1. إعداد مكعبات السكر-الاغاروز
- تزن 8 غرام من السكر ومكان في 50 مل قارورة إرلنمير.
- ملء قارورة إرلنمير مع 20 مل من الماء المتأين. حل السكر عن طريق تحوم قارورة.
- تزن 170 ملغ من الاغاروز وإضافته إلى محلول السكر.
- تسخين محلول الاغاروز السكر في الميكروويف على ارتفاع لمدة 25 ثانية. حل الاغاروز في محلول السكر.
- السماح للقارورة والسكر والأغاروز حل لتبرد.
ملاحظة: يجب أن تكون قارورة باردة لمسة، ولكن لا تسمح الحل لتصلب. - لإعداد مكعب السكر الاغاروز لعلاج السيطرة، صب محلول الاغاروز السكر شبه بارد في قالب القارب وزنها.
ملاحظة: القارب وزن القالب له أبعاد 1.5 × 1.5 × 0.3 سم 3 . - لإعداد مكعب السكر الاغاروز مركب لعلاج طارد، إضافة المبلغ المطلوب من مركب إلى حل شبه بارد (على سبيل المثال ، 1٪ ديت في قمحلول أغار-أغاروس (v / v)). دوامة قارورة لخلط في المجمع ثم صب الحل في القارب وزن القالب.
ملاحظة: سيتم إعداد ثمانية قوالب التحكم وثمانية قوالب الاختبار في هذه المرحلة. قوالب التحكم لا تحتوي على طارد.
- تبريد مكعبات السكر الاغاروز في قوالب في الثلاجة لمدة 5-10 دقيقة. إزالة مكعبات السكر الاغاروز عزز من قوالب القارب وزنها ووضعها في حاوية بلاستيكية مع منشفة ورقية مبللة.
- وضع الحاويات في الثلاجة للتخزين. وينبغي استخدام مكعبات السكر الاغاروز في غضون 7 أيام من التحضير.
2. برمجة برامج تتبع الفيديو والإعداد التجريبي
- ضمن إعدادات التجربة في شريط إكسبلورر إكسبلورر (في برنامج التتبع، انظر جدول المواد)، الموجود على يمين الشاشة، تأكد من تحديد الكاميرا الصحيحة وأن يتم تركيز تسجيل الفيديو على ساحات طبق بتري.
- إذا كان تسجيل الفيديو يحتاج إلى أن يكون محوره، انتقل إلى إعدادات الكاميرا وتحت الضوابط أوي وحدد مركز X وخيارات Y المركز.
- ضمن إعدادات التجربة، قم بتغيير عدد الساحات إلى 16. في إطار الميزات المتراكمة حدد كشف نقطة الوسط.
- حدد إعدادات الساحة لإعداد الساحة المطلوبة للفحص.
- وضع 16 أطباق بتري في نمط 4 × 4 على رأس مربع ضوء، وضعه تحت الكاميرا ( الشكل 1 ).
ملاحظة: يتم استخدام هذه الأطباق لإنشاء الساحة تسجيل فارغة.

الشكل 1: ترتيب طبق بتري على مربع الضوء. يتم ترتيب أطباق بتري في كتلة 4 × 4 على الجزء العلوي من مربع الضوء. هذا الترتيب يوفر سهولة التعرف على العلاجات ومقاومة طارد ل vإسوال تتبع البروتوكول. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
- في إعدادات الساحة، استخدم زر الاستيلاء على الخلفية، وتقع على لوحة الأدوات الجانب الأيمن، لالتقاط صورة من 16 أطباق بتري. سيتم استخدام هذا كقالب لإعداد الساحة.
- حدد "إنشاء القطع الناقص" من شريط الأدوات في الجزء العلوي من شاشة إعدادات الساحة وخلق دائرة يطابق قطر واحد من الأطباق بتري في الصورة أمسك. وضع الساحة 1 علامة في الدائرة ( الشكل 2 ).

الشكل 2: لقطة من إعدادات التتبع المرئي البرامج الساحة. مراقبة المشارب قطري داخل الدائرة يوفر تأكيد منطقة الكشف في الدائرة. ا يتم توفير علامة المنطقة 1 لكل مربع ويحدد المنطقة المستهدفة لكل طبق بتري. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
- حدد "زون غروب 1" الموجود أسفل أرينا 1 في لوحة الأدوات الجانبية اليمنى. حدد "إنشاء مستطيل" من شريط الأدوات أعلى الشاشة. إنشاء مربع 30 × 30 بكسل باستخدام هذا ثم وضعه في وسط الدائرة التي تم إنشاؤها في الخطوة السابقة. حدد "إضافة منطقة" من شريط الأدوات العلوي ثم انقر في منتصف المربع. حرك علامة المنطقة 1 بحيث تكون في المربع.
ملاحظة: مربع إنشاؤه هو منطقة التغذية وليس من شرط أن تكون منطقة التغذية بالضبط نفس الحجم كما هو مدرج طالما أنها أكبر قليلا من مكعب السكر الاغاروز.
ليس / ftp_upload / 55603 / 55603fig3.jpg "/>
الشكل 3: لقطة شاشة من إعدادات الساحة المكتملة. يجب أن تبدو إعدادات الساحة المكتملة مثل هذا المثال. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
- حدد "الساحة 1" في لوحة أدوات الجانب الأيمن ثم انقر فوق الساحة كاملة مكررة. من القائمة المنسدلة حدد "آل أريناس أريناس" ثم انقر فوق موافق. نقل الأعداد الساحة مكررة للأطباق بتري المتبقية في صورة أمسك (الشكل 3).
- حدد "الساحة 1" ثم حدد "معايرة مقياس" على شريط الأدوات العلوي. رسم خط المعايرة عبر قطر الساحة 1 طبق بتري. تغيير قياس القطر إلى 9 سم (قطر الأطباق بيتري المستخدمة). حدد "التحقق من صحة إعدادات الضبط" على لوحة أدوات الجانب الأيمن.
- تحديد "إعدادات الكشف "على شريط التحكم على اليسار.
- حدد "إعدادات الكشف 1" ثم حدد "التحجيم الرمادي" في القائمة المنسدلة الموجودة في مربع أداة الجانب الأيمن. تحت الكشف، تعيين النطاق بحيث هو 0 إلى 83 ( الشكل 4A ).
- انقر بزر الماوس الأيمن فوق "إعدادات الكشف" وقم بإعداد إعداد جديد باسم "إعدادات الكشف 2". تأكد من تحديد "التحجيم الرمادي"، ولكن لا تغير المعلمات الأخرى.
ملاحظة: سيكون هناك دوائر صفراء كبيرة في نافذة الفيديو على الساحات. وهذا سوف يساعد في ترتيب أطباق بتري في المواضع الصحيحة قبل تسجيل ( الشكل 4B ).

الشكل 4: لقطة من إعدادات كشف 1 و 2. ( A ) يظهر ما سيبدو الساحة مع تصحيح الرمادي تصحيح لنحل العسل الموضوع في طبق بتري. ( B ) يظهر منطقة الكشف الساحة بحيث تحديد المواقع من الأطباق بتري يمكن القيام به بين التجارب. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
- حدد "قائمة تجريبية" في المستكشف التجريبي وانقر على "إضافة متغير" في شريط الأدوات العلوي. قم بتسمية المتغير المحدد من قبل المستخدم باسم "العلاج". حدد الشريط المنسدل "القيم المعرفة مسبقا" في العمود العلاج المعرفة من قبل المستخدم وإضافة C (التحكم) و T (العلاج) كما قيم محددة مسبقا. حدد الزر "إضافة تجارب" الموجود في شريط الأدوات العلوي. إضافة تجربتين، ثم لكل الساحة حدد ما إذا كان هو الساحة السيطرة (C) أو العلاج الساحة (T) ( الشكل 5 ).

فايغور 5: لقطة من قائمة المحاكمة. وضع العلامات على الساحات بشكل صحيح مهم هنا حيث يستخدم البرنامج المعلومات هنا لفصل البيانات لتحليلها إحصائيا. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
- حدد "ملف تعريف البيانات" ضمن لوحة إكسبلورر إكسبلورر. في العمود الأيسر حدد "العلاج" الموجود تحت عنوان "المتغيرات المستقلة المعرفة من قبل المستخدم". هذا سيضيف مربع "تصفية" في المنطقة مع مخطط التدفق. حدد "C" في المربع المنبثق ثم ضع الفلتر الذي تم إنشاؤه حديثا بين مربع "ابدأ" و "النتيجة 1". يجب ضبط أسهم المخطط الانسيابي بحيث تشير من مربع البداية إلى الفلتر وأخيرا إلى النتيجة 1.
- كرر الخطوة 2.12، ولكن هذه المرة حدد "T" للمرشح ثم حدد"النتيجة" ضمن قسم "العناصر المشتركة". نقل المربعات التي تم إنشاؤها حديثا في منطقة مخطط الانسيابي وربط المربعات مع الأسهم ( الشكل 6 ).

الشكل 6: لقطة من ملف تعريف البيانات. ويوضح ذلك كيفية إعداد المخطط الانسيابي للحصول على الفصل المناسب في التحليل الإحصائي. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
- حفظ الملف.
3. جمع العسل النحل الأفراد
- وضع الملابس الواقية وحدد خلية لجمع نحل العسل (معظمها العلافات).
- إزالة الغطاء الخارجي والداخلي من الخلية. استخدام أداة خلية لتحديد إطار من الجسم خلية العليا التي لا تحتوي على الحضنة.قم برفع الإطار بلطف من صندوق الخلية.
- فحص الإطار لملكة العسل النحل. إذا لم تكن هناك، اكتساح عمال نحل العسل من الإطار في حاوية للنقل. جمع ما يكفي من الأفراد لتكون قادرة على تشغيل اثنين من المحاكمات كاملة لكل مركب لفحصها (يتم استخدام 16 شخصا في المحاكمة مع الضوابط).
ملاحظة: يجب أن يكون الأفراد التي تم جمعها في المقام الأول العلافات؛ ومع ذلك، قد يكون هناك أشخاص آخرين من العمر مثل النحل الممرضة المدرجة في المجموعة. - قم بتدوين الوقت الذي تمت فيه إزالة نحل العسل. نقلها إلى 9 سم × 7 سم × 9 سم مربع من البلاستيك تحتوي على ثقوب الهواء ووضعها في حاضنة عند 32 درجة مئوية و 70٪ الرطوبة النسبية.
- تجويع نحل العسل لمدة 15 ساعة.
ملاحظة: هذا عادة ما يعمل بشكل أفضل إذا تم جمع النحل العسل مساء قبل أن يتم اختبارها.
4. إجراء الفحص البصري الفحص
- بدء برنامج تتبع البصرية وفتح حفظد التجريبية التي تم إنشاؤها لهذا الفحص.
- حدد "إعدادات الكشف 2".
- وضع مكعبات السكر الاغاروز التحكم في مراكز 8 من 16 أطباق بتري. كرر هذه العملية مع مكعبات السكر-الاغاروز مركب (رادع) في الأطباق 8 المتبقية.
- استخدام ملقط لإزالة العسل النحل واحد من مربع من البلاستيك ووضعه في واحدة من أطباق بتري السيطرة.
- كرر الخطوة 4.4 ل 15 أطباق بتري المتبقية.
- وضع كل من الأطباق على مربع الضوء ووضعها بحيث مناطق الكشف الساحة (كما هو موضح على شاشة الكمبيوتر عند تحديد الإعداد 2 يتم تحديد) تناسب كل من الساحات طبق بتري. تضيء مربع الضوء من أسفل من خلال مجموعة من أضواء ليد تعيين إلى الطيف الأحمر. تحيط مربع كامل والكاميرا مع ورقة من البلاستيك الأسود للقضاء على الضوء الخارجي وتقليل الظلال داخل الساحات.
- بعد أن تم تعيين أطباق بتري، تأكد من "إعدادات الكشف 1" هوالإعداد المحدد.
ملاحظة: عند هذه النقطة برنامج تتبع البصرية يجب التقاط فقط النحل العسل داخل الساحات طبق بتري. - حدد "اكتساب" من مستكشف التجربة. اضغط على الزر الأخضر "بدء التجربة" الموجود في المربع المنبثق التحكم في الاكتساب على اليمين لبدء التسجيل.
- تشغيل الفحص لمدة 10 دقيقة ثم انقر فوق الزر الأحمر "إيقاف المحاكمة" في المربع المنبثقة السيطرة اكتساب لوقف التسجيل.
- إزالة الأفراد من أطباق بتري ووضعها في وعاء منفصل بحيث لا يتم اختبارها مرتين.
- كرر الخطوات 4.4-4.10 للمحاكمة الثانية على نفس المركب.
ملاحظة: يمكن تعديل هذه الطريقة لزيادة عدد نحل العسل لكل معاملة حسب الحاجة من قبل المستخدم. - حدد إحصائيات في مستكشف التجربة ثم انقر فوق حساب.
- تصدير البيانات إلى برنامج إدارة البيانات ومن ثم تحليل البيانات لأهميتها باستخدام استخدام واحد ثأي تحليل التباين مع اختبار توكي البعدي، واختبار t غير مرغوب فيه باستخدام برنامج البرمجيات الإحصائية المفضل.