مقالة منهجية

استخدام الاشراط الكلاسيكي اييبلينك تتبع لتقييم هيبوكامبال الخلل في نموذج الفئران من اضطرابات طيف الكحول الجنيني

9.5K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/55350

⸱

أغسطس 5, 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Psychology, East Carolina University, 2Multidisciplinary Studies Program in Neuroscience, East Carolina University

في هذه المقالة

ملخص

تتبع اييبلينك الاشراط الكلاسيكي (ECC) واستخدمت لتقييم التعلم النقابي هيبوكامبال المعتمدة في الفئران الكبار التي كانت تدار تركيزات عالية من الكحول (11.9% v/v) أثناء تطور الدماغ حديثي الولادة المبكرة. بشكل عام، إجراءات ECC أدوات التشخيص السليم للكشف عن الخلل في الدماغ عبر العديد من الإعدادات النفسية والطبية الحيوية.

الملخص

كانت تدار من الفئران حديثي الولادة تركيزات عالية نسبيا من الكحول الاثيلي (11.9% v/v) خلال الأيام التالية للولادة 4-9، وقت الدماغ الجنين يخضع للتغيير التنظيمي السريع وهو مماثل لتسارع التغييرات الدماغ التي تحدث خلال الربع الثالث في البشر. هذا النموذج من اضطرابات طيف الكحول الجنيني (فاسدس) ينتج تلف الدماغ الشديد، محاكاة حجم ونمط من السمر الذي يحدث في بعض الأمهات الحوامل الكحولية. يصف لنا استخدام الاشراط الكلاسيكي تتبع اييبلينك (ECC)، متغير مرتبة أعلى من التعلم النقابي، وتقييم الضعف هيبوكامبال الطويلة الأجل التي ينظر إليها عادة في ذرية الكبار المعرضة للكحول. في 90 يوما عمر، القوارض كانت مستعدة جراحيا مع تسجيل وتحفيز كهربائي، التي تقاس اليكتروميوجرافيك (EMG) وميض النشاط من عضلة الجفن الأيسر وألقى صدمة خفيفة الخلفي للعين اليسرى، على التوالي. بعد فترة انتعاش يوم 5، أنها خضعت 6 جلسات لتتبع ECC لتحديد الاختلافات التعلم النقابي بين المعرضة للكحول والتحكم في الفئران. تتبع ECC هي واحدة من العديد من الإجراءات المبكرة الممكنة التي يمكن تعديلها بسهولة باستخدام نفس المعدات والبرمجيات، حيث أنه يمكن تقييم النظم العصبية المختلفة. وبصفة عامة، يمكن استخدام الإجراءات المبكرة كأدوات التشخيص للكشف عن الأمراض العصبية في أنظمة الدماغ المختلفة والظروف المختلفة التي إهانة الدماغ.

المقدمة

من الصعب تماماً تخيل أنه في عصرنا الحالي، ومع تحسن الرعاية الصحية وتسهيل الوصول إلى الخدمات الصحية، لا يزال إساءة استخدام الكحول يمثل مصدر قلق صحي عالمي رئيسي. ولسوء الحظ، فقد ثبت أن الأم الحامل التي تستهلك كميات كبيرة من الكحول قد تنجب طفلاً يعاني من تلف دماغي شديد واضطرابات في النمو العصبي تستمر مدى الحياة، كما هو واضح لدى المصابين بمتلازمة الجنين الكحولية (FAS)1,2,3. وفيما يخص النساء اللواتي لديهن تاريخ مؤكد من استخدام الكحول أثناء الحمل، فإن الجنين النامي يكون أيضاً عرضة للتأثر بكميات صغيرة من الكحول أو بأنماط مختلفة من استهلاكه تؤدي إلى تباين في تركيزات الكحول في الدم. وفي هذه الحالة الأخيرة، ورغم أن الأطفال قد لا يظهرون الاضطرابات المورفولوجية أو العصبية السلوكية الشديدة مثل تلك المصاحبة لـ FAS، إلا أنهم قد يظلون يعانون من إعاقات معرفية واضطرابات عاطفية مدى الحياة تتراوح شدتها من الطفيفة إلى الشديدة3,4. وبشكل عام، تشكل FAS والأشكال الأقل شدة من الاضطرابات الناجمة عن تعاطي الكحول قبل الولادة مجموعة من اضطرابات طيف الكحول الجنينية (FASDs). وليس من المفاجئ أن هذه الاضطرابات قابلة للوقاية تماماً، ولكن من المثير للدهشة أن التقديرات تشير إلى أنه في المجتمعات التي يشيع فيها إساء استخدام الكحول، تظل هذه الاضطرابات السبب غير الوراثي الرئيسي للإعاقة العصبية والمعرفية، حيث تؤثر على حوالي 2% إلى 5% من الأطفال الصغار في الولايات المتحدة وفي دول أوروبية مثل فرنسا والسويد. وبالنسبة لمعدل حدوث FAS وحدها داخل الولايات المتحدة، فإن معدل الانتشار هو 2 إلى 7 لكل 1,0 مولود حي5، مما يشير إلى أن معدل حدوث FASDs الإجمالي أعلى بكثير من معدل حدوث FAS.

أظهرت دراسات التصوير العصبي التي أُجريت على الأطفال المصابين باضطرابات طيف الكحول الجنينية (FASDs) وجود تشوهات دماغية، مثل رقة الجسم الثفني6، وصغر حجم الدودة المخيخية الأمامية7، وصغر حجم الحصين8. وتكمن هذه التشوهات الدماغية وراء بعض الاضطرابات المعرفية العصبية طويلة المدى الملاحظة لدى الأطفال المصابين باضطرابات طيف الكحول الجنينية. ولم يتم بعد تحديد الروابط الدقيقة التي تربط بين التغيرات الدماغية الناتجة عن تعاطي الأم للكحول والتباينات في نمط (أي نوع ومدى) قصور معرفي عصبي معين. ولكن كبداية، يعد الحصين مرشحاً ممتازاً لتحديد مدى تأثره بآثار الكحول قبل الولادة. وبالفعل، يظهر الأطفال المصابون باضطرابات طيف الكحول الجنينية قصوراً في السلوكيات التي يتوسطها الحصين، مثل تعلم المكان9,10 واسترجاع الأشياء المؤجل1.

لقد أثبتت نماذج القوارض لاضطرابات طيف الكحول الجنينية (FASDs) أنها ذات قيمة لا تقدّر بثمن في توضيح الآليات التي تؤدي إلى الاختلالات المعرفية العصبية المشاهدة لدى الأطفال المصابين بهذه الاضطرابات. ويتضمن نموذج التعرض المفرط (binge-exposure model) الراسخ الذي اعتمدناه تقديم الكحول للجرذان خلال الأيام التالية للولادة من اليوم الرابع إلى التاسع.12,13، وهي فترة يمر خلالها الدماغ بتكوين سريع للمشابك والاتصالات الشجيرية، وهو ما يماثل الأسبوع 24 من المرحلة الجنينية لدى البشر ويمتد إلى الأسبوع 3بما أن النص المقدم هو مجرد اختصار "rd"، وهو غير كافٍ لتحديد سياق علمي أو تقني محدد لترجمته، يرجى تزويدي بالنص الكامل المراد ترجمته لضمان الدقة العلمية والالتزام بالمعايير المطلوبة. ثلث الحمل14,15,16,17يؤدي هذا النموذج تحديداً إلى فقدان كبير في العصبونات الحصينية.18,19 والعصبونات في العديد من مناطق الدماغ الأخرى مثل المخيخ12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23، يصاحبها ضعف شديد في الوظائف المعرفية يمتد ليشمل مجالات مختلفة21,24,25يمكن تقييم الاضطراب المعرفي الناتج عن التعرض المبكر للكحول في الجرذان بطرق مختلفة، لا سيما باستخدام إشراط رمش العين الكلاسيكي (ECC). يُعد ECC نموذجاً تم استخدامه لأكثر من قرن من الزمان للبحث العلمي في الأساس الجوهري للتعلم26,27 وبناءً على ذلك، فإنها توفر طريقة مفيدة لفهم التبعات المعرفية العصبية الضارة الناتجة عن التعرض للكحول في المرحلة الجنينية بشكل أفضل. ويُعد هذا النموذج مرناً للغاية، حيث يتيح للباحثين استخدام مجموعة متنوعة من إجراءات التبريد الموجه (ECC) المختلفة، والتي يمكن فحص أي منها عبر العديد من الأنواع الثديية صعوداً في السلم تطوريّ (من الفئران إلى البشر) وفي مراحل مختلفة من تطور الدماغ.28,29,30,31علاوة على ذلك، فإن الدوائر العصبية الأساسية التي تتوسط التعلم الترابطي في هذا النموذج مدعومة بتقارير تجريبية ونفسية عصبية في هذه الأنواع نفسها.26,32,33,34,35,36,37.

يتم توضيح أحد أشكال التكيف الشرطي للعين (ECC)، وهو التكيف الشرطي الأثري (trace ECC)، في هذه الورقة (الشكل 1). ولتوفير السياق، تمت مقارنته بالشكل الأكثر تقليدية وهو التكيف الشرطي المتأخر (delay ECC). تم نمذجة نموذج التكيف الشرطي للعين بناءً على التكيف الكلاسيكي باستخدام الكلاب، والذي أجراه لأول مرة عالم الفسيولوجيا الحائز على جائزة نوبل، إيفان بافلوف. اكتشف بافلوف أن محفزات معينة مثل النغمات لا تسبب سيلان اللعاب بشكل طبيعي، ولكن عندما تسبق تقديم الطعام وتتداخل معه، يمكن تعزيز استجابة سيلان اللعاب من خلال التكرار في تقديم الاثنين، شريطة الحفاظ على هذا الارتباط بين النغمة والطعام. هذا مثال على التكيف الشرطي المتأخر، مع فكرة أن قوة الارتباط تتم بوساطة التقارب الزمني الفوري بين المحفزين، مما يجعل ظروف التعلم مثالية للحيوان. كما اختبر تنويعات أخرى للارتباط بين النغمة والطعام، مثل إيقاف النغمة وترك فترة "أثر" قبل تقديم الطعام. وعندما كان هذان المحفزان غير متجاورين بما يكفي، أصبح من الأصعب بكثير على الكلاب إظهار استجابات سيلان اللعاب قبل تقديم الطعام. وبذلك يكون عدم التجاور بين إيقاف النغمة وتقديم الطعام مثالاً على التكيف الشرطي الأثري. وبما أن القوارض لا يسيل لعابها بشكل طبيعي عند وجود الطعام، يتم استخدام محفزات أكثر ملاءمة للنوع مثل الصدمة الكهربائية الخفيفة بدلاً من ذلك؛ كما أنها لا تظهر بشكل طبيعي استجابات رمش دفاعية للنغمات. وفي هذا السياق، تتضمن إجراءات التكيف الشرطي للعين في القوارض تقديم نغمة بمستوى ديسيبل معين وربطها بطريقة ما بصدمة خفيفة إما لعضلة الجفن (orbicularis oculi) أو العضلة الصدغية (temporalis) لاستثارة استجابة الرمش. تُعتبر النغمة محفزاً شرطياً (CS) بينما تُعتبر الصدمة محفزاً غير شرطي (US). في التكيف الشرطي المتأخر، يُقدم المحفز الشرطي أولاً؛ ويظل هذا المحفز يعمل لمدة زمنية محددة. بعد ذلك، يتم تقديم المحفز غير الشرطي. يتداخل هذان المحفزان لمدة محددة، ثم ينتهي كلاهما في وقت واحد؛ وتعتبر استجابة الرمش الناتجة بسبب المحفز غير الشرطي استجابة غير شرطية (UR). في هذا الإجراء، تتعلم القوارض إظهار استجابات الرمش في وقت ما بعد تقديم المحفز الشرطي، ولكن مباشرة قبل المحفز غير الشرطي، وذلك لتوقع هذا المحفز المنفر. ويُشار إلى استجابة الرمش المتعلمة باسم الاستجابة الشرطية (CR). أما في التكيف الشرطي الأثري، فيفصل بين المحفز الشرطي والمحفز غير الشرطي فترة زمنية خالية من المحفزات تُعرف باسم فاصل الأثر؛ فهما لا يتداخلان زمنياً كما هو الحال في التكيف الشرطي المتأخر. وخلال هذا الفاصل، يُكلف الحيوان بحل متطلبات الارتباط بين المحفزات. ومثل التكيف الشرطي المتأخر، يحدث التعلم عندما يظهر الحيوان باستمرار استجابة رمش بعد توقف المحفز الشرطي، ولكن مباشرة قبل تقديم المحفز غير الشرطي. ومن خلال قدر معين من تدريب الاكتساب (ربط CS مع US)، تتطور منحنيات التعلم (أي بناءً على قياسات CR المختلفة). وتظهر دراسات الآفات والتصوير العصبي أن التعلم الناجح في التكيف الشرطي المتأخر يعتمد على سلامة الدوائر العصبية في المخيخ وجذع الدماغ38,39,40، بينما يعد التكيف الشرطي الأثري إجراءً من رتبة أعلى يتطلب مشاركة عصبية إضافية من الحصين41,42,43,4 وبنيات قشرية أخرى45,46. وبسبب متطلبات التوقيت اللازمة لاكتساب الاستجابات الشرطية الأثرية بنجاح، فإن هذه المهمة تكون أيضاً أصعب في التعلم (حتى بالنسبة للأفراد الطبيعيين).

رسم بياني للإشراط الكلاسيكي؛ الفولت مقابل الزمن؛ يوضح فترات النغمة، والصدمة، والاستجابة التكيفية.
الشكل 1: تتبع الإشراط الكلاسيكي لرمش العين. يظهر هنا شكل موجي فعلي يمثل جرذاً بالغاً في مجموعة التحكم غير المُنْبُوبة (UC). يتم تقديم المثير الشرطي (CS) على شكل نغمة (85 ديسيبل، 2.8 كيلو هرتز) أولاً لمدة 380 ميلي ثانية، يليه فاصل تتبع مدته 50 ميلي ثانية لا يتم فيه تقديم أي مثيرات. بعد ذلك، يتم إلقاء المثير غير الشرطي (US) على شكل صدمة (1.6 ميلي أمبير) لمدة 10 ميلي ثانية. يحدث التعلم الناجح في هذه المهمة عندما يزداد تردد (%) أو سعة (بالفولت) رماشات العين خلال النافذة الزمنية للاستجابة الشرطية (CR) (فترة الاستجابة الشرطية الإجمالية) عبر جلسات تدريبية متعددة. وبشكل خاص، عادةً ما تُصدر القوارض ذات الحصين السليم استجابات شرطية أكثر دقة من حيث التوقيت (استجابات شرطية تكيفية) قبيل بدء المثير غير الشرطي (US) للصدمة مباشرة (ضمن نافذة زمنية قدرها 20 ميلي ثانية). كما يتم قياس استجابات الجفل (SRs) خلال أول 80 ميلي ثانية بعد بدء المثير الشرطي (CS) للنغمة، بالإضافة إلى الاستجابات غير الشرطية (URs). وعادةً ما تكون استجابات الجفل غير الترابطية منخفضة أو منعدمة في القوارض المدربة جيداً، بينما يُتوقع أن تكون الاستجابات غير الشرطية عالية التردد والسعة. تتطلب هذه المهمة أن يتعلم القارض كيفية سد الفجوة الترابطية بين انتهاء المثير الشرطي (CS) وبدء المثير غير الشرطي (US) (خلال فاصل التتبع)، مما يجعل اكتسابها أصعب بطبيعتها مقارنةً بالتكيف الشرطي بتأخير (delay ECC). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

نوضح هنا العواقب الوظيفية السلبية للتعرض للكحول في مرحلة حديثي الولادة والذي يتم تقديمه بطريقة تشبه الشرب المفرط (binge-like)، وذلك من خلال تقييمه بإجراء التكيف الشرطي الكلاسيكي (ECC) من نوع الأثر (trace)، والذي يتم فيه تقديم مثير شرطي (CS) عبارة عن نغمة بتردد 2.8 kHz وبشدة 85 dB تستمر لمدة 380 ms، يليه مثير غير شرطي (US) عبارة عن صدمة بشدة 1.6 mA تستمر لمدة 10 ms، ويفصل بين هذه المثيرات فترة أثر مدتها 50 ms. وقد ذكرنا فائدة هذا الاختبار السلوكي في دراسات سابقة بحثت في تدخل الكولين والمكملات الحديدية للتخفيف من آثار التعرض للكحول في مرحلة حديثي الولادة18,47. وبالفعل، يمكن استخدام trace ECC كأداة تشخيصية لتقييم اعتلال الحصين الناجم عن التعرض للكحول في مرحلة حديثي الولادة. وتكمن ميزته على delay ECC في أنه أكثر حساسية في الكشف عن الاضطرابات في وظيفة الحصين، والتي تكون متضررة لدى البشر المصابين باضطرابات طيف الكحول الجنينية (FASDs).

يمتد تطبيق التكييف الكلاسيكي (ECC) إلى ما هو أبعد بكثير من مجال متلازمة الجنين الكحولية. إذ يمكن استخدام العديد من متغيرات التكييف الكلاسيكي (على سبيل المثال، التأخير، والتتبع، والمركب، والعكس) لتوضيح الاختلافات الأنطوجينية في التعلم عبر مراحل النمو، والأساس النيوروبيولوجي للتعلم الترابطي في الثدييات الطبيعية، فضلاً عن مدى تأثر أنظمة الدماغ المختلفة بالتحديات العديدة، بما في ذلك (على سبيل المثال لا الحصر) مسببات التشوهات، والسموم البيئية، وإصابات الدماغ الرضحيّة، والأمراض التنكسية العصبية، والحالات النفسية.

البروتوكول

ملاحظة: تمت الموافقة على جميع الإجراءات وتنفيذها وفقاً للسياسات المحددة من قبل لجنة الرعاية المؤسسية للحيوانات (IACUC) بجامعة شرق كارولاينا. تم إنتاج جرذان Long-Evans من إناث تم تزاوجها مع ذكور مربية. وقد أُنتجت الجراء من مجموعات العلاج الثلاث (انظر 1.1) ضمن بطن واحدة من نفس الأم. أُنتجت خمس بطون، وتم تقليص عدد الجراء في كل بطن إلى 8 جراء في اليوم الثالث بعد الولادة (PD 3). أما الجروان المتبقيان من كل بطن فقد تم تخصيصهما لتجارب منفصلة. شملت الدراسة صغار الذكور والإناث على حد سواء (واحد من كل مجموعة تعريض). تم فحص ما مجموعه N = 27 من الصغار البالغين في هذه الدراسة؛ حيث تم استبعاد 3 جرذان بسبب كسر أسلاك توصيل 3T (انظر 3.1.1) والتي تعذر إصلاحها في اليوم الأول من تدريب ECC.

1. تحضير المجموعات والمواد والمحاليل

  1. في اليوم الثالث من عمر الجراء (PD 3)، يتم فصل الجراء عن الأم ووضعها على وسادة تدفئة مائية منظمة الحرارة للحفاظ على دفئها. استخدم إجراء اختيار عشوائي لتوزيع جراء الجرذان على واحدة من ثلاث مجموعات: (1) مجموعة التأنبيب بالكحول (AI)؛ (2) مجموعة التحكم بالتأنبيب الوهمي (SI)؛ أو (3) مجموعة التحكم غير المأنببة (UC). قم بتنفيذ إجراءات التعريف المعتمدة، مثل وشم قوائمها بحبر [غير سام] باستخدام إبرة مقاس 30G × 1/2 بوصة وفقًا لمخطط ترقيم محدد. أعد الجراء إلى الأم فور الانتهاء من عملية الوشم.
  2. قم بتجهيز أنبوب (أو أنابيب) للتنبيب داخل المعدة باستخدام البولي إيثيلين (PE) بمقاس 50 و10. يعتمد الطول الإجمالي لهذا الأنبوب على المستخدم ويمكن تعديله وفقاً لذلك.
    1. استخدم مقصات التشريح الدقيق لقص قطعة بطول 3 بوصات من أنابيب PE-50 وقطعة بطول 6 بوصات من أنابيب PE-10.
    2. قم بتوصيل أنبوب PE-50 بعناية بإبرة تحت جلدية معقمة مقاس 2 G وطول 1 بوصة.
    3. أدخل أحد طرفي أنبوب PE-10 في الطرف المفتوح لأنبوب PE-50. قد يتطلب الأمر إجراء قطع قطري عند طرف أنبوب PE-10 لتسهيل توجيهه إلى داخل أنبوب PE-50.
    4. اقطع قطعة صغيرة من أنبوب PE-50 (حوالي 2-3 مم) وأدخلها في الطرف المفتوح من أنبوب PE-10؛ حيث ستعمل هذه القطعة كسدادة مرئية.
    5. يُحفظ أنبوب التنبيب داخل المعدة كاملاً في كحول إيزوبروبيلي طازج بتركيز 70% للحفاظ على تعقيمه.
  3. قم بإجراءات التعقيم لتحضير محلول حليب مخزون في زجاجات سعة 50 مل. يعتمد محلول الحليب المخزون على تركيبة غذائية وضعها أولاً West et al. (1984).48تُخزن الزجاجات عند درجة حرارة -18 °C حتى وقت الاستخدام. قم بإذابة زجاجتين من الحليب باستخدام الماء الدافئ قبل الاستخدام.
    1. اسحب 7.16 مل من الإيثانول بتركيز 95% (USP) باستخدام حقنة معقمة وأضفها إلى زجاجة حليب سعة 50 مل واحدة. ينتج عن ذلك محلول كحولي بتركيز 1.9% حجماً/حجماً، يُقدم لصغار الجرذان خلال أول تغذيتين في اليوم (انظر 2.1.1)؛ وتبلغ الجرعة اليومية الإجمالية من الكحول 5.25 جم/كجم/يوم. وقد صُممت هذه الطريقة لتقديم الكحول ضمن حجم (0.0278 مل/جم لكل تغذية) في محلول حليب مُدعم.
      ملاحظة: يمكن تعديل هذه الكمية بناءً على حجم البطن والاستخدام المتوقع على مدار 3-4 أيام. كما يجب تعديل كمية الكحول المضافة من أجل تحضير محلول بتركيز 1.9% حجماً/حجماً.
    2. رُج هذه الزجاجة جيدًا وضع عليها الملصق المناسب (أيْ، 1.9% حجماً/حجماً من الكحول الإيثيلي في الحليب).
    3. قم بتمييز زجاجة الحليب الثانية (التي لم يُضف إليها كحول) بما يناسبها (على سبيل المثال، (الحليب فقط) واستخدامه للتغذيات التكميلية كما هو موضح في 2.1.1.
    4. احفظ زجاجتي الحليب في الثلاجة.

2. التعرض للكحول في مرحلة حديثي الولادة (أيام ما بعد الولادة 4-9)

  1. قم بإجراء إجمالي 4 عمليات تنبيب يومياً للجراوي من مجموعتي AI وSI بدءاً من اليوم الرابع بعد الولادة (PD 4)، مع الفصل بين كل عملية تنبيب بفاصل زمني قدره 2 h. ونظراً لأن جراوي AI يتم تنبيبها بمحلول فعلي، فإن كل عملية تنبيب لها تُعتبر تغذية.
    1. قم بتنبيب جراوي AI بمحلول الكحول الإيثيلي في الحليب بتركيز 11.9% v/v خلال أول عمليتي تغذية في اليوم، ثم قم بتنبيبها بمحلول الحليب فقط خلال عمليتي التغذية الأخيرتين في اليوم لتعزيز نموها.
    2. قم بتنبيب جراوي SI 4 مرات بدون أي محلول كل ساعتين، لضمان تعرضها لأنبوب PE-10 لنفس المدة التي تتعرض لها جراوي AI. أما مجموعة UC فلا تتلقى أي عمليات تنبيب.
  2. افصل الجراوي عن الأم وضعها على وسادة تدفئة مائية منظمة حرارياً للحفاظ على دفئها. زن كل جرو وسجل وزن جسمه (بالـ g). ارجع إلى مخطط تغذية معد مسبقاً لتحديد حجم التنبيب لكل جرو من مجموعة AI ودونه في ورقة السجل.
    1. ضع محلول الكحول الإيثيلي في الحليب بتركيز 1.9% v/v في حمام مائي دافئ ورجه جيداً.
    2. إجراء التنبيب داخل المعدة:
      1. اشطف أنبوب التنبيب داخل المعدة الذي كان مخزناً في كحول الأيزوبروبيل بتركيز 70% جيداً باستخدام ماء دافئ.
      2. استخلص الكمية الصحيحة من المحلول باستخدام حقنة معقمة سعة 1 mL.
      3. اغمس طرف أنبوب التنبيب (طرف PE-10) في زيت ذرة طازج (لتسهيل عملية الإدخال).
      4. قس طول أنبوب PE-10 من فم الجرو وصولاً إلى معدته. اضبط سدادة PE-50 لتكون دليلاً لنقطة التوقف.
      5. أدخل أنبوب PE-10 بعناية في فم الجرو، مروراً بالمريء، وتجاوزاً بسيطاً للمصرة المريئية المعدية، وصولاً إلى المعدة. افحص الجرو، وثبته، ثم اضغط على مكبس الحقنة لإيصال المحلول ببطء.
        ملاحظة: لتجنب إدخال الأنبوب عن طريق الخطأ في الرغامي، وجه الأنبوب أولاً بحيث ينحني ويلامس الحنك الرخو قبل المتابعة للأمام. استخدم الحنك كدليل، حيث سينحرف الأنبوب طبيعياً عن هذه المنطقة ويوجه نحو المريء. بخلاف ذلك، فإن أي انحراف كبير لطرف الأنبوب نحو الجهة البطنية قد يؤدي إلى دخوله في الرغامي. ويُفضل إزالة الأنبوب وعدم المتابعة في التنبيب إذا لم تكن متأكداً من موقع الدخول - وأعد إدخال الأنبوب بشكل صحيح في المحاولة التالية.
      6. أخرج أنبوب PE-10 بعناية وافحص الجرو للتأكد من عدم وجود ارتداد للمحلول أو دم أو إصابة جسدية. أعد الجرو إلى زملائه في العش إذا كانت حالته جيدة. تستغرق عملية التنبيب بأكملها أقل من 1 min تقريباً لكل جرو، وحوالي 4 min إجمالاً للجراوي الأربعة الخاضعة للتنبيب في كل بطن (2 AI و 2 SI).
      7. إجراء التنبيب داخل المعدة لجراوي SI: اتبع نفس إجراء إدخال PE-10 المستخدم مع جراوي AI، ولكن بدون أي محلول وللمدة نفسها (1 min).
      8. أعد جميع الجراوي إلى الأم فور الانتهاء من الإجراءات للجرو الأخير في البطن. أعد الأم إلى الحظيرة حتى جلسة التغذية التالية (بعد 2 h).
      9. اشطف أنبوب التنبيب داخل المعدة بماء معقم دافئ وأعده إلى كحول الأيزوبروبيل بتركيز 70% للتخزين. اشطف الأنبوب جيداً بالماء قبل كل جلسة تغذية.
      10. كرر الخطوات من 2.2 (باستثناء وزن الجراوي) إلى 2.2.2.9 لجلسة التغذية الثانية. وفي آخر عمليتي تغذية، قم بتنبيب جراوي AI بمحلول الحليب فقط باستخدام نفس أحجام التنبيب المحددة في 2.2.
  3. زن الجرذان على فترات منتظمة، مثل اليوم 15 بعد الولادة (PD 15) (عند فتح العينين)، واليوم 21 (PD 21) (الفطام)، واليوم 30 (PD 30)، واليوم 60 (PD 60)، واليوم 90 (PD 90) (الجراحة) للحصول على منحنيات نمو ممثلة.

3. تصنيع وتعديل الأقطاب الكهربائية

  1. قم بتصنيع "مرحلة رأسية" (headstage) واحدة لتخطيط العضلات الكهربائي (EMG) لكل جرذ (الشكل 2). تسمح المرحلة الرأسية بتسجيل استجابات رمش العين عبر نظام رمش العين (الشكل 4).
    1. قم ببناء مرحلة رأسية تتكون من سلكين من الفولاذ المقاوم للصدأ مغطيين بـ PTFE بحجم 3T (طول كل منهما 5 cm)، وسلك واحد من الفولاذ المقاوم للصدأ مغطى بـ PTFE بحجم 10T (طول 5 cm)، وثلاثة دبابيس تلامس ذكرية، وعازل مقبس شريطي دقيق يتم قصّه ليكون بـ 3 ثقوب (انظر 3.1.4).
    2. قم بإزالة غطاء PTFE من سلك 10T عن طريق الإمساك بالمنتصف باستخدام ملقط عالي الدقة مسنن، وإزالة الغطاء في كلا الاتجاهين باستخدام ملقط عالي الدقة أملس. تأكد من إزالة جميع آثار الغطاء من هذا السلك.
      1. قم بكبس أحد طرفي سلك 10T على دبوس تلامس باستخدام زرادية أسنان ذات منصة مسننة؛ سيعمل هذا كسلك أرضي. أمسك سلك 3T بعناية باستخدام الملقط عالي الدقة الأملس على مسافة 1 to 1.5 mm من أحد الطرفين. قم بإزالة غطاء PTFE بطول 1 to 1.5 mm مع ترك بقية الغطاء سليماً. قم بكبس دبوس تلامس على الطرف المكشوف من سلك 3T.
      2. كرر نفس الإجراءات لسلك 3T الثاني. سيعمل كلا السلكين كموصلات موجبة وسالبة لأقطاب تسجيل EMG.
    3. أجرِ اختبارات سحب لجميع الأسلاك للتأكد من تثبيتها بإحكام في الدبابيس. توخَّ الحذر لعدم ثني الأسلاك أو إتلافها.
    4. اقطع جزءاً من شريط العازل للمقبس ليصل إلى 3.5 ثقوب (اقطع منتصف الثقب الرابع) باستخدام شفرة القطع في أداة تعرية الأسلاك. قلص هذا الجزء ليصبح 3 ثقوب كاملة فقط وقم بصنفره من كلا الجانبين إذا لزم الأمر. يساعد ذلك في ضمان توفر 3 ثقوب كاملة. أدخل وحدات الدبوس-السلك في الثقوب الثلاثة للشريحة الدقيقة حتى تصبح النهايات المكبوسة محاذية للحافة السفلية لجزء العازل. يجب أن تكون تجميعة 10T في أحد الثقوب الخارجية للشريحة الدقيقة وليس في المنتصف.
  2. تعديل أقطاب التحفيز ثنائية القطب (الشكل 2).
    1. خصص لكل جرذ قطباً تحفيزياً ثنائياً واحداً. يطبق هذا القطب كمية صغيرة من التيار الكهربائي عبر عازل للمنبهات (انظر نظام رمش العين) كصدمة US أثناء ECC. يتم الحصول على الأقطاب من الشركة المصنعة في شكل ملتوٍ وتكون معزولة.
    2. قم بفك التواء الموصلين المعدنيين 2-3 مرات لتشكيل شكل V (بمدى 5 mm) ثم استخدم الملقط عالي الدقة الأملس لتسوية كل "شوكة" قدر الإمكان. قم بكشط 1 mm من العزل من طرف كل شوكة (من جميع الجهات) باستخدام شفرة حلاقة. افحص كل شوكة بحثاً عن أي عيوب أو انحناءات، وقم بتصحيحها إذا لزم الأمر دون كشط المزيد من العزل.
  3. أزل زيت التصنيع والشوائب الغريبة من المراحل الرأسية لـ EMG والأقطاب ثنائية القطب عن طريق غسلها في ethyl alcohol بتركيز 95%. اتركها لتجف ثم قم بتعقيمها بالـ autoclave.

مكونات تجميع الموصل، بما في ذلك الدبابيس والمبيتات والأسلاك، على مساحة عمل.
الشكل 2أقطاب تسجيل تخطيط كهربائية العضلات (EMG) والقطب الثنائي القطب. تكون مرحلة الرأس النهائية لجهاز تخطيط العضلات الكهربائي (EMG) (إلى اليمين، باللون البرتقالي) من ثلاثة دبابيس تلامس ذكرية، وسلكين مغلفين بمادة PTFE بحجم 3T، وسلك واحد مغلف بمادة PTFE بحجم 10T، وشريحة دقيقة معدلة. يبلغ طول كل من الأسلاك الثلاثة 5 سم تقريبًا، وهي مكبوسة بالدبابيس الملامسة. أما القطب ثنائي القطب النهائي (إلى اليمين، باللون الأبيض)، فقد تم فك التواءه، وإعادة تسويته، وتشكيله على شكل حرف V (بفتحة قدرها 5 مم). كما أزيل الغلاف الواقي من أطراف المخلبين. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

4. إجراء جراحة الجفن (اليوم 90 بعد الولادة)

  1. تحضير المواد (راجع قسم المواد للحصول على معلومات تفصيلية حول التوريدات)، والحيوانات، والمناطق الجراحية وغير الجراحية:
    1. تعقيم الأدوات والمستلزمات الجراحية بجهاز الأوتوكلاف - يشير الرقم الموجود بين قوسين ( ) إلى الكمية المطلوبة تقريباً لكل جرذ بالغ أو لكل قياس: الأدوات الجراحية (مجموعة واحدة لكل 4 جردان، وفقاً لاعتماد لجنة IACUC في جامعة ECU)، منصات الشاش (3-4)، مساحات قطنية (5-6)، غلاف قياس 20 × 20 (4 لكل جلسة جراحية)، بوثقة بورسلين (1)، ميكروسباتولا من الفولاذ المقاوم للصدأ (1)، محلول ملحي 0.9% (زجاجة غسيل واحدة)، طبق بتري (1)، وبراغي من الفولاذ المقاوم للصدأ مقاس 0-80 (3 لكل جرذ).
    2. مستلزمات معقمة أخرى مطلوبة: شفرة جراحية مقاس 10 (واحدة لكل 4 جردان)، غطاء جراحي (واحد لكل جرذ)، مرهم عيني بيطري، بوفيدون-يود (زجاجة غسيل واحدة)، إبرة تحت الجلد مقاس 26G × 3/8 بوصة (2)، ملقط تثبيت دبابيس مطلي بالنيكل مع ريشة ثقب رقم 5، ومفك براغي للمجوهرات برأس مسطح مطلي بالنيكل (شفرة 1.8-2 مم).
    3. تجهيز منطقة احتفاظ معقمة لجميع الأدوات والمستلزمات الجراحية باستخدام مطهر معتمد من الدرجة البحثية/الطبية. توضع المواد في هذه المساحة عندما تصبح المنطقة جاهزة.
    4. تجهيز مساحة جراحية معقمة باستخدام مطهر معتمد من الدرجة البحثية/الطبية. تحتوي هذه المساحة على وسادة تدفئة مائية منظمة حرارياً، وجهاز ستيريوتكسي (stereotaxic) مجهز بقناع تخدير للجرذان، ومعقم بالخرز الزجاجي، ومبخر غاز الإيزوفلوران (للتخدير). يحتوي المبخر على أنابيب متصلة بقناع التخدير وبغرفة تحريض تقع في مساحة منفصلة لإجراءات تحضير الحيوانات غير المعقمة؛ ويتم التحكم في كل أنبوب بواسطة صمام خاص به.
    5. غسل اليدين والذراعين جيداً بصابون مضاد للميكروبات. دون لمس الداخل، يتم فتح أي عناصر مغلفة في أكياس أو أغلفة التعقيم مسبقاً. ارتداء قفازات معقمة باستخدام إجراءات التعقيم ونقل جميع العناصر ذات الصلة إلى المنطقة الجراحية. ضبط ريشة الثقب على العمق المناسب في ملقط التثبيت (~ 2 مم) وتجهيز مفك البراغي. تغطية المواد المعقمة بغلاف معقم حتى تكون الجراحة جاهزة للبدء.
    6. تجهيز مساحة غير معقمة تحتوي على ميزان، وآلة حلاقة كهربائية للفراء، وحقن معقمة سعة 1 مل مع إبر مقاس 26G × 3/8 بوصة (واحدة لكل جرذ)، وسجل الجراحة، وبوبرينورفين (بتركيز 0.03 ملغ/مل) يُعطى بمعدل 0.1 مل/10 غرام.
      تنبيه: البوبرينورفين هو أفيون شبه اصطناعي من الجدول الثالث التابع لإدارة DEA، ويجب حفظه في مكان مغلق وتسجيله بشكل مناسب.
    7. التحقق من مستوى الغاز في مبخر الإيزوفلوران؛ إضافة المزيد من الغاز إذا كان منخفضاً. ترك مقابض تدفق الغاز والخليط مغلقة حالياً. تشغيل خزان O2 والتأكد من وجود غاز كافٍ لجميع العمليات الجراحية.
    8. وزن كل جرذ وتسجيل وزن الجسم في سجل الجراحة. استخدام مخطط حقن البوبرينورفين لتحديد حجم الحقن المناسب.
    9. فتح صمام المبخر المتصل بغرفة التحريض وإبقاء صمام قناع الجراحة مغلقاً. ضبط الخليط على 3 ومعدل التدفق على 3 (3% إيزوفلوران مع 10% O2 كغاز حامل بحجم 3 لتر/دقيقة).
    10. وضع الجرذ في غرفة التحريض والسماح له بالوصول إلى مستوى التخدير المناسب (تنفس بطيء، فقدان المنعكس الأخمصي، فقدان منعكس الرمش). إخراج الجرذ من الغرفة بمجرد وصوله إلى مستوى التخدير.
    11. حلاقة رأسه باستخدام آلة حلاقة الفراء، وكشف كمية كافية من الجلد لموقع الشق والجفن الأيسر. إذا لزم الأمر، يتم إعادته إلى غرفة التحريض للوصول إلى مستوى التخدير مرة أخرى قبل استئناف الحلاقة.
    12. تطهير الجلد المكشوف عن طريق مسحه بالتناوب بالكحول الأيزوبروبيلي وبوفيدون-يود ثلاث مرات. إذا لزم الأمر، يتم إعادته إلى غرفة التحريض للوصول إلى مستوى التخدير مرة أخرى، قبل نقله إلى طاولة الجراحة.
  2. الجراحة
    1. فتح صمام المبخر المتصل بقناع التخدير وإغلاق صمام غرفة التحريض. ضبط الخليط على 2.5 ومعدل التدفق على 2 (2.5% إيزوفلوران مع 10% O2 كغاز حامل بحجم 2 لتر/دقيقة). نقل الجرذ إلى جهاز الستيريوتكسي واتباع الإجراءات القياسية في تثبيت رأسه بقضيب القواطع وقضبان الأذن (انظر Geiger et al., 20849 كمثال).
    2. إعطاء الجرذ حقنة ما قبل الجراحة من البوبرينورفين (تحت الجلد SC) والتخلص من الإبرة (بدون غطاء) بعناية في حاوية الأدوات الحادة. وضع غطاء جراحي معقم على الجرذ، مع كشف المنطقة الجراحية فقط وعزلها عن بقية الجسم.
    3. ارتداء قناع جراحي، وغطاء رأس جراحي، ورداء جراحي، ونظارات واقية، وأي معدات وقاية شخصية أخرى مطلوبة من قبل لجنة IACUC. غسل وفرك اليدين والذراعين جيداً بصابون مضاد للميكروبات. ارتداء قفازات معقمة باستخدام إجراءات التعقيم.
    4. وضع كمية صغيرة من المرهم العيني في كلتا العينين باستخدام مساحة قطنية لمنعهما من الجفاف.
    5. البدء في الجراحة عندما يظهر الجرذ مستوى التخدير المناسب. مراقبة الجرذ باستمرار طوال الجراحة والتحقق من مستوى الإيزوفلوران بشكل دوري. ضبط مقابض التدفق والخليط وفقاً لذلك أثناء الجراحة بناءً على استجابة الجرذ للتخدير.
    6. إجراء شق أمامي-خلفي عند خط الوسط في القحف باستخدام شفرة مشرط. يجب أن يكشف هذا الشق مساحة كافية أمام العينين (أي كشف العظم الجبهي) وخلف الدرز اللامبي (lambdoid suture) قليلاً.
    7. كشط السمحاق الموجود أعلى القحف بعناية لتجنب حدوث نزيف مفرط. مسح الأنسجة الضامة والدم الزائد باستخدام مساحة قطنية.
    8. حفر ثقب باستخدام ريشة الثقب بمساعدة ملقط تثبيت الدبابيس، بدءاً من المنطقة الموجودة مباشرة خلف الدرز الإكلي (coronal suture) في إحدى العظام الجدارية. إزالة أي دم أو بقايا عظمية باستخدام مساحة قطنية. الإمساك ببرغي 0-80 من الجزء المسنن باستخدام ملقط شظايا وتثبيته في الثقب باستخدام مفك المجوهرات؛ شد البرغي بما يكفي دون إتلاف أنسجة الدماغ القشرية (عادةً 3-4 دورات كاملة).
    9. اتباع نفس الإجراءات الموصوفة في 4.2.8 لتثبيت برغيين إضافيين مقاس 0-80 في الجمجمة، أحدهما مباشرة خلف الدرز الإكلي للعظم الجداري المقابل والآخر مباشرة أمام الدرز اللامبي الأيمن. وجد أن 3 براغي كافية لتثبيت الأسمنت السني (انظر 4.2.18) في القحف، حيث أن البرغي الرابع (أمام الدرز اللامبي الأيسر) سيعيق وضع القطب الكهربائي ثنائي القطب.
    10. إزالة رأس وحدة EMG من طبق بتري. توجيه رأس الوحدة بحيث يكون السلك 10T على الجانب الأيمن للجرذ. ثني السلك 10T للأعلى ليكون موازياً للحافة السفلية للشريحة الدقيقة. ثنيه قليلاً نحو الجانب الأيمن بحيث يمكن للسلك أن يلتف حول براغي 0-80 الأمامية والخلفية. وضعه جانباً ولكن في مكان قريب يسهل الوصول إليه.
    11. [بافتراض أن الجراح يستخدم اليد اليمنى] وضع ملقط تضميد مقاس 3 بوصة في اليد اليسرى وملقط تضميد مقاس 4 بوصة في اليد اليمنى. الإمساك بالجلد العلوي عند موقع الشق للعين اليسرى باستخدام ملقط التضميد 4 بوصة وتوجيه ملقط التضميد 3 بوصة نحو زاوية هذه العين؛ الإمساك بالجلد عند هذه الزاوية. الحفاظ على الإمساك باستخدام ملقط التضميد 3 بوصة مع تحرير ملقط التضميد 4 بوصة.
    12. أخذ إبرة واحدة مقاس 26G × 3/8 بوصة وإدخالها عبر زاوية الجفن؛ تدوير الإبرة بحيث يكون الجانب المائل للأعلى. استخدام ملقط تشريح دقيق مزود بمنصة لإدخال سلك 3T الأوسط في ثقب الإبرة. دفعه عبر الثقب لبضعة سنتيمترات دون النزول بالكامل؛ هذا السلك هو القطب السالب.
    13. تنفيذ الإجراءات الموصوفة في 4.2.1 و 4.2.12 لإدخال سلك 3T الخارجي في الجزء الأوسط من الجفن؛ هذا السلك هو القطب الموجب.
    14. الإمساك بكلتا الإبرتين بيد واحدة بينما يتم الإمساك برأس الوحدة باليد الأخرى (أو الملقط). سحب الإبر بعيداً عن الجفن مع توجيه رأس الوحدة في نفس الاتجاه في حركة واحدة مستمرة. إذا لزم الأمر، تدوير رأس الوحدة بحيث يكون السلك 10T باتجاه العين اليمنى للحيوان؛ عدم السماح بعبور أسلاك 3T. استخدام ملقط دقيق للتأكد من أن القطب الموجب موجود في منتصف الجفن.
    15. ضبط رأس الوحدة بحيث يكون متمركزاً بين العينين وفي وضع مثالي فوق العظم الجبهي، أمام البراغي المثبتة ثنائياً. تثبيت رأس الوحدة بيد واحدة والإمساك بملقط التضميد 3 بوصة باليد الأخرى. لف السلك 10T حول أحد أو كلا البرغيين في جانب 10T.
    16. وضع ملقط تضميد 3 بوصة في يد وملقط تضميد 4 بوصة في اليد الأخرى. استخدام ملقط التضميد 3 بوصة للإمساك بالجلد عند موقع الشق باتجاه الصدغ الأيسر. استخدام ملقط التضميد 4 بوصة لإنشاء "جيب" صغير عن طريق فصل الجلد (أي اللفافة السطحية) عن العضلة الصدغية. استخدام مقص القزحية لقص المزيد من الأنسجة الضامة، والعمل باتجاه زاوية العين اليسرى، لزيادة حجم هذا الجيب. الحذر من الدخول بعمق شديد أو قطع أي أوعية دمويّة.
    17. أخذ قطب كهربائي ثنائي القطب وتشكيل الأسلاك بحيث يمكن تركيبها على طول انحناء العضلة الصدغية، بينما يقع الشوكان (الظهري والبطني) خلف العين اليسرى (انظر الفيديو)، ويمكن وضع الطرف السفلي للقطب ثنائي القطب مباشرة فوق القحف. ترك مسافة كافية بين رأس الوحدة وهذا القطب للسماح بتوصيل مقابس كابل المبدل (الشكل 3) دون عوائق.
    18. صب مسحوق الأسمنت السني في البوثقة - البدء بحوالي 1/3 البوثقة، ثم زيادة الكمية حسب الضرورة. إضافة المكون السائل حتى يصبح القوام مائياً، وخلط هذه المكونات باستخدام السباتولا. عندما يصبح قوام الأسمنت أكثر لزوجة، يتم وضعه على موقع الشق - مع تغطية جميع حواف الجلد بحدود لا تقل عن 1/8 بوصة.
      1. وضع كمية كافية من الأسمنت لتدعيم رأس الوحدة والقطب ثنائي القطب دون منع الجرذ من إغلاق عينيه. مسح أي أسمنت يتساقط بسرعة على مناطق غير مرغوب فيها من فراء الجرذ.
    19. التأكد من ترك 4-5 لفات على الأقل من القطب ثنائي القطب غير مغطاة بالأسمنت بحيث يمكن تدوير القابس ثنائي القطب (الشكل 3). إزالة الأسمنت الزائد من رأس الوحدة - يجب أن يكون الجزء العلوي من الشريحة الدقيقة ودبابيس الاتصال الثلاثة نظيفة. يتصلب الأسمنت بسرعة وقد يمنع بسهولة الاقتران الكامل لأي من هذه الأقطاب بمقابس كابل المبدل. استخدام ملقط شظايا لإزالة الأسمنت الزائد الذي جف جزئياً.
    20. الانتظار حتى يتصلب الأسمنت؛ حيث يصبح شفافاً. استخدام مقص التشريح الدقيق لقص الطول الزائد من سلكي 3T، مع ترك بضعة سنتيمترات للمناورة.
    21. الإمساك بملقط التشريح الدقيق المزود بمنصة في اليد اليسرى وبالملقط دقيق الرؤوس في اليد اليمنى. الإمساك بأحد أسلاك 3T بالملقط الأيسر أمام الجفن قليلاً. باستخدام الملقط الأيمن، يتم دفع الجفن للأعلى لكشف المزيد من سلك 3T وتثبيته هناك. تحرير الملقط الأيسر واستخدام اليد اليسرى للإمساك برأس الوحدة (التأكد من ثباته الآن). استخدام الملقط الأيمن لإزالة بعض غلاف PTFE، مما يسمح للسلك بالاتصال بعضلة orbicularis oculi (العضلة المدارية للعين).
      ملاحظة: توخي الحذر من سحب سلك 3T بقوة، لأنه قد ينفصل عن دبوس الاتصال. إذا انفصل السلك، فلن يكون من الممكن استبدال دبوس الاتصال لأن الأسمنت المتصلب لن ينفصل بسهولة عن القحف دون التسبب في كسر العظم.
    22. تنفيذ الخطوات المذكورة في 4.2.21 لإزالة غلاف PTFE الزائد من سلك 3T الثاني.
    23. الإمساك بملقطي التشريح الدقيقين كما هو مذكور في 4.2.21 (المنصة في اليسار، والرؤوس الدقيقة في اليمين). وضع الملقط الأيسر أمام أحد أسلاك 3T قليلاً مع ترك مساحة لوضع الملقط الأيمن مباشرة أمام الجفن. الإمساك بالسلك بكلتا الملقطين.
      1. إنشاء "خطاف" عن طريق تثبيت الملقط الأيمن وتدوير الملقط الأيسر للأعلى وحول الجفن؛ يتم ذلك في حركة واحدة. تحرير الملقط الأيمن بعناية، ثم الملقط الأيسر.
        ملاحظة: يساعد تعليق الأقطاب على الأجفان في تقليل احتمالية احتكاكها بالقرنية. كما يقلل ذلك من احتمالية انقطاع السلك في أي مرحلة من مراحل الاختبار السلوكي. ورغم أن التعليق لا يمنع تماماً احتكاك السلك بالقرنية في جميع الحيوانات، إلا أنها عادة لا تظهر أي علامات تلف في العين، وهو ما ينعكس في سعات الرمش العالية (التي يتم قياسها بواسطة راسم الإشارة الرقمي في 5.1.7) ومن الملاحظات الصحية اليومية بعد الجراحة (الدموع المفرطة، الإغلاق الجزئي للجفن، فقدان الحركة بسبب تلف العين). إذا أظهر الجرذ علامات أولية على عدم الارتياح، يتم تخديره بالإيزوفلوران (انظر 4.1.10) وإعادة فحص وأو إعادة وضع أقطابه الكهربائية. يتم وضع المرهم العيني لمنع جفاف القرنية. يتم مراقبة الجرذ يومياً لأي مضاعفات في العين بعد الإجراء، وفي حال استمرارها، يجب طلب الرعاية البيطرية. الجرذان التي تظهر مضاعفات شديدة في العين لا يمكن تصحيحها بإعادة وضع القطب أو بالعلاج البيطري، يتم قتلها رحيماً وفقاً لإجراءات التشغيل القياسية للجنة IACUC في جامعة ECU.
    24. تنفيذ الخطوات المذكورة في 4.2.23 لسلك 3T الثاني. قص السلك الزائد باستخدام مقص التشريح الدقيق.
    25. استخدام يد واحدة لتحرير الجرذ من قضبان الأذن مع دعم جسمه باليد الأخرى. فحص رأسه للتأكد من عدم وجود دم أو بقايا، والتنظيف إذا لزم الأمر، وإعطاؤه حقنة بوبرينورفين بعد العملية.
    26. وضع الجرذ في حاوية استشفاء تحتوي على مصدر للحرارة (مثل وسادة تدفئة مائية منظمة حرارياً) للمساعدة في التعافي. تسجيل وقت انتهاء الجراحة في سجل الجراحة وأي ملاحظات ذات صلة عن الجرذ أثناء الجراحة. مراقبة الجرذ للتأكد من التنفس السليم، وعندما يظهر وضعية الاستلقاء الصدري أو يبدأ في الحركة، يمكن إعادته إلى قفصه الأصلي.
    27. إعادة تعقيم الأدوات (باستثناء ملاقط التشريح الدقيق - لأنها قد تتضرر) باستخدام معقم الخرز والتأكد من بقاء المنطقة الجراحية معقمة، وتكرار إجراءات التعقيم إذا كان سيتم إجراء عمليات جراحية متعددة للأجفان.

5. إجراءات الإشراط الكلاسيكي لرمش العين

إعداد التجربة السلوكية باستخدام مبدل اتجاهي (commutator) خماسي القنوات، وتخطيط كهربائية العضلات (EMG)، وكاميرا ويب، ورغوة صوتية، وتحليل صوتي.
الشكل 3صندوق تشريط إجرائي معدل لشرط استجابة رمش العين. تُعد الجرذان من الثدييات ذات الحركة الحرة، ولذلك يُستخدم مبدل دوار للحفاظ على اتصال الإشارة الكهربائية من تخطيط عضلات الجسم (EMG) والقوابس ثنائية القطب المثبتة في الرأس. ويُثبت المبدل الدوار في ذراع الدعامة، المزودة بثقل موازن لتقليل الضغط الواقع على الجرذ. ويقوم تغريد بيزو (مكبر صوت) بإصدار نغمة بتردد 2.8 كيلو هرتز وبشدة 85 ديسيبل، وتُعاير هذه القيم بانتظام. كما تساعد الرغوة الصوتية في تخفيف الضوضاء البيئية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

إعداد تخطيط الكهربائية العضلية باستخدام راسمات الإشارة، ومضخم أولي لإشارات تخطيط الكهربائية العضلية من الجرذان؛ تجربة.
الشكل 4نظام إشراط رمش العين. يتكون هذا النظام المصمم خصيصاً من وحدة تكامل تخطيط كهربية العضلات (EMG Integrator) التي تعمل على ترشيح وتضخيم الإشارات الواردة من الجرذان، ووحدة تحكم في المثيرات (Stimulus Control) تقدم مثيرات متنوعة بالإضافة إلى النغمات والصدمات، ومضخم أولي لكل صندوق تشغيلي لزيادة كسب إشارة تخطيط كهربية العضلات، وعازل للمثيرات لكل صندوق تشغيلي؛ ويوفر النظام مستويات صدمات متغيرة (بالميلي أمبير mA). كما يُستخدم راسم oscilloscope رقمي (ليس جزءاً من نظام رمش العين القياسي) لأغراض التشخيص أثناء مرحلتي التعود والاكتساب. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

  1. ابدأ تدريب التعويد والاكتساب بعد 5 أيام من الجراحة. امنح كل جرذ يوماً واحداً من المناولة والتعويد على جهاز التدريب - المكون من صندوق تكييف إجرائي معدل موضوع داخل غرفة عازلة للصوت أكبر حجماً (الشكل 3) - ثم يتبع ذلك 6 أيام من التدريب على الاكتساب. أجرِ جلسات التعود والاكتساب باستخدام نظام رصد رمش العين مصمم خصيصاً (الشكل 4).
    1. قم بإنشاء ملف سجل تدريب واطبعه لاستخدامه في التدوين اليومي. يجب أن يتضمن هذا السجل تخصيص مجموعة الجرذان مسبقاً وبشكل شبه عشوائي (أو باستخدام طريقة عشوائية أخرى) على صناديق التدريب الخاصة بها.
    2. قم بتشغيل نظام الرمش بالعين (eyeblink system) والكمبيوتر، ثم قم بتشغيل برنامج eyeblink. يحتوي هذا الإصدار من البرنامج على وحدات (أو تطبيقات) مختلفة تعمل بشكل مستقل. قم بتشغيل وحدة الحيوانات (Animal module) لإنشاء ملف بصيغة *.RAT يتضمن معلومات الخاضعين للدراسة (رقم الجلسة، ومعرف الحيوان، والجنس، والوزن، ورقم الصندوق). يدير ملف RAT واحد ما يصل إلى أربعة جرذان، وهو ما يشكل مجموعة من الخاضعين للدراسة. أدخل القيم وفقاً لذلك واحفظ الملف. أنشئ ملف RAT منفصلاً لكل مجموعة من الجرذان المراد تدريبها.
    3. انقل الجرذان من مكان إيوائها إلى غرفة الاختبار وأغلق الباب. قم بالتعامل مع كل جرذ لمدة 5 دقائق.
    4. انقل الجرذ إلى الصندوق المخصص له، وقم بتوصيل قابسي تخطيط كهربية العضلات (EMG) والقطب ثنائي القطب من كابل المبدل (commutator cable) إلى مرحلة تكبير الإشارة (headstage) الخاصة بتخطيط كهربية العضلات والقطب ثنائي القطب المقابلين على رأسه.
      ملاحظة: عند تعريض الجرذ لكابل المبدل (commutator cable) لأول مرة، قد يبدي الجرذ مقاومة وتظهر عليه علامات التوتر. يجب التعامل مع الجرذ بعناية، والسماح بفترات راحة بين محاولات التوصيل غير الناجحة لتخفيف توتره.
    5. استخدم مبدلًا دوارًا 360° مع الحفاظ على إرسال واستقبال الإشارات الكهربائية أثناء تحرك الجرذ بحرية داخل صندوق. ويحتوي الجهاز على 5 قنوات (3 لأقطاب تخطيط كهربائية العضلات EMG، و2 للأقطاب ثنائية القطب) تؤدي إلى وحدة مكامل تخطيط كهربائية العضلات (EMG Integrator)، والتي تعمل على ترشيح وتضخيم الإشارة الخام.
    6. تحقق من أن الجرذ يتحرك بحرية، وأنه لا يعاني من أي إعاقة بسبب وزن تجميعة كابل المبدل أو ذراع الدعامة. اضبط ثقل الموازنة الموجود في الجزء الخلفي من الدعامة إذا لزم الأمر. تحقق من إحكام جميع القوابس ثم أغلق باب الصندوق. كرر إجراءات التوصيل والفحص ذاتها لجميع الجرذان.
    7. استخدم جهاز رسم الإشارات الكهربائية (oscilloscope) لمراقبة نشاط تخطيط كهربائية العضلات (EMG) بحثًا عن أي إشارات غير طبيعية (مثل النشاط الكهربائي عالي التردد و/أو عالي السعة)، ونظام مراقبة بالفيديو للتحقق من حالتهم (مثل النشاط الحركي، والحساسية تجاه البيئة، وعلامات الألم) في حال توفره. دوّن أي مشكلات يتم ملاحظتها في سجل التدريب.
    8. اترك الجرذان لتعتاد على غرفها لمدة 10 دقائق، ثم أعدها إلى أقفاصها الأصلية.
    9. نظف وعقم صناديق التشغيل الإجرائي، واكنس الأرضية، ونظف الطاولة (أو الطاولات). نفذ هذه الإجراءات بعد كل جلسة.
  2. يتم تدريب الاكتساب على مدار 6 أيام (جلسات) متتالية.
    1. اليوم الأول: انقل الجرذ إلى الصندوق المخصص له، وقم بتوصيل مقابس تخطيط كهربائية العضلات (EMG) والمقابس ثنائية القطب من كابل المبدّل (commutator cable) إلى مرحلة رأس تخطيط كهربائية العضلات والقطب الكهربائي ثنائي القطب المقابلين على رأسه. نفذ الإجراءات نفسها الموضحة في القسمين 5.1.6 و5.1.7.
    2. قم بتشغيل عوازل التحفيز واضبط التيار المراد إيصاله عند 0.4 مللي أمبير (4% من 10 مللي أمبير كما هو موضح في الفيديو). تقوم العوازل بتوصيل التيار الكهربائي بشكل متبادل (أي من تجربة إلى أخرى) بين الشوكتين الظهرية والبطنية للقطب ثنائي القطب، مما يساعد في تقليل إجهاد الألياف العضلية (في كل موقع عضلي) على مدى عمليات التحفيز المتكررة.
    3. راقب جميع استجابات رمش العين الصادرة والتحملات المظهرة في كل تجربة لجميع الجرذان. بعد كل تجربة ثانية، زد شدة المثير غير الشرطي (US) الصدمي بمقدار 0.4 مللي أمبير لكل جرذ، حتى يتم الوصول إلى 1.6 مللي أمبير (في التجربتين 7 و8). تحقق جيداً من أن جميع الجرذان تستجيب بشكل طبيعي داخل صناديقها، ومن ثبات جميع إعدادات التضخيم والكسب، ومن سلامة الإشارات الكهربائية الصادرة عنها (أي وجود ضوضاء منخفضة/ضئيلة في تخطيط كهربائية العضلات EMG). استخدم شدة مثير غير شرطي (US) صدمي تبلغ 1.6 مللي أمبير لجميع أيام التدريب على الاكتساب.
      ملاحظة: إذا أظهر الجرذ استجابة تدل على الألم عند مستوى صدمة معين (على سبيل المثال: القفز عالياً عن الأرض، أو تسلق الجدران، أو الركض في المكان)، يتم إيقاف التجربة مؤقتاً وإعادته إلى إعداد الميلي أمبير السابق (بمقدار 0.4 ميلي أمبير أقل) لمدة تجربتين. بعد ذلك، يتلقى الجرذ قيمة الصدمة الأعلى التي لم يتحملها مرة أخرى، وفي حال أظهر تحملاً لها، يتلقى قيمًا متزايدة حتى الوصول إلى 1.6 ميلي أمبير. وإذا لم يتمكن من تحمل أي قيمة، يتم استخدام القيمة الأدنى التالية (بزيادات قدرها 0.4) التي يتحملها طوال فترة التدريب.
    4. استخدم راسم الإشارة (oscilloscope) لمراقبة نشاط تخطيط كهربائية العضلات (EMG) بحثاً عن إشارات غير طبيعية (على سبيل المثال، ونشاط كهربائي عالي التردد و/أو عالي السعة) ونظام مراقبة بالفيديو للتحقق من حالتهم (على سبيل المثال، والنشاط الحركي، والحساسية تجاه البيئة، وعلامات الألم).
      ملاحظة: شرح تتبع تخطيط كهربائية القلب (ECC): يظهر في الشكل حقبة تجريبية ممثلة مع أشكال موجات تخطيط كهربائية العضلات (EMG) الملتقطة في الشكل 1 ويتم شرح إجراء الـ ECC التتبعي بالتفصيل في الفيديو. وقد تم ضبط ملف تدريب الإشراط التتبعي لتقديم 10 محاولة (90 محاولة من المثير الشرطي-المثير غير الشرطي المقترن، و10 محاولات من المثير الشرطي فقط في كل 10th (تجربة) بمتوسط فاصل زمني بين التجارب يبلغ 30 ثانية. تستغرق جلسة التدريب بأكملها 52 دقيقة تقريبًا (بافتراض عدم وجود توقفات). تكون جميع الجرذان غير خبيرة في الجلسة 1، وستظهر منحنيات تعلم متباينة (وفقًا لما يحدده التعبير عن الاستجابات الشرطية CRs) مع تقدمها عبر عدة أيام من التدريب.
    5. ابدأ التدريب: قم بتشغيل وحدة برنامج Blink. عند ظهور المطالبة، اختر ملف RAT الصحيح وملف التدريب الخاص بإشراط رمش العين من نوع "الأثر" (trace).
    6. دوّن وقت البدء واسم الباحث في سجل التدريب. راقب جميع الأنشطة في هذه المرحلة: إشارات تخطيط كهربائية العضلات (EMG) الصحيحة، واستجابات الرمش الجيدة للمنبه غير الشرطي (US) الصادم (أي الاستجابات غير الشرطية العالية/المتكررة)، والحالة الصحية للحيوانات، وكفاءة عمل الأجهزة. دوّن أي ملاحظات جديرة بالذكر في سجل التدريب.
    7. يتم التقاط جمع البيانات تلقائيًا بواسطة البرنامج في شكل ملفات RAW (ملف واحد لكل جرذ، يوميًا). وتحتوي ملفات RAW على سعة تخطيط العضلات الكهربائي (EMG) (بالفولت)، وتعدادات التردد، وفترة الكمون، وبيانات المساحة لاستجابات الجفلة (SRs)، والاستجابات غير الشرطية (URs)، والاستجابات الشرطية (CRs) (الكلية والتكيفية). ويحجب أثر الصدمة أول 10 ميلي ثانية من فترة الاستجابة غير الشرطية (UR)، وبناءً على ذلك، تحتوي آخر 140 ميلي ثانية فقط من فترة الاستجابة غير الشرطية على بيانات الاستجابة غير الشرطية.
    8. عند انتهاء التدريب، سيغلق البرنامج تلقائياً. أخرج جميع الجرذان من صناديق التدريب وأعدها إلى الحيوانarium.
    9. كرر الخطوات 5.2.5 - 5.2.6 لجميع أيام التدريب اللاحقة. وقبل البدء في وحدة الرمش (Blink module) في يوم معين، قم بتحديث رقم الجلسة داخل ملف RAT؛ حيث يسمح ذلك بإنشاء ملفات RAW جديدة لجميع الجرذان في ذلك اليوم. يجب أن يكون لكل جرذ 6 ملفات RAW، بافتراض عدم استبعاد أي منها من التدريب.
  3. قم بمعالجة الملفات الخام (RAW files) وإنشاء ملف تمت تصفيتُه للتحليل الإحصائي.
    1. قم بتشغيل وحدة التحليل. راجع كل جلسة لكل جرذ على أساس كل محاولة للبحث عن المحاولات الإشكالية. يتم إجراء ذلك لفحص المحاولات التي قد تكون متأثرة لأسباب مختلفة (على سبيل المثال، ونشاط خط الأساس المفرط قبل التحفيز القشري (CS)، والحركة المفرطة، وانفصال الأقطاب الكهربائية، ومشاكل الكابلات/الأسلاك). يحتوي البرنامج على خوارزميات تساعد الباحث في اكتشاف "المحاولات غير الصالحة" وإزالتها من مجموعة البيانات المفلترة.
    2. قم باستيراد البيانات المفلترة إلى برنامج جداول بيانات وأجرِ التحليلات الإحصائية ذات الصلة.

النتائج

البرنامج اييبلينك قادر على توفير مجموعة كبيرة وشاملة من البيانات لأنواع عديدة من القياسات. للإيجاز، يمكننا تقرير في هذه الدراسة، الممثل نتائج للتعلم والأداء التدابير التي تشمل النسبة المئوية CR التكيفية والتكيف CR السعة، أور النسبة المئوية والسعة أور. وقد اختيرت الفترة CR التكيف حيث أنه يمثل الحصول على الاستجابات اييبلينك حسنة التوقيت على مدى التدريب المتكرر، نتيجة لزيادة اللدونة متشابك في الحصين أثناء تتبع ECC50،،من5152. التدابير جولة أوروغواي التي اختيرت لتوضيح ما إذا كان العجز في التعلم الأطفال حديثي الولادة المستحثة بالكحول في تتبع ECC بسبب اضطرابات في التعلم النقابي أو اختلالات في الاستجابة للصدمة علينا-والتي قد تشير إلى اختلافات تحفيزية أو موتور، بدلاً من التعلم الاختلافات بين المجموعات المعالجة. تم تحليل البيانات لكل تدبير من التدابير استخدام 2 (الجنس) x 3 (مجموعة الوليد) x 6 (الدورة) مختلطة ANOVAs، مع دورة كعامل التدابير المتكررة. حللت الآثار الرئيسية الهامة لعلاج الأطفال حديثي الولادة باستخدام الاختبارات المخصصة بعد توكي في وحللت تفاعلات هامة باستخدام اختبارات آثار بسيطة. أجريت جميع التحليلات الإحصائية باستخدام الحد أدنى ألفا 0.05 والنتائج في الرسوم البيانية يعني ± sem.

بدءاً بقياس النسبة المئوية CR التكيفية، ANOVA أشارت إلى أثر الرئيسي لمجموعة الوليد، و(2,21) = 11.69، ف < 0.001، ولكن أي تأثير الرئيسية الهامة للجنس (p = 0.71) أو تفاعل كبير بين هذه العوامل (ف = 0.20). كما كان متوقعا، زادت نسبة CR التكيفية على مدى ست دورات تدريبية، و(5، 105) = 81.15، ف < 0.001، والاختلافات بين مجموعات الأطفال حديثي الولادة كانت تعتمد على مستوى معين من الدورة، و(10, 105) = 4.58، ف < 0.001. وكانت هناك لا التفاعلات الهامة الأخرى التي تنطوي على عامل الدورة. وبالمثل للتكيف CR السعة، مرة أخرى هناك أثر الرئيسي لمجموعة الوليد، و(2,21) = 22.32، ف < 0.001، ولكن أي تأثير الرئيسية الهامة للجنس (p = 0.21) أو تفاعل كبير بين هذه العوامل (ف = 0.48). السعة الجمهورية التشيكية أيضا زيادة كبيرة على مدى ست دورات تدريبية، و(5، 105) = 59.27، ف < 0.001، والاختلافات بين مجموعات الأطفال حديثي الولادة كانت تعتمد على مستوى معين من الدورة، و(10, 105) = 4.31، ف < 0.001. وعموما، أظهرت كل التدابير المتعلقة بمسؤولية الشركات اختلافات كبيرة بين مجموعة الوسائل وهذه الوسائل فصل كثيرا في دورات مختلفة للتدريب. لتأكيد المجموعات التي تختلف اختلافاً كبيرا، أظهرت الاختبارات المخصصة بعد توكي لأن الفئران (منظمة العفو الدولية) تنبيب الكحول تنفيذها إلى حد كبير أسوأ على تدابير CR كلا من أونينتوباتيد--التحكم (UC) والفئران (SI) تنبيب الشام (ف < 0.01 للنسبة المئوية للسجل التجاري؛ ف < 0.001 السعة CR)، التي لم تختلف عن بعضها البعض (ف> 0.05). آثار بسيطة الاختبارات على مجموعة المواليد وكبير × التفاعلات الدورة لكل التدابير CR، أكدت أن الفئران منظمة العفو الدولية كانت البصر أكثر كثيرا في اكتساب CRs ابتداء من الدورة 2 والقيام من خلال الدورة 6 بالمقارنة مع الفئران UC والاشتراكية (كل ف< 0.05)، التي لم تختلف عن بعضها البعض في جميع أنحاء ست جلسات. الاستثناء الوحيد كان التكيف CR السعة للفئران SI لم تبدأ تختلف اختلافاً كبيرا عن منظمة العفو الدولية الفئران حتى الدورة 3. وترد هذه النتائج في الشكل 5A، 5B.

كانت هناك لا اختلافات كبيرة في التدابير أور بسبب الجنس أو الوليدية أو التفاعلات بين هذه العوامل بعامل الدورة. وأشارت هذه النتائج السلبية إلى أن كل فريق كان قادراً على تنبعث ردود اييبلينك للصدمة لنا على قدم المساواة، وأن العجز في التعلم لوحظ في الفئران منظمة العفو الدولية لا تتأثر بالاختلافات تحفيزية أو موتور في الوميض (الشكل 6A 6B).

figure-results-1
الشكل 5 : الحصول على تتبع مكيفة المجيبة (يعني ± SEM). أوائل الكحول التعرض (مجموعة منظمة العفو الدولية) تأثرا كبيرا اكتساب الاستجابة التكيفية مشروط (CR) النسبة المئوية (A) والسعة (ب). تتبع ECC أصلاً من الصعب الحصول على، وللتدابير التي أقل نسبيا بالنسبة لجميع الفئات-مع تأخير ECC، النسب المئوية قد تصل إلى 80-85 ٪ في نماذج القوارض من FASD21،53. ومع ذلك، تتبع الإجراء ECC أكثر فرض ضرائب على الحصين، وعرضه لآثار الكحول أثناء تطور الدماغ المبكر. * ف = < 0.05، * * ف = < 0.01، * * * ف = < 0.001 بين الفئران UC ومنظمة العفو الدولية؛ تتوفر أحجام العينات في أقواس. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

figure-results-2
الرقم 6 : الحصول على الاستجابات أونكونديتيونيد (يعني ± ووزارة شؤون المرأة)- أداء اييبلينك (النسبة المئوية أور والسعة أور) لم تكن تختلف اختلافاً كبيرا فيما بين المجموعات. عدم وجود اختلافات تشير إلى أنه لم يغير شدة الصدمة المستخدمة أثناء التدريب اكتساب الأثران الدافع في الفئران منظمة العفو الدولية أو قدرتها على إنتاج دفاعية وميض الردود على الصدمة، مقارنة بالمجموعتين التحكم (UC وسي). تتوفر أحجام العينات في أقواس. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

المناقشة

أظهرت الجراء الفئران حديثي الولادة التي تلقت إيثيل الكحول خلال الأيام التالية للولادة 4-9 اييبلينك تتبع تكييف العاهات في مرحلة البلوغ. هذه النتائج تدعم الفكرة القائلة بأن الكحول تناسليا مع يعانون آثار ضارة على الدالة هيبوكامبال. إجمالاً، مكيفة الاستجابة في إجراء التتبع كان أقل بالنسبة للفئران المعرضة إلى الكحول مقارنة بالفئران في كلتا المجموعتين السيطرة. إعاقات التعلم النقابي في الفئران المعرضة للكحول لا تتأثر بالاختلافات تحفيزية أو السيارات (أي.، لم توجد فروق في الوميض لشدة الصدمة الولايات المتحدة).

في حين تتبع ECC أداة تشخيصية مفيدة لأمراض الأعصاب توضيح هيبوكامبال المستحثة بالتحدي، يجب أن توضع النتائج من هذا الأسلوب في السياق الصحيح. أولاً، إشراك العناصر الإجرائية الرئيسية في هذه التظاهرة التنفيذ الهادف للكحول خلال نافذة الضعف في الدماغ النامي، تصنيع الأجهزة الكهربائي الذي يسمح تسجيل النشاط اليكتروميوجرافيك ويسلم صدمة، وغرس الجراحية الأجهزة المذكورة آنفا، واختبار الحيوان اللاحقة باستخدام نموذج تعلم الذي يقيم دالة المعرفي للفائدة معروفة. في كل مرحلة من مراحل العملية، ويجب الحرص لا تسبب أذى لا لزوم لها/غير المقصودة لمواضيع القوارض ورصد علامات الصحة بها بانتظام. تقديم نتائجها السلوكية "نافذة" للإدراك، ووصف تركيبة نفسي فقط بدقة عند عدم المساس بصحتهم بأخطاء تجريبية تشمل الجرعات الكحول أو عيوب الأجهزة، أو زرع جراحية. وهكذا، يجب تنفيذ كل عنصر من عناصر إجرائية في عملية البحث بطريقة سليمة لضمان أن يمكن استقراء النتائج من رعاية الطفولة المبكرة إلى النتائج التي توصل إليها في البشر. ثانيا، يوفر النموذج ECC البصيرة على طبيعة التعلم النقابي، ولكن يجب الحرص لا تمديد النتائج باستخدام هذا النهج، وتنسب لهم على نطاق واسع في المجالات المعرفية الأخرى-مثل الذاكرة العاملة والذكريات الطويلة المدى، والوعي--إلا إذا كان أحد قد أدرجت بعض جوانب هذه المجالات ضمن دراسة ECC بالتصميم التجريبي. على سبيل المثال، هذه التظاهرة درست في مرحلة اكتساب التعلم ECC التتبع، ولكن لم تدرس الاحتفاظ الذاكرة في الفئران بعد الانتهاء من التدريب. وهكذا الذاكرة هو عملية نفسية مستقلة ينبغي تقييمها بالإضافة إلى التعلم. حسب التصميم، واحدة قد تتضمن فترة احتفاظ بذاكرة لتقييم قدرة الذاكرة قصيرة الأجل أو طويلة الأجل أما. ثالثا، الاعتراف بأن هناك أنظمة الذاكرة الموازية54 التي قد تعمل في وقت واحد جنبا إلى جنب مع العوامل المحفزة والتجريبي، والهرمونية التي تسهم في السلوك، أمر ضروري لفهم أن التجميع (خلال ECC) ولكن واحدة من العديد من العمليات التي تكشف عن ما هو "جيد" أو "الفقراء" عن التعلم. وأخيراً، تتبع ECC ليست مهمة محض هيبوكامبال تعتمد على، كما يجوز التوسط مناطق الدماغ الأخرى بعض المكونات من الجمهورية التشيكية. ومن ثم، فهم التفاعلات بين مختلف الدوائر العصبية و/أو النوع من التحفيز المعلمات التي تستخدم في دراسة، ويجب أن تؤخذ في الاعتبار عند تقديم الآثار المترتبة على نتائج متميزة. على سبيل المثال، المخيخ، يسهم أيضا تتبع رعاية الطفولة المبكرة، حيث أنه يؤثر على الخصائص الطبوغرافية للجمهورية التشيكية والجمهورية التشيكية التوقيت، ولا سيما عندما تكون المخابرات الباكستانية في مدة قصيرة. تتبع ECC لا يتأثر بأناس بتلف الدماغ الذي يتم اختباره مع فاصل زمني طويل تتبع (1,000 ms)، ولكن يتأثر بأولئك الذين يحصلون الفاصل زمني (400 مللي ثانية) تتبع أقصر34. وعلاوة على ذلك، منع آفات ثنائية من قشرة prefrontal الآنسي الظهرية (mPFC) التي تستهدف المناطق الأمامية أجرانولار سينجولاتي ووسطى في الفئران، الحصول على تتبع CRs55، بينما تدمير مبفك والذيلية في الأرانب تنتج نتائج مماثلة46. هذه النتائج تسلط الضوء أيضا على أهمية النظر في الاختلافات الأنواع prefrontal المساهمات الدماغ الدماغ في وقف تحركها النقابي التعلم، مثل تتبع ECC. بينما الجرذان التعرض الكحول الولدان خلال اقتناء تأثيراً سلبيا على 4-9 PD CRs تتبع 500 مللي ثانية للكبار في هذه الدراسة وغيرها47،56، هذا ليس هو الحال نفسه للفئران المعرضة للكحول حديثي الولادة تجربة فاصل تتبع 300 مللي ثانية، حتى عندما طعن بجرعة عالية نسبيا من الكحول (5 غ/كغ)57، مما يدل على أن ضعف التتبع في الفئران المعرضة للكحول يعتمد على مدة الفاصل الزمني تتبع.

وشدد الحصين في هذه الدراسة، كما يجري ذات أهمية حيوية للتوسط في تتبع رعاية الطفولة المبكرة، وعند الطعن بالتعرض للكحول الولدان، يسلك العصبية المتصلة الضرر كما يتبين من العاهات في الحصول على تتبع CRs. ومع ذلك، يجب أن حذر من أن الدوائر الجذعية المخيخ والدماغ، لا سيما نواة إينتيربوسيتوس، أمر ضروري للعديد من جوانب رعاية الطفولة المبكرة، بما في ذلك اقتناء والتعبير، والسمات الطوبوغرافية للجمهورية التشيكية، اعتماداً على نوع مهمة رعاية الطفولة المبكرة، بما في ذلك تتبع ECC36،،من4055،،من5859. والواقع أن هذه الدائرة العصبية يتفاعل مع الحصين للقيادة على التعبير عن المؤسسة خلال أشكال مرتبة أعلى لرعاية الطفولة المبكرة، مثل تتبع ECC60. ما إذا كان التعرض الكحول أثناء تطور الدماغ المبكر يؤثر على وجه التحديد دالة هيبوكامبال في تتبع ECC ليس واضحا تماما. مناطق الدماغ مختلفة كثيرة معرضة للإهانة الكحول المبكر، بما في ذلك مبفك، المخيخ، والحصين18،،من1923،47،،من6162، وأنه من المحتمل جداً أن الكحول يعطل سير عمل هذه الهياكل بدرجات متفاوتة ومتباينة، ولكن الاختلافات الهامة وظيفيا عبر العديد من الإجراءات المبكرة. رغم العثرات فيما يتعلق بتفسير نتائج الدراسات ECC التتبع، ثبت اقتناء ناجحة لتتبع المؤسسة الاعتماد على الأقل على الحصين سليمة، كما تدعمه الآفة الحيوانية دراسات42،44،63،،من6465. وهكذا يظل هذا الإجراء نهجاً قيمة للغاية لما أبدته من تفهم الروابط بين التعرض الكحول التنموية لتتبع مكيفة الاستجابة لأن الدوائر العصبية الكامنة وراءها، أفضل بكثير من ذلك من المهام الأخرى التي تعتمد على هيبوكامبال، مثل مكان التعلم في متاهة المياه موريس، الاعتراف بوجوه جديدة، والسياقية وتتبع الخوف تكييف.

رعاية الطفولة المبكرة كأسلوب سلوكية "الاعتداء" الإدراك، قد انطباق واسع النطاق في مجال نيوروتيراتولوجي التنموية. والواقع أن النتائج الأخيرة من لدينا مختبر دعم الفكرة القائلة بأن الحصين النامي حساس بدرجة كبيرة لآثار الكحول، الأمر الذي قد يخفف من مختلف الاستراتيجيات التدخلية18،47. تتمثل الفائدة الرئيسية هنا بفهم أفضل للعجز في التعلم ECC التتبع التي يسببها الكحول، أنها قد تكون التنبؤية لمشاكل أخرى في مهام هيبوكامبال خارج التعلم النقابي-لا سيما تلك التي من المعروف أن توسط نيوروسيركويتري هيبوكامبال نفسه.

ويمكن تمديد تطبيق التتبع ECC وعن المتغيرات الأخرى (مثلاً، تأخير، عكس، التمييز، مجمع) توضيح الآليات العصبية الحيوية والعصبية نظم المشاركة في التعلم النقابي، خارج ميدان البحوث الجنينية الكحول. على سبيل المثال، هذا النموذج قد تلقت الكثير من الاهتمام في الحالات الإنسانية ونماذج حيوانية لظروف نفسية مثل الفصام66،67، أمراض الأعصاب مثل مرض الزهايمر68،69، والمخدرات لتعاطي70،،من7172. وهكذا تتضح فوائدها كأسلوب بحث لتقييم دالة عصبي وخلل عبر العديد من التخصصات الطبية والنفسية، بما في ذلك علم الأعصاب.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

بتأييد هذا العمل بمنحه إلى TDT من الكحول المشروبات الطبية البحوث مؤسسة (أبمرف).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي > التعرض للكحول لحديثي الولادة < / قوي >
190 كحول إيثيلي مقاوم للدليل (USP)Pharmco-AAPER225-36000 [مخزن ECU الطبي]يمكن استبداله ؛ يجب أن يكون USP ؛ تجنب استخدام حاوية / سلة كحول إيثيلي 200
دليل للجسورأي
زيت ذرةأيالساخن للطعام
مع / منصاتGaymarTP-500للحفاظ على دفء الجراء ؛ يمكن استبدالها
إبر تحت الجلد 22 جم × 1 بوصة ، معقمةأي
إبر تحت الجلد 30 جم × 1/2 بوصة ، معقمةأي
كحول الأيزوبروبيل 70٪EMD MilliporePX1840-4 [فيشر العلمي]استبدالها ؛ درجة الكاشف
www.fishersci.com< / أ>
فئران إيفانز الطويلة (مربيون من الإناث والذكور)مختبرات نهر تشارلزغير [قسم الطب المقارن لوحدة التحكم الإلكترونية]يجب تحديد العمر والوزن ؛ يختلف السعر حسب هذه العوامل
www.criver.com< / a>
مقص تشريح دقيق ، شفرات 3.5 بوصة ، 23 ممأدوات البحث الطبية الحيوية11-2200لقطع أنابيب البولي إيثيلين
brisurgical.com< / a>
البولي إيثيلين 10 أنابيب (0.011 بوصة. هوية ؛ 0.024 بوصة. OD)يمكن استبدال BD Diagnostic Systems22-204008 [Fisher Scientific]
www.fishersci.com< / a>
البولي إيثيلين 50 الأنابيب (0.023 بوصة. هوية ؛ 0.038 بوصة. OD)يمكن استبدال أنظمة تشخيص BD22270835 [فيشر العلمي
www.fishersci.com< / a>
سخان مياه منظم أو ساخن زجاجة حليب أطفالأياختياري ؛ يساعد في تسخين محاليل الحليب البارد
محاقن توبركولين ، معقمة ، 1.0 ملأي
محاقن توبركولين ، معقمة ، 10 ملأييمكن استخدامها لسحب الكحول الإيثيلي أو استخدام مقياس الوزن بحجم مناسب من الميكروبيبت
يجب أن يكون لهدقة جيدة (بوحدات الجرام)
<قوي>الاسم<قوي>الشركة<قوي>رقم الكتالوج<قوي>تعليقات
><قوي>تصنيع مدرج الرأس وقطب ثنائي القطب تعديل < / قوي >
القطب الكهربائي ، 2 قناة SS البلاستيك الملتويةواحدة ، Inc.MS303/2-B/SPC  ELECT SS  2C TW .008 "يجب تحديد طول مخصص يبلغ 20 مم أسفل قاعدة التمثال
www.plastics1.com< / a>
Centi-Loc Strip Socket عازل (المعروف أيضا باسم Micro Strip) ITTCannon / ITT Interconnect SolutionsCTA4-IS-60 * أو CTA4-1S-60 **يعتمد على البائع ؛ انظر كماشة الأسنان www.onlinecomponents.com أو
www.avnetexpress.avnet.com ، CMF Medicon المسنن390.20.05يمكن استبدالها ؛ استخدم لتجعيد الأسلاك إلى دبابيس التلامس الذكورية
www.medicon.de< / a>
مقص تشريح دقيق ، 3.5 بوصة ، 23 مم شفراتالبحث الطبية الحيوية11-2200تستخدم فقط لقطع أسلاك 3T ؛ سيؤدي قطع أسلاك 10T إلى إتلاف الشفرة - استخدم شفرة متجرد الأسلاك بدلا من ذلك
brisurgical.com< / a>
أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ المطلية ب PTFE ، 10T (قطر مكشوف .010 بوصة)Sigmund Cohn-Medwire316SS10T
www.sigmundcohn.com< / a>
PTFE أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ المطلية ، 3T (قطر مكشوف 0.003 بوصة)Sigmund Cohn-Medwire316SS3T
www.sigmundcohn.com< / a>
شفرة حلاقةأيلتجريد 1 مم من شوكات القطب ثنائي القطب
دبوس الاتصال بالمقبس Relia-Tac ،Cooper Interconnect220-P02-100انظر Allied Electronics Cat # 70144761
www.alliedelec.com< / a>
ملاقط ، عالية الدقة ، مسننة ، 4 3/4 فيعلوم المجهر الإلكتروني78314-00Dلفهم سلك 10T بإحكام أثناء تجريد PTFE بملاقط ناعمة
www.emsdiasum.com
، عالية الدقة ، ناعمة ، 4 3/4 فيعلوم المجهر الإلكتروني78313-00B
www.emsdiasum.com
ملاقط ، أطراف فائقة الدقة ، 4 3/4 فيعلوم المجهر الإلكتروني78510-0لتجريد 1 مم من PTFE من أحد طرفي سلك 3T ؛ قبضة جزء محمي مع ملاقط ناعمة
www.emsdiasum.com
متجرد الأسلاك ، 16-26 AWGأياستخدام نهاية الشفرة لقطع الشرائط
الدقيقة<قوية>الاسم<قوي>الشركة Catalog NumberComments
Eye-EyeSurgery
الأدوات الجراحية (الفولاذ المقاوم للصدأ عالي الجودة)
2 × ملقط الضمادات ، 4 فيأدوات البحث الطبية الحيوية30-1205يمكن استبدالها ؛ ملقط إضافي للإمساك بالأقطاب الكهربائية / البراغي خارج صينية الجراحة
brisurgical.com
ملقط الضمادات ، 3 فيأدوات البحث الطبية الحيوية30-1200يمكن استبدال
brisurgical.com< / a>
البحث الطبية الحيويةلصينية الأدوات24-1355يمكن استبدالها
brisurgical.com< / a>
مقبض السكين رقم 3 ، 5 فيأدوات البحث الطبية الحيوية26-1000يمكن استبدالها
brisurgical.com< / a>
ملقط تشريح دقيق ، 3.5 بوصة ،البحث الطبية الحيوية10-1630يمكن استبدالها
brisurgical.com< / a>
ملقط تشريح دقيق ، 3.5 بوصة ، منصة ناعمة (0.3 × 5 مم) أدواتالبحث الطبية الحيوية10-1720
brisurgical.com< / a>
مقص تشريح دقيق ، 3.5 بوصة ، حساس للغاية ، شفرات 15 ممأدوات البحث الطبية الحيوية11-2000يمكن استبدالها
brisurgical.com< / a>
ملقط منشق عادي ، 3.5 بوصة & nbsp ؛أدوات البحث الطبية الحيوية30-1600يمكن استبدالها
brisurgical.com< / a>
# 10 شفرة جراحية من الفولاذ المقاوم للصدأ لمقبض # 3 ، معقمةيمكن استبدالها
0-80 × 0.125 في مسامير الفولاذ المقاومPlastics One، Inc.0-80 × 0.125يمكن استبدالها
www.plastics1.com< / a>
وسادات تحضير الكحول ، فيشرعلمي22-363-750 [يمكن استبدال فيشر العلمي
www.fishersci.com< / a>
Betadine Povidone-IodinePurdue Frederick Co.6761815101 [فيشر العلمي]يمكن استبدالها
www.fishersci.com< / a>
بيتادين بوفيدون اليود الإعدادية وساداتمور الطبية19-898-946 [فيشر العلمي]يمكن استبدالها
www.fishersci.com< / a>
مسحات قطنية برأس ، قابلة للتعقيمبأيعادة ما يكون طول 7.6 سم أو 15.2
سم مثقاب لملزمة الدبوس ، # 55 (0.052 بوصة)يجب أن يقاوم أيمعدن الصدأ والتآكل
وسادات الشاش ، 2 بوصة × 2 فيفيشر Scientific22-362-178 [فيشر العلمي]يمكن استبدالها
www.fishersci.com< / a>
قفازات اللاتكس / النتريل / الفينيل للأغراض العامةأي
معقم الخرزة الزجاجيةأيأدوات تعقيم بين العمليات الجراحية
يمكن استبدال مضخة العلاج بالماء المسخن مع الوسادات × 2GaymarTP-500؛ يوصى باستخدام مضخات منفصلة - 1 للجراحة ، 1 للتعافي
إبر تحت الجلد 26 جم × 3/8 بوصة ، معقمةأي
إيزوفلورانفيدكوNDC 50989-150-12يمكن استبدال Manfacturer. قد تكون هناك حاجة إلى موافقة بيطرية
نظام مبخر الأيزوفلوران ، منضدية ،V3000PKعلمي باركلانديمكن استبداله
www.parklandscientific.com< / a>
مفك براغي المجوهرات مع شفرة 1.8-2 مم يجبأن يقاوم أيمعدن الصدأ والتآكل
Ortho-Jet BCA (أسمنت الأسنان)Lang DentalB1334على مسحوق (1 رطل) وخزان أكسجين سائل
www.langdental.com< / a>
مع منظم ضغط ، مورد محلي كبير
بوتقة بورسلين ، عالية الشكل ، مزجج ، 10 ملCoorsTek، Inc.07-965C [فيشر العلمي]يمكن استبداله ب Fisher FB-965-I Wide-Form Crucible
www.fishersci.com< / a>
Puralube مرهم العيون البيطري ،Henry Scheinالمعقمة NC0144682 [فيشر العلمي]استبدالها
www.fishersci.com< / a>
Quatricide PV-15PharmacalPV-15؛ يمكن استبداله
www.pharmacal.com< / a>
أقنعة تخدير غاز الفئران للجراحة التجسيمية   ؛شركة Stoelting51610
www.stoeltingco.com< / a>
جهاز تجسيمي للفئران مع قضبان الأذن (45 درجة)بأيقضبان 45 درجة لمنع إتلاف طبلة الأذن Roboz
Surgical Instrument MilkRoboz SurgicalNC9358575 [فيشر العلمي]يمكن استبدالها لأدوات التشحيم أثناء التعقيم
www.fishersci.com< / a>
الشعر ماكينة تشذيبأي
كلوريد الصوديومفيشر ScientificS641-500 [فيشر العلمي]لجعل 0.9٪ محلول ملحي ؛ درجة الكاشف ؛ USP
www.fishersci.com< / a>
صغيرة من الفولاذ المقاوم للصدأ (الشفرة: 0.75 لتر × 0.18 بوصة. ث)فيشر Scientific21-401-15 [فيشر العلمي]يمكن استبداله
www.fishersci.com< / a>
Starrett Pin Vise ، 0.000 بوصة - 0.055 فيأيمطلي بالنيكل أو ما يعادله موصى به لمقاومة الصدأ والتآكل
قفازات جراحية معقمةأي
لفائف تعقيم ، 20 بوصة × 20 بوصة ، قابلة للتعقيمتصنيع المروحة11-890-8C [فيشر العلمي]مفيد لتغليف الإمدادات القابلة للتعقيم وفي الحقل المعقم أثناء الجراحة
www.fishersci.com< / a>
الستارة الجراحية ، معقمة / قابلة للتعقيمتحتاج إلىقطع إلى الحجم للفئران
ثوب جراحي *أي* إذا لزم الأمر بواسطة
قناع IACUC الجراحيأي
محاقن درنة ، معقمة ، 1.0 ملأي
مقياسيجب أن يكون لها دقة جيدة (بوحدات الجرام)
<قوي>الاسم < / قوي ><قوي > الشركة < / قوي ><قوي>رقم الكتالوج < / strong>تعليقات < قوي>
<قوي > نظام وميض العين (بافتراض نظام 4 قوارض) < / قوي >
قناة عاكس × 4بلاستيك ون ، إنك.SL2 + 3C
www.plastics1.com< / a>
كابل القطب ثنائي القطب ، مزدوج 305 × 4بلاستيك واحد ، Inc.305-305 80 سم TT2 (C)يوفر نهاية قابس للقطب ثنائي القطب على الفئران والمبدل ؛ يجب تعديله
www.plastics1.com< / a>
كابل ، 5 قنوات ، محمي ، 26 AWG × 4أيلتصنيع كابل العاكس ؛ يجب أن يكون هذا مصنوعا من غرفة الصفر
لصندوق اختبار التشغيل (في الداخل: يمكن استبدال 24 ارتفاع × 23 عرض × 14 عمق بوصة) × 4Med-Associates؛ يجب أن تتناسب الأبعاد الداخلية مع صندوق الاختبار الفعال بشكل مريح ، مع مساحة للرغوة الصوتية ؛ تناسب المروحة - 55-60 ديسيبل
www.med-associates.com< / a>
نظام وبرنامج Eyeblinkتصاميم JSAغيرمتوفرة ومخصصة لمختبر الأبحاث
أنابيب الانكماش الحراري (3/16 بوصة ، 1/4 بوصة ، 3/8 بوصة ، 1/2 في الأقطار)أيلحماية نهايات ملحومة بكابل العاكس المعدل وتوصيلات
رغوة صوتية ثلاثية الذروة من الميلامين مع هيبالون أسود (24 × 48 بوصة)McMaster-Carr9162T5؛ قطع ليناسب 4 غرف سكنية
www.mcmaster.com< / a>
صندوق اختبار عامل (خارجي 12.5 لتر × 10 عرض × 13.5 بوصة ارتفاع) ، حزمة مخصصة كاملة × 4Med-AssociatesENV-007مع أرضية شبكية من الفولاذ المقاوم للصدأ وأعلى مخصص (3 فتحات في الوسط لكابل العاكس)
www.med-associates.com< / a>
راسم الذبذبات (اختياري)أيالحد الأدنى للمواصفات الموصى بها: عرض النطاق الترددي التناظري 200 ميجاهرتز، أخذ العينات في الوقت الحقيقي GS/s 1، 4 قنوات؛ انظر مكبرات الصوت www.picotech.com
/ td >
Piezo (مكبرات الصوت) × 4 (7 × 3 بوصة)MCM Electronics53-805يجب أن تتطابق مع مواصفات نطاق التردد لنظام وميض العين (2500 هرتز - 25 كيلو هرتز)
www.mcmelectronics.com< / a>
محطة لحام ، لحام ، تدفق ، تقصيرأيلحام 26 كبلات AWG إلى مآخذ الإناث (التي تناسب دبابيس الاتصال الذكورية) والمقابس ثنائية القطب
عوازل التحفيز × 4WPI InternationalA365تعمل هذه الوحدات على بطاريات قلوية 16-9 فولت ؛ يتوفر إصدار مناسب قابل لإعادة الشحن (A365R)
www.wpiinc.com< / a>
قطب كهربائي ثلاثي الأقطاب لمبدل SL3C × 4بلاستيك واحد ، شركه.335-335 80 سم TT3 Cيوفر نهاية قابس إلى مسرح EMG على الفئران والمبدل ؛ يجب تعديله
www.plastics1.com< / a>
USB LED × 4لا تسبب أيمصابيح USB "ضوضاء" كهربائية مع إشارات EMG من الفئران
www.plastics1.com< / a>
كاميرات الويب × 4 ، برامج المراقبةأي
جهاز كمبيوتر يعمل بنظام التشغيل MS Windows OSأي
مضخة معالجة بالماء يمكن ] ثنائي أدوات ذكر المسننة المسننة أدوات أدوات Fine Points للصدأ معقم غير المعاد التنفس حزمة يحتوي شركة يمكن مطهر مضاد للميكروبات يوصى قوارض ملعقة قد وزن 5 يمكن استبدال كابل

المراجع

  1. Jones, K. L., Smith, D. W. Recognition of the fetal alcohol syndrome in early infancy. Lancet. 2, 999-1001 (1973).
  2. Stratton, K. R., Howe, C. J., Battaglia, F. C. Fetal alcohol syndrome: Diagnosis, epidemiology, prevention, and treatment. , National Academy Press. (1996).
  3. Streissguth, A. P., Barr, H. M., Martin, D. C., Herman, C. S. Effects of maternal alcohol, nicotine, and caffeine use during pregnancy on infant mental and motor development at eight months. Alcohol Clin Exp Res. 4 (2), 152-164 (1980).
  4. Streissguth, A. P., O'Malley, K. Neuropsychiatric implications and long-term consequences of fetal alcohol spectrum disorders. Semin Clin Neuropsychiatry. 5 (3), 177-190 (2000).
  5. May, P. A., et al. Prevalence and epidemiologic characteristics of FASD from various research methods with an emphasis on recent in-school studies. Dev Disabil Res Rev. 15 (3), 176-192 (2009).
  6. Sowell, E. R., et al. Mapping callosal morphology and cognitive correlates: Effects of heavy prenatal alcohol exposure. Neurology. 57 (2), 235-244 (2001).
  7. Sowell, E. R., et al. Abnormal development of the cerebellar vermis in children prenatally exposed to alcohol: Size reduction in lobules I-V. Alcohol Clin Exp Res. 20 (1), 31-34 (1996).
  8. Autti-Ramo, I., et al. MRI findings in children with school problems who had been exposed prenatally to alcohol. Dev Med Child Neurol. 44 (2), 98-106 (2002).
  9. Hamilton, D. A., Kodituwakku, P., Sutherland, R. J., Savage, D. D. Children with Fetal Alcohol Syndrome are impaired at place learning but not cued-navigation in a virtual Morris water task. Behav Brain Res. 143 (1), 85-94 (2003).
  10. Uecker, A., Nadel, L. Spatial but not object memory impairments in children with fetal alcohol syndrome. Am J Ment Retard. 103 (1), 12-18 (1998).
  11. Uecker, A., Nadel, L. Spatial locations gone awry: object and spatial memory deficits in children with fetal alcohol syndrome. Neuropsychologia. 34 (3), 209-223 (1996).
  12. Goodlett, C. R., Lundahl, K. R. Temporal determinants of neonatal alcohol-induced cerebellar damage and motor performance deficits. Pharmacol Biochem Behav. 55 (4), 531-540 (1996).
  13. Goodlett, C. R., Kelly, S. J., West, J. R. Early postnatal alcohol exposure that produces high blood alcohol levels impairs development of spatial navigation learning. Psychobiol. 15, 64-74 (1987).
  14. Bayer, S. A., Altman, J., Russo, R. J., Zhang, X. Timetables of neurogenesis in the human brain based on experimentally determined patterns in the rat. Neurotoxicol. 14 (1), 83-144 (1993).
  15. Dobbing, J., Sands, J. Quantitative growth and development of human brain. Arch Dis Child. 48 (10), 757-767 (1973).
  16. West, J. R. Fetal alcohol-induced brain damage and the problem of determining temporal vulnerability: A review. Alcohol Drug Res. 7 (5-6), 423-441 (1987).
  17. Zecevic, N., Rakic, P. Differentiation of Purkinje cells and their relationship to other components of developing cerebellar cortex in man. J Comp Neurol. 167, 27-48 (1976).
  18. Rufer, E. S., et al. Adequacy of maternal iron status protects against behavioral, neuroanatomical, and growth deficits in fetal alcohol spectrum disorders. PLoS One. 7 (10), e47499(2012).
  19. Tran, T. D., Kelly, S. J. Critical periods for ethanol-induced cell loss in the hippocampal formation. Neurotoxicol Teratol. 25 (5), 519-528 (2003).
  20. Pierce, D. R., Goodlett, C. R., West, J. R. Differential neuronal loss following early postnatal alcohol exposure. Teratology. 40 (2), 113-126 (1989).
  21. Tran, T. D., Jackson, H. J., Horn, K. H., Goodlett, C. R. Vitamin E does not protect against neonatal ethanol-induced cerebellar damage or deficits in eyeblink classical conditioning in rats. Alcohol Clin Exp Res. 29 (1), 117-129 (2005).
  22. Goodlett, C. R., Peterson, S. D., Lundahl, K. R., Pearlman, A. D. Binge-like alcohol exposure of neonatal rats via intragastric intubation induces both Purkinje cell loss and cortical astrogliosis. Alcohol Clin Exp Res. 21 (6), 1010-1017 (1997).
  23. Green, J. T., Tran, T. D., Steinmetz, J. E., Goodlett, C. R. Neonatal ethanol produces cerebellar deep nuclear cell loss and correlated disruption of eyeblink conditioning in adult rats. Brain Res. 956, 302-311 (2002).
  24. Cronise, K., Marino, M. D., Tran, T. D., Kelly, S. J. Critical periods for the effects of alcohol exposure on learning in rats. Behav Neurosci. 115 (1), 138-145 (2001).
  25. Tran, T. D., Cronise, K., Marino, M. D., Jenkins, W. J., Kelly, S. J. Critical periods for the effects of alcohol exposure on brain weight, body weight, activity and investigation. Behav Brain Res. 116 (1), 99-110 (2000).
  26. Steinmetz, J. E. Brain substrates of classical eyeblink conditioning: A highly localized but also distributed system. Behav Brain Res. 110 (1-2), 13-24 (2000).
  27. Thompson, R. F. The neurobiology of learning and memory. Science. 233 (4767), 941-947 (1986).
  28. Ivkovich, D., Eckerman, C. O., Krasnegor, N. A., Stanton, M. E. Eyeblink classical conditioning: Vol. 1 Applications in humans. Woodruff-Pak, D. S., Steinmetz, J. E. , Kluwer Academic Publishers. 119-142 (2000).
  29. Woodruff-Pak, D. S., Steinmetz, J. E. Eyeblink classical conditioning: Volume I - Applications in humans. , Kluwer Academic Publishers. (2000).
  30. Woodruff-Pak, D. S., Steinmetz, J. E. Eyeblink classical conditioning: Volume II - Animal models. , Kluwer Academic Publishers. (2000).
  31. Kishimoto, Y., et al. Implicit Memory in Monkeys: Development of a Delay Eyeblink Conditioning System with Parallel Electromyographic and High-Speed Video Measurements. PLoS One. 10 (6), e0129828(2015).
  32. Chen, L., Bao, S., Lockard, J. M., Kim, J. K., Thompson, R. F. Impaired classical eyeblink conditioning in cerebellar-lesioned and Purkinje cell degeneration (pcd) mutant mice. J Neurosci. 16 (8), 2829-2838 (1996).
  33. Freeman, J. H. Jr, Carter, C. S., Stanton, M. E. Early cerebellar lesions impair eyeblink conditioning in developing rats: Differential effects of unilateral lesions on postnatal day 10 or 20. Behav Neurosci. 109 (5), 893-902 (1995).
  34. Gerwig, M., et al. Trace eyeblink conditioning in patients with cerebellar degeneration: Comparison of short and long trace intervals. Exp Brain Res. 187 (1), 85-96 (2008).
  35. LaBar, K. S., Disterhoft, J. F. Conditioning, awareness, and the hippocampus. Hippocampus. 8 (6), 620-626 (1998).
  36. McCormick, D. A., Steinmetz, J. E., Thompson, R. F. Lesions of the inferior olivary complex cause extinction of the classically conditioned eyeblink response. Brain Res. 359 (1-2), 120-130 (1985).
  37. Clark, R. E., Zola, S. Trace eyeblink classical conditioning in the monkey: a nonsurgical method and behavioral analysis. Behav Neurosci. 112 (5), 1062-1068 (1998).
  38. Anderson, B. J., Steinmetz, J. E. Cerebellar and brainstem circuits involved in classical eyeblink conditioning. Rev Neurosci. 5 (3), 251-273 (1994).
  39. Thompson, R. F., Krupa, D. J. Organization of memory traces in the mammalian brain. Annu Rev Neurosci. 17, 519-549 (1994).
  40. Miller, M. J., et al. fMRI of the conscious rabbit during unilateral classical eyeblink conditioning reveals bilateral cerebellar activation. J Neurosci. 23 (37), 11753-11758 (2003).
  41. Geinisman, Y., et al. Remodeling of hippocampal synapses after hippocampus-dependent associative learning. J Comp Neurol. 417 (1), 49-59 (2000).
  42. Ivkovich, D., Stanton, M. E. Effects of early hippocampal lesions on trace, delay, and long-delay eyeblink conditioning in developing rats. Neurobiol Learn Mem. 76 (3), 426-446 (2001).
  43. Moyer, J. R. Jr, Deyo, R. A., Disterhoft, J. F. Hippocampectomy disrupts trace eye-blink conditioning in rabbits. Behav Neurosci. 104 (2), 243-252 (1990).
  44. Solomon, P. R., Vander Schaaf, E. R., Thompson, R. F., Weisz, D. J. Hippocampus and trace conditioning of the rabbit's classically conditioned nictitating membrane response. Behav Neurosci. 100 (5), 729-744 (1986).
  45. Kronforst-Collins, M. A., Disterhoft, J. F. Lesions of the caudal area of rabbit medial prefrontal cortex impair trace eyeblink conditioning. Neurobiol Learn Mem. 69 (2), 147-162 (1998).
  46. Weible, A. P., McEchron, M. D., Disterhoft, J. F. Cortical involvement in acquisition and extinction of trace eyeblink conditioning. Behav Neurosci. 114 (6), 1058-1067 (2000).
  47. Thomas, J. D., Tran, T. D. Choline supplementation mitigates trace, but not delay, eyeblink conditioning deficits in rats exposed to alcohol during development. Hippocampus. 22 (3), 619-630 (2012).
  48. West, J. R., Hamre, K. M., Pierce, D. R. Delay in brain growth induced by alcohol in artificially reared rat pups. Alcohol. 1 (3), 213-222 (1984).
  49. Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. Survivable stereotaxic surgery in rodents. J Vis Exp. (20), e880(2008).
  50. Christian, K. M., Thompson, R. F. Neural substrates of eyeblink conditioning: acquisition and retention. Learn Mem. 10 (6), 427-455 (2003).
  51. Kishimoto, Y., Nakazawa, K., Tonegawa, S., Kirino, Y., Kano, M. Hippocampal CA3 NMDA receptors are crucial for adaptive timing of trace eyeblink conditioned response. J Neurosci. 26 (5), 1562-1570 (2006).
  52. Shors, T. J., et al. Neurogenesis in the adult is involved in the formation of trace memories. Nature. 410 (6826), 372-376 (2001).
  53. Tran, T. D., Stanton, M. E., Goodlett, C. R. Binge-like ethanol exposure during the early postnatal period impairs eyeblink conditioning of short and long CS-US intervals in rats. Dev Psychobiol. 49 (6), 589-605 (2007).
  54. Mizumori, S. J., Yeshenko, O., Gill, K. M., Davis, D. M. Parallel processing across neural systems: Implications for a multiple memory system hypothesis. Neurobiol Learn Mem. 82 (3), 278-298 (2004).
  55. Siegel, J. J., et al. Trace Eyeblink Conditioning in Mice Is Dependent upon the Dorsal Medial Prefrontal Cortex, Cerebellum, and Amygdala: Behavioral Characterization and Functional Circuitry(1,2,3). eNeuro. 2 (4), (2015).
  56. Murawski, N. J., Jablonski, S. A., Brown, K. L., Stanton, M. E. Effects of neonatal alcohol dose and exposure window on long delay and trace eyeblink conditioning in juvenile rats. Behav Brain Res. 236 (1), 307-318 (2013).
  57. Lindquist, D. H. Hippocampal-dependent Pavlovian conditioning in adult rats exposed to binge-like doses of ethanol as neonates. Behav Brain Res. 242, 191-199 (2013).
  58. Ivarsson, M., Svensson, P. Conditioned eyeblink response consists of two distinct components. J Neurophysiol. 83 (2), 796-807 (2000).
  59. Woodruff-Pak, D. S., Lavond, D. G., Thompson, R. F. Trace conditioning: abolished by cerebellar nuclear lesions but not lateral cerebellar cortex aspirations. Brain Res. 348 (2), 249-260 (1985).
  60. Takehara-Nishiuchi, K. The Anatomy and Physiology of Eyeblink Classical Conditioning. Curr Top Behav Neurosci. , (2016).
  61. Mattson, S. N., Schoenfeld, A. M., Riley, E. P. Teratogenic effects of alcohol on brain and behavior. Alcohol Res Health. 25 (3), 185-191 (2001).
  62. Goodfellow, M. J., Abdulla, K. A., Lindquist, D. H. Neonatal Ethanol Exposure Impairs Trace Fear Conditioning and Alters NMDA Receptor Subunit Expression in Adult Male and Female Rats. Alcohol Clin Exp Res. 40 (2), 309-318 (2016).
  63. Beylin, A. V., et al. The role of the hippocampus in trace conditioning: Temporal discontinuity or task difficulty? Neurobiol Learn Mem. 76 (3), 447-461 (2001).
  64. Port, R. L., Romano, A. G., Steinmetz, J. E., Mikhail, A. A., Patterson, M. M. Retention and acquisition of classical trace conditioned responses by rabbits with hippocampal lesions. Behav Neurosci. 100 (5), 745-752 (1986).
  65. Weiss, C., Bouwmeester, H., Power, J. M., Disterhoft, J. F. Hippocampal lesions prevent trace eyeblink conditioning in the freely moving rat. Behav Brain Res. 99 (2), 123-132 (1999).
  66. Brown, S. M., et al. Eyeblink conditioning deficits indicate timing and cerebellar abnormalities in schizophrenia. Brain Cogn. 58 (1), 94-108 (2005).
  67. Sears, L. L., Steinmetz, J. E. Effects of haloperidol on sensory processing in the hippocampus during classical eyeblink conditioning. Psychopharmacology. 130 (3), 254-260 (1997).
  68. Kronforst-Collins, M. A., Moriearty, P. L., Schmidt, B., Disterhoft, J. F. Metrifonate improves associative learning and retention in aging rabbits. Behav Neurosci. 111 (5), 1031-1040 (1997).
  69. Woodruff-Pak, D. S., Finkbiner, R. G., Sasse, D. K. Eyeblink conditioning discriminates Alzheimer's patients from non-demented aged. Neuroreport. 1 (1), 45-48 (1990).
  70. Oristaglio, J., Romano, A. G., Harvey, J. A. Amphetamine influences conditioned response timing and laterality of anterior cingulate cortex activity during rabbit delay eyeblink conditioning. Neurobiol Learn Mem. 92 (1), 1-18 (2009).
  71. Scavio, M. J., Clift, P. S., Wills, J. C. Posttraining effects of amphetamine, chlorpromazine, ketamine, and scopolamine on the acquisition and extinction of the rabbit's conditioned nictitating membrane response. Behav Neurosci. 106 (6), 900-908 (1992).
  72. Fortier, C. B., et al. Delay discrimination and reversal eyeblink classical conditioning in abstinent chronic alcoholics. Neuropsychology. 22 (2), 196-208 (2008).

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

التعلم الترابطينشاط رمش العين الكهربائي العضليفترة الأثرالاستجابة الشرطيةالاستجابة غير الشرطيةالاستجابات الشرطية التكيفية
استخدام الاشراط الكلاسيكي اييبلينك تتبع لتقييم هيبوكامبال الخلل في نموذج الفئران من اضطرابات طيف الكحول الجنيني
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.