هنا ، نصف تقنية للتوصيل الموضعي للكواشف إلى الغدة الثديية للأرانب عن طريق الحقن داخل القناة. بالإضافة إلى ذلك ، نصف بروتوكولا للتصور وتأكيد التسليم عن طريق التصوير بالموجات فوق الصوتية عالي الدقة لعوامل التباين.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
العلاجات ينترادوكتال محلية للكشف عن سرطان الثدي توفر مزايا المحتملة، بما في ذلك التنفيذ الفعال للورم وخفض سمية جهازية والآثار الضارة 1، 2، 3، 4، 5، 6، 7. ومع ذلك، لا تزال هناك العديد من التحديات قبل أن يتم تطبيق هذه العلاجات على نطاق أوسع. تطوير والتحقق من العلاجات ينترادوكتال في نموذج حيواني المناسبة تسهيل تطوير استراتيجيات علاجية ينترادوكتال للمرضى. في حين أن الغدة الثديية الماوس وقد استخدم على نطاق واسع كنظام نموذج للتنمية الثديية وتكون الأورام، وعلم التشريح هو واضح من الغدة الإنسان. نموذج حيوان أكبر، مثل الأرنب، قد يكون بمثابة نموذج أفضل للهيكل الغدة الثديية والتنمية العلاجية ينترادوكتال. في جontrast على الفئران، حيث يتم توزيع عشرة أشجار الأقنية مكانيا على طول محور الجسم، كل تنتهي في حلمة منفصلة، الغدة الثديية أرنب أكثر شبها الغدة الإنسان، مع عدة أنظمة الأقنية المتداخلة التي الخروج من خلال فتحات منفصلة في حلمة واحدة. هنا، فإننا نقدم طرق الغازية الحد الأدنى لإيصال الكواشف مباشرة في أرنب القناة الثديية والتصور لتسليم نفسه مع عالية الدقة التصوير بالموجات فوق الصوتية.
المقدمة
وقد درس تسليم ينترادوكتال من العوامل العلاجية في نماذج القوارض وفي التجارب على الانسان مرحلة مبكرة 3، 4، 5، 6، 11، 12. والمرحلة الأخيرة أدرس أثبتت سلامة وجدوى الكاربوبلاتين ينترادوكتال أو ينترادوكتال مضاد للفيروسات دوكسوروبيسين liposomal في النساء تنتظر استئصال الثدي لعلاج سرطان الغازية 2.
وقد تم تطوير البروتوكولات السابقة للتسليم ينترادوكتال فأرة الحاسوب والثدي الفئران الغدد 6، 7، 8، 9. لأغراض البحث، حقن الخلايا السرطانية ينترادوكتال وlentiviral تسليم ناقلات الجينات المسرطنة كما تم القيام بها في نماذج القوارضالمرجع "> 13، 14، 15، 16. ومع ذلك، مثالية في نموذج الجسم الحي من عملية التسليم ينترادوكتال ينبغي أن يسمح تطوير فئات جديدة من المركبات العلاجية وتسهيل تقييم ما قبل السريرية. وقد تعقدت الاختلافات التشريحية بين القوارض والبشر ترجمة هذه دراسات.
على عكس الفئران، التي في كل قناة ينتهي في حلمة منفصلة، الثدي البشري يتكون من 5-9 أنظمة الأقنية مستقلة، لكل منها افتتاح منفصل تنتهي عند الحلمة. أرنب الغدد الثديية تؤوي أربعة أنظمة الأقنية مستقلة، كل على حدة يمكن الوصول إليها من خلال واحدة من أربع فتحات في حلمة واحدة. نموذج أرنب مباريات أكثر عن كثب التشريح البشري وتسمح هذه الدراسة من تسليم المخدرات ينترادوكتال في سياق أكثر أهمية.
هنا، نحن نستخدم اثنين من التقنيات المستخدمة لتقييم تسليم ينترادوكتال. شارك في إدارة ليسمح صبغ حيوي التصور من خلال الجلد ويوفر تأكيدا بسيطة وسريعة للطريقة. بالنسبة لبعض التطبيقات، أعلى رسم الخرائط قرار من القنوات قد يكون من المفضل. نقدم هنا بروتوكول للتصوير بالموجات فوق الصوتية من القنوات من خلال تقديم ينترادوكتال من كاشف غير المستهدفة التباين.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد تمت الموافقة على إجراءات استخدام المواد الحيوانية من لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي من جامعة تكساس في أوستن.
1. إعداد قبل الجراحة
- تسجيل وزن الجسم كل أرنب. كما هو الحال مع جميع الدراسات قبل السريرية، ومراقبة الأوزان الحيوانات بانتظام لتقييم السمية المحتملة.
- قبل التخدير أرنب، وملء أنبوب مخروطي 50 مل مع هلام الموجات فوق الصوتية المتاحة تجاريا وتدور في 500 x ج لمدة 30 ثانية. ينبغي أن يكون هناك أي فقاعات مرئية في هلام عند الانتهاء من الطرد المركزي.
- إدارة غليكوبيرولات تحت الجلد بجرعة 0.1 ملغ / كغ وآسيبرومازين العضل بجرعة 0.75 مغ / كغ. الانتظار 15-20 دقيقة لمهدئ نافذة المفعول في حين رصد العلامات الحيوية والسلوك.
ملاحظة: غليكوبيرولات هو عامل مضاد للالكوليني الذي يمنع بطء القلب ويقلل من أمراض الجهاز التنفسي والجهاز الهضمي الإفرازات. آسيبرومازين هو المسكنات التي هي بمثابة premedicatiعلى للتخدير. - إدارة 35 ملغم / كغم من الكيتامين و 5 ملغم / كغم من زيلازين تحت الجلد كمخدر. لكن، وكما يصبح المشغل أكثر خبرة ويمكن أن تنجز تسليم ينترادوكتال بسرعة أكبر، وانخفاض جرعات المخدرات إلى 15 ملغم / كغم من الكيتامين و 3 ملغ / كغ من تحت الجلد زيلازين. هذا سيختصر الوقت التخدير والوقت اللازم للحيوان للتعافي من التخدير.
- فحص وتوثيق معدل ضربات القلب، مكتب التخطيط الاستراتيجي 2، ودرجة الحرارة، معدل التنفس، ولون الغشاء المخاطي كل 15 دقيقة. تطبيق مواد التشحيم العين لكلتا العينين.
ملاحظة: إلا من قبل موظفين الذين تلقوا تدريبا مناسبا، وتمت الموافقة من قبل IACUC مؤسستهم يجب أن إدارة أو مراقبة التخدير. استخدام جهاز التخدير البيطري يمكن أن تساعد في الحصول على العلامات الحيوية، وينصح. رصد التخدير البيطري، ومع ذلك، لا يحل محل الحاجة للتحقق من الحيوان يدويا كل 15 دقيقة. انظر تعليمات الشركة الصانعة وأو الاستخدام السليم للجهاز البيطري. - تحقق من بداية التخدير عن طريق قرصة اصبع القدم لطيف. وينبغي أن يكون الأرنب غير المراعية قبل المتابعة.
- بعناية حلق البطن الذيلية للأرنب في المنطقة المحيطة أزواج الثالثة والرابعة من الحلمات الأربية.
- مع معظم الشعر إزالتها، وتطبيق أكثر من وصفة كريم إزالة الشعر من منطقة حلق. إزالة دقيقة كريم 10 بعد التطبيق باستخدام المناشف الورقية الرطبة المبللة بماء دافئ.
ملاحظة: الأرنب الجلد يكون هشا جدا / حساس. يجب استخدام كريم إزالة الشعر لمدة لا تتجاوز 10 دقيقة. في الواقع، وهو أكثر أمانا لمحاولة "بقعة اختبار" في 5 دقائق ويترك فقط لفترة أطول إذا تبين اختبار بقعة وقتا أطول هناك حاجة الفترة. - مسح المنطقة مع قطع من الشاش غارقة في الكحول لتنظيف موقع الحقن.
- وضع الأرنب على ظهر في حوض على شكل حرف V واصطف مع إعادة تدوير بطانية المياه الدافئة ووسادة ماصة.
2. العلاقات العامةeparation وكيل التباين
- إعادة الكاشف غير المستهدفة النقيض من ذلك وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. ماصة صعودا وهبوطا بلطف لمزج.
ملاحظة: عامل تباين المستخدمة في هذا البروتوكول هو مستقر في درجة حرارة الغرفة ل4-6 ساعات بعد إعادة. صخرة بلطف القارورة بين كل عملية استرداد.
ملاحظة: حجم الحل المطلوب سيعتمد على عدد من القنوات ليتم حقنه. الأرنب يحتوي على 4 فتحات الأقنية في حلمة، و 0.2 مل من محلول كافية لملء شجرة الأقنية واحد من الكبار أرنب نيوزيلندا الأبيض (Oryctolaguscuniculus). وبالتالي، قد يتم تسليم الحجم الكلي من 0.8 مل إلى الغدة الثديية واحد.
3. تسليم ينترادوكتال
- تحديد موقع الحلمات المناسبة ليتم حقنه. ينصح 3 و 4 تشرين أزواج من الحلمات الأربية، كما تصور أنهم بسهولة عندما يتم وضع الحيوان على ظهر لها.
- تحميل 0.2 مل من العقيمة المالحة 0.9٪ إلىحقنة السلين 1 مل لور للانغلاق مع إبرة 22 G. التخلص السليم من إبرة G 22 مرة المالحة هي في حقنة واستبدالها العقيمة إبرة عيار 25. قم بمسح المنطقة مع 85٪ ايزوبروبيل على الشاش.
- مع شطبة من الإبرة حتى وبالتوازي حقنة إلى جسم الحيوان، تضاف شطبة من الإبرة إلى جانب حلمة وببطء ضخ 0.1-0.2 مل من المياه المالحة. هذا سوف يسمح لرؤية أفضل للفتحات الأقنية.
- تحميل 0.2 مل من محلول الحقن في حقنة السلين 1 مل لور للانغلاق.
- عقد حلمة برفق مع الإبهام والسبابة ورفعه قليلا لوضعه للحقن ينترادوكتال. قد يساعد العدسة في العين يمكن ارتداؤها في تصور فتحات الأقنية.
- مع الحفاظ على موقف رفع من حلمة، يقني؛ يدخل القنية بعناية القناة ذات الاهتمام باستخدام 25 G حادة في رأس الإبرة.
- بعد إقناء؛ إدخال القنية، وتطور بلطف محقنة لور قفل على محور حادة تيإبرة الحقن IP حتى يتم تأمين في مكانه.
- رفع حلمة وحقن المحلول ببطء للحد من الأضرار المحتملة الناجمة عن طريق تحريك السوائل بسرعة داخل القناة. في أي وقت من الأوقات ينبغي أن تكون هناك مقاومة عند حقن الحل.
4. التصوير بالموجات فوق الصوتية
- تطبيق الليبرالية مبلغ من هلام الموجات فوق الصوتية طرد على الجلد في المنطقة من الفائدة. تأكد من عدم وجود فقاعات في هلام، وهذه سوف تؤثر سلبا على جودة الصورة.
- تعيين عمق التصوير إلى 6 ملم. وضع محول 21 ميغاهرتز في اتصال مع هلام ومسح المنطقة من اهتمام في B-وضع. مراقبة وسط تباين في المنطقة الممسوحة ضوئيا بما في ذلك فتح الأقنية وفي جميع أنحاء لاصق.
ملاحظة: تم تطوير هذه الإعدادات لاستخدامها مع جهاز الموجات فوق الصوتية محددة الضوئي. الرجوع إلى جدول المواد لمزيد من التفاصيل. قد يكون من الضروري لضبط قوة الإرسال وعمق التصوير أنظمة التصوير الأخرى لتحسين الثدييةالتصور الغدة. - إزالة هلام الموجات فوق الصوتية من جلد الحيوان مع الشاش.
5. الرعاية بعد العملية الجراحية
- لاحظ موقع الحقن: يجب أن يكون هناك أي علامات الصدمة للمنطقة حلمة أو إلى الأنسجة المحيطة بها، وتورم في المنطقة المحيطة حلمة المرجح أن يشير إلى الثديية حقن الدهون وسادة بدلا من حقن ينترادوكتال ناجحة.
- وضع الأرنب في وضع القصية. إذا لزم الأمر، وإعطاء 0.2 مغ / كغ من اليوهمبين عن طريق الوريد إلى الوريد الأذن هامشية. هذا وعكس تأثير زيلازين والسماح للحيوان للتعافي بسرعة أكبر من التخدير.
- مراقبة أرنب كل 15 دقيقة طوال فترة النقاهة حتى الحيوان هو في حالة تأهب واستجابة ويحافظ على موقف القصية.
ملاحظة: يجب أن هذا الإجراء لا يؤدي إلى تلف الأنسجة أو تورم. إذا لاحظت احمرار أو تورم، وإدارة جرعة من ميلوكسيكام 0.1-0.2 ملغ / كغ PO مرة واحدة الحيوان هو في حالة تأهب وقادرةلتناول الدواء عن طريق الفم. الاتصال الموظفين البيطريين المؤسسة لمزيد من الإرشادات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
هنا، وتبين لنا أن تسليم ينترادوكتال الكواشف النقيض من القنوات الثديية من الأرنب يمكن أن يتحقق من دون صدمة للأنسجة (الشكل 2). في الأرانب، أربعة أنظمة الأقنية منفصلة تلتقي في حلمة واحدة، وبالتالي يمكن الوصول إليها وتصويرها على حدة باستخدام هذا الأسلوب. وتصور فتحات الأقنية الفردية بسهولة. لاحظ السهم بمناسبة افتتاح الأقنية الثاني المجاور لقناة مقنى في الشكل 2B.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ويمكن استخدام هذه الطريقة لتسليم ينترادوكتال إلى الغدة الثديية أرنب للمواد النقيض من الموجات فوق الصوتية والعديد من المحاليل المائية الأخرى، بما في ذلك الأصباغ الحيوية والعلاجات. وقد أظهرت الدراسات السابقة تسليم ينترادوكتال الهرمونات 17 و 18 و 19. في نماذج القوارض، وتسليم ينترادوكتال من الأحماض النووية 8، المعالجة الكيميائية 6،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يقر المؤلفون بالدعم المقدم من منحة أبحاث سرطان الثدي الانتقالية (14-60-26-BROC إلى AB) من مؤسسة أبحاث سرطان الثدي والجمعية الأمريكية لأبحاث السرطان.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| كاشف التباين غير المستهدف MicroMarker | VisualSonics | VS-11694 | |
| Luer Lock 1 مل محاقن | BD | 309628 | |
| Glycopyrrolate 0.2 مجم / مل | صيدلية Wedgewood Compounding | GLYCOP-INJ013VC | مدة صلاحية 6 أشهر ، قد يكون العرض محدودا. |
| كبريتات الأتروبين 0.5 مجم / مل | 15320764 المنظمة الدولية لصحة | حالة عدم توفر الجليكوبيرولات. لا يتم دمجها مع جليكوبيرولات. | |
| كيتامين هيدروكلورايد 100 مجم / مل | منظمة صحة | الدولية 21250699 | http://www.animalhealthinternational.com/< / a> |
| أسيبرومازين 10 مجم / مل | صحة الدولية | 17640541 | |
| زيلازين 20 مجم / مل | صحة | الدولية 20101547 | |
| يوهيمبين 0.2 مجم / مل | هيلث إنترناشيونال | 14588965 | |
| كريم لإزالة الشعر | فيت | محلول البشرة الحساسة. متوفر من خلال تجار التجزئة المحليين. | |
| إبر التسريب ذات الطرف الحاد | Sai Infusion Technology | B14-50 | http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles< / a> |
| مقياس التأكسج النبضي البيطري | EdanUSA | VE-H100B | http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html< / a> |
| مضخة الماء الدافئ | Gaymar | TP700 | |
| بطانية الماء الدافئ | صحة الدولية | 21232696 | Maxi-Therm Lite منصات الاحترار |
| نظام الموجات فوق الصوتية | VisualSonics | Vevo 2100 |
المراجع
- Flanagan, M., Love, S., Hwang, E. S. Status of Intraductal Therapy for Ductal Carcinoma in Situ. Curr Breast Cancer Rep. 2 (2), 75-82 (2010).
- Love, S. M., et al. A Feasibility Study of the Intraductal Administration of Chemotherapy. Cancer Prevention Research. 6 (1), 51-58 (2013).
- Stearns, V., et al. Preclinical and Clinical Evaluation of Intraductally Administered Agents in Early Breast Cancer. Sci Transl Med. 3 (106), 106ra108(2011).
- Zhang, B., et al. The Safety Parameters of the Study on Intraductal Cytotoxic Agent Delivery to the Breast before Mastectomy. Chin J Cancer Res. 26 (5), 579-587 (2014).
- Mahoney, M. E., Gordon, E. J., Rao, J. Y., Jin, Y., Hylton, N., Love, S. M. Intraductal Therapy of Ductal Carcinoma In Situ: a Presurgery Study. Clin Breast Cancer. 13 (4), 280-286 (2013).
- Murata, S., et al. Ductal Access for Prevention and Therapy of Mammary Tumors. Cancer Res. 66 (2), 638-645 (2006).
- Chun, Y. S., et al. Intraductally Administered Pegylated Liposomal Doxorubicin Reduces Mammary Stem Cell Function In the Mammary Gland but in the Long Term, Induces Malignant Tumors. Breast Cancer Res Treat. 135 (1), 201-208 (2012).
- Brock, A., et al. Silencing HoxA1 by Intraductal Injection of siRNA Lipidoid Nanoparticles Prevents Mammary Tumor Progression in Mice. Sci Trans Med. 6 (217), 2172a2(2014).
- Krause, S., Brock, A., Ingber, D. E. Intraductal Injection For Localized Drug Delivery To The Mouse Mammary Epithelium. J Vis Exp. (80), e50692(2013).
- Brock, A., Goh, H. T., Yang, B., Yu, L., Li, H., Loh, Y. H. Cellular Reprogramming: A New Technology Frontier In Pharmaceutical Research. Pharm Res. 29 (1), 35-52 (2012).
- Silverstein, M. J., et al. Ductal Carcinoma In Situ of the Breast. Annu. Rev Med. 51, 17-32 (2000).
- Love, S. M., Barsky, S. H. Anatomy of the Nipple And Breast Ducts Revisited. Cancer. 101 (9), 1947-1957 (2004).
- Virnig, B. A., Shamliyan, T., Tuttle, T. M., Kane, R. L., Wilt, W. J. Diagnosis and Management of Ductal Carcinoma In Situ (DCIS). Evidence Report/Technology Assessment. , AHRQ Publication No. 09-E018 185(2009).
- Mills, D., et al. Examination of Duct Physiology in the Human Mammary Gland. PLoS One. 11 (4), e0150653(2016).
- King, B. L., Love, S. M. The Intraductal Approach to the Breast: Raison d'Etre. Breast Cancer Res. 8 (2), 206(2006).
- Bu, W., Xin, L., Toneff, M., Li, L., Li, Y. Lentivirus vectors for stably introducing genes into mammary epithelial cells in vivo . J Mammary Gland Biol Neoplasia. 14, 401-404 (2009).
- Lyons, W. R. The Direct Mammotrophic Action of Lactogenic Hormone. Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 51 (2), 308-311 (1942).
- Fiddler, T. J., Birkinshaw, M., Falconer, I. R. Effects Of Intraductal Prolactin On Some Aspects of the Ultrastructure and Biochemistry of Mammary Tissue in the Pseudopregnant Rabbit. J Endocrinol. 49 (3), 459-469 (1971).
- Falconer, I. R., Fiddler, T. J. Effects of Intraductal Administration Of Prolactin, Actinomycin D and Cycloheximide on Lipoprotein Lipase Activity in the Mammary Glands of Pseudopregnant Rabbits. Biochim Biophys Acta. 218 (3), 508-514 (1970).
- Singh, Y. Influence of Molecular Size on the Retention of Polymeric Nanocarrier Diagnostic Agents in Breast Ducts. Pharm Res. 29 (9), 2377-2388 (2012).
- Jain, R., et al. Atypical Ductal Hyperplasia: Interobserver and Intraobserver Variability. Mod Pathol. 24 (7), 917-923 (2011).
- Betsill, W. L. Jr, Rosen, P. P., Lieberman, P. H., Robbins, G. F. Intraductal Carcinoma. Long-term Follow-up After Treatment by Biopsy Alone. JAMA. 239 (18), 1863-1867 (1978).
- Eusebi, V., et al. Long-term Follow-up of In Situ Carcinoma of the Breast. Semin Diagn Pathol. 11 (3), 223-235 (1994).
- Sanders, M., et al. The Natural History Of Low-Grade Ductal Carcinoma In Situ Of The Breast In Women Treated By Biopsy Only Revealed Over 30 Years Of Long-Term Follow-Up. Cancer. 103 (12), 2481-2484 (2005).
- Esserman, L. J., et al. Addressing Overdiagnosis and Overtreatment in Cancer: A Prescription For Change. Lancet Oncol. 15 (6), e234-e242 (2014).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
