تسليم ينترادوكتال إلى الأرنب الغدة الثديية

وقد درس تسليم ينترادوكتال من العوامل العلاجية في نماذج القوارض وفي التجارب على الانسان مرحلة مبكرة ^{3، 4، 5، 6، 11، 12.} والمرحلة الأخيرة أدرس أثبتت سلامة وجدوى الكاربوبلاتين ينترادوكتال أو ينترادوكتال مضاد للفيروسات دوكسوروبيسين liposomal في النساء تنتظر استئصال الثدي لعلاج سرطان الغازية ^2.

وقد تم تطوير البروتوكولات السابقة للتسليم ينترادوكتال فأرة الحاسوب والثدي الفئران الغدد ^{6، 7، 8، 9.} لأغراض البحث، حقن الخلايا السرطانية ينترادوكتال وlentiviral تسليم ناقلات الجينات المسرطنة كما تم القيام بها في نماذج القوارضالمرجع "> ^{13، 14، 15، 16.} ومع ذلك، مثالية في نموذج الجسم الحي من عملية التسليم ينترادوكتال ينبغي أن يسمح تطوير فئات جديدة من المركبات العلاجية وتسهيل تقييم ما قبل السريرية. وقد تعقدت الاختلافات التشريحية بين القوارض والبشر ترجمة هذه دراسات.

على عكس الفئران، التي في كل قناة ينتهي في حلمة منفصلة، ​​الثدي البشري يتكون من 5-9 أنظمة الأقنية مستقلة، لكل منها افتتاح منفصل تنتهي عند الحلمة. أرنب الغدد الثديية تؤوي أربعة أنظمة الأقنية مستقلة، كل على حدة يمكن الوصول إليها من خلال واحدة من أربع فتحات في حلمة واحدة. نموذج أرنب مباريات أكثر عن كثب التشريح البشري وتسمح هذه الدراسة من تسليم المخدرات ينترادوكتال في سياق أكثر أهمية.

هنا، نحن نستخدم اثنين من التقنيات المستخدمة لتقييم تسليم ينترادوكتال. شارك في إدارة ليسمح صبغ حيوي التصور من خلال الجلد ويوفر تأكيدا بسيطة وسريعة للطريقة. بالنسبة لبعض التطبيقات، أعلى رسم الخرائط قرار من القنوات قد يكون من المفضل. نقدم هنا بروتوكول للتصوير بالموجات فوق الصوتية من القنوات من خلال تقديم ينترادوكتال من كاشف غير المستهدفة التباين.

وقد تمت الموافقة على إجراءات استخدام المواد الحيوانية من لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي من جامعة تكساس في أوستن.

1. إعداد قبل الجراحة

1. تسجيل وزن الجسم كل أرنب. كما هو الحال مع جميع الدراسات قبل السريرية، ومراقبة الأوزان الحيوانات بانتظام لتقييم السمية المحتملة.
2. قبل التخدير أرنب، وملء أنبوب مخروطي 50 مل مع هلام الموجات فوق الصوتية المتاحة تجاريا وتدور في 500 x ج لمدة 30 ثانية. ينبغي أن يكون هناك أي فقاعات مرئية في هلام عند الانتهاء من الطرد المركزي.
3. إدارة غليكوبيرولات تحت الجلد بجرعة 0.1 ملغ / كغ وآسيبرومازين العضل بجرعة 0.75 مغ / كغ. الانتظار 15-20 دقيقة لمهدئ نافذة المفعول في حين رصد العلامات الحيوية والسلوك.
   ملاحظة: غليكوبيرولات هو عامل مضاد للالكوليني الذي يمنع بطء القلب ويقلل من أمراض الجهاز التنفسي والجهاز الهضمي الإفرازات. آسيبرومازين هو المسكنات التي هي بمثابة premedicatiعلى للتخدير.
4. إدارة 35 ملغم / كغم من الكيتامين و 5 ملغم / كغم من زيلازين تحت الجلد كمخدر. لكن، وكما يصبح المشغل أكثر خبرة ويمكن أن تنجز تسليم ينترادوكتال بسرعة أكبر، وانخفاض جرعات المخدرات إلى 15 ملغم / كغم من الكيتامين و 3 ملغ / كغ من تحت الجلد زيلازين. هذا سيختصر الوقت التخدير والوقت اللازم للحيوان للتعافي من التخدير.
5. فحص وتوثيق معدل ضربات القلب، مكتب التخطيط الاستراتيجي _{2، ودرجة} الحرارة، معدل التنفس، ولون الغشاء المخاطي كل 15 دقيقة. تطبيق مواد التشحيم العين لكلتا العينين.
   ملاحظة: إلا من قبل موظفين الذين تلقوا تدريبا مناسبا، وتمت الموافقة من قبل IACUC مؤسستهم يجب أن إدارة أو مراقبة التخدير. استخدام جهاز التخدير البيطري يمكن أن تساعد في الحصول على العلامات الحيوية، وينصح. رصد التخدير البيطري، ومع ذلك، لا يحل محل الحاجة للتحقق من الحيوان يدويا كل 15 دقيقة. انظر تعليمات الشركة الصانعة وأو الاستخدام السليم للجهاز البيطري.
6. تحقق من بداية التخدير عن طريق قرصة اصبع القدم لطيف. وينبغي أن يكون الأرنب غير المراعية قبل المتابعة.
7. بعناية حلق البطن الذيلية للأرنب في المنطقة المحيطة أزواج الثالثة والرابعة من الحلمات الأربية.
8. مع معظم الشعر إزالتها، وتطبيق أكثر من وصفة كريم إزالة الشعر من منطقة حلق. إزالة دقيقة كريم 10 بعد التطبيق باستخدام المناشف الورقية الرطبة المبللة بماء دافئ.
   ملاحظة: الأرنب الجلد يكون هشا جدا / حساس. يجب استخدام كريم إزالة الشعر لمدة لا تتجاوز 10 دقيقة. في الواقع، وهو أكثر أمانا لمحاولة "بقعة اختبار" في 5 دقائق ويترك فقط لفترة أطول إذا تبين اختبار بقعة وقتا أطول هناك حاجة الفترة.
9. مسح المنطقة مع قطع من الشاش غارقة في الكحول لتنظيف موقع الحقن.
10. وضع الأرنب على ظهر في حوض على شكل حرف V واصطف مع إعادة تدوير بطانية المياه الدافئة ووسادة ماصة.

2. العلاقات العامةeparation وكيل التباين

1. إعادة الكاشف غير المستهدفة النقيض من ذلك وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. ماصة صعودا وهبوطا بلطف لمزج.
   ملاحظة: عامل تباين المستخدمة في هذا البروتوكول هو مستقر في درجة حرارة الغرفة ل4-6 ساعات بعد إعادة. صخرة بلطف القارورة بين كل عملية استرداد.
   ملاحظة: حجم الحل المطلوب سيعتمد على عدد من القنوات ليتم حقنه. الأرنب يحتوي على 4 فتحات الأقنية في حلمة، و 0.2 مل من محلول كافية لملء شجرة الأقنية واحد من الكبار أرنب نيوزيلندا الأبيض (Oryctolaguscuniculus). وبالتالي، قد يتم تسليم الحجم الكلي من 0.8 مل إلى الغدة الثديية واحد.

3. تسليم ينترادوكتال

1. تحديد موقع الحلمات المناسبة ليتم حقنه. ينصح ³ و 4 ^تشرين أزواج من الحلمات الأربية، كما تصور أنهم بسهولة عندما يتم وضع الحيوان على ظهر لها.
2. تحميل 0.2 مل من العقيمة المالحة 0.9٪ إلىحقنة السلين 1 مل لور للانغلاق مع إبرة 22 G. التخلص السليم من إبرة G 22 مرة المالحة هي في حقنة واستبدالها العقيمة إبرة عيار 25. قم بمسح المنطقة مع 85٪ ايزوبروبيل على الشاش.
3. مع شطبة من الإبرة حتى وبالتوازي حقنة إلى جسم الحيوان، تضاف شطبة من الإبرة إلى جانب حلمة وببطء ضخ 0.1-0.2 مل من المياه المالحة. هذا سوف يسمح لرؤية أفضل للفتحات الأقنية.
4. تحميل 0.2 مل من محلول الحقن في حقنة السلين 1 مل لور للانغلاق.
5. عقد حلمة برفق مع الإبهام والسبابة ورفعه قليلا لوضعه للحقن ينترادوكتال. قد يساعد العدسة في العين يمكن ارتداؤها في تصور فتحات الأقنية.
6. مع الحفاظ على موقف رفع من حلمة، يقني؛ يدخل القنية بعناية القناة ذات الاهتمام باستخدام 25 G حادة في رأس الإبرة.
7. بعد إقناء؛ إدخال القنية، وتطور بلطف محقنة لور قفل على محور حادة تيإبرة الحقن IP حتى يتم تأمين في مكانه.
8. رفع حلمة وحقن المحلول ببطء للحد من الأضرار المحتملة الناجمة عن طريق تحريك السوائل بسرعة داخل القناة. في أي وقت من الأوقات ينبغي أن تكون هناك مقاومة عند حقن الحل.

4. التصوير بالموجات فوق الصوتية

1. تطبيق الليبرالية مبلغ من هلام الموجات فوق الصوتية طرد على الجلد في المنطقة من الفائدة. تأكد من عدم وجود فقاعات في هلام، وهذه سوف تؤثر سلبا على جودة الصورة.
2. تعيين عمق التصوير إلى 6 ملم. وضع محول 21 ميغاهرتز في اتصال مع هلام ومسح المنطقة من اهتمام في B-وضع. مراقبة وسط تباين في المنطقة الممسوحة ضوئيا بما في ذلك فتح الأقنية وفي جميع أنحاء لاصق.
   ملاحظة: تم تطوير هذه الإعدادات لاستخدامها مع جهاز الموجات فوق الصوتية محددة الضوئي. الرجوع إلى جدول المواد لمزيد من التفاصيل. قد يكون من الضروري لضبط قوة الإرسال وعمق التصوير أنظمة التصوير الأخرى لتحسين الثدييةالتصور الغدة.
3. إزالة هلام الموجات فوق الصوتية من جلد الحيوان مع الشاش.

5. الرعاية بعد العملية الجراحية

1. لاحظ موقع الحقن: يجب أن يكون هناك أي علامات الصدمة للمنطقة حلمة أو إلى الأنسجة المحيطة بها، وتورم في المنطقة المحيطة حلمة المرجح أن يشير إلى الثديية حقن الدهون وسادة بدلا من حقن ينترادوكتال ناجحة.
2. وضع الأرنب في وضع القصية. إذا لزم الأمر، وإعطاء 0.2 مغ / كغ من اليوهمبين عن طريق الوريد إلى الوريد الأذن هامشية. هذا وعكس تأثير زيلازين والسماح للحيوان للتعافي بسرعة أكبر من التخدير.
3. مراقبة أرنب كل 15 دقيقة طوال فترة النقاهة حتى الحيوان هو في حالة تأهب واستجابة ويحافظ على موقف القصية.
   ملاحظة: يجب أن هذا الإجراء لا يؤدي إلى تلف الأنسجة أو تورم. إذا لاحظت احمرار أو تورم، وإدارة جرعة من ميلوكسيكام 0.1-0.2 ملغ / كغ PO مرة واحدة الحيوان هو في حالة تأهب وقادرةلتناول الدواء عن طريق الفم. الاتصال الموظفين البيطريين المؤسسة لمزيد من الإرشادات.

هنا، وتبين لنا أن تسليم ينترادوكتال الكواشف النقيض من القنوات الثديية من الأرنب يمكن أن يتحقق من دون صدمة للأنسجة (الشكل 2). في الأرانب، أربعة أنظمة الأقنية منفصلة تلتقي في حلمة واحدة، وبالتالي يمكن الوصول إليها وتصويرها على حدة باستخدام هذا الأسلوب. وتصور فتحات الأقنية الفردية بسهولة. لاحظ السهم بمناسبة افتتاح الأقنية الثاني المجاور لقناة مقنى في الشكل 2B.

عالية الدقة التصوير بالموجات فوق الصوتية مع كاشف النقيض تشتته في وضع التصوير الخطي يمكن أن توفر قراءات في الوقت الحقيقي من تسليم ينترادوكتال. تظهر الصور التمثيلية كشف كاشف تصل إلى 45 دقيقة بعد الولادة (الشكل 3). قد يكون هذا الأسلوب مفيدا أيضا لرصد حركية تسليم العلاجية من خلال القنوات.

-page = "1"> ومتانة هذه الطريقة حقن تعتمد بشكل كبير على المشغل. لإتقان تقنية الحقن، فمن المستحسن لحقن محلول 0.2٪ صبغ إيفانس الأزرق ومراقبة سلامة الغدة. وهذا يوفر المشغل مع قراءات إضافية من النجاح ويساعد أيضا في تحديد الكميات المناسبة ليتم حقنه في كل غدة. ويمكن استخدام التقييم البصري بسيط لتحديد ما إذا كان صبغ يصل النظام القنوي بأكمله (الشكل 4)، وما إذا معطوبة أي القنوات أثناء الولادة.

الشكل 1: رسم تخطيطي للأرنب غدد ثديية. أزواج اثنين أقل من النقاط تمثل الحلمات من الغدد الأربية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

معشوقة = "jove_content" FO: المحافظة على together.within الصفحات = "1">
الشكل 2: إعداد وكيفية تركيب الكانيولا من الأربي الغدة الثديية لينترادوكتال تسليم. (A) ويرد حلمة من الحق في الغدة الثديية الأربية هنا مباشرة بعد الولادة من 0.2 مل من 0.9٪ ملحي معقم. على الحقن، وتصور فتحات الأقنية بشكل أكثر وضوحا. (ب) وفتح الأقنية في نفس حلمة ثم يتم مقنى مع 25 G صريحا معلومات سرية ضخ إبرة. يظهر السهم لفتح الأقنية دون قنية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 3. غير المستهدفة التباين الكاشف تصور داخل الثدي القناة بواسطة الموجات فوق الصوتية أناmaging. المترجمة (A) الكاشف المقابل فورا بعد الولادة وتصور (ب) 30 دقيقة بعد الولادة و (C) 45 دقيقة بعد الولادة. استمرار كاشف داخل القناة الثديية يسمح التصور طوال مدة هذا البروتوكول. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (4): والأربي الغدة الثديية المصبوبة من خلال الحلمة مع ايفانز الأزرق المالحة الحل. (A) والمظهر الخارجي بعد الحقن ينترادوكتال من 0.2 مل من محلول ايفانز الأزرق. (ب) عند فتح الجلد، وايفانز الأزرق يسمح تصور كامل شجرة الأقنية اللبنية ويؤكد هيكل الأقنية سليمة. (<قوي> C) جبل لالجامع عينة من منطقة الغدة الثديية الأربية بعد التثبيت وتلطيخ مع الشب اللون القرمزي. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.