Method Article

الكمي المطلق للAβ 1-42 في السائل الدماغي الشوكي عن طريق مرجع إجراء قياس كتلة الطيف

DOI:

10.3791/55386

⸱

March 21st, 2017

 ,  ,  , 
1Institute of Neuroscience and Physiology, Department of Psychiatry and Neurochemistry, The Sahlgrenska Academy at University of Gothenburg, Sahlgrenska University Hospital, 2Clinical Neurochemistry Laboratory, Sahlgrenska University Hospital, 3UCL Institute of Neurology, Queen Square

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم وصف إجراء قياس مرجعي للقياس الكمي المطلق ل Aβ1-42 في السائل الدماغي النخاعي البشري بناء على استخراج الطور الصلب وقياس الطيف الكتلي الترادفي للكروماتوغرافيا السائلة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرض الزهايمر (AD) هو أكثر الأمراض التنكسية العصبية شيوعا بين كبار السن ويمثل 60-80٪ من جميع حالات الخرف. حاليا ، يعتمد تشخيص مرض الزهايمر على الاختبارات المعرفية وفحوصات الحالة العقلية ، ولكن الببتيد أميلويد بيتا (Aβ) في السائل الدماغي النخاعي (CSF) يستخدم بشكل متزايد في التجارب السريرية والإعدادات السريرية. بالنسبة لمعظم المؤشرات الحيوية للبروتين والببتيد ، يتم إجراء القياس الكمي باستخدام تقنيات قائمة على الأجسام المضادة ، مثل مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). ومع ذلك ، فإن التباين داخل المختبر وفيما بينه في هذه المقايسات يعيق استخدامه كعلامة تشخيصية في الروتين السريري. < p class = 'jove_content'> تم تطوير إجراء قياس مرجعي مستقل عن الأجسام المضادة (RMP) بناء على استخراج الطور الصلب (SPE) والكروماتوغرافيا السائلة (LC) - قياس الطيف الكتلي الترادفي (MS / MS) ، حيث تم استخدام ببتيدات Aβ المستقرة المسماة بالنظائر كمعايير داخلية ، مما يتيح القياس الكمي المطلق. تم استخدام أداة هجينة عالية الدقة رباعية الأقطاب المدارية للقياسات. تسمح الطريقة بالقياس الكمي للنخاعي النخاعي Aβ1-42 بين 150-4,000 بيكوغرام / مل.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرض الزهايمر (م) هو الشكل الأكثر شيوعا من الخرف ويصيب حوالي 35 مليون شخص في جميع أنحاء العالم 1. بصمات عصبية مرضية من مرض يعتقد على نطاق واسع تكمن في جوهر م المرضية هي التشابك الليفي العصبي بين الخلايا من hyperphosphorylated بروتين تاو 2 ولويحات خارج الخلية التي تتكون من (Aβ) الببتيد 3 المجمعة اميلويد بيتا. وتماشيا مع هذا، وقد تم مؤخرا شملت تقييم أمراض الترسبات في الجسم الحي من المؤشرات الحيوية في المعايير البحوث التشخيصية لمدة 4 م. لقياس السائل النخاعي من Aβ 1-42، هي عدة المناعية المتاحة وتستخدم في العديد من المختبرات السريرية 5. تركيز Aβ 1-42 في السائل النخاعي هو أقل ما يقرب من 50٪ في المرضى ميلادي مما كانت عليه في كبار السن الطبيعي معرفيا، مما يعكس ترسب الببتيد في لويحات رعين 6 و 7.

ويتم تحليل هذه المؤشرات الحيوية بشكل رئيسي باستخدام المناعية (أي التقنيات المعتمدة الضد)، ولكن قد تتأثر هذه المقايسات من الآثار مصفوفة 8. استخدام المناعية على منصات التكنولوجيا المختلفة وعدم وجود فحص التقييس 9، 10 يجعل إدخال العالمية تركيزات قطع الصعبة 11 و 12. ومن شأن RMP التحقق من صحة تحليلي تسمح معايرة موحدة للمنصات فحص مختلفة، مما أدى مثالي في المقارنة أفضل عبر منصات التحليلية وفي تحسين السيطرة على العوامل التي تساهم في تقلب قياس العام.

الكمي المطلق للAβ 1-42 باستخدام ضعت طريقة LC-MS / MS يتغلب على العديد من القضايا المرتبطة ميتاليك القائم على الأجسام المضادةiques. سيتم استخدام طريقة، على النحو الوارد في الشرطة العسكرية الملكية من قبل اللجنة المشتركة للتتبع في طب المختبرات (JCTLM قاعدة بيانات تحديد عدد C11RMP9)، لتحديد تركيز المطلق للAβ 1-42 في المراجع معتمد (CRM) لتنسيق CSF Aβ 1 قياسات -42 عبر تقنيات ومناهج تحليلية. وينبغي أن يكون سير العمل وصفه ذات الصلة لتطوير أساليب مرشح مرجعية لالببتيدات والبروتينات داخل مناطق أخرى من الأدوية.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: هذا البروتوكول يتطلب قسامات لا يقل عن 50 ميكرولتر، مع تركيز 50 ميكروغرام / مل لكل الببتيد Aβ، في بدء المواد. يجب حل الببتيد Aβ في 20٪ الأسيتونتريل (إيه سي) و 4٪ محلول الأمونيا المركزة في الماء منزوع الأيونات (ت / ت) وتخزينها في 80 درجة مئوية.

تحذير: انظر الجدول رقم 1 لمعلومات السلامة.

1. إعداد حلول

  1. إعداد 100 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ محلول الأمونيا المركزة في الماء منزوع الأيونات (ت / ت) عن طريق تمييع 20 مل من إيه سي و 4 مل من الأمونيا المركزة (~ 25٪) في الماء منزوع الأيونات. ضبط الحجم النهائي إلى 100 مل مع الماء منزوع الأيونات. جعل الطازجة يوميا.
  2. تجهيز 50 مل من 5 M-غوانيدين هيدروكلوريد عن طريق إذابة 26.08 غرام من غوانيدين-هيدروكلوريد في الماء منزوع الأيونات إلى الحجم النهائي من 50 مل. متجر في 20 درجة مئوية، وجعل شهرية جديدة.
  3. إعداد 200 مل من 4٪ حامض الفوسفوريك في الماء منزوع الأيونات (ت /ت) عن طريق تمييع 9.4 مل من حمض الفوسفوريك المركز (~ 85٪) في الماء منزوع الأيونات. ضبط الحجم النهائي إلى 200 مل مع الماء منزوع الأيونات. تخزينها في الثلاجة وجعل أسبوعية جديدة.
  4. تجهيز 50 مل من 75٪ ACN و 10٪ من محلول الأمونيا المركز (ت / ت) في الماء منزوع الأيونات عن طريق تمييع 37.5 مل من إيه سي و 5 مل من الأمونيا المركزة (~ 25٪) في الماء منزوع الأيونات. ضبط الحجم النهائي إلى 50 مل مع الماء منزوع الأيونات. جعل الطازجة يوميا.
  5. ذوبان الجليد لا يقل عن 2.5 مل من السائل النخاعي البشري للمعايرة، تم الحصول عليها من التي تم تحديدها دي عينات متبقية من التحليل السريري الروتيني.
  6. تحضير السائل النخاعي الاصطناعي تحتوي على 150 ملي نا، 3.0 ملي K، 1.4 ملي الكالسيوم، و 0.8 ملي المغنيسيوم، 1.0 ملم P، و 155 ملي الكلورين في الماء منزوع الأيونات وإضافة الزلال المصل البقري إلى تركيز النهائي من 4 ملغ / مل. وهناك حاجة فقط 1 مل في التحليل، ولكن إعداد حجم كبير، قسامة عليه، وتخزينها لاستخدامها في المستقبل.

2. إعداد أجهزة القياس

  1. إعداد 0.5 مل من 4 ميكروغرام / مل 15 NAβ 1-42 الببتيد بإضافة 40 ميكرولتر من 50 ميكروغرام / مل 15 NAβ 142-0،46 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ الأمونيا المركزة في أنبوب microcentrifuge 0.5 مل. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  2. إعداد 2 مل من 100 نانوغرام / مل 15 NAβ 1-42 الببتيد بإضافة 50 ميكرولتر من 4 ميكروغرام / مل 15 NAβ 142 وإلى 1.95 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ الأمونيا المركزة في أنبوب microcentrifuge 2 مل. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  3. إعداد ستة حلول تدريج (AF) عن طريق خلط كميات كل حل هو مبين في الجدول 2. استخدام 0.5، 1.5، و 2 مل أنابيب microcentrifuge. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  4. إعداد معايرة النهائية (في نسختين) في 0.5 مل أنابيب microcentrifuge بإضافة حلول المعايرة المقابلة وCSF الإنسان وفقا للجدول 3. ميكس على خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.

3. إعداد معيار الداخلية

  1. إعداد 2 مل من 0.8 ميكروغرام / مل 13 CAβ 1-42 الببتيد بإضافة 32 ميكرولتر من 50 ميكروغرام / مل 13 CAβ 142-1،968 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ الأمونيا المركزة في أنبوب microcentrifuge 2 مل. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  2. إعداد 5 مل من 16 نانوغرام / مل 13 CAβ 1-42 الببتيد بإضافة 0.1 مل من 0.8 ميكروغرام / مل و 4.9 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ الأمونيا المركزة في أنبوب microcentrifuge 5 مل. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.

4. إعداد نموذج استجابة عامل

ملاحظة: عامل استجابة يتم تنفيذ (RF) تقرير لتحديد تركيز الببتيد المسمى تستخدم لمعايرة (15 NAβ 1-42). وهذا يتطلب أن تركيز الأصلي Aβ 1-42 الببتيد وقد تم تحديد باستخدام تحليل الأحماض الأمينية (AAA). وهكذا، فإن حجم وتركيز الأم قسامات الببتيد Aβ 1-42تحتاج للوفاء بمتطلبات AAA.

  1. إعداد 0.5 مل من 4 ميكروغرام / مل مواليد (تحمل اسما) Aβ 1-42 بإضافة 40 ميكرولتر من 50 ميكروغرام / مل الأصلي Aβ 1-42 إلى 0.46 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ الأمونيا المركزة في أنبوب microcentrifuge 0.5 مل. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  2. إعداد 2 مل 40 نانوغرام / مل مزيج من مواليد و15 NAβ 1-42 بإضافة 20 ميكرولتر من 4 ميكروغرام / مل الأصلي Aβ 1-42 و 20 ميكرولتر من 4μg / 15 مل NAβ 1-42 إلى 1.96 مل من 20٪ إيه سي و 4٪ تتركز الأمونيا في أنبوب مل microcentrifuge 2. خلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.
  3. إضافة 20 ميكرولتر من مزيج 40 نانوغرام / مل إلى 0.38 مل من السائل النخاعي الاصطناعي في أنبوب مل microcentrifuge 0.5. إعداد التكرارات وخلط في خلاط دوامة لمدة 1 دقيقة.

إعداد 5. عينة

ملاحظة: ذوبان الجليد في العينات المراد قياسها في درجة حرارة الغرفة على الأسطوانة.

  1. إضافة 0.18 مل من كل تدريج، عامل ردا على ذلك، وعينة غير معروفة (بما في ذلك مراقبة الجودة [QC] عينات، في حال استخدامها) إلى 1 بروتين مل 96 لوحة في آبار عميقة، وفقا لشكل 1 (يتم استخدام افتراض لوحة كاملة). تأكد من إضافة العينات في، أو بالقرب من، والجزء السفلي من الآبار.
  2. إضافة 20 ميكرولتر من معيار الداخلية إلى كل بئر (أي معايرة، والعوامل ردا على ذلك، حلقات الجودة، والمجاهيل)؛ لا بد من الافراج عن انخفاض على جانب إغلاق البئر إلى السطح من العينة دون غمر طرف ماصة.
  3. إضافة 0.2 مل من 5 M-غوانيدين هيدروكلوريد إلى كل بئر.
  4. وضع لوحة عينة على شاكر صفيحة ومزج العينات لمدة 45 دقيقة في 1100 دورة في الدقيقة. قد تختلف وتيرة الأمثل اعتمادا على الأجهزة. ضبط التردد والسعة في خلاط حتى يتسنى للحلول مختلطة تماما وتترك أي قطرات من معيار داخلي أو CSF غير مخلوط على جانب الآبار.
  5. إضافة 0.2 مل من 4٪ حامض الفوسفوريكإلى كل بئر. مزيج دوامة لفترة وجيزة.

6. الصلبة المرحلة استخراج

ملاحظة: في كل غسل، وتحميل، والخطوات شطف، وتطبيق أدنى فراغ محتمل بعد إضافة الحل وتزيد تدريجيا حسب الحاجة إلى تحميل أو أزل الحل. تعطيل فراغ بين كل تحميل وخطوة شطف.

  1. وضع علبة خزان للنفايات في ظل وضع مختلط، الموجبة لتبادل، 96-جيدا استخراج المرحلة الصلبة (SPE) لوحة في غرفة متعددة استخراج لوحة.
  2. شرط الماصة SPE بإضافة 0.2 مل من الميثانول إلى كل بئر.
  3. تتوازن الماصة بإضافة 0.2 مل من 4٪ حامض الفوسفوريك إلى كل بئر.
  4. نقل جميع العينات (حوالي 0.62 مل في كل بئر) من لوحة في آبار عميقة لوحة SPE. استخدام ماصة ثماني قنوات عند نقل عينات من لوحة في آبار عميقة لوحة SPE. ليس حاسما لنقل كميات بأكملها أو المتساوية لجميع العينات، منذ العينات تحتوي على المتدربآل المعيار الذي سوف تعوض عن الاختلافات.
  5. غسل الماصة بعد مرور العينات خلال بإضافة 0.2 مل من 4٪ حامض الفوسفوريك إلى كل بئر.
  6. بعد غسل المذيبات ومزال من المواد الماصة، استبدال علبة خزان مع لوحة جمع أو الأنابيب.
  7. أزل عينة من المواد الماصة عن طريق إضافة مرتين 50 ميكرولتر من 75٪ ACN / 10٪ الأمونيا المركزة، ونلاحظ أن هذا الحل يتطلب فراغ منخفض جدا لتمرير من خلال الماصة. تذكر أن تعطيل فراغ بين كل إضافة.
    1. اختياري: ختم لوحة جمع أو الأنابيب وتجميدها في -80 درجة مئوية. إزالة ختم من لوحة جمع أو الأنابيب قبل الانتقال إلى الخطوة 6.8.2.
    2. تجفيف eluates باستخدام فراغ الطرد المركزي (بدون تطبيق الحرارة)؛ هذا يمكن أن يستغرق من واحد إلى عدة ساعات، اعتمادا على أجهزة الطرد المركزي فراغ.
    3. ختم الحاويات وتجميدها في -80 درجة مئوية.

7. السائل Chromatography

  1. إعداد الطور المتحرك ألف (5٪ إيه سي و 0.3٪ الأمونيا المركزة في الماء منزوع الأيونات [ت / ت])، B (منزوع الأيونات الماء 4٪ و 0.1٪ الأمونيا المركزة في إيه سي [ت / ت])، وغسل إبرة (50٪ ACN و 4٪ تتركز الأمونيا في الماء منزوع الأيونات [ت / ت]).
    1. 500 مل من مرحلة الأجهزة المحمولة، إضافة 25 مل من إيه سي و 1.5 مل من الأمونيا المركز إلى الماء منزوع الأيونات. ضبط الحجم النهائي إلى 500 مل مع الماء منزوع الأيونات.
    2. 500 مل من المرحلة المحمول B، إضافة 500 ميكرولتر من الأمونيا المركزة و 25 مل من الماء منزوع الأيونات إلى إيه سي. ضبط الحجم النهائي إلى 500 مل مع إيه سي.
    3. إعداد 250 مل من غسل إبرة بإضافة 120 مل من إيه سي و 10 مل من الأمونيا المركز إلى الماء منزوع الأيونات. ضبط الحجم النهائي إلى 250 مل مع الماء منزوع الأيونات.
    4. وضع مراحل المحمول ألف وباء وغسل إبرة زجاجات مفتوحة في حمام صوتنة لمدة 20 دقيقة قبل الاستخدام مع نظام LC
  2. حل كل عينة مع 25 ميكرولتر من 20٪ إيه سي و 4٪ concentraتيد محلول الأمونيا ووضعها على شاكر لمدة 20 دقيقة. أجهزة الطرد المركزي لأسفل العينات ووضعها في الاوتوماتيكى (نضع في 7 درجة مئوية).
  3. ضخ 20 ميكرولتر من العينة على 1 × 250 مم 2 البوليسترين-divinylbenzene (عكس المرحلة) عمود متجانسة حافظت على 50 درجة مئوية.
    1. استخدام التدرج LC هو مبين في الجدول رقم 4 مع معدل تدفق 0.3 مل / دقيقة. تحويل الأولين ودقيقة الخمس الماضية أن تضيع (بعد العمود) باستخدام صمام تحويل للحد من تلوث مطياف الكتلة.

تحليل 8. قداس الطيف

ملاحظة: تم استخدام هذه المعلمات لمطياف الكتلة الهجين-رباعي orbitrap مجهزة aheated مصدر تأين بالإرذاذ الإلكتروني.

  1. تعيين المعلمات لمصدر ايون وفقا للجدول 5.
  2. تعيين أداة MS لعزل الدول تهمة 4+ من الأصلي Aβ 1-42 (1،129.48 تجاريا،لتهمة نسبة [م / ض])، 15 NAβ 1-42 (1،143.00 م / ض)، و 13 CAβ 1-42 (1،179.50 م / ض) في محلل كتلة رباعي مع عرض العزلة من 2.5 م / ض.
  3. تفتيت الببتيدات المعزولة في الخلية الاصطدام مع طاقة الاصطدام تطبيع (NCE) من 17.0. قد تحتاج هذه إلى ضبطها لكل أداة، حتى من نفس النوع (وخاصة في حالة استخدام أنواع أخرى من الصكوك، مثل رباعي الثلاثي MS).
  4. تسجيل أطياف جزء مع قرار من 17.500، مع هدف السيطرة التلقائي من 2 × 10 5 الاتهامات والحد الأقصى لوقت حقن 250 مللي ثانية.

9. معالجة البيانات

  1. استخدام مبلغ من الأيونات المنتج (مع التسامح الشامل لل± 250 وحدة كتلة ملي [MMU]) في الجدول رقم 6 لحساب المناطق الكروماتوغرافي عن كل الببتيد. لاحظ أن أنواع أيون وأرقام تظهر فقط لAβ الأصلي أيونات 1-42 المنتج، لأنها هي نفسها من أجل كل 15 NAβ 1-42 و 13 CAβ 1-42.
  2. تحديد متوسط معامل استجابة العينتين عامل استجابة بتقسيم المنطقة تحت المنحنى (الذروة الكروماتوغرافي) المؤرخ 15 NAβ 1-42 مع المنطقة تحت المنحنى الأصلي Aβ 1-42.
  3. ضبط تركيز 15 NAβ 1-42 تستخدم لمعايرة بضرب مع عامل ردود الفعل المحسوبة في الخطوة 9.2.
  4. بناء منحنى المعايرة من قبل المتهم بالتآمر في نسب مساحة 15 NAβ 1-42 إلى 13 CAβ 1-42 من مجموعتي معايرة ضد الاعتقال.
  5. حساب المنحدر واعتراض من منحنى المعايرة باستخدام الانحدار الخطي.
  6. حساب نسبة مجال الأصلي Aβ 1-42 لمعيار داخلي (13 CAβ 1-42) للامم المتحدةعينة معروفة.
  7. استقراء تركيز العينات المجهولة من منحنى المعايرة باستخدام المنحدر واعتراض حصلت عليه في الخطوة 9.5.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم استخدام الإعداد لوحة في الشكل رقم 1 لوحة كاملة من العينات. إذا ليتم تحليلها أقل عينات غير معروفة، وتدريج الثاني، ينبغي أن توضع مجموعات الترددات اللاسلكية، ومراقبة الجودة بعد نهاية الشوط الأول من العينات غير معروف.

كما رأينا في الشكل 2، ومعايرة قريبة من خط الانحدار، مع الانحرافات المعيارية منخفضة. هذا الأسلوب لد...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

للتعرف على طريقة وصفها، بدلا من استخدام مصفوفة البديلة، استخدمنا نهج بديل تحليلها 13، 14، 15، 16، والتي تمكن المعايرة في السائل النخاعي البشري. ينطوي على نهج تحليلها البديل مختلفين معايير المسمى isotopically. واحد (15 NAβ 142) يستخدم لتوليد منحنى المعايرة في السائل النخاعي البشري، في حين يتم استخدام (13 CAβ 142)

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أبلغ JP و EP عن عدم الإفصاح. عمل HZ في المجالس الاستشارية لشركة Roche Diagnostics و Eli Lilly و Pharmasum Therapeutics. عمل KB كمستشار أو في المجالس الاستشارية لشركة Fujirebio Europe و IBL International و Roche Diagnostics. HZ و KB هما مؤسسان مشاركان لشركة Brain Biomarker Solutions في Gothenburg AB ، وهي شركة منصات مقرها GU Venture في جامعة جوتنبرغ.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تنفيذ هذا العمل نيابة عن الاتحاد الدولي لمجموعة عمل الكيمياء السريرية حول بروتينات السائل الدماغي النخاعي ، والتي تحتوي على التركيبة التالية: Kaj Blennow (الرئيس) وهنريك زيتربيرج ، جامعة جوتنبرج ، السويد. ليس شو وماغدالينا كوريكا ، جامعة فيلادلفيا ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية. إنغريد زيجرز ، معهد المواد المرجعية والقياسات ، جيل ، بلجيكا. بيوتر ليتشوك ، جامعة إرلانغن ، ألمانيا ؛ وراند جينكينز ، مختبر التحليل الحيوي PPD ، ريتشموند ، فيرجينيا ، الولايات المتحدة الأمريكية. راندال بيتمان ، جامعة واشنطن ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية. و H Vanderstichele, Innogenetics NV, غنت, بلجيكا. كان هذا العمل أيضا جزءا من مجموعة عمل الأساليب المرجعية للاتحاد العالمي لتوحيد المؤشرات الحيوية ، والتي تقودها ماريا سي كاريلو ، دكتوراه ، مديرة أولى للعلاقات الطبية والعلمية ، جمعية الزهايمر. تم دعم الدراسة من قبل مجلس البحوث السويدي (المنح # 14002 ، # 521-2011-4709 ، و # 2013-2546) ؛ مؤسسة كنوت وأليس والنبرغ. Demensförbundet; ومؤسسات إميل وويرا كورنيل ، وآينا والستروم وماري آن شوبلوم ، وأغون وبيرتيل ستوهني ، وماغنوس بيرجفال ، ومؤسسة غاملا تيانارينور.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة Eppendorf Protein LoBind ، 0.5 ملEppendorf022431081
Eppendorf Protein LoBind ، 1.5 ملالدقيقة Eppendorf022431081
Eppendorf Protein LoBind ، 2 ملEppendorf022431102
Eppendorf Protein LoBind أنابيب الطرد المركزي الدقيقة ، 5 ملEppendorf0030 108.310
Eppendorf Protein LoBind Deepwell Plates 96Eppendorf951032905
Micronic 0.75 مل أنابيب البولي بروبيلين ،MPW32071BC3 الميكرونيكالمستخدمة لجمع مصافي SPE ، ولكن يمكن استخدام أجهزة تجميع أخرى مثل ألواح 96 بئرا.
Micronic Split TPE Capcluster ل 96 ind. أنبوبا أغطيةMP53026ميكرونيكلأنابيب ميكرونيك.
Micronic Loborack-96 أبيض ث غطاء عالي الغطاءMPW51015BC3 ميكرونيمشفر لأنابيب الميكرونيك.
نصائح Biohit Optifit 1.2 ملSartorius791210تستخدم للوصول إلى أسفل ألواح LoBind العميقة (96 بئر). قد تعمل النصائح الضيقة الأخرى أيضا.
واحة المياه MCX 96 جيدا & مياه لوحة Elution186001830BA 
صينية خزان مشعب لوحة المياهلوحة استخراج المياهWAT058942
ألواح الواحة 96 بئرالمياه186001831
محلول هيدروكسيد الأمونيوم ، puriss. p.a. ، reag. ISO ، ريج. دكتوراه يورو ، ~ 25٪ NH3 أساسسيجما ألدريتش30501-1L-D
أسيتونيتريل ، درجة التدرج للأشعة فوق البنفسجية البعيدة HPLC ، 2.5 لترفيشر ScientificA / 0627 / 17X
حمض الفوسفوريك 85٪ ، ACS ، ISO ، ريج. Ph EurMerck Millipore1005731000
Guanidine Hydrochloride ، 500 جرامThermo Scientific24110
Thermo Scientific Q-exactive Hybrid Quadrupole Orbitrap مطياف الكتلةThermo ScientificIQLAAEGAAPFALGMAZRمع Dionex Ultimate 3000 LC وجهاز أخذ العينات الآلي.
عمود Dionex ProSwift RP-4H Monolith (1.0 × 250 مم)Dionex066640
ألبومين مصل البقر ، مسحوق مجفف بالتجميد ، مناسب ل (للبيولوجيا الجزيئية) ،Sigma-AldrichB6917
Beta-Amyloid غير الأسيتيل (1-42) ، Ultra Pure ، TFArPeptideA-1002-2
15N بيتا أميلويد (1-42) ، مسمى بشكل موحدrPeptideA-1102-2
13C بيتا أميلويد (1-42) ،rPeptideA-1106-2
، TiMix 2Edmund B & uuml ؛ هلر6110 000
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة أنابيب الطرد المركزي أنابيب V-bottom حامل مشعب هزازات صفيحة دقيقة مصنفة بشكل موحد

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Querfurth, H. W., LaFerla, F. M. Alzheimer's disease. N Engl J Med. 362 (4), 329-344 (2010).
  2. Braak, H., Braak, E. Evolution of the neuropathology of Alzheimer's disease. Acta Neurol Scand Suppl. 165, 3-12 (1996).
  3. Blennow, K., de Leon, M. J., Zetterberg, H. Alzheimer's disease. Lancet. 368 (9533), 387-403 (2006).
  4. Dubois, B., et al. Advancing research diagnostic criteria for Alzheimer's disease: the IWG-2 criteria. Lancet Neurol. 13 (6), 614-629 (2014).
  5. Blennow, K., Hampel, H., Weiner, M., Zetterberg, H. Cerebrospinal fluid and plasma biomarkers in Alzheimer disease. Nat Rev Neurol. 6 (3), 131-144 (2010).
  6. Buchhave, P., et al. Cerebrospinal fluid levels of beta-amyloid 1-42, but not of tau, are fully changed already 5 to 10 years before the onset of Alzheimer dementia. Arch Gen Psychiatry. 69 (1), 98-106 (2012).
  7. Olsson, B., et al. CSF and blood biomarkers for the diagnosis of Alzheimer's disease: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Neurology. 15 (7), 673-684 (2016).
  8. Bjerke, M., et al. Confounding factors influencing amyloid Beta concentration in cerebrospinal fluid. Int J Alzheimers Dis. , (2010).
  9. Dumurgier, J., et al. Intersite variability of CSF Alzheimer's disease biomarkers in clinical setting. Alzheimers Dement. 9 (4), 406-413 (2013).
  10. Mattsson, N., et al. CSF biomarker variability in the Alzheimer's Association quality control program. Alzheimers Dement. 9 (3), 251-261 (2013).
  11. Kang, J. H., Korecka, M., Toledo, J. B., Trojanowski, J. Q., Shaw, L. M. Clinical Utility and Analytical Challenges in Measurement of Cerebrospinal Fluid Amyloid-beta1-42 and tau Proteins as Alzheimer Disease Biomarkers. Clin Chem. 59 (6), 903-916 (2013).
  12. Mattsson, N., et al. Reference measurement procedures for Alzheimer's disease cerebrospinal fluid biomarkers: definitions and approaches with focus on amyloid beta42. Biomark Med. 6 (4), 409-417 (2012).
  13. Ahmadkhaniha, R., Shafiee, A., Rastkari, N., Kobarfard, F. Accurate quantification of endogenous androgenic steroids in cattle's meat by gas chromatography mass spectrometry using a surrogate analyte approach. Anal Chim Acta. 631 (1), 80-86 (2009).
  14. Jemal, M., Schuster, A., Whigan, D. B. Liquid chromatography/tandem mass spectrometry methods for quantitation of mevalonic acid in human plasma and urine: method validation, demonstration of using a surrogate analyte, and demonstration of unacceptable matrix effect in spite of use of a stable isotope analog internal standard. Rapid Commun Mass Spectrom. 17 (15), 1723-1734 (2003).
  15. Leinenbach, A., et al. Mass spectrometry-based candidate reference measurement procedure for quantification of amyloid-beta in cerebrospinal fluid. Clin Chem. 60 (7), 987-994 (2014).
  16. Li, W., Cohen, L. H. Quantitation of endogenous analytes in biofluid without a true blank matrix. Anal Chem. 75 (21), 5854-5859 (2003).
  17. Perret-Liaudet, A., et al. Cerebrospinal fluid collection tubes: a critical issue for Alzheimer disease diagnosis. Clin Chem. 58 (4), 787-789 (2012).
  18. Lewczuk, P., et al. Effect of sample collection tubes on cerebrospinal fluid concentrations of tau proteins and amyloid beta peptides. Clin Chem. 52 (2), 332-334 (2006).
  19. Pannee, J., et al. Reference measurement procedure for CSF amyloid beta (Aβ)1-42 and the CSF Aβ1-42 /Aβ1-40 ratio - a cross-validation study against amyloid PET. J Neurochem. 139 (4), 651-658 (2016).
  20. Thienpont, L. M., Van Houcke, S. K. Traceability to a common standard for protein measurements by immunoassay for in-vitro diagnostic purposes. Clin Chim Acta. 411 (23-24), 2058-2061 (2010).
  21. Vesper, H. W., Thienpont, L. M. Traceability in laboratory medicine. Clin Chem. 55 (6), 1067-1075 (2009).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Absolute QuantificationAmyloid Beta 1 42Cerebrospinal FluidMass SpectrometrySolid Phase ExtractionLiquid ChromatographyStable Isotope StandardsReference Measurement ProcedureAlzheimer s Disease BiomarkerQuadrupole Orbitrap

Related Articles