يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

وإنتاجية عالية الفحص المدعم لتقييم فعالية الدواء ضد بلعم Passaged

7.6K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/55453

⸱

مارس 24, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Medicine, University of Alabama at Birmingham

في هذه المقالة

ملخص

النماذج والمقايسات الجديدة التي من شأنها تحسين عملية تطوير الأدوية المبكرة للأدوية من الجيل التالي من الأدوية المضادة للسل مرغوبة للغاية. هنا ، نصف مقايسة سريعة وغير مكلفة ومتوافقة مع BSL-2 لتقييم فعالية الدواء ضد المتفطرة السلية التي يمكن تكييفها بسهولة للفحص عالي الإنتاجية.

الملخص

يتم إعاقة عملية تطوير الأدوية المبكرة للأدوية المضادة للسل بسبب الترجمة غير الفعالة للمركبات ذات النشاط المختبري إلى الفعالية في البيئة السريرية. من المحتمل أن يكون هذا بسبب عدم مراعاة حواجز الاختراق الخلوي ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية الموجودة في المضيف المصاب. لقد أنشأنا مؤخرا نموذجا بديلا للعدوى يولد هياكل مجمعة كبيرة من البلاعم تحتوي على M. tuberculosis (Mtb) المعبأة بكثافة في جوهرها ، والذي كان مناسبا لاختبار الحساسية للأدوية. نموذج العدوى هذا غير مكلف وسريع والأهم من ذلك أنه متوافق مع BSL-2. هنا ، نصف الإجراءات التجريبية لتوليد هياكل مجمعة Mtb / البلاعم التي من شأنها أن تنتج Mtb يمر البلاعم لاختبار الحساسية للأدوية. على وجه الخصوص ، نوضح كيف يمكن تكييف نظام العدوى هذا مباشرة مع تنسيق اللوحة المكونة من 96 بئرا الذي يظهر قدرة الإنتاجية لفحص المكتبات المركبة مقابل Mtb. بشكل عام ، يعد هذا الاختبار إضافة قيمة إلى مجموعة أدوات اكتشاف الأدوية Mtb المتوفرة حاليا نظرا لبساطته وفعاليته من حيث التكلفة وقابليته للتوسع.

المقدمة

السل (TB) لا يزال يشكل تهديدا الصحة العالمية خطيرا على الرغم من توفر نظم العلاج الكيميائي لمكافحة السل لأكثر من 40 سنوات 1. وهذا يرجع جزئيا إلى شرط لفترات علاج طويلة لأكثر من 6 أشهر باستخدام مزيج من الادوية متعددة، الأمر الذي يؤدي إلى المريض عدم الامتثال 2 هذا. وظهور السل المقاوم للأدوية في السنوات الأخيرة من تعقيد المشاكل في الميدان حيث التنمية الناجحة من الأدوية المعتمدة سريريا هي شبه معدومة 3. في الواقع، على الرغم من تطوير الأدوية المضادة للسل شاملة، كان فقط دواء واحد وافقت ادارة الاغذية والعقاقير للاستخدام السريري في السنوات ال 40 الماضية (4). وبالتالي، هناك حاجة ماسة إلى الأجيال الجديدة من الأدوية المضادة للسل لمعالجة هذه المشكلة.

المشكلة الرئيسية في اكتشاف السل المخدرات هي عدم وجود النقل الناجح من مركبات مع في المختبر النشاط إلى فعالية في الإعداد السريرية= "XREF"> 5، 6، 7. في البداية، تم استخدام النهج الهدف استنادا للكشف عن مكافحة المخدرات المتفطرات السلية 5، الذي فشل في ترجمتها إلى الخلايا البكتيرية بأكملها. حتى عندما يتم استخدام خلايا المتفطرة السلية، وغالبا ما يتم تنفيذ ذلك باستخدام مرق نمت الثقافات، التي لا التنبؤ بدقة فعالية الدواء في الجسم الحي 8 و 9. وقد تم التعرف على هذه المشاكل وتم المقايسات فحص المخدرات ضد الضامة التي تحتوي على المتفطرات السلية أو الكامنة المتفطرات السلية أنشأت بنجاح 8، 10، 11، 12. ولكن، حتى هذه المقايسات أكثر تقدما لا تعطي الاعتبار الكافي للحواجز الاختراق التي تواجهها المخدرات في الآفات الرئوية غير أوعية دموية، وفي بؤر نخرية في موقع الإصابة. في الواقع، حتى للخط الأول السل ريفامبيسين المخدرات، وقد تم استجواب الجرعات دون المستوى الأمثل نظرا لعدم كفاية في أنسجة الجسم الحي والدماغية السائل الشوكي (CSF) اختراق 13، 14، 15 وكذلك انخفاض كفاءة الخلايا ضد المتفطرة السلية 8 و 9. على هذا النحو، ونماذج وفحوصات جديدة من شأنها أن تأخذ بعين الاعتبار هذه المعلمات أثناء عملية التنمية الرصاص في وقت مبكر من شأنه أن يحسن بلا شك السل جهود اكتشاف المخدرات.

لتلبية هذه الحاجة، أنشأنا مؤخرا-2 BSL متوافق نموذج العدوى بديل غير مكلف وسريع، والمتفطرات السلية المخدرات فعالية الاختبار 16. هذا النموذج عدوى تنتج المكتظة معبأة المتفطرات السلية داخل هياكل الإجمالية البلاعم الكبيرة، والتي لخص الحواجز معدل انتشار الهواتف النقالة ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية ولدت بلعم-passaged المتفطرات السلية مع الحالة الفيزيولوجية تغير تشبه الكامنة المتفطرات السلية. المواضيع المتميزة المستمدة من هذا النموذج العدوى ودمجها مع فحص ريسازورين عيار مكروي (REMA) لتقييم نجاعة الأدوية، والتي تنتج نتائج متسقة مع نماذج إصابة الخلايا الأخرى وربطها بشكل جيد مع القدرة ذكرت من أدوية السل المشتركة لتحقيق تركيزات عالية CSF النسبية لتركيزات مصل 16.

نحن هنا تصف بالتفصيل جيل من المتفطرات السلية / الهياكل الكلية بلعم لإنتاج بلعم passaged المتفطرات السلية مناسبة لاختبار الحساسية المخدرات باستخدام REMA. على وجه الخصوص، وتبين لنا كيف يمكن تكييف هذا النظام العدوى إلى تنسيق 96-جيدا من أجل التوافق مع الفحص الإنتاجية مرشح الأدوية المضادة للسل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: كما السل م مولودية 2 6206 هو سلالة الفوعة 17، 18، كل عمل في هذا البروتوكول لا يمكن أن يؤديها في 2 مرفق السلامة الأحيائية مستوى (BSL-2).

1. شروط الثقافة عن البروتين الفلوري الأخضر تعرب عن السل م مولودية 2 6206 (المتفطرات السلية -GFP)

ملاحظة: م. السل H37Rv المستمدة عوني التغذي سلالة مولودية 2 6206 (Δ panCD، Δ leuCD) تحولت مع استخدام GFP معربا عن البلازميد pMN437 طوال هذا البروتوكول 16. كان من الممكن أن تحل محل سلالة المتفطرة السلية -GFP مع عدم GFP يعبرون عن نوع السلالة البرية لتمكين تسهيل عملية التواصل من سلالة للباحثين. ومع ذلك، التعبير GFP أمر مرغوب فيه لتمكين تأكيدا البصرية البلعمة وتشكيل المتفطرات السلية المجاميع / البلاعم. لخط الطولز التخزين على المدى، جمدت المتفطرات السلية -GFP في -80 درجة مئوية في 7H9 وسائل الإعلام كاملة (كما هو موضح في الخطوة 1.1) تستكمل مع 20٪ الجلسرين.

  1. إعداد كامل وسائل الإعلام المتفطرات السلية -GFP (7H9-C) من خلال استكمال 7H9 المتوسطة مع 10٪ ميدلبروك OADC، 0.02٪ تيلوكسابول، 24 ميكروغرام / مل مد البانتوثنيك حامض، 50 ميكروغرام / مل L-ليسين و 50 ميكروغرام / مل هيغروميسين B.
  2. ذوبان الجليد قارورة واحدة من المتفطرات السلية -GFP وإضافة إلى 10 مل من 7H9-C في 30 مل قارورة مربع PETG أسفل.
  3. احتضان عند 37 درجة مئوية على شاكر دوارة (50 دورة في الدقيقة). أخذ قياسات الكثافة الضوئية (OD 600) كل بضعة أيام حتى OD 600 يصل إلى 1.0 (حوالي 5-8 أيام).
  4. تمييع والثقافة مرور حسب الحاجة للحفاظ على OD 600 بين 0،2-1،0.
  5. للعدوى، استخدم ثقافة راسخة من المتفطرات السلية -GFP في مرحلة النمو لوغاريتمي (OD 600 من 0،6-1). لتجنب الثقافات ملتف، يصوتن الثقافة قارورة المتفطرات السلية في حمام مائي (130 واط؛ 3 × 5 ق البقول) انسه أو مرتين في الأسبوع

2. شروط الثقافة ل THP-1 خلايا

  1. إعداد كامل THP-1 خلية الإعلام (RPMI-C) من خلال استكمال RPMI 1640 المتوسطة مع 10٪ للحرارة المعطل مصل الجنين البقري، 2 مم L-الجلوتامين، و 10 ملي HEPES.
  2. احتضان الخلايا في قارورة T-75 عند 37 درجة مئوية في جو مرطب من 5٪ CO 2.
  3. عد الخلايا باستخدام عدادة الكريات أو التدفق الخلوي كل يوم والحفاظ على THP-1 الخلايا في مناطق ذات كثافة بين ،1-0٬600٬000 لكل مليلتر.

3. بروتوكول العدوى لتوليد هياكل MTB / بلعم الركام

  1. THP-1 إعداد الخلية (في لوحة 96-جيدا)
    1. الطرد المركزي 7 × 10 6 THP-1 الخلايا في 250 x ج لمدة 5 دقائق. resuspend في 7 مل RPMI-C.
  2. إعداد المواضيع المتميزة -GFP
    1. الطرد المركزي 2.8 × 10 8 المتفطرات السلية -GFP في 3200 x ج لمدة 5 دقائق في جهاز للطرد المركزي يتأرجح دلو شالغناء تحويل OD 600 1.0 = 3 × 10 8 بكتيريا / مل.
    2. يغسل مرة واحدة مع RPMI-C وأجهزة الطرد المركزي كما في الخطوة 3.2.1.
    3. resuspend في 7 مل RPMI-C ودوامة لمدة 10 ثانية.
  3. عدوى
    ملاحظة: انظر الشكل رقم 1 لقالب.
    1. إعداد لوحة 96-جيدا من خلال إضافة 200 ميليلتر من الماء المعقم في صفوف ألف وحاء والأعمدة 1 و 12 لحافة الماء لمنع التبخر من مستنبت.
    2. إضافة 200 ميكرولتر RPMI-C إلى العمود 2 (B2 إلى G2) لمراقبة الخلفية (فارغة).
    3. لتصيب، إضافة المتفطرات السلية -GFP تعليق (الخطوة 3.2) إلى THP-1 تعليق خلية (الخطوة 3.1) وتخلط جيدا من قبل pipetting. النهائي THP-1 كثافة الخلية 5 × 10 5 لكل مليلتر وتعدد المقابلة من الإصابة هو 40.
    4. صب THP-1 / المتفطرات السلية -GFP تعليق في خزان 25 مل.
    5. إضافة 200 ميكرولتر من THP-1 / المتفطرات السلية -GFP تعليق على كل 96-الآبار المتبقية (B3 من خلال G11) النقيبالجا متعدد القنوات ماصة.
      ملاحظة: إذا كان يعمل مع لوحات متعددة 96-جيدا، و resuspend بانتظام THP-1 / المتفطرات السلية تعليق المتبقية في الخزان لضمان يضاف خليط حتى إلى كل بئر.
    6. احتضان عند 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2 لمدة 7-10 أيام.
    7. تغيير وسائل الاعلام كل يوم 2 عن طريق إزالة ببطء 100 ميكرولتر قضى وسائل الإعلام من أعلى كل بئر وبلطف بإضافة 100 ميكرولتر قبل تحسنت RPMI-C باستخدام الماصة متعدد القنوات. لا و resuspend الآبار وتعكير صفو المجاميع MTB / بلعم على الجزء السفلي من الآبار.
    8. فحص البصر الآبار بواسطة المجهر مضان (الهدف 4-10X) يوميا، مع الأخذ علما حجم المتفطرات السلية المجاميع / البلاعم. بعد يوم 10/7، وينبغي أن يكون المتفطرات السلية المجاميع / بلعم كبير بما فيه الكفاية (انظر الشكل 2 للمرجعية) على المضي قدما لاختبار نجاعة الأدوية (القسم 4).
    9. إذا رغبت في ذلك، التقاط الصور من الآبار 96 باستخدام نظام آلي التصوير الخلية مجهزةمع حقل مشرق ومرشح GFP يحدد لتوثيق MTB / بلعم تشكيل الكلي.
      ملاحظة: إذا لم يكن لدى المستخدمين الوصول إلى نظام التصوير الآلي، صور الآبار التمثيلية التي يمكن اتخاذها باستخدام أي المجهر المناسب مع GFP ومشرق الميدان القدرات.

4. إعاقة النمو الفحص لتقييم الأدوية فعالية ضد المتفطرة السلية مشتقة من المتفطرات السلية / بلعم المجاميع

  1. إعداد المخدرات (شروط ثلاث نسخ للعقارين)
    ملاحظة: انظر الشكل 1A للقالب.
    1. في لوحة 96-جيدا منفصلة، ​​إضافة 125 ميكرولتر من وسائل الإعلام 7H9-C إلى B2 من خلال لG10.
    2. إعداد عقارين في ضعف أعلى تركيز النهائي المطلوب في 1 مل من 7H9-C لحساب التخفيف في الخطوة 4.2.4.
    3. إضافة 250 ميكرولتر من كل دواء لآبار B11-C11-D11 و E11-F11-G11، على التوالي للعلاج ثلاث نسخ.
    4. باستخدام الماصة متعدد القنوات، ديل متسلسليوت المخدرات اختبار شقين عن طريق نقل 125 ميكرولتر من B11-G11 إلى B10-G10. مزيج من قبل pipetting 5 مرات في كل خطوة.
    5. مواصلة التحرك 125 ميكرولتر من عمود إلى عمود (من اليمين إلى اليسار) عبر لوحة، ووقف بعد العمود 4.
    6. بعد خلط العمود 4، ونبذ 125 ميكرولتر في حاوية النفايات. الأعمدة 2 و 3، أن لا يحتوي على أية عقاقير للسماح للاستخدام كخلفية (فارغة) والضوابط نمو إيجابية.
      ملاحظة: بدلا من ذلك، اتبع القالب في الشكل 1B للمكتبات اختبار المخدرات. كل لوحة 96-جيدا يمكن أن تستوعب 58 المخدرات بتركيز واحد. إعداد هذا الطبق المخدرات باستخدام ضعف التركيز النهائي المطلوب لأنها سوف تضعف في نصف في الخطوة 4.2.4.
  2. العلاج من الإدمان:
    1. استرداد لوحة 96 كذلك يحتوي على المتفطرات السلية -infected الضامة (المجاميع MTB / بلعم).
    2. بعناية صب جميع الآبار ذات الصلة (B2 من خلال G11) مع الماصة متعدد القنوات.تنفيذ هذا بطريقة خطوتين: أولا إزالة 150 ميكرولتر من دون إمالة لوحة، ثم قم بإزالة وسائل الاعلام المتبقية (~ 50 ميكرولتر) عن طريق إمالة لوحة وإدخال طرف ماصة إلى الحافة السفلى من البئر. كما MTB / بلعم المجاميع هي ملتصقة إلى قاع البئر، يجب أن تضيع أي مادة.
    3. إضافة بلطف 100 ميكرولتر من 7H9-C وسائل الإعلام لجميع الآبار ذات الصلة (B2 من خلال G11) من لوحة تحتوي على مجاميع / بلعم المتفطرات السلية.
    4. باستخدام الماصة متعدد القنوات، ونقل 100 ميكرولتر من المخدرات التي تحتوي على 96-جيدا لوحة (الخطوة 4.1) إلى الآبار المقابلة من لوحة العدوى.
    5. مكان في كيس مختوم واحتضان لمدة 3 أيام في 37 درجة مئوية.

5. الكمي من فعالية الدواء باستخدام الفحص ريسازورين عيار مكروي

  1. إعداد ريسازورين حل السهم عند تركيز النهائي من 0.8 ملغ / مل في H 2 O. تصفية من خلال 0.22 ميكرون مسام الغشاء حجم PVDF للتعقيم.
  2. إعداد ريسازورين العمل الحل عن طريق خلط ريسازورين حل الأوراق المالية، H 2 O وتوين-80 (حل 20٪ في H 2 O) في نسبة 2: 1: 1. تركيزات النهائية هي 0.4 ملغ / مل ريسازورين و 5٪ توين-80.
  3. باستخدام قارئ لوحة، وإعداد برنامج لقراءة مضان في 530 نانومتر الإثارة و 590 نانومتر انبعاث كل 30 دقيقة لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية. قبل دافئ لوحة القارئ إلى 37 درجة مئوية.
  4. إضافة 20 ميكرولتر من محلول العمل ريسازورين لجميع الآبار ذات الصلة (B2 من خلال G11) من لوحة المخدرات المعالجة (الخطوة 4.11) باستخدام الماصة متعدد القنوات.
  5. وضع لوحة على قارئ لوحة وبدء البرنامج بإعدادها في الخطوة 5.3.
    ملاحظة: لتسهيل معالجة كميات كبيرة من لوحات الفحص، فإنه يكفي لتطوير فحص في الحاضنة 37 درجة مئوية وأداء مضان واحد يقرأ كل 24 ساعة. هذا ينطبق أيضا على المستخدمين الذين لا يستطيعون الوصول إلى قارئ لوحة مع القدرات الحركية والحضانة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

لتأكيد متانة التكيف مع هذا النموذج العدوى إلى 96 بئرا شكل لوحة، ونحن هنا فحص قابلية المخدرات من المتفطرات السلية المستمدة من وجهة نظرنا 96-جيدا تكييفها نموذج العدوى إلى ريفامبيسين (RIF) وموكسيفلوكساسين (MOXI) وفقا لقالب معين في الشكل 1A. علينا أن نبرهن على توليد MTB / الهياكل الكلية بلعم الرئيسية لهذا الاختبار يمكن أن تنتج بشكل موثوق في شكل لوحة 96-جيدا (الشكل 2)، وبالتالي تمكين التوافق الإنتاجية ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هنا، التي وصفناها في التفاصيل بديلا المتفطرات السلية نموذج العدوى مناسبة لاختبار فعالية الدواء. يأخذ هذا النموذج في الاعتبار اثنين من العوامل الرئيسية التي ينبغي إيلاء المزيد من الاهتمام خلال عملية التنمية السل المخدرات في وقت مبكر: وجود الحواجز ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية للتغلغل المخدرات والتغيرات الأيضية من المتفطرات السلية خلال العدوى. في حين أظهرنا سابقا فوائد نموذج العدوى لدينا واقترح إمكانية توسيع نطاق العدوى لسرعة التوافق 16، ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

نشكر الدكتور فرانك وولشندورف على الوصول إلى قارئ لوحة التصوير الآلي Cytation 3. تم تمويل هذا العمل جزئيا من خلال منحة المعاهد الوطنية للصحة R01-AI104499 إلى OK. تم تنفيذ أجزاء من العمل في مرافق UAB CFAR ومن قبل UAB CFAR Flow Cytometry Core / Joint UAB Flow Flow Cellmetry Core ، والتي يتم تمويلها من قبل NIH / NIAID P30 AI027767 و NIH 5P30 AR048311.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
7H9BD Difco271310اتبع توصيات الشركة المصنعة
Middlebrook OADCBD Biosciences212351
TyloxapolSigmaT8761قم بإعداد محلول مخزون بنسبة 20٪ في H2< / sub>O ؛ فلتر تعقيم
ملح حمض D-Pantothenic hemicalciumSigmaP5710تحضير محلول مخزون 24 مجم / مل في H2 فلتر تعقيم
L-leucineMP Biomedicals194694تحضير محلول مخزون 50 مجم / مل في H2< / sub>O ؛ فلتر تعقيم
Hygromycin BEMD Millipore400051تحضير محلول مخزون 200 مجم / مل في H2< / sub>O
Nalgene Square زجاجة وسائطPETG Thermo Fisher2019-0030
RPMI 1640 وسائطHycloneSH30027.01
مصل الأبقار الجنينيأتلانتا البيولوجيS12450H
L-glutamineCorningMT25005CI
HEPESHycloneSH30237.01
قارئ لوحة Cytation 3Biotekقابل للتبديل مع أي قارئ لوحة فلورية وميكروسكوب
Gen5 SoftwareBiotekتسجيل وتحليل rezasurin coversion
Rifampicin فيشر العلميتحضير محلول مخزون 10 مجم / مل في H2< / sub>O
Moxifloxacin HydrochlorideAcrosOrganics 457960010تحضير محلول مخزون 10 مجم / مل في H2< / sub>O
Resazurin ملح الصوديومSigmaR7017تحضير 800 & mu ؛ جم / مل محلول مخزون في H2< / sub>O ؛ تصفية تعقيم
Tween-80Fisher ScientificT164500تحضير محلول مخزون بنسبة 20٪ في H2< / sub>O ؛ تعقيم المرشح
BP2679250

المراجع

  1. Barry, C. E. Lessons from seven decades of antituberculosis drug discovery. Curr Top Med Chem. 11 (10), 1216-1225 (2011).
  2. Bass, J. B. Jr, et al. Treatment of tuberculosis and tuberculosis infection in adults and children. American Thoracic Society and The Centers for Disease Control and Prevention. Am J Respir Crit Care Med. 149 (5), 1359-1374 (1994).
  3. Koul, A., Arnoult, E., Lounis, N., Guillemont, J., Andries, K. The challenge of new drug discovery for tuberculosis. Nature. 469 (7331), 483-490 (2011).
  4. Palomino, J. C., Martin, A. TMC207 becomes bedaquiline, a new anti-TB drug. Future Microbiol. 8 (9), 1071-1080 (2013).
  5. Zuniga, E. S., Early, J., Parish, T. The future for early-stage tuberculosis drug discovery. Future Microbiol. 10 (2), 217-229 (2015).
  6. Evangelopoulos, D., Fonseca, da, D, J., Waddell, S. J. Understanding anti-tuberculosis drug efficacy: rethinking bacterial populations and how we model them. Int J Infect Dis. 32, 76-80 (2015).
  7. Ekins, S., et al. Looking back to the future: predicting in vivo efficacy of small molecules versus Mycobacterium tuberculosis. J Chem Inf Model. 54 (4), 1070-1082 (2014).
  8. Christophe, T., et al. High content screening identifies decaprenyl-phosphoribose 2' epimerase as a target for intracellular antimycobacterial inhibitors. PLoS Pathog. 5 (10), e1000645(2009).
  9. Hartkoorn, R. C., et al. Differential drug susceptibility of intracellular and extracellular tuberculosis, and the impact of P-glycoprotein. Tuberculosis (Edinb). 87 (3), 248-255 (2007).
  10. Queval, C. J., et al. A microscopic phenotypic assay for the quantification of intracellular mycobacteria adapted for high-throughput/high-content screening. J Vis Exp. (83), e51114(2014).
  11. Sorrentino, F., et al. Development of an intracellular screen for new compounds able to inhibit Mycobacterium tuberculosis growth in human macrophages. Antimicrob Agents Chemother. 60 (1), (2015).
  12. Sarathy, J., Dartois, V., Dick, T., Gengenbacher, M. Reduced drug uptake in phenotypically resistant nutrient-starved nonreplicating Mycobacterium tuberculosis. Antimicrob Agents Chemother. 57 (4), 1648-1653 (2013).
  13. Dutta, N. K., Karakousis, P. C. Can the duration of tuberculosis treatment be shortened with higher dosages of rifampicin? Front Microbiol. 6, 1117(2015).
  14. van Ingen, J., et al. Why Do We Use 600 mg of Rifampicin in Tuberculosis Treatment? Clin Infect Dis. 52 (9), e194-e199 (2011).
  15. Donald, P. R. Cerebrospinal fluid concentrations of antituberculosis agents in adults and children. Tuberculosis (Edinb). 90 (5), 279-292 (2010).
  16. Schaaf, K., et al. A Macrophage Infection Model to Predict Drug Efficacy Against Mycobacterium Tuberculosis. Assay Drug Dev Technol. 14 (6), 345-354 (2016).
  17. Sampson, S. L., et al. Protection elicited by a double leucine and pantothenate auxotroph of Mycobacterium tuberculosis in guinea pigs. Infect Immun. 72 (5), 3031-3037 (2004).
  18. Jain, P., et al. Specialized transduction designed for precise high-throughput unmarked deletions in Mycobacterium tuberculosis. MBio. 5 (3), e01245-e01214 (2014).
  19. Davis, J. M., Ramakrishnan, L. The role of the granuloma in expansion and dissemination of early tuberculous infection. Cell. 136 (1), 37-49 (2009).
  20. Collins, L., Franzblau, S. G. Microplate alamar blue assay versus BACTEC 460 system for high-throughput screening of compounds against Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium. Antimicrob Agents Chemother. 41 (5), 1004-1009 (1997).
  21. Snewin, V. A., et al. Assessment of immunity to mycobacterial infection with luciferase reporter constructs. Infect Immun. 67 (9), 4586-4593 (1999).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

96 THP1 BSL 2
وإنتاجية عالية الفحص المدعم لتقييم فعالية الدواء ضد بلعم Passaged
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.