مقالة منهجية

إعداد حويصلات غشاء البلازما من خلايا نخاع العظم الخلايا الجذعية الوسيطة لاحتمال استبدال السيتوبلازم العلاج

DOI:

10.3791/55741

⸱

مايو 18, 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Multidisciplinary Research Center, Shantou University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ترتبط الأمراض المرتبطة بالعمر مع عيوب متعددة في مكونات السيتوبلازم. هنا، نقدم بروتوكول لإعداد الحويصلات غشاء البلازما من الخلايا الجذعية نخاع العظم الوسيطة. ويمكن استخدام هذه التقنية كوسيلة للعلاج استبدال السيتوبلازم لتحسين أو حتى عكس الظواهر المرتبطة بالعمر.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لقد سبق أن أبلغنا عن توليد حويصلات غشاء البلازما (بمفس) من خلال البثق الميكانيكي للخلايا الثدييات. اندماج من بمفس مع خلايا Ro0 ناقصة الميتوكوندريا استعادة النشاط الانقسامي في ظل ظروف الثقافة العادية. تصلب الشرايين، داء السكري من النوع الثاني، مرض الزهايمر، والسرطان هي الأمراض المرتبطة بالعمر التي تم الإبلاغ عنها أن ترتبط بالعديد من العيوب الميكانيكية والوظيفية في السيتوسول وعضيات مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا. الخلايا الجذعية الوسيطة النخاع العظم (بمسك) تمثل خلية فريدة من السكان من نخاع العظام التي تمتلك قدرات التجديد الذاتي مع الحفاظ على تعددها. مكملات خلايا الشيخوخة مع السيتوبلازم الشباب من بمسس ذاتي عن طريق الانصهار من بمفس يوفر نهجا واعدا لتحسين أو حتى عكس الظواهر المرتبطة بالعمر. يصف هذا البروتوكول كيفية إعداد بمفس من بمسك عن طريق قذف من خلال غشاء البولي مع 31؛ م المسام، وتحديد وجود الميتوكوندريا وفحص الحفاظ على إمكانات الغشاء داخل بمفس باستخدام المجهر متحد البؤر، وتركيز بمفس بواسطة الطرد المركزي، وتنفيذ الحقن في الجسم الحي من بمفس في عضلة الساق من الفئران.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد كرس قدرا هائلا من الجهد لوضع نهج للعلاجات الجينات والإنزيم، واستبدال الخلايا. وقد أدى هذا إلى اختراقات كبيرة وحتى التطبيقات السريرية 1 ، 2 ، 3 . في الآونة الأخيرة، تم تطبيق العلاج البديل الميتوكوندريا المثير للجدل على أساس تكنولوجيا نقل النواة إلى الإخصاب في المختبر للنساء في سن الشيخوخة أو تحمل طفرات الحمض النووي الميتوكوندريا القاتلة 4 . العيوب الموجودة في الأمراض المرتبطة بالعمر، بما في ذلك تصلب الشرايين، داء السكري من النوع 2، مرض الزهايمر، والسرطان، وعادة ما تكون متعددة الأوجه. وقد تم توثيق أن تراكم قطرات الدهون. وترسب البروتين اميلويد. الاحتفاظ بالبروتينات تكشفت في الشبكة إندوبلازميك. و بروتاسوم معيبة، أوتوفاغوسوم، والميتوكوندريا تسهم في تطوير أو تفاقم هذه الأمراض"كريف"> 5 ، 6 ، 7 ، 8 ، 9 ، 10 ، 11 . في الوقت الحاضر، لا توجد آلية متاحة تهدف إلى معالجة مباشرة من خلل في السيتوسول والعضيات، والذي يسبب شيخوخة والشيخوخة المظاهر.

لقد ذكرنا سابقا على توليد حويصلات غشاء البلازما (بمفس) من خلال البثق الميكانيكي للخلايا الثدييات 12 . وباستثناء النواة، تم العثور على مكونات في الغشاء أو السيتوسول، بما في ذلك البروتينات والحمض النووي الريبي، وكذلك العضيات، مثل الميتوكوندريا، في بمف. أساسا، يمكن أن ينظر إلى بمف على أنه خلية مصغرة مستأصلة. الأهم من ذلك، اندماج من بمفس مع خلايا Ro0 الناقصة الميتوكوندريا استعادة النشاط الانقسامي في ظل ظروف الثقافة العادية. هذا هو أول تقرير عن إستابليشينج نهجا يحتمل أن تكون فعالة لعلاج السيتوبلازم استبدال.

نخاع العظم الخلايا الجذعية الوسيطة (بمسك) هي الخلايا السلف متعددة الأشكال التي يتم إنشاؤها بشكل روتيني من نخاع العظام ويتم توسيعها بسهولة في الثقافة. وقد تم الكشف عن علامات الخلايا الجذعية الجنينية Oct4، نانوغ، و SOX2 عند مستويات منخفضة في مسس 13 . نشاط تيلوميراز هو أيضا قابلة للقياس. وبالإضافة إلى ذلك، فإن عدم وجود جزيئات التحفيز المشترك وجزيئات مستضد الكريات البيض البشرية (هلا) من الدرجة الثانية، فضلا عن انخفاض هلا الفئة الأولى التعبير على اللجان الدائمة، وجعلها خلايا مثالية ل ألوجنيك، أو "من على الرف"، واستخدام في سواء الطب التجديدي والتطبيقات المناعية 14 .

هنا، نحن تصف كيفية إعداد بمفس من الماوس بمسس عن طريق قذف من خلال غشاء البولي مع المسام 3 ميكرون، وتحديد وجود الميتوكوندريا ودراسة الحفاظ على إمكانات الغشاء في بمفس باستخدام كونفوكالمجهر، وإعداد المركزة بمفس ولكن لا تجميعها بواسطة الطرد المركزي، وتنفيذ الحقن في الجسم الحي من بمفس في عضلة الساق من الفئران.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم شراء 8 إلى 12 الفئران بالب / ج عمرها أسبوع واحد من مركز شنغهاي التجريبية الحيوانية (شنغهاي، الصين)، وتربية في منشأة حيوانية خالية من مسببات الأمراض ومكيفة محددة. وكانت رعاية الحيوان والإجراءات التجريبية متوافقة مع المبادئ التوجيهية لاستخدام ورعاية الحيوانات المختبرية التي أنشأتها جامعة شانتو.

1. جمعية الجهاز

  1. لضمان العقم، بدوره على ضوء الأشعة فوق البنفسجية من هود ثقافة الأنسجة لمدة 30 دقيقة قبل الاستخدام.
  2. فك وحدة تصفية 25 مم القابل للتصرف وغمر غطاء وأسفل الوحدة في كوب زجاجي 200 مل مليئة الايثانول 75٪ لمدة 30 دقيقة. تتكون الوحدة من البولي بروبلين الطبي.
  3. التقاط غطاء وأسفل الوحدة باستخدام ملقط، هزة من الايثانول المتبقية باليد، والسماح للأجزاء للهواء الجاف لمدة 10 دقيقة في غطاء محرك السيارة.
  4. الرطب غشاء البولي 19 ملم في برنامج تلفزيوني ووضعه بعناية على رأس مصفوفة دعم بوتوم من الوحدة. فيلم البوليمر لديه على نحو سلس، سطح مستو والمسار المحفور 3 ميكرون المسام.
  5. أعد تجميع الوحدة عن طريق شد الغطاء بإحكام ضد القاع. تأكد من أن الغشاء لا يتم إزاحة من المركز.
  6. إزالة الإبرة من حقنة الأنسولين 1 مل ورسم 1 مل من برنامج تلفزيوني. إرفاق حقنة إلى وحدة التصفية ومن ثم دفع برنامج تلفزيوني من خلال وحدة لرطب التجمع واختبار إذا كان هناك أي تسرب.

2. جيل من حويصلات غشاء البلازما (بمفس)

  1. إنشاء ثقافة بمسك، كما ذكرت نيميث وآخرون. 15 ، في وسط ثقافة دمم تحتوي على 15٪ فبس و 1٪ البنسلين / الستربتومايسين. زراعة الخلايا في لوحة 6 جيدا في حاضنة ترطيب تحتوي على 5٪ كو 2 عند 37 درجة مئوية.
  2. لنشر الخلايا، وإزالة الوسط والثقافة وشطف جيدا مع 0.5 مل من بس خالية من الكالسيوم.
  3. إضافة 0.5 مل من 0.25٪ التربسين-إدتا واحتضان الخلايا عند 37 درجة مئويةلمدة 3 دقائق. اضغط على لوحة ضد كف اليد بضع مرات لتسهيل مفرزة الخلية. وقف الهضم بإضافة 1 مل من الوسط الثقافي.
  4. جمع الخلايا في أنبوب مخروطي 15 مل وتدور في 200 x ج لمدة 2 دقيقة في جهاز الطرد المركزي أعلى مقاعد البدلاء. ريسوسبيند الخلايا في 4 مل من زراعة المتوسطة وقسامة الخلايا إلى بئرين من لوحة 6 جيدا.
    ملاحظة: الخلايا تصل عادة التقاء في حوالي 24 ساعة.
  5. لتوليد بمفس، وحصاد الخلايا من بئر واحدة (حوالي 5 × 10 5 خلايا) من لوحة 6 جيدا عن طريق التريبسين الهضم و مونوديسبيرز الخلايا في 0.5 مل من وسط الاستزراع.
  6. تحميل الخلايا في حقنة الأنسولين، إرفاقه إلى وحدة التصفية، ودفع المكبس بسرعة للضغط على الخلايا من خلال التصفية. تجاهل المتوسطة مقذوف لأنه يجب أن يكون هناك سوى بضعة بمفس داخله.
  7. تحميل 0.5 مل إضافية من المتوسطة في حقنة ودفعه بسرعة من خلال مرشح. جمع وسط القذف الثاني، التي تحتوي علىs بمفس من مختلف الحجم.
  8. تحميل 150 ميكرولتر من الوسط الذي تم جمعه إلى طبق من الزجاج 35 ملم القاع والسماح لل بمفس لتسوية إلى أسفل لمدة 10 دقيقة. فحص بمفس تحت مقلوب المرحلة المجهر المقابل مجهزة كاميرا كسد باستخدام عدسة الهدف 20X.

3. فحص المحتوى داخل بمفس باستخدام المجهري متحد البؤر

  1. لتنفيذ ترنسفكأيشن في بمسك، تمييع 2 ميكروغرام من دنا البلازميد سوبيركويلد و 6 ميكرولتر من كاشف ترنسفكأيشن الموجبة (على سبيل المثال، بوليجيت) في 50 ميكرولتر من دمم خالية من مصل الدم. دوامة لخلط جيدا وتدور لفترة وجيزة لجمع كل السائل من جانبي الأنبوب.
  2. إضافة الحل المخفف (من الخطوة 3.1) قطرة في حل الحمض النووي المخفف، دوامة بقوة لمدة 1 دقيقة، وتدور لفترة وجيزة، واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة.
  3. استبدال المتوسطة القديمة على بمسكس، التي تم تصنيفها في حوالي التقاء 30٪ بين عشية وضحاها، مع 2 مل من وسط ثقافة جديدة وإضافة دنA ترنسفكأيشن خليط قطرة.
  4. استبدال مع 2 مل من المتوسطة الطازجة بعد 12 ساعة من ترنسفكأيشن.
  5. لتتبع البروتينات المحلية سيتوبلازماسيكالي، ترانسفيكت الخلايا مع البلازميد تحتوي على كاسيت التعبير إغف (بيجف-N1)، كما هو موضح أعلاه. حصاد الخلايا عن طريق التربسين الهضم 48 ساعة بعد ترنسفكأيشن لجيل بمف، كما هو موضح أعلاه.
  6. لتتبع الميتوكوندريا، وصمة عار الخلايا مع صبغ الميتوكوندريا (1 ميكرومتر، ميتوتراكر) في وسط ثقافة جديدة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
  7. للكشف عن إمكانات الغشاء من الميتوكوندريا، وصمة عار الخلايا مع سيانين صبغ جس-1 (5،5 '، 6،6'-تيتراكلورو -1،1'، 3،3'- تيترايثيلبنزيمي-دازوليلكاربوسيانين يوديد) (10 ميكروغرام / مل) في وسط الزراعة الطازجة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
    1. غسل الخلايا مع 0.5 مل من برنامج تلفزيوني ثلاث مرات ومن ثم حصاد الخلايا عن طريق التربسين الهضم لجيل بمف، كما هو موضح أعلاه.
    2. تحميل 150 ميكرولتر من ميد جمعهاأيوم في طبق من الزجاج القاع 35 ملم والسماح لل بمفس لتسوية إلى أسفل لمدة 10 دقيقة. فحص بمفس تحت المجهر متحد البؤر باستخدام عدسة الهدف النفط 100X.
  8. للكشف عن إغف أو صبغ الميتوكوندريا، بدوره على الليزر 488 نانومتر وجمع إشارة في 505-530 نانومتر. للكشف عن جس-1، تشغيل الليزر 488 نانومتر و 543 نانومتر وجمع الإشارات في 505-530 نانومتر و 560-615 نانومتر. تعيين قيمة الثقب إلى حوالي 1.4.

4. إعداد بمفس المركزة بواسطة الطرد المركزي

  1. حصاد الخلايا عن طريق التربسين الهضم وتوليد بمفس، كما هو موضح أعلاه، في 0.5 مل من وسط الثقافة.
  2. تدور بمفس في 1200 x ج في الطرد المركزي بينشتوب لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. نضح بعناية طاف و ريسوسبيند بيليه في 100 ميكرولتر من وسط الثقافة مع دوامة لطيف.
  3. تحميل 50 ميكرولتر من بمفس في طبق 35 مم الزجاج السفلي والسماح لهم لتسوية في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة. فحص بمفستحت المجهر متحد البؤر باستخدام عدسة الهدف النفط 40X.
  4. إضافة سلسلة من محلول بولي إثيلينيمين المخفف (بي) إلى ثقافة بمسك لمدة 1 ساعة والتحقق من وجود علامات السمية الخلوية.
    ملاحظة: هنا، تم اختيار بي في 2 ميكروغرام / مل لأنه لم يتم الكشف عن أي علامة على سمية في بمسك.
  5. حصاد الخلايا عن طريق التربسين الهضم وإضافة بي في 2 ميكروغرام / مل لمدة 1 ساعة لشحن غشاء الخلية كوسيلة لمنع التجميع. توليد بمفس، كما هو موضح أعلاه، في 0.5 مل من وسط الثقافة. تركيز بمفس وفحصها تحت المجهر متحد البؤر، كما هو موضح أعلاه.

5. حقن بمفس في العضلات غاسترونيميوس

  1. لصمة عار الغشاء، إضافة سم-دي (الكلوروميثيل ديكال-إندوكاربوسيانين) (10 ميكرومتر) صبغ في 1 مل من وسط ثقافة جديدة إلى بمسك لمدة 30 دقيقة.
  2. حصاد الخلايا (حوالي 5 × 10 5 ) عن طريق التربسين الهضم و ريسوسبيند لهم في 0.5 مل من وسط الثقافة. إضافة بي (2 ميكروغرام / مل) ل 1ح. توليد وتركيز بمفس في 100 ميكرولتر من الوسط والثقافة، كما هو موضح أعلاه.
  3. تخدير بال / c الماوس عن طريق حقن الصوديوم باربيتال (10 ملغ / كلغ) بعد 12 ساعة من الصيام.
  4. تنظيف خارج العضلات الساق مع 75٪ من الإيثانول. حقن ببطء بمفس (100 ميكرولتر) في عضلة الساق باستخدام حقنة الانسولين 30 G.
  5. بعد إعطاء التخدير، ضع الشاش الرطب على العينين لمدة التجربة ودافئة الماوس مع ضوء ساطع حتى يستيقظ. منزل الماوس وحده في قفص التهوية الفردية.
  6. لحصاد العضلة الساق 12 ساعة بعد العملية، وقتل الماوس عن طريق خلع عنق الرحم.
  7. رش الإيثانول 75٪ على عضلة الساق، وفتح الجلد مع مقص، وقطع كامل عضلة الساق في كلا الطرفين.
  8. شطف العضلات مع برنامج تلفزيوني ودراسة تحت المجهر مضان باستخدام عدسة الهدف 20X.
  9. تقليم العضلات معشفرة حلاقة حادة لإزالة الأجزاء مع عدم وجود مضان. قطع الأجزاء مع مضان أحمر قوي في حوالي 9 ملم 3 مكعبات.
  10. تضمين كل مكعب في الأمثل درجة حرارة القطع المتوسطة (أكتوبر)، غمره في النيتروجين السائل لمدة 5 دقائق، وتخزينه في الفريزر -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.
  11. قطع المقاطع المجمدة إلى قطع 20 ميكرون سميكة باستخدام ناظم البرد والتمسك كل قسم على شريحة زجاجية. شطف القسم مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني.
  12. رسم دائرة حول القسم مع القلم دائرة وصمة عار وإضافة 100 ميكرولتر من دابي (1 ميكروغرام / مل). نضح الحل دابي بعد 10 دقيقة من الحضانة في درجة حرارة الغرفة في الظلام وغسل ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني.
  13. إسقاط تصاعد النفط على العينة، وتغطيته مع زلة الزجاج، وختم الشريحة مع طلاء الأظافر. فحص القسم تحت المجهر متحد البؤر باستخدام عدسة الهدف النفط 100X.
  14. للكشف عن سم-دي، بدوره على الليزر نانومتر 543 وجمع إشارة في 560-615 نانومتر. لاكتشاف دابي، شغل 405نانومتر الليزر وجمع إشارة في 420-480 نانومتر. تعيين قيمة الثقب إلى حوالي 1.4.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مفتاح الإعداد الناجح لل بمفس يعتمد بشكل كبير على التجمع الصحيح للوحدة مرشح ( الشكل 1 )، والتي يمكن اختبارها عن طريق دفع 1 مل من برنامج تلفزيوني من خلال الغشاء. في حالة حدوث تسرب، أعد تجميع وحدة المرشح واختبر مرة أخرى. ومع ذلك، لا يمكن إلا أن يتم اختبار تسرب موثوق عندما يتم دفع الخلايا من خلال الغشاء. إذا تم الكشف عن عدد قليل فقط من بمف تحت المجهر العادي باستخدام الهدف 10X، أو إذا كان حجم بمف في الغالب حوالي 1 ميكرون، وهذا من شأنه أ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

العلاج ببدائل السيتوبلازم كما هو مقترح في هذه المخطوطة له مزايا فريدة مقارنة بالأساليب الأخرى المبلغ عنها مثل العلاج الجيني والجزيئي والخلاوي. لا تغلف PMVs المتولدة من BMSCs منتجات جينات الجذع فحسب ، بل تشمل أيضا العضيات الخلوية السليمة ، والتي تعتبر ضرورية لعلاج الأنماط الظاهرية للشيخوخة المرتبطة بالشيخوخة. عندما يتم تسليم السيتوبلازم الصغير إلى الخلايا الشائخة ، قد تكتسب الآليات المعطلة راحة قصيرة. في الوقت نفسه ، يمكن إعادة برمجة Epigenome وتنشيطه لتوفير تأثير طويل الأمد. بالإضافة إلى ذلك ، قد يكون للميتوكوندريا الخار...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا البحث من قبل مؤسسة لي كا شينغ، ومشروع جامعة قوانغدونغ رفيع المستوى "التكنولوجيات الخضراء للصناعات البحرية"، ومؤسسة العلوم الطبيعية في الصين (http://www.nsfc.gov.cn/ منحة رقم 30971665، 81172894، 81370925)، وقسم التعليم في قوانغدونغ (http://www.gdhed.edu.cn/ منحة رقم cxzd1123).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أغشية IsoporeTMMilliporeTSTP047003 مم مسام
وحدة تصفية يمكن التخلصمنها Xinya ، شنغهاي ، الصين25 ممالأنسولين البولي بروبيلين الطبية
BD3284461 مل
pN1-EGFPClontech  ؛ 6085-1
المجسات الجزيئيةMitoTrackerM7514الأخضر FM ، 1 & M
JC-1Beyotime ، Haimen ، الصينC200610 مجم / مل
CM-DiIBeyotime ، Haimen ، الصينC103610 ملي متر
PEISigmaP3143Mn = 75,000
مجهر مضاننيكونEclipse TE 2000مع كاميرا CCD
Confocol MicroscopeCarl ZeissLSM 510 Meta
PolyJetSigaGenSL100688لتعداء الخلايا
حقنة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Abe, A., Miyanohara, A., Friedmann, T. Enhanced gene transfer with fusogenic liposomes containing vesicular stomatitis virus G glycoprotein. J Virol. 72 (7), 6159-6163 (1998).
  2. Dolatabadi, J., Valizadeh, H., Hamishehkar, H. Solid lipid nanoparticles as efficient drug and gene delivery systems: recent breakthroughs. Adv Pharm Bull. 5 (2), 151-159 (2015).
  3. Torchilin, V. P. Multifunctional, stimuli-sensitive nanoparticulate systems for drug delivery. Nat Rev Drug Discov. 13 (11), 813-827 (2014).
  4. Wolf, D. P., Mitalipov, N., Mitalipov, S. Mitochondrial replacement therapy in reproductive medicine. Trends Mol Med. 21 (2), 68-76 (2015).
  5. López-Otin, C., Blasco, M. A., Partridge, L., Serrano, M., Kroemer, G. The hallmarks of aging. Cell. 153 (6), 1194-1217 (2013).
  6. Plakkal, J., Paul, A. A., Goo, Y. H. Lipid droplet-associated proteins in atherosclerosis. Mol Med Rep. 13 (6), 4527-4534 (2016).
  7. Hoppener, J. W. M., Ahren, B., Lips, C. J. M. Islet amyloid and type 2 diabetes mellitus. N Engl J Med. 343 (6), 411-419 (2000).
  8. Jagust, W. Is amyloid-β harmful to the brain? Insights from human imaging studies. Brain. 139 (Pt 1), 23-30 (2016).
  9. Naidoo, N. The endoplasmic reticulum stress response and aging. Rev Neurosci. 20 (1), 23-37 (2009).
  10. Cuervo, A. M. Autophagy and aging: keeping that old broom working. Trends Genet. 24 (12), 604-612 (2008).
  11. Bratic, A., Larsson, N. G. The role of mitochondria in aging. J Clin Invest. 123 (3), 951-957 (2013).
  12. Lin, H. P., et al. Incorporation of VSV-G produces fusogenic plasma membrane vesicles capable of efficient transfer of bioactive macromolecules and mitochondria. Biomed Microdevices. 18 (3), 41(2016).
  13. Riekstina, U., et al. Embryonic stem cell marker expression pattern in human mesenchymal stem cells derived from bone marrow, adipose tissue, heart and dermis. Stem Cell Rev. 5 (4), 378-386 (2009).
  14. Purandare, B., Teklemariam, T., Zhao, L. M., Hantash, B. M. Temporal HLA profiling and immunomodulatory effects of human adult bone marrow- and adipose-derived mesenchymal stem cells. Regen Med. 9 (1), 67-79 (2014).
  15. Nemeth, K., Mayer, B., Sworder, B. J., Kuznetsov, S. A., Mezey, E. A practical guide to culturing mouse and human bone marrow stromal cells. Curr Protoc Immunol. 102, Unit 22F.12 (2013).
  16. Shahabipour, F., et al. Exosomes: Nanoparticulate tools for RNA interference and drug delivery. J Cell Physiol. , [Epub ahead of print (2017).
  17. Lamichhane, T. N., et al. Emerging roles for extracellular vesicles in tissue engineering and regenerative medicine. Tissue Eng B. 21 (1), 45-54 (2015).
  18. Baumgart, T., et al. Large-scale fluid/fluid phase separation of proteins and lipids in giant plasma membrane vesicles. Proc Natl Acad Sci. 104 (9), 3165-3170 (2007).
  19. Sezgin, E., et al. Elucidating membrane structure and protein behavior using giant plasma membrane vesicles. Nat Protoc. 7 (6), 1042-1051 (2012).
  20. Lingwood, D., Ries, J., Schwille, P., Simons, K. Plasma membranes are poised for activation of raft phase coalescence at physiological temperature. Proc Natl Acad Sci. 105 (29), 10005-10010 (2008).
  21. Pandey, A. P., Sawant, K. K. Polyethylenimine: A versatile, multifunctional non-viral vector for nucleic acid delivery. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 68, 904-918 (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

gastrocnemius

مقالات ذات صلة