كله محمولة على شبكية العين، والخلايا الأفقية والخلايا عديم الاستطالات تقع في الطبقة النووية الداخلية يمكن الوصول إليها لأقطاب في أنسجة شبكية العين كلها سيئة فقط.

لتحقيق أقصى قدر من سهولة الوصول وسلامة متشابك، وضعنا إعداد شريحة الأفقي للشبكية العين الماوس، ودرس نقل الإشارات في المشبك بين خلايا مستقبلة للضوء والأفقيالخلايا. باجتزاء الأفقي يسمح (1) التعرف البصري سهلة واضح لا لبس فيه من أجسام الخلايا الأفقية لاستهداف الكهربائي، و (2) الحفاظ على حقول شجيري الخلايا الأفقية الممتدة، كشرط أساسي لحالها وظيفية مخروط مدخلات متشابك إلى التشعبات الخلية الأفقية.

الخلايا الأفقية من شرائح أفقية أظهرت النشاط متشابك منشط في الظلام، وأنها استجابت لإطلاع ومضات من الضوء مع الحد من الداخل النشاط متشابك الحالي وتقلص. تشير الأدلة Immunocytochemical أن ما يقرب من جميع المخاريط في مجال شجيري خلية الأفقية تضع نقاط الاشتباك العصبي مع التشعبات في الطرفية. لذلك مناسبة لإعداد شريحة الأفقي كذلك دراسة الخصائص الفسيولوجية للالخلايا العصبية للشبكية ممتدة أفقيا وكذلك نقل الإشارات الحسية والتكامل بين نقاط الاشتباك العصبي المحدد.

المقدمة

يتم ترميز المعلومات البصرية كنمط الديناميكي المكانية والزمانية لتفعيل مبصرة، والمشبك الشريط بين خلايا مستقبلة للضوء والخلايا العصبية من الدرجة الثانية قرر نقل المصب من المعلومات البصرية. إعداد شريحة الرأسي للشبكية الثدييات هو أداة قيمة للغاية لدراسة معالجة الإشارات في مسارات العمودي، أي بين خلايا مستقبلة للضوء والخلايا القطبين، وبين خلايا ثنائية القطب وبعض أنواع الخلايا عديم الاستطالات ^{1، 2، 3، 4.}

ومع ذلك، باجتزاء الرأسي يسب....

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للمبادئ التوجيهية لالتجارب على الحيوانات الصادرة عن جمهورية ألمانيا الاتحادية.

ملاحظة: نظرا لأن أنسجة الشبكية ستكون خالية من الأكسجين خلال أجزاء طويلة من هذا الإجراء، وينبغي إجراء جميع الخطوات من في أسرع وقت ممكن. وينبغي أن تكون الفئران داكنة تكييفها لا يقل عن 3 ساعة قبل تشريح. لتجنب ضوء التكيف من شبكية العين، وإعداد وينبغي أن يتم تشريح تحت ضوء أحمر خافت.

1. إعداد وسائل الإعلام وغيرها من المواد الكيميائية

النتائج

في شرائح أفقية من شبكية العين الماوس، يمكن تحديد أجسام الخلايا الأفقية بسهولة وفقا لالتشكل فريدة من نوعها مع العديد من التشعبات الأولية الناشئة من المضلع خلايا الجسم (الشكل 1A). وكانت أجسام الخلايا الأفقية الموجودة بالقرب من سطح شريحة يمكن الوصول إليها بشكل روتيني لأقطاب التصحيح، المشبك. خلال التسجيلات، امتلأت الخلايا مع صبغة الفلورسنت، وكشف عن تشجر شجيري المعقدة، والتي تشبه كثيرا مورفولوجيا الخلايا الحاملة للمحور عصبي الأفقي.......

المناقشة

وعلى النقيض من شرائح عمودية، مورفولوجيا شجيري من الخلايا العصبية الموجهة شعاعيا مثل الخلايا الأفقية وخلايا عديم الاستطالات والحفاظ عليها جيدا. مقارنة الاستعدادات شبكية العين بأكملها، هذين النوعين من الخلايا يمكن الوصول إليها بسهولة لالميكروية ويمكن دراستها من قبل كل من التقنيات الكهربية والتصوير. هنا، ركزنا على شبكية العين الخارجي؛ ومع ذلك، فقد تم الإبلاغ عن نهج مماثل خاصة بالنسبة للخلايا عديم الاستطالات الشبكية الداخلية ^10.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
أميس متوسط	سيجما	A1420
بيكربونات الصوديوم	سيجما	S5761
هيبس	سيجما	H3375
كربوجين	الهواء
الاغاروز	سيجما	A9045
35 ملم طبق بتري (بلاستيك)	Nunc Thermofisher	150318
زجاج بتري طبق	كيمولين	50-1470-40
إيزوفلوران	مستشفى
شفرة حاقن Vibratome	Biosystems	39053250
Vibratome	Leica Microsystems	VT1200
Vibrocheck	Leica Microsystems
حمام مائي بالميكروويف
ملقط
20 جرام إبر
مقص
شفرات
مجهر
بلاستيك باستور ماصة
			زجاجية باستور

السائل مستوصفجامعةزنبركيمشرط منحنيةستيريو