وضع البروتوكول المكرر لزرع الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية البشرية ترانس-سكليرال سوبريتينال في عيون الفئران

Summary

حقن سوبريتينال قد طبقت على نطاق واسع في الدراسات الإكلينيكية للعلاج باستبدال الخلايا الجذعية لكبر السن البقعي. في هذه المقالة تصور، يصف لنا تقنية حقن سوبريتينال أقل مخاطرة واستنساخه وتعديل التحديد عن طريق نهج ترانس-سكليرال لتوصيل الخلايا إلى عيون الفئران.

Abstract

أمراض الشبكية التنكسية مثل كبر السن البقعي (AMD) هي السبب الرئيسي لفقدان البصر الذي لا رجعة فيه في جميع أنحاء العالم. أية أم دي تتميز بانحطاط الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية (RPE) التي هي أحادي الطبقة خلايا الداعمة وظيفيا وتشريحيا الالتفاف حول الشبكية العصبية. العلاجات الدوائية الحالية لعدم نيوفاسكولار أية أم دي (AMD الجافة) فقط إبطاء تطور المرض ولكن لا يمكن استعادة الرؤية، مما يستدعي دراسات تهدف إلى تحديد الاستراتيجيات العلاجية الرواية. استبدال الخلايا RPE التنكسية بالوعد يحمل الخلايا السليمة لعلاج أية أم دي الجاف في المستقبل. وتشمل الدراسات السريرية واسعة النطاق من الخلايا الجذعية العلاج البديلة لأية أم دي زرع الخلايا RPE المستمدة من الخلايا الجذعية في الفضاء سوبريتينال من النماذج الحيوانية، التي تطبق تقنية حقن سوبريتينال. والنهج الأكثر استخداماً في هذه الدراسات السريرية على الحيوانات طريق ترانس-سكليرال، الذي صعوبة بسبب انعدام التصور مباشرة من نهاية الإبرة، وكثيراً ما يمكن أن يؤدي إلى تلف الشبكية. نهج بديل من خلال الجسم الزجاجي يسمح للمراقبة المباشرة لوضع نهاية الإبرة، ولكن فإنه ينطوي على مخاطر عالية للصدمات الجراحية كما نشعر بالقلق أكثر من أنسجة العين. قمنا بتطوير أسلوب حقن ترانس سكليرال معدلة أقل مخاطرة واستنساخه يستخدم زوايا محددة بإبرة وأعماق بنجاح واستمرار تسليم RPE الخلايا في الفضاء سوبريتينال الفئران وتجنب الأضرار الشبكية المفرط. الخلايا التي تم تسليمها بهذه الطريقة أثبتت سابقا أن تكون فعالة في الفئران "الكلية الملكية للجراحين" (نظام المنسقين المقيمين) لمدة شهرين على الأقل. يمكن استخدام هذا الأسلوب ليس فقط لزرع الخلايا ولكن أيضا لتسليم الجزيئات الصغيرة أو العلاج الجيني.

Introduction

شبكية العين البشرية تقع في الجزء الخلفي من وظائف العين كأنسجة حسية خفيفة ويلعب دوراً حاسما في تصور الرؤية. الخلل في الخلية الشبكية أو موت الخلايا وبالتالي يسبب مشاكل في الرؤية أو العمى الدائم. الاضطرابات التي تشمل ضمور أو اختلال وظيفي للخلايا في طبقات مختلفة من الشبكية معروفة كأمراض الشبكية التنكسية، بينها AMD هو النوع الأكثر شيوعاً، والسبب الرئيسي للعمى الذي لا رجعة فيه في كبار السن في البلدان المتقدمة النمو ^1،2. عملية المرضية من AMD يرتبط بتراكم "دروسين" بين طبقة RPE وغشاء بروخ الكامنة في، الذي بدوره يضعف الدعم RPE الفسيولوجيا مستقبله، مما يؤدي إلى ضمور الشبكية العصبية و فقدان الرؤية^{3، 4،5}. وحتى الآن لا يوجد علاج متقدمة الجاف AMD (غير نيوفاسكولار). ظهور العلاج بالخلايا الجذعية كنموذج جديد في الطب التجديدي يجلب الأمل لاستبدال الخلايا RPE المختلة وظيفيا أو الميت بالخلايا السليمة المستمدة من الخلايا الجذعية. في الواقع، وقف الدراسات السريرية واسعة النطاق لزرع خلايا (مثلاً، الخلايا الجذعية الجنينية البشرية)-المشتقة من الخلايا RPE في نماذج حيوانية RPE التنكسية قد أجرى^6،7، التي انتقلت إلى التجارب السريرية^8،9 (NCT01344993، ClinicalTrials.gov). في الآونة الأخيرة، وحددت لدينا مختبر مصدر بديل للخلايا الجذعية المقيم في طبقة RPE البشرية، أن الخلايا الجذعية RPE البشرية (هربيسكس)، ويستخدم حاليا في الدراسات السريرية لعلاج زرع الخلايا (هربيسك-RPE) RPE المستمدة هربيسك لأية أم دي ^{10 , 11 , 12 , 13}.

يتم تطبيق تقنية حقن سوبريتينال في الدراسات السريرية المذكورة أعلاه بواسطة مجموعات متعددة، بما في ذلك مجموعتنا. وهناك نهجين عامين لحقن سوبريتينال في الحيوانات: ترانس-فيتريل وعبر سكليرال. النهج ترانس-فيتريل الذي يتميز بالجراح التمكن من مراقبة مباشرة نهاية إبرة تخترق العين الأمامي، يعبر تجويف فيتريل كامل المتاخمة للعدسة، وتخترق الشبكية في الجزء الخلفي للعين لتصل سوبريتينال مساحة^14،،من¹⁵¹⁶. ومع ذلك، فإنه يتطلب تعطيل الشبكية في موقعين (الأمامي والخلفي)، ينطوي على خطر الأضرار بالعدسة، ويمكن أن يؤدي في الدفق خلايا في الجسم الزجاجي عندما يتم سحب الإبرة. وفي المقابل، النهج ترانس-الصلبة العينية، من حيث المبدأ، يتجنب إشراك الشبكية والجسم الزجاجي، والدفق مخارج العين. في القوارض المصطبغة، الجراح في البداية أن نلاحظ تغلغل الصلبة العينية، ولكن بعد مرور في المشيمية المصطبغة، نهاية إبرة لم تعد مرئية. دون المراقبة المباشرة، خرق الشبكية شائع، ويمكن أن يسفر عن تشريح الشبكية والتسليم للخلايا و/أو الدم الجسم الزجاجي. علاوة على ذلك، لأنه منحنى على سطح العين، فإنه من الصعب جداً معرفة زوايا إبرة والأعماق التي هي الأكثر فعالية لحقن ترانس-سكليرال.

في هذه المقالة تصور، نقدم طريقة حقن سوبريتينال ترانس سكليرال أبلغ عن طريق استخدام التقييمات بعد الجراحة مع "البصرية التماسك التصوير المقطعي" (OCT)، التي تتيح إجراء فحص مفصل للحقن. تستخدم تقنية حقن ترانس سكليرال لدينا مواقع المعرفة، والزوايا، وأعماق لابر الحقن لإنتاج منخفضة جداً من الصدمة الجراحية والموثوقية العالية. هنا، علينا أن نظهر على وجه التحديد حقن الخلايا هربيسك-RPE في الفضاء سوبريتينال من الفئران نظام المنسقين المقيمين، نموذج ما قبل سريرية للبشرية أية أم دي. مع هذا الأسلوب حقن، نحن بنجاح واستمرار تسليم الخلايا هربيسك-RPE في الفضاء سوبريتينال من عيون الفئران نظام المنسقين المقيمين مع نسبة نجاح عالية جداً. حقن الخلايا وجد سابقا أن يؤدي إلى الحفاظ على نظام المنسقين المقيمين photoreceptors 2 أشهر على الأقل بعد حقن¹³. هذه الإجراءات تتم تحت مجهر تشريح وسهلة التعلم. أنه يتطلب شخصين (طبيب جراح ومساعد) للقيام الحقن ومتوسط الوقت لحقن لكل الحيوانات أقل من 5 دقائق. بزوايا محددة والأعماق للحقن بالإبر تجعل من الممكن للمختبرات والتي يتوفر فيها OCT، تحقيق نجاح حقن سوبريتينال. أنها تسمح للوصول سوبريتينال استنساخه بدرجة عالية، ويمكن استخدامها لزرع الخلايا، بل أيضا للمخدرات العلاجات التسليم والجينات.

Protocol

عليها جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) في "جامعة ولاية نيويورك" في ألباني.

1-حقن قبل إعداد

1. إعداد تعليق خلية هربيسك-RPE
   ملاحظة: يتم تنفيذ كافة الخطوات التالية في زراعة الأنسجة المعقمة هود والإلمام بتقنية تعقيم الأساسية المطلوبة.
   1. عزل الخلايا الأولية حرب من المانحين البشرية عيون الذين تتراوح أعمارهم بين 50-90 عاماً، وخلايا الثقافة في لوحات جيدا 24¹². كريوبريسيرفي الخلايا في مرور 1، وذوبان الجليد حسب الحاجة وثقافة المرور 2 (P2) خلايا لمدة 4-5 أسابيع (الشكل 1A) للحقن.
   2. إزالة الثقافة المتوسطة¹² ولطف الآبار شطف مرتين مع 500 ميليلتر استعد قبل 1 × دولبيكو "الفوسفات مخزنة المالحة" دون الكالسيوم والمغنيسيوم (1 × دببس-مركز المرأة والأسرة) بإضافة 1 X دببس-مركز المرأة والأسرة في الآبار باستخدام ماصة ميليلتر 1,000 وإزالته باستخدام فراغ.
   3. إضافة 300 ميليلتر التربسين/الدناز لكل بئر. احتضان خلايا هربيسك-RPE التربسين/الدناز (كو 4 الدناز كل 1 مل من 0.25% التربسين-يدتا) لمدة 4 دقيقة عند 37 درجة مئوية فصل الخلايا.
   4. فحص الخلايا تحت المجهر لمعرفة ما إذا كانوا قد اعتقلوا. الاستمرار في احتضان الخلايا في التربسين/الدناز 2 دقيقة إضافية إذا كانوا لا قد اعتقلت حتى الآن.
   5. حالما يتم تقريب الخلايا، استخدم ماصة ميليلتر 1,000 تريتوراتي الخلايا المنفصلة من البئر ونقل التربسين/الدناز الذي يحتوي على خلايا منفصلة إلى أنبوب مخروطي 15 مل مع تساوي حجم المعالجون مسبقاً الثقافة المتوسطة، لإلغاء تنشيط التربسين/الدناز.
   6. شطف الآبار بحرارة قبل 1 X دببس-مركز المرأة والأسرة بلطف بيبيتينج صعودا وهبوطاً، لا سيما حول حواف البئر؛ قم بإضافة هذه الخلايا إلى أنبوب مخروطي الشكل السابق.
   7. الطرد المركزي الأنبوبة المخروطية في 286 س ز لمدة 5 دقائق عند درجة 4 مئوية بيليه الخلايا.
   8. إزالة المادة طافية وريسوسبيند الخلايا مع 1 مل الثقافة المتوسطة.
   9. عد الخلايا باستخدام هيموسيتوميتير.
   10. الطرد المركزي في 286 س ز لمدة 5 دقائق عند درجة 4 مئوية بيليه الخلايا.
   11. إزالة المادة طافية وريسوسبيند الخلايا في العقيمة متوازنة الملح الحل (BSS) في الخلايا 50,000/ميليلتر (لتقديم خلايا 50,000 في 1 ميليلتر الحجم أثناء حقن سوبريتينال).
   12. نقل تعليق خلية النهائي (CS) في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.7 مل ونضع في خليط الماء المثلج حتى استخدام الحقن.
2. إعداد الخلية حاقن
   1. إدراج إبرة مشطوف 33-قياس معقمة في الحقن بحقنه والمسمار محكم لتجميع محقن.
   2. مسح الحاقن مع الإيثانول 100% 5-6 مرات.
   3. مسح الحاقن مع الإيثانول 70% 5-6 مرات.
   4. مسح الحاقن مع BSS 5-6 مرات.
   5. علامة الإبرة حاقن بقلم ماركر سوداء عقيمة في موقف من 600 ميكرون بعيداً عن غيض الإبرة تحت مجهر تشريح (الشكل 1B).
   6. ضع محقن في ميكرومانيبولاتور للحقن.

2-سوبريتينال حقن

1. منطقة العمليات الجراحية وإعداد الحيوانات
   1. وزن الفئران قديمة في أسبوع 4-5 نظام المنسقين المقيمين (60-100 جرام) وتخدير باستخدام نظام التسليم بالبخار إيسوفلوراني.
      ملاحظة: للحث على إبقاء التخدير معدل التدفق إيسوفلوراني 5%. تأكيد عمق التخدير عن طريق الضغط على الكفوف، ومن ثم خفض معدل التدفق إلى 2-3% للحفاظ على التخدير أثناء الجراحة.
   2. مكان ثني جراحة معقمة، مع لوحة تدفئة أسفل، في مرحلة مجهر تشريح إقامة منطقة جراحية معقمة.
   3. نقل الفئران إلى منطقة العمليات الجراحية والفئران في مخروط الآنف متصل بنظام إيسوفلوراني للحفاظ على التخدير.
   4. يغطي الجسم في الفئران مع شاش. قرصه تو للفئران للتأكد من التخدير الكامل.
2. ترانس-سكليرال حقن سوبريتينال تحت المجهر
   1. تطبيق قطره من زيوت التشحيم العين في العين أونوبيراتيد في الفئران.
   2. ضع الفئران على الجانب الأيمن مع العين اليسرى، تواجه الحد الأقصى للحقن، ورأسه نحو اليد اليمنى للجراح وظهرها نحو الجراح.
   3. تقليم أي شعيرات التي تغطي العين مع مقص صغير.
   4. التنقيط وكمية صغيرة من غسل العين من الجانب الزمني من العين اليسرى وجمع الفائض إلى جانب الآنف مع قضيب القطن شطف العين.
   5. تمدد التلميذ مع فينيليفريني تروبيكاميدي و 2.5% 1% (طازجة من فينيليفريني 10% باذابته في العقيمة 0.9% المالحة اليوم لعملية جراحية) لامتحان أكتوبر بعد حقن بتطبيق قطره واحدة لكل منهما.
   6. اجذب الجلد المحيطة بالعين 4-6 مرات لفتح الجفن حيث تكون العين قليلاً بروبتوسيد لتسهيل الوصول إلى المناطق الخلفية ليمبوس.
   7. تطبيق قطره غسيل العين وإبقاء العين رطبة.
   8. بلطف تريتوراتي CS (أعد الخطوة 1.1.12) وتحميل الحاقن مع 1.2 ميليلتر CS. يستخدم ميليلتر 0.2 إضافية للتعويض عن حقن الدفق.
      ملاحظة: استناداً إلى قياسات لدينا، حول الخلايا 5,000-8,000 تضيع في الدفق مع حقن الخلايا/ميليلتر 50,000 الذي يساوي حوالي 10-16% فقدان الخلية وتم حقن إضافية من 0.2 ميليلتر CS لتعويض هذه الخسارة في الخلية.
   9. ضع حاقن مليئة CS في ميكرومانيبولاتور (أو يكون مساعدا أنه عقد) عمودياً ك RPE الخلايا تميل إلى بالوعة بسهولة في التعليق.
   10. تطبيق قطره 0.5% بروباراكيني (مخدر موضعي المحلية) على العين وإزالة الزائدة مع قضيب القطن.
       ملاحظة: هذه الخطوة ينبغي أن قمع منعكس القرنية ويمنع العين من الوميض أثناء الخطوات اللاحقة.
   11. استخدام الملقط بقبضة الملتحمة الخلفي ليمبوس واستدارة العين انفيا، ورفع الملتحمة جعل "خيمة".
   12. استخدام مقص لقطع الجزء العلوي من "خيمة" لجعل فتحه صغيرة في الملتحمة وفضح الصلبة الكامنة.
   13. استخدام الملقط إلى قبضة حافة الهامش الملتحمة المتبقية بجوار ليمبوس واستدارة العين انفيا حيث يكون المحور الحدقة بزاوية مقدارها حوالي 30 درجة بالنسبة إلى أعلى الجدول (الشكل 1). تجتاح استمرار الهامش الملتحمة ضروري لتوفير قوة مضادة أثناء غرز الإبرة والحفاظ على العين بزاوية أمثل.
   14. جعل ثقب تجريبية لحقن الخلية، ضع نهاية إبرة الأنسولين 31-قياس مشطوف العقيمة على مكم 1,200-1,500 الخلفي ليمبوس مع افتتاح نصيحة مواجهة.
   15. ضبط زاوية إبرة الأنسولين بحيث أنه من 10-15 درجة فوق الصلبة (عرضية لطائرة وهمية في موقع الحقن المقصود). اختراق المجمع المشيمية الصلبة إلى عمق حوالي 500 ميكرومتر إبرة ببطء. نهاية إبرة في الفئران المصطبغة، سوف 'تختفي' تحت المشيمية المصطبغة. للعلامة تجارية إبرة الأنسولين المستخدمة هنا، هو المسافة من الحافة إبرة إلى المجسم مشطوف الحواف 500 ميكرومتر.
   16. بعناية سحب إبرة الأنسولين (قد ينظر انصباب صغيرة جداً من الدم).
   17. إذا أشار إلى النزيف، يمكن تطبيقها رمح عين لمسح الحفرة، إذا لزم الأمر. استمرار النزيف بعد تطبيق الرمح يشير إلى سفينة ربما تكون قد تضررت.
   18. دليل الإبرة تحميل الخلية حاقن RPE في حفرة رائدة، مع فتح التي تواجه أسفل، وفي زاوية من حوالي 10-15 درجة بالنسبة إلى السطح المحلية من الصلبة العينية.
   19. برفق إدراج إبرة محقن في حفرة رائدة على عمق حوالي 500 ميكرون الوصول إلى الفضاء سوبريتينال. ينبغي أن يكون هناك حول هامش 100 ميكرومتر بين حافة علامة قلم أسود ونقطة حيث تغطيها الإبرة المشيمية المصطبغة (الشكل 1 ود 1).
   20. اسأل المساعد كساد برفق المكبس المحاقن محقن لحقن ملائمة حجم الخلايا (حوالي 1.2 ميليلتر). تكون على استعداد لتقديم بعض قوة مضادة المساعد يضغط على المكبس.
       ملاحظة: يمكن أن توفر الممارسة السابقة وهمية مع المساعد كل الجراح والمساعد مع الخبرة اللازمة مع هذه الخطوة.
   21. بينما تركز بصريا على القلم مارك الحافة وعقد محقن في مكان ل 25-30 s ثم تتراجع ببطء محقن. ويلاحظ عادة كمية صغيرة من الدفق.
       ملاحظة: إذا كان يتم ملاحظة لا الدفق، قد يكون هناك حقن حقن. إذا كنت ترى الدفق عن طريق الختم أو خلايا ملء تحت الصلبة العينية، تم الحقن ضحلة جداً.
   22. شطف efflux خلية من موقع الحقن مع غسل العين العقيمة 3 مرات وجمع الفائض مع قضيب القطن.
   23. تطبيق قطره من زيوت التشحيم العين في العين تعمل ونقل الفئران إلى مركز أكتوبر لدراسة موقع الخلايا المزروعة وحجم بليب سوبريتينال.

3-بعد حقن العلاج

1. علاج مسكن للالتهابات والألم
   1. حقن البوبرينورفين في 0.1 مغ/كغ من وزن الجسم في المياه المالحة تحت الجلد لخفض الألم.
   2. حقن الديكساميتازون في 1.6 ملغ/كغ من وزن الجسم في المحلول الملحي بالحقن داخل (القائمة) لمكافحة الالتهابات.
2. استرداد الحيوان
   1. تعود الفئران إلى القفص الانتعاش تحت مصباح حرارة للحفاظ على درجة حرارة الجسم.
   2. مراقبة العين تعمل لعلامات النزف.
   3. مراقبة الفئران للتأكد من أنها تأتي من التخدير.
   4. العودة الحيوان المستردة إلى قفص طازجة والعلم القفص مع بطاقة جراحة، ورصد يومي لأي إشارات الاستغاثة، ونزيف في العين، أو نسبة تظليل القرنية. إعلام الطبيب البيطري فورا إذا كان هناك مخاوف.

Results

باستخدام تقنية الموضحة في هذه المقالة، نحن ألقي باستمرار خلايا هربيسك-RPE في الفضاء سوبريتينال من الفئران نظام المنسقين المقيمين بالتحكم في دقة الموقع، وزاوية وعمق إدخال إبرة محقن الأنسجة (الشكل 1B-د ). فورا أجرى زرع الأعضاء التالية، النظر في أكتوبر للاحتفال بالحقن وبليب سوبريتينال التي تم إنشاؤها بواسطة الخلايا المزروعة. بعد الجراحة أكتوبر التقييم بمثابة أداة فحص لتقييم نوعية الحقن والرصد لتلف الشبكية أو نزيف. كلا بليب سوبريتينال (الشكل ...

Discussion

تقنية حقن سوبريتينال المبينة في هذه المادة عبر المسار عبر سكليرال، حيث تخترق الإبرة حاقن الطبقات الخارجية (الصلبة-المشيمية-RPE مجمع) الجدار العين دون إيذاء الشبكية العصبية أو الإخلال بتجويف الزجاجي. وقد نهج بديلة ترانس-فيتريال مخاطرة محتملة الضرر العدسة مما يؤدي إلى إعتام عدسة العين، منذ عدسة القوارض يشغل معظم التجويف الزجاجي. مقارنة بهذا الأسلوب، لدينا تقنية أقل مخاطرة ويسبب الصدمة الحد الأدنى كما إبرة محقن لا تحتاج إلى الذهاب عبر تجويف الزجاجي كاملة الوصول إلى مساحة سوبريتينال. وفي الواقع، امتحانات أكتوبر في دراساتنا ب...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.25٪ Trypsin-EDTA (1x)	Life Technologies	25200-072
DNAse I	Sigma	DN-25
1xDulbecco' s محلول ملحي مخزن بالفوسفات بدون كالسيوم و أمبير المغنيسيوم (1xDPBS-CMF)	Corning Cellgro	431219
محلول ملح معقم متوازن (BSS)	Alcon	00065079550
غسول العين المعقم	مور ميديكال	75519
معقم 0.9٪ محلول ملحي	Hospira	488810
محلول العيون بروباراكايين هيدروكلوريد (0.5٪)	Akorn	17478026312
محلول تروبيكاميد للعيون ، USP (1٪)	Bausch & amp Lomb	24208058559
Phenylepherine Ophtalmic Solution ، USP (10٪) مخزون	Bausch & amp	Lomb 42702010305	يستخدم هذا لصنع 2.5٪ فينيل إيفيرين
بوبرينكس	باترسون	433502
ديكساميثازون	APP Pharmaceuticals	63323051610
100٪ إيثانول	حراري علمي	615090040
70٪ إيثانول	ريكا كيماويات	2546.70-5
جل زيوت التشحيم المعقمة GenTeal	قطرات العين المعقمة	Systane Ultra
	Alcon	00065143105
خلايا hRPESC-RPE	غير متوفرة		يرجى الرجوع إلى "المرجع # 12" لعزل الخلايا وصيانتها.
24 بئر ألواح	Corning	3526
أنابيب مخروطية (15 مل)	Sarstedt	62554002
غطاء الطرد المركزي الدقيق مع الحلقة	o LPS inc	L233126
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة بدون غطاء (1.7 مل)	LPS inc	L233041
جهاز طرد مركزي	Eppendorf	5804R
مناديل كحولية معقمة	McKesson	58-204
تطبيق طرف قطنية معقمة	McKesson	24-106-2S
معقمة Weck-Cel الرماح	Beaver-Visitec International   ؛	0008680
الستائر الجراحية المعقمة	McKesson	25-515
Gauze	McKesson	16-4242
حقنة Nanofil (10 ul)	World Precision Instruments	Nanofil
Nanofil مشطوفة 33 مقياس إبرة	World Precision Instruments	NF33BV-2
إبر حقنة الأنسولين 31 قياس	Becton Dickinson	328418
ملقط	الأسنان بالجرذ العالم أدوات دقيقة	555041FT
Vannas مايكرو تشريح الربيع مقص	Roboz	RS-5602
مضخة المياه المتداولة T   ؛	Stryker	TP700
وسادة التدفئة	كينت Scientific	TPZ-814
نظام التخدير الحيواني	World Precision Instruments	EZ-7000
Balance	Ohaus	PA1502
مجهر ستيريو	Zeiss	Stemi 2000
مصدر ضوء	المجهر سلسلة Schott	ACE
Bioptigen Envisu المجال الطيفي نظام تصوير العيون	Bioptigen	R2210
قلم تحديد أسود معقم	Viscot Industries	1416S-100
مقياس قياس مصغر	Ted Pella Inc	13623
مصباح بقعة التشمس بالأشعة تحت الحمراء	EXO-TERRA	PT2144	يستخدم كمصباح تدفئة للحيوانات خلال مرحلة التعافي بعد الجراحة