يصف هذا البروتوكول إجراء لتجميد الأنسجة العضلية التي تغرق بها مباشرة في النيتروجين السائل. كما يسلط الضوء على هذا البروتوكول cryovial الجديدة التي يمكن أن تجنب "تأثير بطانية" من غاز النيتروجين عندما الاتصالات النيتروجين السائل على سطح الأنسجة من العينة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
A متعدد حفرة Cryovial يزيل تجميد قطع أثرية عندما منغمسين الأنسجة العضلية مباشرة في النيتروجين السائل
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تواجه دراسات على فسيولوجيا العضلات والهيكل العظمي التحدي الفني للمعالجة بشكل مناسب العينات للحصول على المقاطع مع مقصورات حشوية واضحة للعيان. عقبة أخرى هي بدل ضيق من myofibers إلى الأنسجة المحيطة بها. لأن عملية تثبيت الأنسجة وتضمينها البارافين يؤدي إلى انكماش ألياف العضلات التجميد هو وسيلة مثلى لتصلب الأنسجة العضلية لباجتزاء. ومع ذلك، تحدث مشكلة شيوعا التي تواجهها، وتشكيل بلورات الثلج، أثناء إعداد الأبواب المجمدة بسبب ارتفاع محتوى الماء من العضلات. بروتوكول المعروضة هنا يصف أولا طريقة بسيطة وفعالة لتجميد أنسجة العضلات بشكل صحيح عن طريق غمر لهم في النيتروجين السائل. المشكلة باستخدام النيتروجين السائل وحده هو أنه يؤدي إلى تشكيل حاجز غاز النيتروجين بجانب الأنسجة، الذي يعمل بمثابة عازل ويحول دون تبريد الأنسجة. لتجنب هذا "بطانية البخار" تأثير، وشمال شرقوقد تم تصميم cryovial ث لزيادة سرعة تدفق السائل حول سطح الأنسجة. وقد تحقق ذلك من خلال اللكم ما مجموعه 14 الثقوب مدخل في جدار القارورة. وفقا لديناميات فقاعة، وهو معدل أعلى من النتائج تدفق السائل في فقاعات أصغر وأقل فرص لتشكيل حاجز الغاز. عندما يتدفق النيتروجين السائل في cryovial من خلال الثقوب مدخل، وسرعة تدفق في جميع أنحاء الأنسجة سريعة بما يكفي للقضاء على حاجز الغاز. مقارنة لطريقة تجميد أنسجة العضلات باستخدام نظير البنتان قبل المبردة، وهذا البروتوكول هو أبسط وأكثر كفاءة، ويمكن استخدامها لتجميد العضلات بطريقة الإنتاجية. وعلاوة على ذلك، هذا الأسلوب هو الأمثل للمؤسسات التي ليس لديها إمكانية الوصول إلى نظير البنتان، وهي قابلة للاشتعال للغاية في درجة حرارة الغرفة.
المقدمة
الهيكل العظمي والعضلات هي العنصر الأكثر قيمة من الحيوانات المنتجة للحوم من الناحية التغذوية وتجهيز الرأي. في صناعة اللحوم، هناك جانبان خصوصا الحرجة: كفاءة نمو العضلات ونوعية اللحوم الناتجة عن ذلك. كعنصر رئيسي من العضلات، وألياف العضلات هي ذات الصلة مباشرة إلى أداء النمو وجودة اللحوم الطازجة في الحيوانات 1. على سبيل المثال، فإن العدد الإجمالي للألياف (TNF) ومنطقة مستعرضة للألياف (CSAF) تحديد معظمهم من كتلة العضلات وجودة اللحوم. أيضا، نوع من الألياف التركيب (FTC) تؤثر بقوة جودة اللحوم الطازجة 2. ولذلك، فإن التلاعب في خصائص الألياف العضلية في الحيوانات هي طريقة فعالة للغاية لزيادة ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تأسيس الطريقة الحالية والتحقق من صحتها لحصاد وتخزين أكثر من 1000 عينة العضلات لتلطيخ النسيجي في مختبرنا. وجاءت جميع الإجراءات التي تنطوي على رعاية الحيوان واستخدام المبادئ التوجيهية التي وضعتها وزارة الزراعة في الصين.
1. المعدات اللازمة لجمع العينات
- تسمية هوية العينة على كل قارورة المبردة.
ملاحظة: قارورة المبردة صمم خصيصا لتجميد عينات أنسجة جديدة لهذا الإجراء cryosection (الشكل 1A). مصنوعة من قوارير من البولي بروبلين في قالب المصنع (الشكل 1C).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وتظهر التوضيح cryovial والمعدات المختبرية الشائعة لتجميد العضلات أثناء إعداد أقسام المجمدة في الشكل 1. مصنوعة من مادة البولي بروبيلين cryovials في مصنع العفن. كل قارورة لديها ما مجموعه 14 الثقوب مدخل: واحد على الغطاء. وآخر هو في الأسفل. والباقي 12 شكل أربعة خطوط متوازية، مع كل أربعة ثقوب في 90 درجة مع بعضها البعض. ويمكن لهذه الثقوب مدخل تسريع سرعة تدفق النيتروجين السائل بجانب الأنسجة لتجنب "بطانية البخار" تأثير عندما الات.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا، نحن تصف الجديد، cryovial متعددة حفرة لتجميد وتخزين الأنسجة العضلية لإجراء عمليات تقييم النسيجية وظيفة العضلات. الخطوة تعديل حاسمة في هذا البروتوكول هو أن العينة في cryovial متعددة ثقب مغمورة مباشرة في النيتروجين السائل. على حد علمنا، وهذا هو أبسط وrapidest طريقة للحصول على العينات المجمدة ممتازة لcryosectioning العضلات بين الأساليب تجميد القائمة (انظر نتائج ممثل).
التحدي الفني من قبل الباحثين العضلات واجه هو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
أي تضارب في المصالح أو مالية أو خلاف ذلك، أعلن من قبل المؤلفين.
شكر وتقدير
وقد أيد هذا المشروع من قبل مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية (NSFC): 31301950 و31671288.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Cryostat Microtome | مجهر لايكا | لايكا CM1950 | |
| الرقمي | نيكون | نيكون DS-U3 | |
| قارورة مبردة فيلم | صممه | ||
| النيتروجين | Commomly استخدام | ||
| مشرط | Commomly | ||
| 10 سم ملقط | Commomly 25 | ||
| سم ملاقط | Commomly يستخدم | ||
| زجاج | Commomly تستخدم | ||
| قفازات | الفريزر | Commomly المستخدمة |
المراجع
- Joo, S. T., Kim, G. D., Hwang, Y. H., Ryu, Y. C. Control of fresh meat quality through manipulation of muscle fiber characteristics. Meat Sci. 95 (4), 828-836 (2013).
- Lefaucheur, L. A second look into fibre typing--relation to meat quality. Meat Sci. 84 (2....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
