النمذجة التقليدي جزئية انسداد المثانة منفذ في القوارض محفوف نفوق الحيوانات. اصابة إزالة التعصيب من تشريح جميع أنحاء القريبة مجرى البول وعنق المثانة هي أيضا مصدر قلق كبير. قمنا بتطوير وتقييم لمنتصف مجرى البول نموذج عرقلة آمنة وموثوق بها، وتجنب أوجه القصور في النموذج التقليدي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التي تقتصد في العصب منتصف الإحليلية إعاقة (نيمو) في أنثى القوارض الصغيرة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
جزئية انسداد المثانة منفذ (pBOO) لديها انتشار عالية، يسبب عبئا كبيرا المريض، وتكاليف الرعاية الصحية الهائلة. نموذج حيواني الأكثر شيوعا للتحقيق في المثانة إعادة عرض في pBOO والقوارض الإناث تمر انسداد جزئي في مجرى البول القريبة. التغير في درجة الانسداد ونفوق الحيوانات من الشواغل الرئيسية مع انسداد القريبة. وعلاوة على ذلك، تشريح حول الداني مجرى البول وعنق المثانة يهدد المثانة تعصيب.
قمنا بتطوير نموذج منتصف الإحليلية انسداد التي تقتصد في العصب (نيمو) للpBOO تجنب عيوب النموذج التقليدي. اقتربنا من مجرى البول فقط أقل شأنا من الارتفاق العانة، الذي ينفي الحاجة إلى فتح البطن وكذلك للتشريح في هذا المجال؛ أيضا، وظلت مصرة الإحليل المخططة يمسها. أجرينا نيمو في إناث فئران سبراغ داولي (12 عوائق 6 الحيوانات الشام)، وكذلك في الإناث C57 / الفئران BL6 (20 إعاقةالصورة، 18 الحيوانات الشام). بعد أسبوعين، قمنا بتقييم وظيفة المثانة والكتلة المثانة، وكتلة الجسم.
لم يكن لدينا وفيات بين إناث الفئران obstructed- أو الشام التي تديرها. كما هو موضح في الدانية التقليدي pBOO-الأسلوب، نحن ربط الخيط حول الاحليل الداني وضعت مؤقتا 0.9 ملم قضيب معدني. نيمو الناجم عن زيادة 85٪ في كتلة المثانة بعد أسبوعين، كان متوسط حجم البول المتبقية 0.4 مل في الفئران عرقلت جزئيا في حين لا تتعدى 0.03 مل في الحيوانات صورية. في الفئران، واختبرنا 3 أحجام قنية أننا وضعت على طول مجرى البول عند ربط الخيط. لقد وجدنا أن استخدام قنية 27 عيار أدى في أكثر من نفوق الحيوانات 50٪، وضع قنية عيار 25 لم تسفر عن الاستجابة المطلوبة في زيادة كتلة المثانة. استخدام قنية 26 عيار أسفرت عن نتائج إيجابية مع الوفيات الحد الأدنى من الحيوان (1/8) بعد مهمة زيادة بنسبة 2 أضعاف في كتلة المثانة.
المقدمة
جزئية المثانة منفذ إعاقة (pBOO) لديها ارتفاع معدل انتشار ويمكن أن يؤدي إلى شديد المثانة اختلال وظيفي 1؛ ويتراوح الطيف من التشوهات الخلقية مثل الصمامات الخلفي مجرى البول أو مبال تحتاني، على تضيق الإحليل المكتسبة لتضخم البروستاتا الحميد. هذا الأخير يؤثر على أكثر من 30٪ من الرجال ستين عاما فما فوق 2. عبء المريض كبيرة وتكاليف الرعاية الصحية الهائلة المرتبطة pBOO تبرر الجهد البحثي الكبير وضعت موضع دراسة إعادة المثانة ردا على مقاومة زيادة تدفق 3. من عام 2006 وحتى عام 2015، أكثر من 220 فهرستها مجلات نشرت مقالات بشأن تأثير pBOO على المثانة البولية.
على الرغم من أن النماذج الحيوانية للpBOO وقد وضعت في العديد من الأنواع 4، مثل الفئران 5، الأرنب 6، 7 خنزير، ومذكرات التفاهمه 8، 9، ومع ذلك يمكن القول إن النموذج الحيواني الأكثر استخداما هي إناث الفئران التي تمر انسداد جزئي في مجرى البول القريب. الحصول على بطن الحيوانات، exteriorizing المثانة، وتشريح حول عنق المثانة لا مفر منها مع هذه التقنية مجرى البول عرقلة التقليدية القريبة. التغير في درجة الانسداد ونفوق الحيوانات ليست سوى بعض من المخاوف المرتبطة بهذا الإجراء 10، 11؛ أظهرنا أنه في الشام تشغيلها الحيوانات، تشريح حول الاحليل الداني يؤدي إلى التغيرات الفسيولوجية التي ترتبط مع فقدان الألياف العصبية في عنق المثانة 12. وتشير هذه النتيجة إلى أن الأكثر شيوعا نموذج حيواني pBOO، الذي ينطوي على الوصول إلى مجرى البول الداني في القوارض الإناث، يؤدي إلى إصابة إزالة التعصيب مع التغييرات الهيكلية والوظيفية المرتبطة المثانة، مما يؤثرصورية والحيوانات المتعسرة. لذلك، هناك حاجة إلى نهج تجنب الإصابة إزالة التعصيب بديلة. مختبرنا تطوير وتقييم نهج إعاقة منتصف الإحليلية التي تقتصد في العصب (نيمو) وفعال في إحداث تغييرات المصاحب عرقلة المتوقع في المثانة مثل زيادة في كتلة الجهاز والبول المتبقية، بينما كانت الحيوانات الشام التي تديرها تمييزه عن الحيوانات السيطرة unoperated . أيضا، وظلت مصرة الإحليل المخططة يمسها لأنها تقع الأقرب إلى مستوى تشريح. وعلاوة على ذلك، كان التباين في الزيادة الناجمة عن انسداد في كتلة المثانة أقل بكثير مما كانت عليه في التقليدية انسداد مجرى البول الداني وكان نفوق الحيوانات صفر.
نحن أيضا تطبيقها بنجاح على نيمو في إناث الفئران مع معدل وفيات أقل من 10٪ في الحيوانات إعاقة، في حين ارتبطت كل النماذج pBOO للفئران صفها حتى الآن مع الوفيات حوالي 50٪. سوف دراسة المثانة إعادة عرض في سياق pBOO في الفئران الاستفادة من applicabilإيتي من مجموعة كاملة من التعديلات المعدلة وراثيا.
تشريح حول منتصف مجرى البول في الإناث القوارض لا يسبب التغييرات الهيكلية أو الوظيفية غير المرغوب فيها والتباس في المثانة البولية لوحظت في نموذج عرقلة القريبة التقليدي. ومع ذلك، الأمر الذي أدى إلى إعاقة جزئية على مستوى منتصف مجرى البول لا يزال يدفع المثانة تضخم وزيادة البول المتبقية، كما هو متوقع من نموذج حيواني لpBOO. الأهم من ذلك، أداء نيمو في الفئران يفتح التحقيق في إعادة المثانة في pBOO إلى أساليب المعدلة وراثيا، والتي هي غير متوفرة تقريبا في القوارض أكبر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وتمت الموافقة على بروتوكول التجريبية التالية من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسة.
1. نيمو في إناث الفئران
- تجهيز
- وضع الإناث الفئران سبراغ داولي يزن حوالي 200 غرام أقل من 3٪ الأيزوفلورين التخدير، وتزن الحيوان، ويحلق وتطهير المنطقة prepubic 3 مرات باستخدام فرك الجراحية اليود.
- على وسادة التدفئة، والشريط أطرافه الخلفية والذيل إلى أسفل ويقثطر المثانة مع angiocatheter 20 عيار، والذي هو أيضا مسجلة بلطف إلى أسفل لمنع انزلاق.
- تشريح
- استخدام مشرط لإجراء 8 ملم الطولي شق الجلد من الارتفاق العانة واضح نحو الصماخ الإحليل. رفع قبالة الجلد على جانبي لتسهيل احق إغلاق الجرح.
- تشريح بصراحة لتحديد مجرى البول stented عن طريق نشر طولية مع مقص غرامة. وضع غرامة الذاتي الاحتفاظ السنانير الجلد لتعزيز التعرضمن مجرى البول.
- أداء بعض لطيف طولية نشر باستخدام مقص منحني ظهري إلى مجرى البول لتطوير الطائرة بين مجرى البول والمهبل. ثم، لتمرير بصراحة خياطة 4-0 الحرير وراء مجرى البول وإعداد رمي مزدوج من عقدة الجراح.
- جزئية انسداد مجرى البول
- إزالة angiocatheter، ضع 0.9 ملم قضيب معدني موازية لمجرى البول، ومن ثم تشديد عقدة حول مجرى البول وقضيب معدني، وذلك أن هذا الأخير لا يزال تنزلق بسهولة بعد ذلك.
- تأمين عقدة مع 3 المزيد من رميات باستخدام التوتر لطيف قبل إزالة قضيب. قطع خياطة تنتهي حوالي 3 مم لونغ، أو 4 مم إذا إصدار أحدث من انسداد هو جزء من التجربة.
- إغلاق الجرح
- تقريب الغدد المجاورة للإحليل باستخدام غرزة واحدة دفن من امتصاص مضفر خياطة 4-0.
- إغلاق الجلد مع غرزة فراش الأفقي دفن باستخدام نفس سوت امتصاصلدى عودتهم. ملاحظة: على الرغم من أنه قد يبدو غير تقليدية لاستخدام الخيط للامتصاص لغرزة اختراق الجلد، ونحن لم تواجه مضاعفات مثل الالتهابات الجروح، ويمكن تجنب ذلك إزالة خياطة.
- بعد الرعاية
- حقن البوبرينورفين 0.1 ملغ / كغ تحت الجلد قبل وضع الفئران في قفص الانتعاش.
- تقدم بعض اتباع نظام غذائي استرداد النظام لمدة 24 ساعة الأولى للفأر يقع واحد. بعد هذه الفترة، حيوانات المنزل مرة أخرى في نفس أزواج كما كان من قبل الإجراء شريطة أن تبلي بلاء حسنا وتنتمي إلى مجموعة العلاج نفسها.
- تحقق من الفئران يوميا لحجم المثانة والرفاه العام. تسجيل وزنهم على الأقل أسبوعيا.
2. نيمو في الفئران الإناث
- تجهيز
- وضع الإناث C57BL / 6 الماوس يزن حوالي 18 جرام والمضي قدما كما هو مفصل في الخطوة 1.1.1.
- المضي قدما كما هو مفصل في خطوة 1.1.2، باستثناء استخدام آنج 24 عيارiocatheter.
- تشريح
- استخدام مشرط لإجراء 6 مم الطولي شق الجلد من الارتفاق العانة واضح نحو الصماخ الإحليل.
- تشريح بصراحة لتحديد مجرى البول stented عن طريق نشر طولية مع مقص غرامة. رفع من حزمة من الأعصاب الأوعية الدموية تشغيل البطني على مجرى البول عن طريق تشريح حادة مماثلة.
- أداء بعض لطيف طولية نشر باستخدام مقص منحني ظهري إلى مجرى البول لتطوير الطائرة بين مجرى البول والمهبل. ثم، لتمرير بصراحة خياطة 5-0 غير قابل للامتصاص مضفر وراء مجرى البول وإعداد رمي مزدوج من عقدة الجراح.
- جزئية انسداد مجرى البول
- ربط angiocatheter مع حقنة 1 مل وحقن 0.1 مل من محلول ملحي في المثانة.
- وضع قنية بالتوازي عيار 26 إلى مجرى البول. تشديد بلطف عقدة حول مجرى البول وقنية في حين يتراجع في angiocaعشر.
- تأمين عقدة مع 3 المزيد من رميات باستخدام التوتر لطيف قبل إزالة قنية.
- اختبار البول التي تظهر في الصماخ على ضغط لطيف على المثانة الحيوان. تخفيف التعادل إذا كان غير قادر على التعبير عن البول. خلاف ذلك، وقطع الخيط تنتهي حوالي 3 مم.
- إغلاق الجرح
- إغلاق الجلد مع غرزة فراش الأفقي دفن باستخدام 5-0 مضفر خياطة للامتصاص.
- بعد الرعاية
- ضخ 0.1 ملغم / كغم البوبرينورفين تحت الجلد قبل وضع الماوس في قفص الانتعاش.
- تقدم بعض اتباع نظام غذائي استرداد النظام ل48 ساعة الأولى للماوس يقع واحد. بعد هذه الفترة، حيوانات المنزل مرة أخرى في نفس المجموعات كما كان من قبل الإجراء شريطة أن تبلي بلاء حسنا وتنتمي إلى مجموعة العلاج نفسها.
ملاحظة: الفئران مع اضح منتفخة المثانة 24 ساعة بعد العملية التي لا باطل عند التعامل معها والإفراط في عرقلة وسوف يموت في غضون نتحويلة 1-2 أيام ما لم تؤخذ مرة أخرى تحت التخدير لإزالة ربطة المعطل. - تحقق من الفئران يوميا لحجم المثانة والرفاه العام. تسجيل وزنهم على الأقل أسبوعيا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
التي تقتصد في العصب منتصف الإحليلية إعاقة (نيمو) في إناث الفئران
معدل الوفيات
أجرينا عرقلة منتصف مجرى البول على أكثر من 40 إناث الفئران حتى الآن وليس لديه وفيات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
نفوق الحيوانات هي واحدة من الاهتمامات الرئيسية للنموذج التقليدي للpBOO في مجرى البول القريبة، بنسبة 15٪ أو أكثر في العديد من التقارير 10 و 11 و 13. يبدو نيمو أن يكون الحد الأدنى من الوفيات عند تطبيقها في إناث الفئران. القريبة انسداد مجرى البول لدى الفئران هي تقنيا أكثر صعوبة مما كان عليه في الفئران، وبالتالي حتى أكثر عرضة للمضاعفات. باستخدام قنية عيار 26 كعنصر نائب ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم تمويل العمل من خلال منحة تشغيلية من CHIR (DJB).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أنثى الفئران | تشارلز ريفر كندا | سبراغ داولي الجرذ (Crl: SD) ؛ رمز الإجهاد: 400 | حوالي 200 جرام |
| مبخر الأيزوفلوران | بنسون للصناعات الطبية | TEC III Isoflurane؛ رمز المنتج: 53-T3ISO | |
| Isoflorane | Fresenius Kabi Animal Health | Isoflorane; رمز المنتج: CP0406V2 | زجاجة 250 مل |
| مشرط يمكن التخلص منه | تيد بيلا ، إنك. | # 15 مشارط معقمة من الفولاذ المقاوم للصدأ ؛ رقم الكتالوج 549-9-15S | |
| ملقط الفحص المجهري | Ted Pella، Inc. | ملقط الفحص المجهري Aesculap ، Finepoint ، 115 مم ؛ رقم المنتج 5443 | |
| ملقط Adson | Ted Pella، Inc. | ملقط تشريح Aesculap Adson ، منحني ، 120 مم ؛ رقم المنتج 5002-9 | |
| مقص جراحي منحني | Ted Pella، Inc. | مقص جراحي ، منحني ، S / S ، 105 مم ؛ رقم الكتالوج 1376 | |
| 0.9 مم قضيب معدني إينوكس | goodfellow.com | الفولاذ المقاوم للصدأ - قطر السلك AISI 316L: 0.9 مم ؛ رمز الطلب 911-684-65 | |
| خطافات الجلد - ذاتية الصنع من الفولاذ goodfellow.com | الفولاذ المقاوم للصدأ - AISI 316L قطر السلك: 0.9 مم ؛ رمز الطلب 911-684-65 | ||
| 4-0 خياطة الحرير | esutures.com | 4-0 Sofsilk أسود 98 "حبلا ؛ رقم المنتج LS640 | |
| 5-0 خياطة Vicry | esutures.com | 5-0 Vicryl غير مصبوغ 27 "RB-1 تفتق ؛ رقم المنتج J213H | |
| حامل إبرة | Medsupplier.com | إبرة Integra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner - 5 1/2 "; رمز المنتج: SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC | |
| Temgesic (بوبرينورفين) أول | إمداد بيطري | Buprenex 0.3MG / ml inj أمبير; البند #075701 | |
| 1 مل حقنة مع 27 غرام إبرة | فيشر Scientific | BD & nbsp ; حقنة السل ، BD 309623 | |
| 20 G Angiocath | Fisher Scientific | Andwin Scientific ؛ أنجيوكاث 20 GA ؛ رقم الكتالوج NC9561906 | |
| التعافي من النظام الغذائي | clearh2o | DietGel 31M; 72-08-5022 | |
| C57Bl / 6 إناث الفئران | تشارلز ريفر كندا | C57BL / 6 الفأر (C57BL / 6NCrI); رمز الإجهاد: 027 | حوالي 18 جم |
| 24 جم من الأوعية الدموية | فيشر Scientific | Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc. IV CATH ANGIOCATH 24GX3/4IN; رقم الكتالوج NC9814340 | |
| 5-0 Ethibond | esutures.com | 5-0 Ethibond green 30 "RB-1 تفتق ؛ رقم المنتج X550H | |
| 26 G إبرة حقنة | Sigma-Aldrich | BD Precisionglide ، المقياس 26 ؛ z192392 | |
| Normal Saline | Baxter | 0.9٪ حقن كلوريد الصوديوم ، USP ، 100 مل ميني كيس؛ رمز المنتج 2B0043 |
المراجع
- Andersson, K. E. Storage and voiding symptoms: pathophysiologic aspects. Urology. 62 (5), 3-10 (2003).
- Boyle, P., et al. The prevalence of lower urinary tract symptoms in men and women in four centres. The UrEpik study. BJU Int. 92 (4), 409-414 (2003).
- Coyne, K. S., Wein, A., Nicholson, S., Kvasz, M., Chen, C. I., Milsom, I. Economic burden of urgency urinary incontinence in the United States: a systematic review. J Manag Care Pharm. 20 (2), 130-140 (2014).
- Buttyan, R., Chen, M. W., Levin, R. M. Animal models of bladder outlet obstruction and molecular insights into the basis for the development of bladder dysfunction. Eur. Urol. 32 (Suppl 1), 32-39 (1997).
- Mattiasson, A., Uvelius, B. Changes in contractile properties in hypertrophic rat urinary bladder. J Urol. 128 (6), 1340-1342 (1982).
- Chang, S., et al. Alteration of the PKC-mediated signaling pathway for smooth muscle contraction in obstruction-induced hypertrophy of the urinary bladder. Lab Invest. 89 (7), 823-832 (2009).
- Moore, J. A., Brading, A. F. A porcine model of bladder outlet obstruction incorporating radio-telemetered cystometry. BJU Int. 100 (5), 1192-1193 (2007).
- Beamon, C. R., Mazar, C., Salkini, M. W., Phull, H. S., Comiter, C. V. The effect of sildenafil citrate on bladder outlet obstruction: a mouse model. BJU Inte. 104 (2), 252-256 (2009).
- Pandita, R. K., Fujiwara, M., Alm, P., Andersson, K. E. Cystometric evaluation of bladder function in non-anesthetized mice with and without bladder outlet obstruction. J Urol. 164 (4), 1385-1389 (2000).
- Kang, Y. J., et al. Early Sequential Changes in Bladder Function after Partial Bladder Outlet Obstruction in Awake Sprague-Dawley Rats: Focus on the Decompensated Bladder. Korean J Urol. 52 (12), 835-837 (2011).
- Schroeder, A., et al. Protective effect of an oral endothelin converting enzyme inhibitor on rat detrusor function after outlet obstruction. J Urol. 172 (3), 1171-1174 (2004).
- Sidler, M., Aitken, K., Jiang, J., Bijos, D., Bägli, D. "sometimes a sham is just a sham" - why the rodent model of partial bladder outlet obstruction needs adjustment. J Urol. 195 (4), e379(2016).
- Jin, L. H., et al. Persistent detrusor overactivity in rats after relief of partial urethral obstruction. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 301 (4), R896-R904 (2011).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
