هذا العمل تفاصيل طريقة خطوة بخطوة لإعداد مقتطفات الغنية بالبوليفينول من مسحوق التوت المجففة. وبالإضافة إلى ذلك، فإنه يوفر وصفا دقيقا لكيفية استخدام هذه المستخلصات الغنية بوليفينول في ثقافة الخلية في وجود هرمون الببتيد أنجيوتنسين الثاني (أنغ الثاني) باستخدام خلايا العضلات السلس الأوعية الدموية (فسمكس).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استخراج وتنقية البوليفينول من تجميد المجفف بيري مسحوق لعلاج خلايا العضلات السلس الأوعية الدموية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وتشير الدراسات الوبائية إلى أن زيادة تناول الفلافونويد يرتبط بانخفاض معدل الوفيات بسبب أمراض القلب والأوعية الدموية في الولايات المتحدة (الولايات المتحدة) وأوروبا. وتستهلك التوت على نطاق واسع في الولايات المتحدة ولديها محتوى بوليفينوليكي عالي. وقد تبين أن البوليفينول تتفاعل مع العديد من الأهداف الجزيئية وممارسة العديد من الوظائف البيولوجية الإيجابية، بما في ذلك الآثار المضادة للأكسدة، المضادة للالتهابات، والقلبية. البوليفينول معزولة من بلاك بيري (بل)، التوت (رب)، التوت الأسود (برب) تقليل الإجهاد التأكسدي والشيخوخة الخلوية ردا على أنجيوتنسين الثاني (أنغ الثاني). يوفر هذا العمل وصفا تفصيليا للبروتوكول المستخدم لإعداد مقتطفات البوليفينول من التوت المجففة التجميد. وقد أجريت الاستخلاصات من البوليفينول من مسحوق التوت المجففة باستخدام 80٪ من الإيثانول المائي وطريقة الاستخلاص بمساعدة الموجات فوق الصوتية. كما تم تنقية المستخلص الخام وتجزئته باستخدام الكلوروفورم وأسيتات الإيثيل،على التوالي. تم اختبار آثار كل من المستخلصات الخام والمنقى على خلايا العضلات السلسية الوعائية (فسمكس) في الثقافة.
المقدمة
البوليفينول هي مركبات تحتوي على حلقة الفينول واحدة على الأقل في هيكلها وهي موجودة بوفرة في المملكة النباتية 1 . وقد استهلك البشر النباتات لآلاف السنين لأغراض طبية دون أن يكون على بينة من وجود مثل هذه المركبات 2 . العديد من الفواكه والخضروات لديها بعض المركبات بوليفينوليك المشتركة، وإن كان بكميات مختلفة، بما في ذلك الفلافونويد، ستيلبينس، والأحماض الفينولية 3 . على الرغم من أن البوليفينول غالبا ما ترتبط مع الفواكه والخضروات الملونة، وهذا ليس صحيحا تماما. على سبيل المثال، زياكسانثين و زانثين موجودة في الخضروات التي ليست ملونة للغاية، مثل البصل والثوم، والتي هي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. إعداد الكواشف
- إعداد 80٪ من الإيثانول (100 مل) عن طريق خلط 80 مل من الإيثانول المطلق (الجزيئية البيولوجيا الصف) و 20 مل من الخلايا الصفية المياه الصف العقيمة.
- لإعداد بوليفينول استخراج (10 ملغ / مل)، تزن 10 ملغ من سي أو بي. إضافة 1 مل من دولبيكو تعديل النسر المتوسطة (دمم) تحت غطاء محرك السيارة ثقافة الخلية. دوامة الحل. قسامة في أجزاء 200 ميكرولتر وتخزينها في -20 درجة مئوية.
- إعداد تحلل العازلة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وقد ثبت سابقا أن مقتطفات البوليفينول معزولة من بل، رب، و برب خفضت شيخوخة فسمكس ردا على أنغ الثاني 21 . وقد تبين أن هذه المستخلصات البوليفينول المنقى تعديل أنغ الثاني يشير عن طريق الحد من الفسفرة من أكت، P38 ميتوجين المنشط كيناس البروتين (مابك)، و ERK1 / 2. بل يمنع الشيخوخة عن طريق الحد من التعبير عن أوكسيديز نادف (نوكس) 1، وهو انزيم التي تنتج الأنيونات سوبركسيد و أوبريغولاتد بقوة من قبل أنغ الثاني. في المقابل، رب و برب منع ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يحتوي البوليفينول المعزول من التوت على تركيبات متميزة. بروتوكول الاستخلاص القائم على الإيثانول وصف هنا يسمح لتحديد مستويات مختلفة من الأحماض الفينولية والفلافونويد الموجودة في مستخلصات البوليفينول الخام وتنقيته من بل ( الجدول 1 ). تم إثراء سي في حمض الغاليك، حمض الفيروليك، 4-O- كافوييلكينيك حمض، و 5 O- كافوييلكينيك حمض. عملية تنقية لم يغير كثيرا من مستويات حمض الغاليك و p- حمض الكوماريك. ومع ذلك، فقد زادت مستويات 3- O- كافويويلكينيك حمض من 170.5 - 235.3 ج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
تم تمويل هذا العمل من قبل جمعية القلب الأمريكية (14GRNT20180028) ومجلس ولاية ولاية فلوريدا للبحوث والإبداع (كوفرس).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Angiotensin II | Sigma-Aldrich، Inc. | A9525-10MG | علاج VSMCs |
| & -actin | Sigma-Aldrich، Inc. | A2228 | الجسم المضاد الأساسي (1: 5000) |
| فاكهة بلاك بيري | ميرسر فودز | مسحوق بلاك بيري المجفف بالتجميد | |
| كاتالاز | كالبيوكيم | 219010 | الجسم المضاد الأساسي (1: 1000) |
| كلوروفورم | بيوتك Grd، Inc. | 97064-678 | تحضير مستخلصات البوليفينول المنقاة |
| من Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Mediatech، Inc. | 10-014-CV | ثقافة VSMCs |
| الإيثانول (درجة البيولوجيا الجزيئية المطلقة) | Sigma-Aldrich، Inc. | E7023-500ML | تحضير مستخلصات البوليفينول |
| إيثيل أسيتات | سيجما ألدريتش ، إنك. | 439169 | تحضير مستخلصات البوليفينول المنقاة |
| ERK1 / 2 | Cell Signaling Technology، Inc. | 9102S | الجسم المضاد الأساسي (1: 500) |
| EDTA ، 500 ملي مولار ، درجة الحموضة 8.0 | Teknova، Inc. | E0306 | مجفف التجميد للتحلل |
| Labconco | VirTis Benchtop K | تحضير مستخلصات البوليفينول | |
| مصل الأبقار الجنيني (FBS) | Seradigm | 1400-500 | زراعة الخلايا |
| HEPES | Sigma-Aldrich، Inc. | H3375 | عازلة التحلل |
| كلوريد الصوديوم | EMD Millipore، Inc. | 7760 | عازلة التحلل |
| NaF | J.T.Baker، Inc. | 3688-01 | عازلة التحلل |
| Na3VO4 | Sigma-Aldrich, Inc. | 450243 | المخزن المؤقت للتحلل |
| Na4P2O7 ، decahydrate | Sigma-Aldrich، Inc. | S-9515 | عازلة التحلل |
| فوسفو ERK1 / 2 & nbsp ؛ | تكنولوجيا إشارات الخلية ، Inc. | 9101S | الجسم المضاد الأساسي (1: 1000) |
| كوكتيل مثبط البروتياز | Sigma-Aldrich، Inc. | P8340-5ml | تحلل عازلة |
| بروتين فحص صبغة كاشف | صبغ Bio-Rad Laboratories، Inc. | 500-0006 | قياس تركيز البروتين |
| غشاء نقل PVDF | Thermo Scientific، Inc. | 88518 | اللطحات الغربية |
| المبخر الدوار | Buchi Labortechnik | Rotavapor R3000 | تحضير مستخلصات البوليفينول |
| المياه المعقمة | Mediatech، Inc. | 25-055-CV | تحضير مستخلصات البوليفينول |
| Sonicator | QSonica، LLC | Q125 | تحضير مستخلصات الخلايا |
| SOD2 | Enzo Life Sciences، Inc. | ADI-SOD-110-F | الجسم المضاد الأساسي (1: 1000) |
| Triton-X-100 | Sigma-Aldrich، Inc. | X100 | البقع الغربية |
| Whatman # 2 ورقة الترشيح | GE Healthcare، Inc. | 28317-241 | تحضير مستخلصات البوليفينول |
المراجع
- Morton, L. W., Abu-Amsha Caccetta, R., Puddey, I. B., Croft, K. D. Chemistry and biological effects of dietary phenolic compounds: relevance to cardiovascular disease. Clin Exp Pharmacol Physiol. 27 (3), 152-159 (2000).
- Sekirov, I., Russell, S. L., Antunes, L. C., Finlay, B. B. Gut microbiota in health and disease. Physiol Rev.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
