نحن نقدم طريقة موثوقة لربط الشريان الهابط الأمامي الأيسر (LAD) في نموذج الفأر. هذه الطريقة أقل توغلا نسبيا من الطرق الأخرى ، بما في ذلك التنبيب الرغامي ، ونهج بضع الصدر على الجانب الأيسر ، وبزل الصدر. يمكن استخدام هذه الطريقة كنموذج لكل من احتشاء عضلة القلب الحاد والمزمن (MI).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الفئران اليسار الأمامي تنازلي (LAD) التاجي ربط الشريان: نموذج تحسين والمبسطة لاحتشاء عضلة القلب
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مرض نقص تروية القلب (IHD)، أو متلازمة الشريان التاجي الحادة (ACS)، هي واحدة من الأسباب الرئيسية للوفاة في الولايات المتحدة. يتميز IHD التي كتبها انخفاض تدفق الدم إلى القلب، مما أدى إلى فقدان الأوكسجين إلى ونخر التي تلت ذلك من عضلة القلب. وقد اكتسب هذا النموذج MI شعبية لاستخدامه كمصطلح القصير نموذج نقص التروية ضخه ونموذج ربط دائم على المدى الطويل. أدناه، نحن تصف طريقة يمكن الاعتماد عليها لربط دائم في LAD. مع الماوس تكنولوجيا الهندسة الوراثية أصبحت أكثر تطورا، ومع تزايد توافر الأدوات الجراحية الفئران الجودة، وأصبح الماوس نموذج شعبية للعيادات MI. يتضمن نموذجنا الجراحي استخدام مخدر عكسها بسهولة لانتعاش سريع من الفأرة. والتنبيب الرغامي مينيملي دون تنطوي على القصبة الهوائية. وبزل الصدر من خلال الموقع بضع الصدر الأصلي دون خلق شق إضافي في صدره، كما هويتم في بعض الأساليب الأخرى، نحو فعال لإزالة الدم الزائد والهواء من تجويف الصدر. هذا الأسلوب هو نسبيا أقل الغازية من الأساليب الأخرى، مما يقلل بشكل كبير المضاعفات الجراحية وبعد الجراحة والوفيات ويحسن التكاثر.
المقدمة
مرض الشريان التاجي، أو ACS، هو الحدث القلب والأوعية الدموية الأكثر انتشارا وسيتم النظر في السبب الرئيسي للمراضة والوفيات في جميع أنحاء العالم في عام 2020 1. سبب ACS هو وجود تخثر عضلة القلب نتيجة لتمزق لوحة تصلب الشرايين التاجية الذي يمنع أو يقلل من تدفق الدم إلى أنسجة القلب 2. ولذلك، هناك علامات سريرية متسقة مع وجود نقص تروية عضلة القلب الحاد، مثل احتشاء عضلة القلب (MI) 3، 4. MI يؤدي إلى فقدان في كتلة العضلية والتقدم إلى إعادة البطين المرضية، والتي يمكن أن تؤدي إلى اختلال البطين وفشل القلب 5، 6.
كان واحدا من أكثر الطرق فعالية لدراسة جمعية حقوق الإنسان لتقليد احتشاء عضلة القلب البشري في نموذج حيواني. ويتحقق ذلك عن طريق يسد LAD فيالفئران. باستخدام هذا النموذج، علينا أن ندرس كيف يمكن للقلب أن تكون محمية من الأضرار الناجمة عن جمعية حقوق الإنسان.
على مدى العقد الماضي، تحولت الباحثين من استخدام النماذج الحيوانية الكبيرة للحيوانات الصغيرة، بما في ذلك التحول من الفئران على الفئران. نموذج الفأر أصغر هو بداية ليكون من المفضل للعديد من الأسباب، بما في ذلك صغر حجمها، كبيرة حجم القمامة، ومنخفضة التكلفة للحفاظ على، وفترة الحمل قصيرة، فضلا عن توافر توسعية من المعدلة وراثيا وخروج المغلوب الجينات نماذج 7. على الرغم من أن الفئران صغيرة الحجم، وبمساعدة الأدوات الجراحية الجديدة المصممة خصيصا لهم في هذا التطور. لدينا وسيلة تستخدم هذه الأدوات الجراحية الجديدة.
بينما عدة طرق تنفيذ القصبة الهوائية الغازية، ونحن نستخدم طريقة أقل الغازية من التنبيب الرغامي. استخدام الإضاءة العلوية من البلعوم، ونحن تدخله دون خلق أي شقوق، وتوفير تجربة أكثر أمانا وأقل من صدمة لرانه حيوان. ثم يتم وضع الماوس على جهاز التنفس الصناعي ويحرص على الأيزوفلورين خلال الإجراء بأكمله. نظرا لقصر مدة التخدير التي تنتجها المخدرات، فإنه يستغرق سوى بضع دقائق للحيوان للتعافي من مخدر مرة واحدة يتم التوقف عن ذلك. ويشمل نموذجنا الجراحي أيضا بزل الصدر الغازية الحد الأدنى. وقد تناول إزالة حذرا من الدم والهواء الزائد من تجويف الصدر باستخدام بزل الصدر من خلال شق بضع الصدر الأصلي من المضاعفات الشائعة اللاحقة للعمليات الجراحية للربط LAD: واسترواح التوتر. هذا الأسلوب، مما يلغي الحاجة لاثنين من شقوق إضافية المستخدمة في أساليب واحدة أخرى لالقصبة الهوائية وآخر للمضاعفات أقل، وقد بزل الصدر أسفرت عن مرحلة ما بعد الجراحة وخفضت بشكل كبير وفيات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم استعراض هذا البروتوكول الحيوانية والموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) في مستشفى رود ايلاند.
1. التخدير والتنبيب
- وزن الماوس لحساب الجرعة من الدواء الألم بعد العملية.
- ضع الماوس في غرفة الاستقراء وتسليم 4٪ الأيزوفلورين ل9-10 دقائق، ومراقبة الحيوانات طوال الوقت. بدوره على معقم حبة ساخنة حتى أن الجهاز يمكن أن تسخن إلى ما يقرب من 250 ° C. سوف التسخين اتخاذ 15-20 دقيقة.
- بمجرد وصول الماوس طائرة عميقة التخدير، مع معدل التنفس ما يقرب من 32 نفسا / دقيقة، ضع الماوس مستلق على لوحة الستايروفوم واستخدام شريط مطاطي المضمون تحت أعلى القواطع لعقد الفم مفتوحا. تأكيد التخدير عن طريق إجراء قرصة أخمص قدميه. ضع منار عالية الكثافة فوق الماوس بحيث يمكن تصور والبلعوم.
- استخدام ملقط منحنية لفتح الفك وزوج آخر من ملقط لرفع اللسان للخروج من الطريق. ومن المؤكد أن تدخله في حين المتمركزة أو أقل قليلا على مستوى العين مع جسم الفأر. من المستحسن استخدام loupes لالجراحية.
- تصور افتتاح واختتام الحبال الصوتية. عندما فتح، اضافة الى وجود 20 عيار (1) في الوريد (IV) القسطرة مع حادة طرف إبرة التعريف. استخدام إبرة لتوجيه القسطرة لفتح القصبة الهوائية، ولكن تجنب إدخال الإبرة إلى القصبة الهوائية. التحقق من موضع الصحيح يمكن أن يتم ذلك باستخدام ماصة نقل البلاستيكية.
- نقل الماوس مدخل أنبوب إلى السطح التشغيل مجهزة مع جهاز التدفئة. توصيل الماوس على جهاز التنفس الصناعي القوارض الصغيرة لتعيين حجم المخ من 150 ميكرولتر / السكتة الدماغية والسكتة الدماغية بمعدل 130 السكتات الدماغية / دقيقة.
- تسليم 2.5٪ الأيزوفلورين. التحقق من التنبيب عن طريق التحقق من ارتفاع الصدر الثنائي. تحقق من التخدير عن طريق إجراء قرصة أخمص قدميه. قد تحتاج الماوس 5-10 دقيقة على جهاز التنفس الصناعي لتصبح تخدير كامل.
"jove_title"> 2. إعداد ماوس
- الشريط أسفل أنبوب التنبيب في موقع يربط بين التنفس الصناعي والقسطرة IV. الشريط أسفل الأطراف. وضع قطرات التشحيم العقيمة على العينين.
- تقليم الجانب الأيسر البطني من القفص الصدري مع الحلاقة الكهربائية. نفض الغبار عن الفراء حلق مع مناديل الجافة وتطبيق طبقة صغيرة من كريم إزالة الشعر باستخدام قطعة قطن معقمة. وينبغي أن تظل كريم في اتصال مع بصيلات الشعر لحوالي 30 - 45 ثانية.
- في حين أن عمليات كريم، وضع ثلاث مسحات القطن المعقم في ثلاثة أنابيب 1.5 مل مليئة Betadine لامتصاص. باستخدام مناديل مبللة بالماء المقطر، ويمسح برفق بعيدا كريم والفراء.
- تنظيف الجراحي الميداني ثلاث مرات، بالتناوب Betadine ومعقمة 70٪ منصات الأيزوبروبانول الإعدادية، والتنظيف في حركة دائرية الانتقال من المركز إلى المحيط. وضع الستارة العقيمة مع وجود ثقب ربع الحجم على مدى الجراحي الميداني من الفأرة.
- تنظيف المنطقة المحيطة مذكرات التفاهمه مع 70٪ من الإيثانول. تحقق التخدير مرة أخرى مع قليل أخمص قدميه.
3. LAD من ربط
- وضع الأدوات الجراحية تعقيمها في حبة تعقيم الساخن مسخن إلى 250 درجة مئوية لمدة حوالي 20 ثانية. وضع الأدوات المعقمة على ثنى الجراحية المعقمة تعقيمها. قفازات دون الجراحية.
- استخدام ملقط غرامة تلميح إلى رفع بلطف الجلد في مرحلة ما يقرب من 5 ملم إلى اليسار من الغضروف الخنجري بارز. استخدام مشرط جراحي بشفرة رقم 10 لخلق شق عمودي في الجلد من هذه النقطة صعودا، إلى مستوى المقبض.
- استخدام ملقط منحنية لفصل بلطف الجلد والعضلات طبقات. فتح طبقة العضلات، وبعد شق الجلد. إدراج اثنين من 5-0 خيوط البولي بروبلين من خلال طبقة العضلات، واحدة على كل جانب من جانبي الشق، وتأمين الغرز مؤقتا مع المشابك لعقد طبقة العضلات مفتوحة.
- تحديد وإجراء شق في الفضاء وربي الثالث، بعدزاوية الطبيعية من القفص الصدري. إزالة الشريط من الأطراف اليسرى من الفأرة وتأمين القدم الخلفية اليسرى لقدمه اليمنى الخلفية مع الشريط. قطع قطعة طويلة من شريط وتأمين الجبهة القدم اليسرى لسطح التشغيل في وضع مرتفع قليلا. تنظيف قفازات مع 70٪ من الإيثانول.
- استخدام ضام لنشر بلطف بعيدا في 3 و 4 تشرين الأضلاع. قطع جزء صغير من الشاش المعقم، ما يقرب من 1 في العاشر ½ في، وتراجع في العقيمة 0.9٪ المالحة. استنزاف المياه المالحة الزائدة واستخدام ملقط لإدراج بلطف الشاش ضد الرئة اليسرى لمنع تلف الرئتين بطريق الخطأ أثناء العملية.
- إزالة بلطف التأمور رقيقة بالملقط.
- المسيل للدموع على كمية صغيرة من القطن من مسحة القطن المعقم ولفة على شكل كرة صغيرة. تراجع هذه الكرة القطن في العقيمة 0.9٪ المالحة ومسحة بلطف على سطح القلب لنقدر الشرايين. دفع برفق الأذن اليسرى صعودا وتحديد الشرايين التاجية تحتنيث.
- تحديد LAD وتمرير الخيط 8-0 النايلون تحت LAD. كامل رميتين لتأمين ربط. إذا كان الربط ناجحا، البطين الأيسر البعيدة من رباط إرادة بلانش.
- باستخدام ملقط، إزالة الشاش إدراجها في وقت سابق، ومن ثم إزالة بلطف ضام. إدراج 6 في، 25 عيار أنبوب مرن تعلق على إبرة عيار 25 في تجويف الصدر من خلال فتح بضع الصدر. دفع حوالي 1-2 في الأنابيب في الفضاء فوق الرئة اليسرى. عودة الماوس لموقف ضعيف وتنظيف قفازات مع 70٪ من الإيثانول.
- استخدام 5-0 خيوط البولي بروبلين في نمط توقف بسيط لإغلاق القفص الصدري، والحفاظ على أنبوب في الصدر في المكان. إزالة الغرز اثنين من عقد طبقة العضلات مفتوحة. استخدام 5-0 خيوط البولي بروبلين في نمط مستمر بسيط لإغلاق طبقة العضلات، ومرة أخرى الحفاظ على أنبوب في الصدر في المكان.
- نعلق حقنة 1 مل على إبرة عيار 25 على أنبوب في الصدر. سحب بلطف صعودا على الهبوطص أثناء استخراج في وقت واحد تدريجيا أنبوب في الصدر من تجويف الصدر مع ملقط. استخراج أنابيب ببطء، وهذه الخطوة يزيل الهواء الزائد والدم، والتي ستصبح على خلاف ذلك المحاصرين في تجويف الصدر والنتيجة في استرواح الصدر.
- مرة واحدة حقنة مليئة، فصل حقنة من الإبرة والتخلص من النفايات في كوب النفايات أو بالوعة. تستمر هذه العملية حتى يتم استخراج أنبوب في الصدر تماما. تأكد من أن الصدر هو مغلقة بإحكام.
- تقليل الأيزوفلورين إلى 1.5٪. إغلاق الجلد مع خيوط البولي بروبلين 4-0 في نمط توقف بسيط. تحويل المرذاذ الأيزوفلورين قبالة.
- إدارة 0.1 ملغ / مل البوبرينورفين في المياه المالحة 0.9٪ عن طريق الحقن داخل الصفاق (IP). تطبيق موضعيا 2 ملغ / مل يدوكائين مع 2 ملغ / مل بوبيفاكايين في المياه المالحة 0.9٪ إلى شق. إدارة بين 200-500 ميكرولتر من 0.9٪ المالحة عن طريق الحقن تحت الجلد، رفع كمية المياه المالحة لوزن الماوس.
- انتظر 5 دقائق بعد ADMINIstering والأدوية الألم لإزالة الماوس من أنبوب التنبيب. هذا يساعد في التحول من التنفس الصناعي.
- إذا لم يكن الماوس ارتفاع الصدر الثنائي مرة واحدة قبالة التنفس الصناعي، نفذ إبرة الضغط. للقيام بذلك، وإدخال عيار 25 إبرة معقمة وحقنة 1 مل بين 3 و 4 تشرين الأضلاع حتى يدخل التجويف الصدري، الرمز بواسطة انخفاض مفاجئ في المقاومة. سحب ما يصل بلطف على المكبس لإزالة الهواء الزائد.
- عندما يوضح الماوس معدل التنفس الثنائي الكافي وعمق ويستجيب لقرصة أخمص القدمين، ضع الماوس في قفص الانتعاش نظيفة تحت مصباح الحرارة. تقديم الماوس مع الغذاء رطبة وزجاجة مياه والرصد في غطاء تدفق الصفحي ل15-20 دقيقة. مراقبة لمحاولة مبالغ فيها التنفس، النزيف، أو غيرها من المضاعفات المحتملة التي تهدد الحياة.
- وخلال الأيام الثلاثة المقبلة، إدارة 0.1 ملغ / مل الألم البوبرينورفين الدواء عن طريق IP فيjection مرتين يوميا. مراقبة الماوس يوميا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يصرح باستخدامها الفئران بعد ثمانية وعشرين يوما الجراحة، ويتم حصاد قلوب وفحصها. يتم تخدير الفئران مع 50-75 ملغ / كغ من الكيتامين و5-10 ملغم / كغم من زيلازين. عندما يكون الحيوان تحت التخدير المناسب، يتم فتح التجويف الصدري، وباستخدام إبرة 23 عيار، يتم حقن البارد كلوريد البوتاسيوم (بوكل و 30 ملم) في المنطقة القاعدية الخلفي للقلب. ألقي القبض على القلب في انبساط. لمزيد من التحقق من صحة الربط، تتم إزالة القلب من الحيوان ويتم حقن مع 4٪ لامتصاص العرق وثم 1٪...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
مع تزايد استخدام نموذج MI في المختبرات، يسعى الإجراء الموضح لزيادة معدل الكفاءة وبقاء الفئران مع تقليل الألم بعد العمليات الجراحية وعدم الراحة. يسعى هذا البروتوكول للحد من وفيات طريق إدخال تحسينات عديدة لمختلف جوانب الإجراء LAD ربط. هناك عدد قليل من الاختلافات. بعض الدراسات التنبيب الفئران التي تستخدم الكيتامين وزيلازين جنبا إلى جنب مع isoflurane لتحريض، ويرجع ذلك إلى الاستفادة من مدة أطول من التخدير، وقد أظهرت الوفيات 8 زاد. يستخدم أسلوب ل...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.
شكر وتقدير
تم تطوير هذا النموذج بدعم من المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة (NIGMS) / منحة المعهد الوطني للصحة (NIH) 1P20GM103652 (المشروع # 3) (إلى MRA) وجمعية القلب الأمريكية (AHA) منحة المعونة 14GRNT20460291 (إلى MRA) ؛ منحة الحكومة البرازيلية CAPES (إلى KR و FR) ؛ وجائزة LINK من جامعة براون (إلى IM). كما نقدر الدعم الفني المتميز من الأطباء البيطريين وموظفي المرافق الحيوانية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
مصدر منصة شركة صيدلية مستشفى كينت أدوات الأنسجة 750452 حامل إبرة 700131
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الضوء عالي الكثافة جهاز | هارفارد | 72-0215 | |
| التشغيل SurgiSuite | تستخدم شركة كينت العلمية | SurgiSuite | وسادة تسخين بالأشعة تحت الحمراء البعيدة قابلة لإعادة الشحن تعمل بالبطارية. اشحن طوال الليل قبل الجراحة. |
| طقم إضاءة LED SurgiSuite | كينت العلمية | SURGI-5003 | |
| معقم الخرز الساخن | أدوات العلوم الدقيقة | 18000-45 | يستغرق التسخين المسبق 15-20 دقيقة ، وتستغرق الأدوات 20 ثانية للتعقيم. |
| نظام تخدير القوارض الصغيرة | VetEquip Inc. | 901810 | |
| الأيزوفلوران | Piramal Enterprises | 66794-017-10 | |
| بوبرينورفين | رود آيلاند | NDC 12496-0757-1 ، 12496-0757-5 | |
| العدسات الجراحية | Roboz | RS-6687 | |
| جهاز التنفس الصناعي للقوارض الصغيرة | هارفارد | 73-0043 | |
| قطرات التشحيم | الحرارية فيشر العلمية | 19-898-350 | |
| ماكينة حلاقة كهربائية | كينت ساينتفيك كوربوريشن | CL 9990-1201 | |
| كريم إزالة الشعر | ناير | ||
| شريط طبي | ثيرمو فيشر ساینتفيك | 18-999-380 | |
| بيتادين | ثيرمو فيشر ساینتفيك | 19-027136 | |
| 70٪ مناديل إيزوبروبانول | ثيرمو فيشر ساینتفيك | 22-363-750 | |
| الستائر الجراحية | Braintree | SP-TS | |
| القفازات الجراحية | Thermo Fisher Scientific | 18999102D | |
| 5-0 خيوط البولي بروبيلين | Ethicon | 8630G | |
| 8-0 خيوط نايلون | أدوات العلوم الدقيقة | 12051-08 | |
| أنابيب معالجة بالبلاتين | جهاز هارفارد | 72-1042 | 0.3 مم القطر الداخلي × 0.6 مم القطر الخارجي |
| 0.9٪ ملحي | ثيرمو فيشر علمي | 19-310-207 | |
| 4-0 خيوط بولي بروبلين | Ethicon | 8631G | |
| 1 CC حقنة مع إبرة قياس 25 ؛ | ثيرمو فيشر العلمي | 14-826-100 | |
| مقص | العلمية INSS600225 | ||
| ملقط | كينت ساينتوفيك كوربوريشن | INS700100 | |
| مسحات قطنية | ثيرمو فيشر Scientific | 23-400-118 | |
| قسطرة IV ، 20-Gauge | Thermo Fisher Scientific | ؛ NC9892181 | |
| الضام | Kent Scientific Corporation | INS 750369 | |
| ملقط | العلوم الدقيقة | 11003-12 | |
| ملقط تشريح ، مستقيم | كينت Scientific Corporation | INS 700101 | |
| ملقط تشريح ، منحني | كينت Scientific Corporation | INS 700103 | |
| ملقط مرقئ ، مستقيم | كينت شركة Scientific Corporation | INS 750451 | |
| ملقط مرقئ ، شركة كينت العلمية المنحنية | INS ملقط | ||
| شركة كينت العلمية | INS | ||
| شركة | كينت العلمية | شركة INS 600109 | |
| مقص ؛ | شركة كينت العلمية | INS 600225 |
المراجع
- Hausenloy, D. J., Yellon, D. M. New directions for protecting the heart against ischaemia-reperfusion injury: targeting the Reperfusion Injury Salvage Kinase (RISK)-pathway. Cardiovasc Res. 61 (3), 448-460 (2004).
- Roffi, M., et al. 2015 ESC Guidelines for the management of acute coronary syndromes in patients presenting without persistent ST-segment elevation. Eur Heart J. 37 (3), 267-315 (2015).
- Kumar, A., Cannon, C. P. Acute Coronary Syndromes: Diagnosis and Management, Part I. Mayo Clin Proc. 84 (10), 917-938 (2009).
- Eitan, A., Nikolsky, E. Antithrombotic therapy in patients with acute coronary syndromes: how to make the right choice. Minerva Med. 104 (4), 357-381 (2013).
- Abbate, A., Bussani, R., Amin, M. S., Vetrovec, G. W., Baldi, A. Acute myocardial infarction and heart failure: role of apoptosis. Int J Biochem Cell Biol. 38 (11), 1834-1840 (2006).
- Zheng, Z., et al. Nebivolol protects against myocardial infarction injury via stimulation of beta 3-adrenergic receptors and nitric oxide signaling. PLOS ONE. 9 (5), 98179(2014).
- Tarnavski, O., et al. Mouse cardiac surgery: comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies. Physiol Genomics. 16 (3), 349-360 (2004).
- Buitrago, S., Martin, T. E., Tetens-Woodring, J., Belicha-Villanueva, A., Wilding, G. E. Safety and Efficacy of Various Combinations of Injectable Anesthetics in BALB/c Mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 47 (1), 11-17 (2008).
- Kolk, M. V., et al. LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction. J Vis Exp. (32), e1438(2009).
- Wu, Y., Yin, X., Wijaya, C., Huang, M. H., McConnell, B. K. Acute myocardial infarction in rats. Journal of visualized experiments : J Vis Exp. (48), (2011).
- Ferrera, R., Benhabbouche, S., Bopassa, J. C., Li, B., Ovize, M. One hour reperfusion is enough to assess function and infarct size with TTC staining in Langendorff rat model. Cardiovasc Drugs Ther. 23 (4), 327-331 (2009).
- Zeng, C., et al. Evaluation of 5-ethynyl-2'-deoxyuridine staining as a sensitive and reliable method for studying cell proliferation in the adult nervous system. Brain Res. 1319, 21-32 (2010).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
