مقالة منهجية

الجاذبة الإرواء كطريقة لتصور الأوعية الدموية في أمبيستوما ميكسيكانوم

DOI:

10.3791/55740

⸱

يونيو 16, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopedic Surgery, Harvard Medical School and Brigham and Women's Hospital, 2Division of Graduate Medical Sciences, Boston University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باستخدام محبة للدهون 1،1'- ديوكتاديسي -3،3،3 '، 3'-تيتراميثيليندوكاربوسيانين البركلورات (الجاذبة) تقنية تلطيخ، أمبيستوما ميكسيكانوم يمكن أن يخضع نضح الأوعية الدموية للسماح لتصور سهلة من الأوعية الدموية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد استخدمت تقنيات الإرواء لعدة قرون لتصور تداول الأنسجة. أكسولوتل (أمبيستوما ميكسيكانوم) هو نوع من السمندل الذي برز كنموذج أساسي لدراسات التجدد. لا يعرف إلا القليل عن كيفية إعادة التوعي يحدث في سياق التجدد في هذه الحيوانات. هنا نحن الإبلاغ عن طريقة بسيطة لتصور الأوعية الدموية في أكسولوتل عن طريق نضح من 1،1'-ديوكتاديسي 3،3،3 '، 3'-تيتراميثيليندوكاربوسيانين البيركلورات (الجاذبة). الجاذبة هو صبغ كاربوسيانين محبة للدهون التي تدرج في غشاء البلازما من الخلايا البطانية على الفور. يتم الإرواء باستخدام مضخة تحوي بحيث يدخل الجاذبة الدورة الدموية من خلال الشريان الأبهر. خلال نضح، وتدفق صبغ من خلال الأوعية الدموية أكسولوتل ودمجها في طبقة ثنائية الدهون من الخلايا البطانية الوعائية عند الاتصال. الإجراء نضح يستغرق حوالي ساعة واحدة لمدة 8 بوصة أكسولوتل. مباشرة بعد نضح وايث داي، و أكسولوتل يمكن تصور مع المجهر متحد البؤر الفلورسنت. ينبعث مؤشر الجاذب الضوئي الضوء في نطاق أحمر برتقالي عندما متحمس مع مرشح الفلورسنت الأخضر. هذا الإجراء نضح الجاذبة يمكن استخدامها لتصور بنية الأوعية الدموية من أكسولوتلس أو لإظهار أنماط إعادة التوعي في تجديد الأنسجة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصور الأوعية الدموية يلعب دورا حيويا في فهم بنية ووظيفة الكائنات الحية عبر العديد من الأنواع. ابتداء من القرن ال 16 مع ليوناردو دا فينشي، وقد تم دراسة النماذج والرسوم البيانية من الدورة الدموية 1 . باستخدام الشمع والقوالب المطاطية، تم بيرفوسد الأنسجة لخلق نماذج ثلاثية الأبعاد من الأوعية الدموية، مما سمح لدراسة أورغانوجينيسيس والمرضية 1 ، 2 . تم تلوين الراتنجات والشمع مع الأصباغ مثل الهند الحبر أو القرمزي الأحمر للسماح لتصورها سهلة 1 ، 2 . ومع ذلك، تسببت هذه التقنيات العديد من القضايا لأن اللزوجة العالية منعت نضح كامل من الأنسجة من الفائدة 1 . كما أصبح الحقل أكثر تطورا، واستخدام المجاهر متحد البؤر والإلكترون دخلت حيز اللعب، ونقل تيشنيق نضح إيس بعيدا عن قوالب الزهر نحو بيرفوسيونس السائل من الأوعية الدموية، وبعضها سمح للنضح والتصوير من الأوعية الدموية دون تدمير الأنسجة الأولية 3 . دي، صبغ كاربوسيانين الفلورسنت، هو واحد من مثل وصمة عار الذي يسمح لنضح الحيوانات دون الأضرار التي لحقت أنسجة الأوعية الدموية.

الأصباغ كاربوسيانين هي الأصباغ محبة للدهون التي تدمج في أغشية الخلايا عند الاتصال. هذه الأصباغ تسمح لتلطيخ سهلة وحظية من الخلايا البطانية الوعائية، والتي يمكن بعد ذلك أن ينظر إليها تحت المجهر متحد البؤر الفلورسنت. تتحرك الجاذبة عن طريق الانتشار الجانبي في غشاء الدهون من الخلايا، كما هو مبين في وضع العلامات وتعقب الخلايا العصبية 4 . كيميائيا، وسلاسل ألكيل اثنين من الجاذبة تعطي الصبغة تقارب عالية لأغشية الخلايا، في حين أن اثنين من حلقات مترافق من فلوريوكروم الذي هو المسؤول عن انبعاث الطول الموجي الأحمر عندما متحمس من الفلورسنت الضوء الأخضر مرشحات> 4. وقد استخدمت الجاذبة في العديد من القدرات، بما في ذلك وضع العلامات الناجحة للغشاء البلازما وعلى حد سواء أنتيروغريد والوراء إلى الوراء في الخلايا العصبية 5 ، 6 . وقد استخدمت سابقا الجاذبة في بروتوكولات نضح في حين تصور الأوعية الدموية من الفئران 7 .

أكسولوتلس ( أمبيستوما ميكسيكانوم ) هي السلمندرات التي تعيش حصرا في البحيرات المالحة بالقرب من مكسيكو سيتي، المكسيك. وقد أصبحت هذه الحيوانات نموذجا هاما لفهم عمليات التجدد لأنها يمكن أن تجدد أطرافه الكاملة والذيل (بما في ذلك الحبل العصبي)، وأجزاء من القلب والأعضاء الداخلية الأخرى، وأجزاء من العين والبالغين 8 ، 9 . بالإضافة إلى ذلك، مع التطبيق الأخير من الأدوات الجينية في أكسولوتلس، نظرة غير مسبوقة في الجزيئات والخلايا التي تقود هذه العمليات من الممكن الآن 8 . نجاح ريجينالتموينية من طرف كامل يتطلب عملية إعادة التوعي واسعة النطاق، والتي قد تلعب دورا هاما في تجديد بعد مجرد الوظائف التقليدية للأوعية الدموية في توفير الأكسجين والمواد المغذية. فهم إعادة التوعي في سياق تجديد الأنسجة أمر حتمي. وقد سبق تصور الأوعية الدموية أكسولوتل باستخدام الهند الحبر، وبينما كانت النتائج مثيرة للاهتمام، لم يتم إعادة النظر في هذه العملية في العقود اللاحقة 10 . سعينا إلى تكييف بروتوكول نضح الجاذبة وضعت لاستخدامها في الثدييات للسماح لنضح كاملة والتصور من الأوعية الدموية أكسولوتل 7 . يصف هذا البروتوكول الخطوات التي اتخذت لإرواء بنجاح وبعد ذلك تصور الدورة الدموية أكسولوتل مع تقنية تلطيخ الجاذبة. هذا الإجراء سوف يسمح لتصور دقيق من الأوعية الدموية براءات الاختراع في الأنسجة التماثل، وكذلك في تجديد الأنسجة، ويوفر طريقة جديدة ل فيسواليزاتيون وتحليل عملية إعادة التوعي في أكسولوتل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم إجراء جميع التجارب أكسيولوتل وفقا ل بريغهام ومستشفى المرأة (بو) المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام اللجنة.

1. إعداد تجربة الإرواء

  1. وضع أكسولوتل الكبار في حاوية بلاستيكية مليئة 0.1٪ تريكين حل (MS222) لمدة 15-20 دقيقة أو حتى تخدير تماما. تأكد من أن الحاوية مليئة ما يكفي من محلول تريكين بحيث يتم المغمورة تماما أكسولوتل.
    ملاحظة: يجب تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للمبادئ التوجيهية رعاية الحيوان المؤسسية. في بو، يعتبر أكسولوتل تخدير كامل عندما يفشل اختبار قرصة القدم، وهذا يعني أنه لا يوجد حركة الانعكاسية عندما يتم تقلص القدم بلطف.
    الحذر: على الرغم من تريكين هو مخدر تستخدم خصيصا للكائنات المائية، وينبغي تجنب ملامسة الجلد مباشرة مع الحل تريكين.
  2. إعداد محطة نضح أكسولوتل.
    1. ضع الوسادة ماصة على شقة، سطح مستو مع الجانب ماص مواجهة.
    2. قطع حفرة في إطار رغوة البوليسترين الذي هو الحجم المناسب والشكل ل أكسولوتل تخدير لوضعها في موقف ضعيف. وضع الإطار على وسادة ماصة.
      ملاحظة: يمكن وضع بعض المناشف الورقية الإضافية مباشرة تحت الإطار لمزيد من الامتصاصية.
    3. تحميل مضخة تحوي مع أنابيب نضح. تعيين المضخة إلى معدل تدفق 0.7 مل / دقيقة، وتتدفق في اتجاه عقارب الساعة.
    4. جعل الحل المخفف مع برنامج تلفزيوني 0.7x و 5٪ الجلوكوز في خليط 1: 4.
    5. مزيج 10 مل من محلول مخفف مع 200 ميكرولتر من حل الأسهم ديي في أنبوب مخروطي 50 مل. كاب ومزيج من انعكاس. تغطية هذا الأنبوب مع رقائق الألومنيوم ورقة لحماية حل العمل من التعرض للضوء.
      ملاحظة: يجب تغيير الأحجام وفقا لحجم أكسولوتل نسبيا. هذه القيم هي حوالي 15 سم أكسولوتل (طول الذيل إلى الذيل). انيمالس من هذا الحجم قد لا تكون قد وصلت إلى النضج الجنسي الكامل حتى الجنس الحيوان قد لا يتم تحديدها في هذا الوقت.
    6. ملء أنبوب مخروطي 50 مل مع برنامج تلفزيوني 0.7x.
      ملاحظة: سيتم استخدام برنامج تلفزيوني لتشكيل الحلقة و إكسولانغيناتيون أكسولوتل.
    7. نعلق إبرة فراشة 27 قياس إلى نهاية خروج أنابيب نضح. أضعاف أجنحة فراشة على بعضها البعض ومكان في موقف المشبك.
    8. وضع نهاية حرة من أنابيب نضح في أنبوب مخروطي 50 مل مليئة برنامج تلفزيوني 0.7X وتشغيل مضخة نضح حتى يتم تعبئة كامل أنابيب مع الحل. وقفة المضخة مرة واحدة يتم ملء أنابيب بأكملها مع برنامج تلفزيوني.
      ملاحظة: تأكد من أنابيب خالية من فقاعات الهواء في جميع الأوقات، وهذه سوف تسبب صمة الهواء في أكسولوتل ومنع نضح الكامل.
    9. وضع منشفة ورقية في العفن على شكل أكسولوتل في إطار رغوة البوليسترين. باستخدام ماصة نقل، نقع منشفة مع الحل تريكين.
      ملاحظة: قطع مربع صغير في منتصف سحب الورقإل للسماح لتصريف السوائل أثناء إجراء التروية.
    10. وضع مستحلب أكسولوتل مستلق على منشفة ورقية داخل إطار رغوة البوليسترين.

2. فتح الصدر أكسولوتل

  1. استخدام ملقط الجراحية لقرصة الجلد على طول المحور المركزي للصدر أكسولوتل، فقط تحت خط الكتفين. اسحب.
  2. استخدام مشرط لجعل شق صغير حيث تم سحب الجلد.
  3. إزالة التصحيح مربع من الجلد على صدره من أجل الكشف عن اثنين من لوحات الغضروف.
    1. إزالة الجلد لفتح نافذة على التجويف الصدري كبيرة بما فيه الكفاية لرؤية بوضوح القلب وحوالي 5 ملم من الشريان الأورطي المتفرعة من القلب.
  4. تمزيق الأنسجة الضامة بعناية باستخدام ملقط أو مقص مغلقة من أجل تجنب قطع أي الأوعية الدموية الرئيسية.
  5. رفع كل لوحة الغضروف بشكل فردي باستخدام ملقط ومكوس لهم ثإيث مقص جراحي.
  6. قرصة بعناية التامور مع ملقط، سحب ما يصل، وثقب ذلك باستخدام مقص جراحي. وينبغي أن يكون هذا شق عميق فقط بما فيه الكفاية لثقب التامور رقيقة جدا، وينبغي أن تكون كبيرة بما يكفي للسماح لإزالة التامور. الحرص على عدم قطع القلب.
  7. إزالة بدقة التامور لفضح القلب والشريان الأبهر.
    ملاحظة: باستخدام ماصة نقل، دافق بشكل دوري تجويف الصدر والخياشيم مع حل تريكين للحفاظ على المنطقة واضحة والحفاظ على تخدير أكسولوتل.

3. إرواء أكسولوتل

  1. وضع موقف المشبك مع إبرة فراشة تحميل بجانب إطار رغوة البوليسترين، بحيث يمكن بسهولة التلاعب في ذراع المشبك لإدراج الإبرة في الشريان الأبهر أكسولوتل. نقطة طرف الإبرة نحو الجانب منقاري من الحيوان خلال الإدراج والحفاظ على موازية الإبرة إلى الشريان الأبهر لتجنب ثقب ذلك من خلال المرجعبوسيت الجانب.
  2. بدوره على مضخة تحوي. وينبغي أن يستمر برنامج تلفزيوني 0.7X في التدفق من خلال الأنابيب.
  3. إدراج الإبرة في الشريان الأبهر.
    1. حرك الملقط تحت القوس الأبهر وسحب ما يصل قليلا للسماح لسهولة الوصول إليها.
    2. مناورة مجموعة إبرة المشبك مثل أن الإبرة يمتد على طول الشريان الأبهر، لافتا نحو الرأس. إدراج الإبرة أثناء استخدام ملقط للدعم وراء الشريان الأبهر.
      ملاحظة: يجب إدراج إبرة عميقة بما فيه الكفاية في الشريان الأورطي للتأكد من أنها لن تنزلق خلال نضح. قد يكون هذا حوالي 5 ملم ل 15 سم أكسولوتل. تأكد من أن الإبرة هو تماما في خط مع الشريان الأبهر لتجنب ثقب كامل من السفينة. من خلال-- من خلال-- ثقب من خلال يمكن أن يسبب نزيف هائل ونقصان معدلات نجاح نضح. يمكن تأكيد الإدراج الناجح عن طريق توسيع مرئية من أتريا القلب.
  4. بسرعة تمزيق أتريوم واحد مع الخيال العلميسسورس والسماح الدم لاستنزاف.
    1. دافق مع حل تريكين لمنع تراكم الدم وتشكل الجلطة في تجويف الصدر.
  5. يروي أكسولوتل مع حوالي 20-30 مل من برنامج تلفزيوني. الحيوان يجب أن تتغير من الضوء الوردي في اللون إلى الأبيض في نضح ناجحة.
  6. وقفة مضخة تحوي ونقل نهاية خالية من الأنابيب في أنبوب 15 مل من حل الجاذبة. إعادة تشغيل المضخة، ورعاية لتجنب خلق أي فقاعات الهواء في الأنابيب.
  7. يروي أكسولوتل مع الأسهم العمل بأكمله من الجاذبة.
    ملاحظة: في نضح ناجحة، و أكسولوتل مع تغيير اللون إلى الوردي مشرق من الجاذبة. وهذا سيكون أكثر وضوحا في الخياشيم.
  8. وقفة مضخة بعد نضح مع الجاذبة كاملة ووضع نهاية حرة من الأنابيب إلى 4٪ بارافورمالدهيد (بفا) حل لإصلاح الأنسجة. إعادة تشغيل مضخة وإرواء لا يقل عن 10 مل من بفا.
    الحذر: بفا هو سامة ويجب التعامل معها و ديسبوسيد من المناسب. يجب ارتداء القفازات ونظارات السلامة، ويجب أن تكون الحلول داخل غطاء الدخان. إرواء من أكسولوتل مع بفا لإصلاح نتائج الأنسجة في وفاة الحيوان.

4. إنهاء الإرواء والتصور التحضير

  1. وقف مضخة تحوي وإزالة الإبرة من الشريان الأبهر أكسولوتل.
  2. وضع أكسولوتل على لوحة من البلاستيك.
    ملاحظة: استخدام نصف طبق بتري كبير يعمل بشكل جيد ويسمح لصب كمية صغيرة من تريكين أو برنامج تلفزيوني على أكسولوتل للحفاظ على بشرتها الرطب وتحسين جودة التصور.
  3. تخلص من جميع المواد المستخدمة في صناديق النفايات المناسبة. تنظيف الأدوات الجراحية مع الايثانول 70٪، وتطهير باستخدام معقم الزجاج حبة بين الحيوانات، وتعقيم عن طريق التعقيم بعد الإجراء. تدفق أنابيب مع الحل بس ومن ثم استنزاف، تجف تماما، وتخزين لمزيد من الاستخدام.

5. التصور بيرفوسد أكسولوتل

  • وضع أكسولوتل تحت المجهر متحد البؤر الفلورسنت.
  • إيقاف الأضواء كما التصور من الأوعية الملوثة الجاذبة هو عائق من الضوء.
  • استخدام الأخضر مضان مرشح تصفية الانبعاثات (على سبيل المثال إت-CY3) مع المجهر متحد البؤر لتصور الأوعية الدموية من أكسولوتل. استخدام ضوء الإثارة من الطول الموجي 545 نانومتر.
    ملاحظة: للحصول على صورة ذات جودة عالية، يمكن استخدام المعلمات التالية: التعرض ل 1.1 ثانية، وكسب 1X، والتشبع من 1.0، والتكبير 2X.

    • الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    النتائج

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    مع تلطيخ الجاذبة، والأوعية الدموية من أكسولوتل يمكن تصور بسهولة. الأوعية الدموية من الحيوانات بيرفوسد مع صبغ محبة للدهون هي مرئية على الفور تحت المجهر متحد البؤر الفلورسنت. الشكل 1-1-1.5 هو تمثيل تخطيطي لبروتوكول نضح. بعد نضح مع صبغ وردي مشرق، سوف بيرفوسد بيرفوسد بنجاح تظهر الوردي. باستخدام مرشح الفلورسنت الأخضر على المجهر متحد البؤر سوف تظهر الانبعاثات الحمراء للشبكة الأوعية الدموية. يحدث تلطيخ الجاذب...

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    المناقشة

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    التصور من الأوعية الدموية من أكسولوتل يمكن أن يتحقق بنجاح عن طريق نضح مع صبغ كاربوسيانين محبة للدهون، الجاذبة. في هذه الدراسة، ونحن تصف بروتوكول رواية لنضح من أكسولوتل مع الجاذبة باستخدام مضخة تحوي. وتبين لنا أيضا التصور اللاحق من الأوعية الدموية أكسولوتل باستخدام المجهر متحد البؤر الفلورسنت. وكان هذا البروتوكول التكيف من القوارض بروتوكول نضح الجاذب ينظر في لي وآخرون. 7 ، ولكن الاختلافات الرئيسية بين القوارض و أكسولوتل يتطلب تنقيح البروتوكول لتناسب...

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    الإفصاحات

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

    شكر وتقدير

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

    وأيد هذا البحث من قبل مستشفى بريغهام والمرأة ومارس دايمس. ويود المؤلفون أن يشكروا جميع أعضاء مختبر وايتيد على دعمهم ومشورتهم.

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    المواد

    قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
    الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
    المضخة التمعجية مارشال العلمي RD-RP1
    أنابيب الترويةExcelon Lab & 436901705 الأنابيب المفرغةمقاس S1A
    27g إبرة فراشةEXELint المنتجات الطبية26709
    NaClAmericanBio7647-14-5
    KClAmericanBio7747-40-7
    Na2< / sub>HPO4< / sub> AmericanBio7558-79-4
    NaH2< / sub>PO4< / sub>AmericanBio10049-21-5
    الماء
    HClAmericanBio7647-01-0
    GlucoseThermoFischerA2494001
    1،1 & prime ؛ -Dioctadecyl-3،3،3 &prime ؛ ، 3 &prime ؛ - رباعي ميثيل إندوكاربوسيانين بيركلوراتسيجما ألدريتش468495
    الإيثانول (100٪ حجم / حجم)سيجما ألدريتش64-17-5
    الجلوس الجراحية   ؛MedlineMDG0748741
    إطار رغوةأي مربع رغوة البوليسترين مع قنافذ البحر على شكل قنفذ   قطع
    مقص جراحيMedlineDYND04025
    Scalpel MedlineMDS15210
    الوسادة السفلية الماصةAvacare MedicalPKUFSx
    المناشف الورقية ماصة
    نقل قياسية يمكن التخلصمنها Fisherbrand50216954
    حاملالمشبك Adafruit291
    إيثيل 3-أمينوبنزوات ميثان سولفوناتسيجما ألدريتشE10521تريكايين مسحوق
    قنافذ البحر
    MgSO4< / sub>AmericanBio10034-99-8
    CaCl2< / sub>Sigma AldrichC1016-100G
    NaHCO3< / sub>Sigma AldrichS5761-500G
    بلاستيكيةأحجام متفاوتة مناسبة لقنافذ
    بارافورمالدهايدسيجما ألدريتش30525-89-4
    مجهر إبسولوتل
    لايكالايكاM165 FC
    ET-CY3لايكاM205FA / M165FC
    MS-222
    المقطر البوليسترين البالغة خزانات البحر فلتر الفلورسنت لايكا

    المراجع

    $$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
    1. Giuvarasteanu, I. Scanning electron microscopy of vascular corrosion casts - standard method for studying microvessels. Rom J Morphol Embryo. 48 (3), 257-261 (2007).
    2. Hasan, M. R., Herz, J., Hermann, D. M., Doeppner, T. R. Intravascular perfusion of carbon black ink allows reliable visualization of cerebral vessels. J Vis Exp. (71), e4374(2013).
    3. Minnich, B., Lametschwandtner, A. Scanning electron microscopy and vascular corrosion casting for the characterization of microvascular networks in human and animal tissues. Microscopy: Science, Technology, Applications, and Education. 1, 29-39 (2010).
    4. Honig, M., Hume, R. I. DiI and DiO: versatile fluorescent dyes for neuronal labelling and pathway tracing. Trends Neurosci. 13, 333-335 (1989).
    5. Honig, M. G., Hume, R. I. Fluorescent carbocyanine dyes allow living neurons of identified origin to be studied in long-term cultures. J Cell Biol. 103 (1), 171-187 (1986).
    6. Schwartz, M., Agranoff, B. W. Outgrowth and maintenance of neurites from cultured goldfish retinal ganglion cells. Brain Res. 206 (2), 331-343 (1981).
    7. Li, Y., Song, Y., Zhao, L., Gaidosh, G., Laties, A. M., Wen, R. Direct labeling and visualization of blood vessels with lipophilic carbocyanine dye DiI. Nat Protoc. 3 (11), 1703-1708 (2008).
    8. Kuo, T. H., Kowalko, J. E., DiTommaso, T., Nyambi, M., Montoro, D. T., Essner, J. J., Whited, J. L. Evidence of TALEN-mediated gene editing of an endogenous locus in axolotl. Regeneration. 2 (1), 37-43 (2015).
    9. Brockes, J. P., Kumar, A. Appendage Regeneration in Adult Vertebrates and Implications for Regenerative Medicine. Science. 310 (5756), 1919-1923 (2005).
    10. Smith, A. R., Wolpert, L. Nerves and angiogenesis in amphibian limb regeneration. Nature. 257 (5523), 224-225 (1975).

    الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

    إعادة الطباعة والأذونات

    طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

    طلب إذن

    الوسوم

    مقالات ذات صلة