يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

ل

6.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/55183

⸱

فبراير 9, 2017

 ,  , 
1Biomedical Engineering, Tulane University

في هذه المقالة

ملخص

يتضمن تكوين الأوعية الدموية

تفاعلات متعددة الخلايا ومتعددة الأنظمة تحتاج إلى التحقيق في بيئة ذات صلة من الناحية الفسيولوجية. الهدف من هذه الدراسة هو إظهار قدرة نموذج ثقافة المساريق للفئران على إجراء مقارنات بفاصل زمني لشبكات الأوعية الدموية الدقيقة السليمة أثناء تكوين الأوعية.

الملخص

الأوعية الدموية، الذي يعرف بأنه نمو أوعية دموية جديدة من السفن الموجودة من قبل، ينطوي على الخلايا البطانية، pericytes، وخلايا العضلات الملساء، الخلايا المناعية، والتنسيق مع الأوعية اللمفاوية والأعصاب. الخلية متعددة، والتفاعلات المتعددة نظام تستلزم التحقيق في الأوعية الدموية في بيئة ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية. وهكذا، في حين أن استخدام في المختبر نماذج لزراعة الخلايا قدمت رؤى الآلية، نقد شيوعا هو أنها لا ألخص التعقيدات المرتبطة مع شبكة الاوعية الدموية الدقيقة. والهدف من هذا البروتوكول هو لإثبات القدرة على إجراء مقارنات الوقت الفاصل بين شبكات الاوعية الدموية الدقيقة على حالها قبل وبعد تحفيز الأوعية الدموية في أنسجة الفئران مساريق مثقف. الأنسجة مثقف تحتوي على شبكات الاوعية الدموية الدقيقة التي تحافظ على التسلسل الهرمي بهم. وضع العلامات المناعى يؤكد وجود خلايا بطانة الأوعية الدموية، والخلايا العضلية الملساء، pericytes والأوعية الدموية والأوعية اللمفاوية. فيddition، واصفة الأنسجة مع BSI-كتين يمكن مقارنة الوقت الفاصل بين المناطق الشبكة المحلية قبل وبعد التحفيز مصل أو عامل النمو يتسم بزيادة تنتشر الشعرية وكثافة السفينة. في مقارنة لنماذج ثقافة الخلية المشتركة، وهذه الطريقة توفر أداة لدراسات الخلايا البطانية النسب والأنسجة التقييم المحددة المخدرات عائية في شبكات الاوعية الدموية الدقيقة ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية.

المقدمة

نمو شبكة الاوعية الدموية الدقيقة، وإعادة عرض وقواسم مشتركة من أجل وظيفة الأنسجة، والتئام الجروح، وأمراض متعددة وعملية رئيسية هي الأوعية الدموية، الذي يعرف بأنه نمو أوعية دموية جديدة من القائمة 1 و 2. لهندسة الأنسجة سفن جديدة أو تصميم العلاجات عائية القائمة على فهم أهمية ديناميات الخلوية العاملة في الأوعية الدموية أمر بالغ الأهمية. ومع ذلك، فإن هذه العملية معقدة. يمكن أن تختلف في مواقع محددة داخل شبكة الاوعية الدموية الدقيقة ويشمل أنواع خلايا متعددة (أي الخلايا البطانية، وخلايا العضلات الملساء، pericytes، الضامة، والخلايا الجذعية) وأنظمة متعددة (شبكات اللمفاوية والشبكات العصبية). على الرغم من أن في المختبر نماذج ساهمت الى حد كبير في دراسة العلاقة بين الخلايا المختلفة المشاركة في الأوعية الدموية 3، يمكن أن تقوض أهميتها الفسيولوجية بسبب thei ص تعقيد محدود، وحقيقة أنها لا تعكس بشكل وثيق سيناريو في الجسم الحي. للتغلب على هذه القيود، ونظم ثقافة ثلاثية الأبعاد 3، المجراة سابقا نماذج الأنسجة 4، أنظمة الموائع الدقيقة 5 و 6 و 7 النماذج الحسابية تم تطويرها وتقديمها في السنوات الأخيرة. ومع ذلك، لا يزال هناك حاجة لنموذج مع القدرة على مرور الزمن لتحقيق الأوعية الدموية في شبكات الاوعية الدموية الدقيقة سليمة خارج الحي. وإنشاء نماذج الوقت الفاصل جديدة للدراسات الأوعية الدموية مع هذا المستوى من التعقيد توفر أداة لا تقدر بثمن لفهم الآليات الكامنة وراء تنظيم الأوعية الدموية وتحسين العلاجات.

نموذج محتمل تمكن التحقيق المجراة سابقا من الأوعية الدموية عبر شبكة الاوعية الدموية الدقيقة سليمة والفئران نموذج الثقافة مساريق> 8. في الأعمال الأخيرة، لقد أثبتنا أن الدم وشبكات الاوعية الدموية الدقيقة اللمفاوية تبقى قابلة للحياة بعد الثقافة. الأهم من ذلك، نموذج ثقافة مساريق الفئران يمكن استخدامها لتحقيق الوظيفية التفاعلات خلية حوطية البطانية الخلايا والدم وصلات الخلايا البطانية اللمفاوية، والوقت الفاصل بين التصوير. الهدف من هذه الورقة هو تقديم لدينا بروتوكول للأسلوب التصوير في الوقت الفاصل بين. وثيقتنا نتائج ممثل أنواع الخلايا المتعددة التي تبقى قابلة للحياة بعد تحفيز الأوعية الدموية مع الدم وتقديم أمثلة على استخدام هذا الأسلوب لتحديد كمية الأنسجة ردود عائية محددة وكذلك البطانية دراسات تتبع الخلية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع التجارب والإجراءات الحيوانية من قبل لجنة جامعة تولين في المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام (IACUC).

1. إعداد الإجراءات الجراحية

  1. أدوات الأوتوكلاف والمعدات الجراحية والمستلزمات الثقافة قبل الجراحة. إمدادات جراحية لكل فأر ما يلي: 1 ثنى (1)، وثنى مع قبل قطع حفرة (0.5 بوصة × 1.5 في) في الوسط، قطع من الشاش، و1 underpad ماصة. وتشمل الأدوات الجراحية: 1 مشرط بشفرة رقم 10، 2 ​​أزواج من ملاقط، وزوج من مقص غرامة. وتشمل الإمدادات ثقافة: 1 ثنى، 1 زوج من ملاقط، وأعدت إدراج لوحة 6 جيدا مع مرشحات البولي.
  2. تعقيم منصة شبكي، مرحلة الجراحية ومساحة الفوق الجراحي مع 70٪ من الإيثانول. الحفاظ على مرحلة جراحية في وعاء معقم حتى الاستخدام.
    1. إنشاء المرحلة الجراحية من خلال حفر على ما يقرب من 2 في موعد أقصاه 1 في حفرة في وسط طبق ثقافة 100 ملم. المقبل، واستخدام الصنفرة لتسهيلأي حواف حادة وإضافة طبقة من الغراء سيليكون لحواف الحفرة لخلق سطح أثار للأنسجة.
    2. بدلا من ذلك، تصميم المرحلة الجراحية باستخدام برامج CAD وجعل بنسبة 3-D الطباعة (الشكل 1).
  3. وضع underpad ماصة معقمة أسفل ويرسي قاعدة شبكي على أعلى من ذلك. وضع الستارة، دون حفرة قبل قطع، على وسادة ساخنة القادمة إلى underpad ماصة.
  4. قبل دافئة معقمة الفوسفات مخزنة المالحة (PBS)، وسائل الإعلام والمالحة إلى 37 درجة مئوية. وسائل الاعلام مكان وبرنامج تلفزيوني في أطباق ثقافة منفصلة فوق وسادة التدفئة ومكان المالحة في أنبوب مخروطي 50 مل إلى جانب الإعداد للعمليات الجراحية.
  5. تأكد من فتح جميع الطرود قبل بداية عملية جراحية لضمان التعامل عقيمة لجميع المواد. وترد قائمة كاملة من الأدوات المستخدمة في هذا الإجراء في جدول المواد والأدوات الجراحية محددة.

2. Mesenterذ الأنسجة حصاد

  1. استخدام الكبار فئران ويستار الذكور (350 ± 25 غرام؛ 6-8 أسابيع من العمر). يمكن أن تكون بديلا سلالات وأعمار الفئران الأخرى.
  2. تخدير الفئران عن طريق الحقن العضلي الكيتامين (80 ملغم / كغم من وزن الجسم) وزيلازين (8 ملغ / كغ من وزن الجسم). تأكيد الفئران تحت التخدير بواسطة معسر بين أصابع القدم للتحقق من استجابة رد الفعل. يجب أن يكون هناك شيء. تسكين وقائية لهذا الإجراء المحطة ليست ضرورية.
  3. حلق منطقة البطن وإزالة الشعر المتبقية باستخدام كريم إزالة الشعر. مسح الجلد في منطقة البطن مرتين مع 70٪ ايزوبروبيل تليها بوفيدون اليود. لمناديل وينبغي أن تبدأ الجراح في وسط الموقع الجراحي والانتقال إلى خارج منطقة المعدة بطريقة دائرية حتى لا تتداخل المناطق التي تم نقيت سابقا مع نفس قطعة من الشاش المعقم أو قطعة قطن معقمة. ثم نقل الحيوانات إلى الإعداد جراحية معقمة ووضع على قمة بلات شبكيشكل.
  4. باستخدام شفرة مشرط، وجعل 0.75 في - 1.25 في شق في القناة الهضمية التي تبدأ في 1 في أقل من القص. يجب الحرص على عدم ثقب الأمعاء أو مساريق (1 طبقة من الجلد (1)، طبقة من النسيج الضام، و1 طبقة من العضلات).
  5. وضع الستارة مع وجود ثقب قبل قطع أكثر من شق ووضع مرحلة جراحية معقمة فوق الستارة. ضمان محاذاة فتح مع شق. استخدام أدوات تطبيقها ذات الرؤوس القطن المعقم لتحديد وسحب الدقاق من خلال افتتاح المرحلة الجراحية.
  6. سحب 6-8 النوافذ المساريقي خلال المرحلة باستخدام أدوات تطبيقها من القطن ذات الرؤوس، ويجب الحرص على عدم لمس النوافذ (الشكل 1). وعادة ما يتم حصاد الأنسجة من منطقة الدقاق الأمعاء الدقيقة بدءا بالقرب من الأعور. إبقاء الأنسجة يتعرض رطبة مع ملحي معقم استعد حسب الحاجة باستخدام محقنة معقمة بالتنقيط الحل.
  7. الموت ببطء الفئران عن طريق الحقن داخل القلب من الصوديوم بنتوباربيتال (0.2 مل لكل فأر). قبل إزالة لينوافذ senteric، وضمان والموت الرحيم الفئران عن طريق تحسس القلب؛ يجب أن يكون هناك نبض.
  8. إزالة الأنسجة مساريق المطلوبة باستخدام ملاقط للاستيلاء على منصة الدهون ومقص غرامة لخفض النافذة. ترك الحدود من الدهون (2 ملم) حول النافذة. غسل الأنسجة مرة واحدة في درجة حرارة PBS العقيمة ومرة ​​واحدة في وسائل الإعلام.
  9. العودة الدقاق exteriorized إلى تجويف البطن والتخلص من الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية.

3. مساريق زراعة الأنسجة للدراسات الوقت الفاصل بين

  1. نقل الإمدادات تعقيمها الثقافة (انظر القسم 1.1) والأنسجة لغطاء تدفق الصفحي العقيمة.
  2. استخدام ملاقط لنقل كل الأنسجة فوق غشاء فلتر البولي. الأنسجة انتزاع بواسطة لوحة الدهون لتجنب إتلاف الأوعية الدموية.
  3. وسرعان ما انتشر في الأنسجة باستخدام لوحة الدهون، والحرص على عدم لمس النافذة. عكس إدراج مع الأنسجة في الجزء السفلي من لوحة 6 جيدا، وتغطي مع 3 مل من وسائل الاعلام (الشكل 1 ). وسائل الاعلام النموذجية المستخدمة لهذا الإجراء يشمل وسائل الإعلام الأساسية الدنيا (MEM) مع 1٪ البنسلين ستربتومايسين (PenStrep) و 10٪ مصل بقري جنيني (FBS). وسائل الإعلام يمكن أن تستكمل مع الأمصال الأخرى و / أو عوامل النمو لتحفيز الأوعية الدموية.
  4. كرر الخطوات من 3،2-3،3 لكل الأنسجة والثقافة في ظروف الحاضنة القياسية (5٪ CO 2، 37 درجة مئوية) لمدة تصل إلى 5 أيام.

4. التصوير الوقت الفاصل بين من مساريق الأنسجة

  1. في يوم من التصوير، واستكمال وسائل الإعلام في كل بئر مع مترافق BSI-كتين واحتضان في ظل ظروف ثقافة معيار لمدة 30 دقيقة. غسل الأنسجة مرتين مع وسائل الاعلام خالية من كتين. ستبقى BSI-كتين وصمة عار واضحة على النسيج مساريق لمدة تصل إلى 3 أيام في الثقافة.
  2. نقل لوحة لمرحلة المجهر. تحديد الأوعية الدموية واللمفاوية على أساس التشكل وشبكة هيكلها.
  3. تحديد منطقة الشبكة المطلوبة على كل الأنسجة والتقاط صور. يحيط علما التصويروسوف يتم القبض الموقع لضمان نفس المنطقة للصور لاحقة. إذا باستخدام مرحلة الآلية، وتوثيق الإحداثيات.
  4. العودة الأنسجة إلى الحاضنة والاستمرار في الثقافة حتى نقطة النهاية المرجوة. كرر الخطوات من 4،1-4،3 حسب الحاجة اعتمادا على نقاط الوقت التجريبية المطلوبة.

5. الأنسجة Immunolabeling

  1. BSI-كتين وصفها
    1. احتضان الأنسجة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع 01:40 كتين FITC مترافق في وسائل الإعلام (2.5 مل من محلول الأجسام المضادة لكل بئر في لوحة 6 جيدا) تليها اثنين يشطف مع وسائل الإعلام. ليشطف، إضافة وسائل الإعلام ثم استبدل على الفور.
  2. الحي / الميت وصفها
    1. احتضان الأنسجة لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع 1: 500 2 مم إيثيديوم homodimer-1 و 1: 500 calcein AM 1 ملم في وسائل الإعلام (2.5 مل من محلول الأجسام المضادة لكل بئر في لوحة 6 جيدا) تليها اثنين يشطف مع وسائل الإعلام.
  3. BSI-كتين / NG2 وصفها
    1. الأنسجة انتشار على المجهر تراجعته (1-2 الأنسجة / الشرائح) والسماح ليجف. إزالة الدهون الزائدة مع مشرط عن طريق الضغط على أسفل بشدة لاستئصال الدهون.
    2. إصلاح الأنسجة في الميثانول البارد لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة -20 درجة مئوية. غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني (3 × 10 دقيقة).
    3. لوضع العلامات الأجسام المضادة الأولية احتضان الأنسجة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع 1: 100 أرنب بولكلونل NG2 الأجسام المضادة و 5٪ مصل الماعز العادي (خ ع). غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني (3 × 10 دقيقة).
    4. لوضع العلامات الضد الثانوية احتضان الأنسجة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع 1: 100 الماعز المضادة للأرنب CY2 مترافق الأجسام المضادة (GAR-CY2) و 5٪ خ ع. غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني (3 × 10 دقيقة).
    5. احتضان الأنسجة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع 01:40 كتين FITC مترافق في برنامج تلفزيوني تليها اثنين يشطف مع برنامج تلفزيوني. ليشطف، إضافة PBS ثم استبدل على الفور.
    6. لتحميل الشرائح، وتغطية الأنسجة مع 50:50 برنامج تلفزيوني وحل الجلسرين ومكان ساترة على القمة. ختم حواف الشريحة باستخدام طلاء الأظافر.
  4. LYVE-1 / PECAM وصفها
    1. نشر الأنسجة على شريحة المجهر (1-2 الأنسجة / الشرائح) والسماح ليجف. إزالة الدهون الزائدة مع مشرط عن طريق الضغط على أسفل بشدة لاستئصال الدهون.
    2. إصلاح الأنسجة في الميثانول البارد لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة -20 درجة مئوية. غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين (3 × 10 دقيقة).
    3. لوضع العلامات الأجسام المضادة الأولية احتضان الأنسجة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع 1: 200 الماوس وحيدة النسيلة المعقدة البيروكسيديز CD31 الضد و 1: 100 أرنب بولكلونل LYVE-1 الأجسام المضادة في برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين + 2٪ زلال المصل البقري (BSA) + 5٪ خ ع . غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين (3 × 10 دقيقة).
    4. لوضع العلامات الضد الثانوية، واحتضان الأنسجة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع 1: الأجسام المضادة streptavidin 500 CY3 مترافق و 1: 100 GAR-CY2 في برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين + 2٪ BSA + 5٪ خ ع. غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين (3 × 10 دقيقة).
    5. لتحميل الشرائح والأنسجة مع تغطية 50:50 برنامج تلفزيوني والجلسرين حل ووضع ساترة على القمة. ختم حواف الشريحة باستخدام طلاء الأظافر.
  5. BrdU / BSI-كتين وصفها
    1. إضافة 1 ملغ / مل BrdU إلى وسائل الإعلام واستبدال وسائل الإعلام الأنسجة بمحلول BrdU. احتضان لمدة 2 ساعة عند 37 درجة مئوية.
    2. نشر الأنسجة على شريحة المجهر (1-2 الأنسجة / الشرائح) والسماح ليجف. إزالة الدهون الزائدة مع مشرط عن طريق الضغط على أسفل بشدة لاستئصال الدهون.
    3. إصلاح الأنسجة في الميثانول البارد لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة -20 درجة مئوية. غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني (3 × 10 دقيقة).
    4. تفسد الحمض النووي الأنسجة في 2 M حمض الهيدروكلوريك لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية. غسل الأنسجة في برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين (3 × 10 دقيقة).
    5. لوضع العلامات الأجسام المضادة الأولية، واحتضان الأنسجة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع 1: 100 وحيدة النسيلة الماوس مكافحة BrdU في برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين + 2٪ BSA + 5٪ خ ع. غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين (3 × 10 دقيقة).
    6. لوضع العلامات الضد الثانوية، واحتضان الأنسجة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع 1: 100 الضد الماعز المضادة للماوس و Cy3 مترافق (امانة عمان-و Cy3) في برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين + 2٪ BSA + 5٪ خ ع. غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين (3 × 10 دقيقة).
      7. احتضان الأنسجة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع 01:40 كتين FITC مترافق في برنامج تلفزيوني تليها اثنين يشطف مع برنامج تلفزيوني.
    7. لتحميل الشرائح والأنسجة مع تغطية 50:50 برنامج تلفزيوني وحل الجلسرين ومكان ساترة على القمة. ختم حواف الشريحة باستخدام طلاء الأظافر.
  6. BSI-كتين / CD11b الوسم
    1. نشر الأنسجة على شريحة المجهر (1-2 الأنسجة / الشرائح) والسماح ليجف. إزالة الدهون الزائدة مع مشرط عن طريق الضغط على أسفل بشدة لاستئصال الدهون.
    2. إصلاح الأنسجة في الميثانول البارد لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة -20 درجة مئوية. غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين (3 × 10 دقيقة).
    3. لوضع العلامات الأجسام المضادة الأولية احتضان الأنسجة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع 1: 100 الماوس لمكافحة الفئران CD11b في برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين + 2٪ BSA + 5٪ خ ع. غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين (3 × 10 دقيقة).
    4. لوضع العلامات الضد الثانوية احتضان الأنسجة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع 1: 100 امانة عمان-و Cy3 في برنامج تلفزيوني + 0.1٪ سابونين + 2٪ BSA + 5٪ خ ع. غسل الأنسجة مع برنامج تلفزيوني+ 0.1٪ سابونين (3 × 10 دقيقة).
    5. احتضان الأنسجة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع 01:40 كتين FITC مترافق في برنامج تلفزيوني تليها اثنين يشطف مع برنامج تلفزيوني.
    6. لتحميل الشرائح والأنسجة مع تغطية 50:50 برنامج تلفزيوني وحل الجلسرين ومكان ساترة على القمة. ختم حواف الشريحة باستخدام طلاء الأظافر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

بعد 3 أيام في الثقافة، وصفت الأنسجة مع الميتة عدة الحية / الجدوى / السمية الخلوية لإثبات جدوى من الأوعية الدموية الدقيقة في نموذج الثقافة الفئران مساريق (الشكل 2A). بقيت غالبية الخلايا الموجودة في مساريق قابلة للحياة في الثقافة حيث تم تحديد القائمة على الخلايا البطانية على مواقعها في قطاعات الاوعية الدموية الدقيقة. وأكد تكاثر الخلايا البطانية أيضا كتين / BrdU وضع العلامات (الشكل 2D). وأكد الخلايا العضلية الملساء وج...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هذا البروتوكول يوثق طريقة لاستخدام نموذج الثقافة الفئران مساريق كأداة خارج الجسم الحي للتصوير الوقت الفاصل بين النمو شبكة الاوعية الدموية الدقيقة. وقد أنشأت الأعمال السابقة في مختبرنا استخدام نموذجنا لل1) الأوعية الدموية 8، 2) lymphangiogenesis 8، 3) التفاعلات خلية خلية حوطية البطانية 8، و 4) المضادة للعائية اختبار المخدرات 9. القدرة لتصوير أنسجة الفئران مساريق مثقف في نق...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل منحة المعاهد الوطنية للصحة 5-P20GM103629 إلى WLM ومركز تولين للشيخوخة. نود أن نشكر ماثيو نيس على مساعدته في تحرير نص البروتوكول.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
ثنىالكاردينال هيلث401212 × 12 بوصة Bio-Shield Regular Sterilization Wraps
مقبض مشرطRoboz Surgical InstrumentRS-9843مقبض مشرط ، # 3 ؛ صلب; 4 "طول
شفرة جراحية معقمةسينسيناتي الجراحية0110الفولاذ المقاوم للصدأ. مقاس 10
صحن ثقافة (60 مم)130181حراري علمي10 / كم
ملقط Graefe (ملاقط منحنية) أداةجراحية RobozRS-5135ملقط تشريح دقيق ؛ مسنن; منحنى طفيف عرض الطرف 0.8 مم ؛ 4 "طول
Graefe ملقط (ملاقط مستقيمة) Robozأداة جراحيةRS-5130ملقط تشريح دقيق ؛ مسنن ، مستقيم. عرض الطرف 0.8 مم ؛ 4 "طول
Noyes Micro ScissorRoboz أداة جراحيةRS-5677Noyes مقص زنبركي مايكرو تشريح ؛
مستقيمة ، نقاط حادة حادة ؛ 13 مم حافة القطع ؛ 0.25 مم عرض الطرف ، 4 1/2 "
وسادات شاشالكلي FisherBrand13-761-52إسفنج شاش قطني غير معقم ؛ 4 "× 4" 12 رقائق
من القطن المقووىFisherBrand23-400-1246 "الطول ؛ رمح خشبي استخدام واحد فقط
6 آبار لوحةفيشر Scientific08-772-49قاع مسطح مع غطاء تبخر منخفض ؛ البوليستيرين;
حقنة معقمةفيشر ساينتفيك14-829-45Luer-Lok Tip
Sterile BowlMedical Action Industries Inc.0123232 أونصة كيس قشر. أزرق;
6 آبار للاستخدام الفردي (إدراج CellCrown) إدراجلوحة SIGMAZ681792-3EA6 آبار ؛
غشاء مرشح البوليSIGMATMTP04700مرشح غشاء Isopore ؛ البولي; ماء; 5.0  ومايكرو. م ، 47   ؛ مم ، أبيض عادي
<قوي > الاسم < / قوي ><قوي > شركة < / قوي >< قوي > رقم الكتالوج < / strong > التعليقات / الوصف < / strong>
BeuthanasiaSchering-Plough Animal Health Corp. Union (طلب من MWI Veterinary Supply)MWI #: 011168العنصر النشط: لكل 100 مل ، 390 مجم صوديوم بنتوباربيتال ، 50 مجم فينيتوين صوديوم   ؛
كيتامينفورت دودج لصحة (مطلوب من MWI Veterinary Supply)MWI #: 000680Kateset 100 مجم / مل
XylazineLLOYD. Inc. (مطلوب من MWI Veterinary Supply)MWI #: 000680Anased 100 mg /
mL SalineBaxter2F7122
PBSInvitrogen14040-133
MEMInvitrogen11095080
PenStrepInvitrogen15140-122
FBSInvitrogen16000-044
BSAJackson ImmunoResearch001-000-162
Saponin SIGMAS7900-100G
كحول الأيزوبروبيلفيشر ScientificS25372
بوفيدون اليودالمعامل82-226
حمض الهيدروكلوريكSIGMA320331
الميثانولفيشر العلمي67-56-1
الجلسرينفيشر العلمي56-81-5
مترافق FITC ليكتينSIGMAL9381-2MG
Anti-NG2 شوندروتن كبريتات البروتيوغليكان الأجسام المضادةSIGMAAB5320
PECAM (CD31) الجسم المضادBD Biosciences555026
LYVE-1 الأجسام المضادةAngioBio Co.11-034
الماعز المضاد للأرانب Cy2 الأجسام المضادة المترافقةجاكسون ImmunoResearch111-585-144
الماعز المضاد للفأر Cy3 المترافق الجسم المضادجاكسون ImmunoResearch115-227-003
ستربتافيدين Cy3 الأجسام المضادة المترافقةJackson ImmunoResearch016-160-084
طقم البقاء / السمية الخلوية الحي / الميتInvitrogenL3224
مصل الماعز العادي Jackson ImmunoResearch005-000-121
5-Bromo-2'-DeoxyuridineSIGMAB5002
فأر أحادي النسيلة مضاد للبرومودوكسيوريدين                                              استنساخ Bu20aDakoM074401-8
ماوس مضاد للفئران CD11b عبد الديمقراطي سيروتيكMCA275R
ذات الطول غير حرارية 5 مل إدراج لوحة معقمة ذات غير المعقم

المراجع

  1. Carmeliet, P., Jain, R. K. Angiogenesis in cancer and other diseases. Nature. 407 (6801), 249-257 (2000).
  2. Carmeliet, P. Angiogenesis in life, disease and medicine. Nature. 438 (7070), 932-936 (2005).
  3. Kaunas, R., Kang, H., Bayless, K. J. Synergistic Regulation of Angiogenic Sprouting by Biochemical Factors and Wall Shear Stress. Cell Mol Bioeng. 4 (4), 547-559 (2011).
  4. Pitulescu, M. E., Schmidt, I., Benedito, R., Adams, R. H. Inducible gene targeting in the neonatal vasculature and analysis of retinal angiogenesis in mice. Nat Protoc. 5 (9), 1518-1534 (2010).
  5. Song, J. W., Munn, L. L. Fluid forces control endothelial sprouting. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (37), 15342-15347 (2011).
  6. Chan, J. M., et al. Engineering of in vitro 3D capillary beds by self-directed angiogenic sprouting. PLoS One. 7 (12), e50582(2012).
  7. Peirce, S. M., Mac Gabhann, F., Bautch, V. L. Integration of experimental and computational approaches to sprouting angiogenesis. Curr Opin Hematol. 19 (3), 184-191 (2012).
  8. Stapor, P. C., Azimi, M. S., Ahsan, T., Murfee, W. L. An angiogenesis model for investigating multicellular interactions across intact microvascular networks. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 304 (2), H235-H245 (2013).
  9. Azimi, M. S., et al. An ex vivo model for anti-angiogenic drug testing on intact microvascular networks. PLoS One. 10 (3), e0119227(2015).
  10. Nicosia, R. F., Ottinetti, A. Growth of microvessels in serum-free matrix culture of rat aorta. A quantitative assay of angiogenesis in vitro. Lab Invest. 63 (1), 115-122 (1990).
  11. Hutter-Schmid, B., Kniewallner, K. M., Humpel, C. Organotypic brain slice cultures as a model to study angiogenesis of brain vessels. Front Cell Dev Biol. 3, 52(2015).
  12. Sawamiphak, S., Ritter, M., Acker-Palmer, A. Preparation of retinal explant cultures to study ex vivo tip endothelial cell responses. Nat Protoc. 5 (10), 1659-1665 (2010).
  13. Unoki, N., Murakami, T., Ogino, K., Nukada, M., Yoshimura, N. Time-lapse imaging of retinal angiogenesis reveals decreased development and progression of neovascular sprouting by anecortave desacetate. Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (5), 2347-2355 (2010).
  14. Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J Cell Mol Med. 10 (3), 588-612 (2006).
  15. Kelly-Goss, M. R., Sweat, R. S., Azimi, M. S., Murfee, W. L. Vascular islands during microvascular regression and regrowth in adult networks. Front Physiol. 4, 108(2013).
  16. Kelly-Goss, M. R., et al. Cell proliferation along vascular islands during microvascular network growth. BMC Physiol. 12, 7(2012).
  17. Skalak, T. C., Price, R. J. The role of mechanical stresses in microvascular remodeling. Microcirculation. 3 (2), 143-165 (1996).
  18. Kadohama, T., Nishimura, K., Hoshino, Y., Sasajima, T., Sumpio, B. E. Effects of different types of fluid shear stress on endothelial cell proliferation and survival. J Cell Physiol. 212 (1), 244-251 (2007).
  19. Milkiewicz, M., Brown, M. D., Egginton, S., Hudlicka, O. Association between shear stress, angiogenesis, and VEGF in skeletal muscles in vivo. Microcirculation. 8 (4), 229-241 (2001).
  20. Corliss, B. A., Azimi, M. S., Munson, J. M., Peirce, S. M., Murfee, W. L. Macrophages: An Inflammatory Link Between Angiogenesis and Lymphangiogenesis. Microcirculation. 23 (2), 95-121 (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

BSI
ل
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.