مقالة منهجية

المناظير مستعرض الأورطي انقباض في الفئران

DOI:

10.3791/55293

⸱

مارس 14, 2017

 ,  ,  , 
1School of Biological Sciences, The University of Hong Kong, 2College of Arts and Science, New York University, 3Department of Health Technology and Informatics, Faculty of Health and Social Sciences, The Hong Kong Polytechnic University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مينيملي انقباض الشريان الأورطي عرضية (MTAC) تحافظ على أساسيات انقباض الشريان الأورطي عرضية منتظم (TAC) في حين القضاء على استخدام جهاز التنفس الصناعي مع التنبيب الرغامي. وهذا يثبت أن هناك طريقة مرغوب فيه للغاية للدراسات الإنتاجية العالية على اليسار الزائد البطين، ولا سيما في دراسات الترجمة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مينيملي انقباض الشريان الأورطي عرضية (MTAC) هو أسلوب أكثر من المرغوب فيه للانقباض الشريان الأورطي عرضية في الفئران من المعايير الصدر مفتوحة انقباض الشريان الأورطي عرضية (TAC). على الرغم من انقباض الشريان الأورطي عرضية هي طريقة وظيفية للغاية للتحريض ارتفاع الضغط في البطين الأيسر، وهو إجراء أكثر صعوبة وطويلة بسبب استخدامه التنفس الصناعي مع التنبيب الرغامي. معاهدة الصداقة والتعاون في كثير من الأحيان أيضا أقل النجاة منه، كما أن طريقة أحدث وMTAC، لا يتطلب قطع الأضلاع والعضلات بين الضلوع ولا التنبيب الرغامي مع إعداد التهوية. في MTAC، في مقابل بضع الصدر للوصول إلى تجويف الصدر، يتم الوصول إلى قوس الأبهر من خلال شق خط الوسط في الرقبة الأمامية. يتم سحبها الغدة الدرقية يعود للكشف عن الشق القصية. يتم قطع القص بعد ذلك وصولا الى مستوى الضلع الثاني، ويتم الوصول إلى قوس الأبهر ببساطة عن طريق فصل الأنسجة الضامة والغدة الصعترية. من عندهناك، يمكن أن تكون ملفوفة خياطة حول القوس، وتعادل مع فاصل، ثم قطع القصية والجلد يمكن أن تكون مغلقة. MTAC هو أسرع بكثير وأقل الغازية طريقة للحث الأيسر ارتفاع ضغط الدم في البطين ويتيح إمكانية للدراسات الإنتاجية العالية. نجاح انقباض يمكن التحقق باستخدام عالية التردد تخطيط صدى القلب عبر الصدر، وخاصة دوبلر لون وموجة نابض دوبلر، لتحديد سرعات تدفق قوس الأبهر واليسار والشرايين السباتية الحق، والبعد من الأوعية الدموية، و وظيفة البطين الأيسر والتشكل. وهناك انقباض ناجحة تؤدي أيضا التغيرات التشريحية المرضية الهامة، مثل القلب وتضخم الخلايا العضلية يعانون من التليف الخلالي وماحول الأوعية. هنا، يتم وصف هذا الإجراء من MTAC، مما يدل على مدى التغييرات تدفق مما أدى إلى الشرايين السباتية يمكن دراستها مع تخطيط صدى القلب، مورفولوجيا الإجمالي، والتغيرات التشريحية المرضية في القلب.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهدف العام من هذه المقالة هو لشرح كيفية عرضية انقباض الشريان الأبهر (TAC) في الفئران يمكن تعديلها لإنتاج جراحة أبسط وأكثر سرعة. وقدم TAC لأول مرة في عام 1991 (1) وتمكين علماء الأحياء الجزيئية لدراسة مسارات الخلوية والجزيئية التي تؤدي إلى تضخم في البطين الأيسر وفشل القلب، ولا سيما في الحيوانات الصغيرة مع الجينوم التلاعب 2، 3، 4، 5، 6. وعلى الرغم من فعاليته في إنتاج الزائد الضغط المطلوب، وتقنية محدودة في نهاية المطاف من قبل صعوبة في تنفيذ الإجراء ومعدل البقاء على قيد الحياة المنخفض. وقال جراح إجراء TAC يجب أن تكون قادرة على أداء التنبيب الرغامي، بضع الصدر، واستخدام التهوية الاصطناعية من أجل منع انهيار الرئة 1.

محتوى "> كثير من الأحيان، هو المطلوب طريقة بسيطة وأقل الغازية. ونتيجة لذلك، استنبط مينيملي انقباض الشريان الأورطي عرضية (MTAC) 3. على الرغم من أن نتائج (على وجه التحديد، البطين الأيسر تضخم) هو نفسه، الإجراء ينطوي أقل بكثير الأجهزة وأقل ضررا للحيوان. يثبت MTAC لتكون وسيلة من المرغوب فيه أن يبلغ معدل البقاء على قيد الحياة أكبر، أكثر من 90٪، ولديه وقت تشغيل فقط 15 إلى 25 دقيقة، وهي حالات نادرة من الموت بعد جراحة ناجحة يمكن أن يعزى إلى غاية انقباض -tight من قوس الأبهر، مما أدى إلى هائلا الزائد البطين الأيسر والحد قاتلة من تدفق الدم إلى الأعضاء الحيوية مثل الكلى.

بعد الانتهاء من إجراءات، وضربات القلب يمكن استخدامها لتقييم مدى نجاح النطاقات والتشكل القلب وظيفة. ويمكن استخدام نظام الموجات فوق الصوتية عالية التردد لقياس قطر وتدفق التغييرات في اليسار واليمينالسباتي الشرايين، لتصور انقباض قوس الأبهر لقياس سرعة تدفق الذروة، وتحديد الأيسر سمك البطين الجدار والمعلمات الوظيفية 7 و 8. بعد القتل الرحيم، يمكن للأجهزة أيضا أن يتم جمعها لدراسة الأنسجة مع الهيماتوكسيلين وتلطيخ يوزين وPicrosirius الكولاجين تلطيخ، وهذا الأخير هو مفيدة بشكل خاص لمراقبة التليف.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتبع بروتوكول للمبادئ التوجيهية للجنة بشأن استخدام الحيوانات الحية في التدريس والبحث (CULATR) في جامعة هونغ كونغ.

1. عملية إعداد الموقع

  1. تطهير موقع العملية مع 75٪ ايزوبروبيل. ضبط درجة الحرارة سادة التدفئة إلى 37 درجة مئوية لتفادي تغيرات في القلب ومعدلات التنفس الحيوان الموضوع.
  2. استخدام الأدوات الجراحية المعقمة في معقم خطورة التشرد في درجة حرارة 121 مئوية لمدة 30 دقيقة أو عن طريق وسائل أخرى مناسبة.
  3. خذ 2-4 إبر عيار 30 ومنحنى لهم مع حامل إبرة، كما رأينا في الشكل 1، لجعل أداة للربط والنسيج العازل ولاستخدامها بوصفها ضام. جبل الإبرة الآن منحني على قضيب من القطن لاستخدامها في الجراحة.
  4. كليلة إبرة 27 عيار ومنحنى ذلك 90º مع حامل الإبرة. تمهيد طرف عن طريق فرك سطح صلب لجعل فاصل 0.4 ملم في خطوة ربط.

الحمار = "jove_title"> 2. تحضير الحيوانات

  1. تخدير العمر 2-أشهر، ذكر، 22-25 ز C57BL / 6N الماوس مع الكيتامين المناسب وخليط زيلازين فيما يتعلق وزن الجسم: 100 ملغ / كغ + 10 ملغ / كغ الملكية الفكرية تأكيد التخدير مع قرصة رد الفعل السلبي الذيل .
  2. إزالة الشعر على الرقبة الأمامية والصدر مع الطلب 2- 3 دقائق من كريم مزيل الشعر. إزالة كريم مع الماء الدافئ وقضيب من القطن.
  3. تطبيق مرهم أو هلام للعيون الحيوان لمنع جفاف القرنية.
  4. وضع الحيوان على وسادة التدفئة في موقف ضعيف، وإجراء الرصد داخل المنطوق، ويجري التأكد من الحفاظ على الوثائق المناسبة في كل فترة 15 دقيقة.
  5. استخدام ورقة الشريط الجراحية لتأمين أطرافه إلى لوحة التدفئة من اجل الحفاظ على الحيوان في الموضع الصحيح أثناء الجراحة.
  6. تطهير الجلد بالتناوب مع الكحول وبوفيدون اليود حل ثلاث مرات.
  7. استخدام معقم الدكتورقرد مع حقل العملية معرضة لمنع التلوث. استخدام قفازات معقمة جديدة لكل الماوس وعند الضرورة.

3. إجراء من ربط

  1. فتح الجلد من الفأرة في موقف خط الوسط في الرقبة والصدر مع مشرط.
  2. سحب الغدة الدرقية نحو الرأس عن طريق فصل بلطف الأنسجة الضامة مع مقص حادة.
  3. فصل طبقة العضلات على القصبة الهوائية في خط الوسط نحو كلا الجانبين مع الإبر المنحنية.
  4. باستخدام مقص حادة، وقطع القص إلى الضلع الثاني (حوالي 5 ملم). فتح قطع مع ضام أو ملقط منحنية.
  5. فصل فصوص الغدة الصعترية عن بعضها البعض وانخفاض جدار الصدر عن طريق فصل النسيج الضام مع إبرة منحنية. سوف قوس الأبهر عرضية واثنين من الشرايين السباتية تكون مرئية بشكل واضح في هذه النقطة.
  6. وضع إبرة منحنية تحت القوس وخرم بين جدار الوعاء الدموي والنسيج الضام على الجانب الآخر من صديدهينج رئيس المنحني خارج.
  7. باستخدام إبرة مقوسة، وسحب الخيط 6-0 حيدة تحت قوس الأبهر.
  8. وضع فاصل في حلقة وإصلاح خياطة في مكان مع مزدوجة عقدة. إزالة هل بلطف.
  9. تأكيد انقباض ناجحا مع الموقف عقدة وقطع طرفي الخيط.
  10. إغلاق جدار الصدر باستخدام 6/0 خياطة الحرير مع نمط خياطة توقف بسيط. إغلاق الجلد مع خياطة 6/0 حيدة في نمط خياطة المستمر.

العناية 4. بعد العملية

  1. تطبيق حل بوفيدون اليود إلى الموقع خياطة ووضع الحيوانات في قفص قبل تحسنت لاسترداد ومراقبة ما بعد الجراحة.
  2. حقن البوبرينورفين (0،05 حتي 0،1 ملغ / كغ الشوري كل ساعة 12) بعد هذا الحيوان قد استعاد وعيه لتخفيف الألم وتوفير الفأر مع المواد الغذائية لينة المناسب.
  3. عودة الحيوان إلى ضوء 12 ساعة / غرفة دورة الظلام بعد الشفاء التام.

5.تخطيط صدى القلب: تأكيد عملية ربط الناجح والمقاييس

  1. بعد أسبوع واحد، تخدير الماوس النطاقات سابقا مع 3-5٪ الأيزوفلورين، لتحريض، و1-1،5٪، لصيانة، مع / دقيقة معدل تدفق الأوكسجين 1 لتر.
  2. إزالة شعر الصدر باستخدام كريم مزيل الشعر. تماما إزالة كريم مع الماء الدافئ وقضيب من القطن.
  3. تأمين الماوس في موقف ضعيف إلى منصة التعامل مع الحيوان، حافظت على 37 درجة مئوية. تطبيق هلام الكهربائي إلى الكفوف والشريط لهم إلى لوحة مع الأقطاب الكهربائية.
  4. تطبيق هلام الموجات فوق الصوتية في الصدر الماوس. مع تحقيق 40 ميغاهرتز MS550D ونظام الموجات فوق الصوتية عالية التردد، وأداء دوبلر لون وموجة نابض دوبلر المسح على اليسار والشرايين السباتية الصحيحة، فضلا عن قوس الأبهر.
  5. باستخدام B-الوضع، حدد موقع البطين الأيسر. باستخدام M-الوضع، وضغط الدم الانقباضي والانبساطي سمك الجدار يمكن قياسها. استخدام سينمائية مخزن والإطار مخزن لحفظ البيانات والصور على النحو المطلوب.
  6. Uالغناء B-الوضع، حدد موقع الأيسر الشريان السباتي المشترك قبل نقطة التفرع. استخدام نابض الموجة ودوبلر لون لتقييم التدفق. كرر مع الحق في الشريان السباتي عند نقطة مماثلة. حفظ الصور في السينما مخزن والإطار تخزين وسائط للتحليل في وقت لاحق.
  7. إمالة منصة التعامل مع الحيوان إلى اليسار حتى الآن على أن الفأر هو في موقف استلقاء الأيسر. وضع مسبار على الماوس، 30 ° تعويض من موقف مواز في الرأس في موضع القص، والتلاعب X و Y للعثور على قوس الأبهر.
  8. تحديد موقع انقباض. استخدام وضع دوبلر اللون لجعل الموقع من انقباض أكثر وضوحا، والدم سوف تتدفق من خلال قناة ضيقة بين نقطة حيث اثنين من الشرايين السباتية تتفرع من قوس الأبهر.
  9. استخدام نابض الموجة ودوبلر لون لقياس سرعة تدفق الذروة. استخدام سينمائية مخزن والإطار مخزن لحفظ البيانات والصور على النحو المطلوب.
  10. السماح للحيوان للتعافي على وسادة التدفئة في وضعية الانبطاح.عودة الحيوان إلى القفص الأصلي في 12 ساعة ضوء / غرفة دورة الظلام بعد أن تعافى تماما من التخدير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MTAC تمكن تحريض ارتفاع ضغط الدم كبير في البطين الأيسر في الوقت المناسب.

كما رأينا في الشكل 1، وإعداد الأدوات الأساسية لهذا الإجراء هو بسيط وضئيل، لا تتطلب سوى 2-4 إبر عيار 30 إلى أن تكون عازمة والذي عقد في مكان مع أنبوب البولي يوريثين. العملية الجراحية في حد ذاته هو أيضا أقل تعقيدا، بالمقارنة مع معاهدة الصداقة والتعاون، ويمكن القيا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابتكر روكمان وزملاؤه الطريقة الأولى لربط الأبهر كوسيلة لدراسة الزائد الضغط في القلب. هذا البحث سكريبت لتبدأ لكشف عواقب الخلوية والجزيئية لارتفاع ضغط الدم وقصور القلب 1. افضل طريقة، مينيملي عرضية انقباض الشريان الأبهر (MTAC)، ويوفر وسيلة قابلة، تعتمد على الوقت للتحريض البطين الأيسر الضغط الزائد وقصور القلب، دون الآثار الجانبية لانقباض الشريان الأورطي عرضية التقليدية 9. الإجراء في حد ذاته لا يمكن أن يؤديها بشكل ملحوظ أكثر سهولة ومع زيا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونود أن نعترف مرفق أبحاث جامعة في علوم الحياة (ULS) من جامعة هونغ كونغ للفنون التطبيقية لتوفير VEVO 2100 نظام الموجات فوق الصوتية. شكر خاص للدكتور تشون يي ون من الفرقة متعددة التخصصات من الهندسة الطبية الحيوية، وهونغ كونغ جامعة البوليتكنيك، للتدريب والتيسير. وأيد هذا العمل من قبل الحكومة هونج كونج RGC غرانت GRF 17127215، 764812 وHKU6 / CRF / 11G لبيلي KC تشاو.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي>1 بوصة 30 إبر قياس < / قوي >BD ، بحيرات فرانكلين ، نيوجيرسي 07417 ، الولايات المتحدة الأمريكية.305128منحني كما في الإجراء و <قوي>الشكل 1< / strong
>27 مقياس إبرة < / strong>BD ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي 07417 ، الولايات المتحدة الأمريكية.301629اجعل حادة وسلسة للفاصل
< قوي > 6/0 Dafilon < / strong >B. Braun ، 34212 Melsungen ، Hessen ، ألمانيا.C0933066
<قوي>6/0 سيلكامب. براون ، 34212 ميلسونجن ، هيسن ، ألمانيا.C0762067
<قوية>قفازات معقمةA.R. Medicom، Inc (آسيا)، هونغ كونغ.
قضيب <قوي > قطن < / قوي >مانينغز ، خليج المحجر ، هونغ كونغ.مركز تسوق محلي
< قوي > كريم مزيل للشعر < / strong>veet (هونغ كونغ) ، كوون تونغ ، كولون ، مركز هونغ كونغللتسوق
المحلي < قوي > Lexer-Baby Scissor< / strong>FST ، كولومبيا البريطانية V7H 0A6 ، كندا.14078-10
<قوي>ملقط قزحية منحني < / قوي >FST ، كولومبيا البريطانية V7H 0A6 ، كندا.11065-07
Micro Olsen-Hegar Needle HolderWPI, Sarasota, FL 34240, USA. 501989
Stereo MicrioscopeWPI, Sarasota, FL 34240, USA. PZMIII-BS
strong>GenTeal Eye GelNovartis, East Hanover, NJ 07936, USA. صيدلية محلية
<قوية>وسادة تدفئةكينت ساینتيك كوربوريشن، تورينجتون، CT 06790، الولايات المتحدة الأمريكية.DCT-20<
strong>شريط جراحي< قوي>
المختبر<قوي> الكيتامين والزيلازين< / قوي>وحدة
المختبر<قوي>بيتادين< قوي>وحدة
المختبر<قوي>بوبرينورفين< قوي>وحدةالمختبر
<وحدة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc Natl Acad Sci U S A. 88 (18), 8277-8281 (1991).
  2. de Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. Transverse aortic constriction in mice. J Vis Exp. (38), (2010).
  3. Hu, P., et al. Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 285 (3), H1261-H1269 (2003).
  4. Shimizu, I., et al. Excessive cardiac insulin signaling exacerbates systolic dysfunction induced by pressure overload in rodents. J Clin Invest. 120 (5), 1506-1514 (2010).
  5. Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods Mol Biol. 573, 115-137 (2009).
  6. Zhang, X., et al. A modified murine model for the study of reverse cardiac remodelling. Exp Clin Cardiol. 18 (2), e115-e117 (2013).
  7. Hartley, C. J., et al. Doppler estimation of reduced coronary flow reserve in mice with pressure overload cardiac hypertrophy. Ultrasound Med Biol. 34 (6), 892-901 (2008).
  8. Scherrer-Crosbie, M., Thibault, H. B. Echocardiography in translational research: of mice and men. J Am Soc Echocardiogr. 21 (10), 1083-1092 (2008).
  9. Faerber, G., et al. Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: reduced peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator levels and mitochondrial dysfunction. J Thorac Cardiovasc Surg. 141 (2), 492-500 (2011).
  10. Li, L., et al. Assessment of Cardiac Morphological and Functional Changes in Mouse Model of Transverse Aortic Constriction by Echocardiographic Imaging. J Vis Exp. (112), (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة