يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

سيكتيونينغ الغدة الثديية يتصاعد كله لتحديد الآفة

10.6K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/55796

⸱

يوليو 24, 2017

 ,  ,  , 
1Curriculum in Toxicology, University of North Carolina at Chapel Hill, 2National Toxicology Program Laboratory (NTPL), DNTP, National Institute of Environmental Health Sciences, 3Cellular and Molecular Pathology Branch, DNTP, National Institute of Environmental Health Sciences, 4Charles River Laboratories Inc.

في هذه المقالة

ملخص

قمنا بتطوير طريقة لإزالة بنجاح، عملية، قسم، وصمة عار، للتقييم الأنسجة، الأنسجة الثديية التي كانت أصلا تم إصلاحها على الشرائح كما يتصاعد كله. هذا الأسلوب قد تعزز جمع وتقييم الغدة الثديية يتصاعد كله في الدراسات الإرشادية الإنجابية والتنموية اختبار.

الملخص

قد يتغير تطور الغدة الثديية العادية عن طريق التعرض للمواد السامة والبيئية، والتعرض المفرط للهرمونات، والتغيرات الجينية. الغدة الثديية يتصاعد كله هي وسيلة غير مكلفة لالتقاط تطور التغيرات المورفولوجية التي قد تنشأ بعد التعرض. ومع ذلك، في الحياة في وقت لاحق، عندما تشوهات أكثر عرضة للتطور، والاعتماد الوحيد على هذه الطريقة واحدة قد لا توفر دائما ما يكفي من المعلومات لإجراء التشخيص المناسب للشذوذ. تاريخيا، في الدراسات التوجيهية اختبار الكيمياء اختبار، يتم إزالة الغدة الثديية واحدة في التشريح وإعدادها على شكل هيماتوكسيلين و يوسين (H & E) -insted القسم. دمج المقابل الثديي بأكمله جبل جمع وتحليل يقلل من احتمال تقييم سلبية كاذبة. تقييم جبل كله يقتصر وجود واحد أو اثنين من الغدد الثديية بأكملها على شريحة، وفي بعض الحالات، فإن تشوهات لوحظ في جبل كله لاt ممثلة بشكل موحد في قسم H & E. وكان الهدف من هذه الدراسة لتطوير بروتوكول لتحويل يتصاعد كامل الثديي كوفيرسليبد إلى أقسام H & E الملون بحيث الآفات التي من شأنها أن تكون قد غاب عن ذلك أو التي يصعب تشخيصها يمكن تحديدها. هنا، ونحن بالتفصيل طريقة لإنتاج عالية الجودة، جزءا لا يتجزأ من البارافين H & E القسم من الغدة الثديية التي تم إعدادها في البداية كما جبل بأكمله. بالمقارنة مع الأنسجة التي أعدت عمدا ل H & E سيكتيونينغ، جبل كله يتطلب إعداد إضافي لإزالة الأنسجة ومعالجتها. ومع ذلك، تعتبر هذه الطريقة غير مكلفة، لأنها تتطلب الكواشف مختبر مشترك وقليل من الوقت الإضافي. ونتيجة لذلك، يمكن أن توفر هذه الطريقة معلومات لا تقدر بثمن حول كيفية التعرض الكيميائية والبيئية تغير تطور الثديية العادية، فضلا عن تغييرات العرض التي تحدث بسبب التعديلات الجينية.

المقدمة

الثديية بأكملها مونتيس طريقة مفيدة وغير مكلفة تنفيذها في العديد من الفئران والفأر الدراسات لفهم كل من الطبيعي والمستحثة كيميائيا، والتنمية غير طبيعية. بشكل عام، فإن الغدة الثديية التي تم جمعها في مراحل مختلفة خلال تطوير القوارض ( أي المراهقة، سن البلوغ، منتصف إلى وقت متأخر من الحمل، ومرحلة الانقلاب) تظهر التغيرات المورفولوجية في الأنسجة والهندسة المعمارية الخلوية تتأثر عوامل الغدد الصماء، والغدد الصماء، 1 - في الفئران الشيخوخة، وأجزاء الظهارية والانسجة من الغدة تصبح على نحو متزايد كثيفة، مما يجعل قياس المعلمات المورفولوجية صعبة في جبل بأكمله. وبالتالي، فمن الممارسة الشائعة لجمع غدة للتقييم النسيجي لتحديد التغيرات على مستوى المجهري. كلا العمليتين مفيدة بشكل خاص في الدراسات التي تنطوي على التعرض الكيميائي ( أي البيئية، أو الصيدلانية) أو لدراسة التغيرات المورفولوجية المصحوبة بتعديل وراثيبالجمع.

التقنيات والقدرات لاستخدام الغدة الثديية في تقييم المخاطر تستمر في التطور. في حين أن إعداد كامل جبل هو روتيني وموحدة، والتعديلات على باجتزاء تستمر 2 ، 3 . العديد من المجموعات البحثية من مختلف الخلفيات ( أي الأوساط الأكاديمية والحكومة والصناعة) تكيفت أقسام الاكليلية / الطولية من الأنسجة الثديية كطريقة مفضلة، في حين أن بعض المختبرات لا تزال تستخدم المقاطع عبر قطع من خلال الجلد 4 . هذا الأسلوب الأخير ينتج في تمثيل غير عادي للبشرة (الجلد)، بدلا من الأنسجة من الفائدة: ظهارة الغدة الثديية 2 . أقسام الاكليلية أو الطولية هي أكثر فائدة لتوصيف الأنسجة الطبيعية 5 وتحسين كبير في الكشف عن تشوهات والآفات بسبب زيادة مساحة السطح وعدد من الهياكل الحالية. عموما، وهذا يجعل مو كلهونت طريقة مناسبة للتقييم النسيجي المرضي للغدة الثديية 1 ، 2 . سواء باستخدام الفأرة أو فأر، واسترجاع، والحفاظ على ال 4 و 5 تشرين الغدد الأربية ينصح بشدة للمقارنة بين جبل بأكمله إلى قسم H & E المقابل.

عندما تستخدم في تركيبة، وقسم H & E وكل جبل يوفر حساب دقيق للتغيرات الخلوية والمورفولوجية الناجمة عن التعرض البيئي. وهذا صحيح بشكل خاص في بعض سلالات القوارض التي يكون النموذج فيها قابلية منخفضة لتشكيل الورم أو ورم ليس مرئيا بشكل واضح. في بعض الظروف، الحصول على الأنسجة المطلوبة قد لا يكون ممكنا دائما باستخدام كل من التقنيات ( أي عدم كفاية كمية الأنسجة، والموارد، أو نتائج تجريبية غير متوقعة). في حالتنا، لوحظت تشوهات في جبل كامل الثديية، في حين هيستوباثوالنتائج المنطقية في المقابل H & E الغدة كانت في الغالب طبيعية. أدى الاختلاف الساحق بين الغدد المقابل لنا لتطوير إجراءات اقتصادية وفعالة لتحديد تشوهات في يتصاعد كله. باستخدام إجراء المعالجة والتضمين المعدلة، تم إعداد أجزاء عالية الجودة H & E الملون من يتصاعد كامل جزءا لا يتجزأ من البارافين. ونحن نتصور هذا البروتوكول تصبح أداة قوية للكشف عن آثار التعرض الكيميائية، وتعزيز المقارنات بين المختبرات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع استخدام الحيوان والإجراءات لهذه الدراسة من قبل نيهس مختبر الحيوان

لجنة الرعاية والاستخدام، وأجريت في جمعية للتقييم والاعتماد

مختبر رعاية الحيوان منشأة معتمدة.

1. الثديية كله جبل إعداد 2 ، 3 ، 6 ، 7

  1. إزالة الغدد الثديية الأربية من جانب واحد من غير الحامل الماوس الإناث سد-1، كما هو موضح في المرجع 3 ، ووضعها على شريحة مشحونة كهربائيا.
  2. تغطية الغدة مع ورقة غير لاصقة أو فيلم ووضع شريحة أخرى على القمة. إضافة ضغط ( أي الأوزان المياه) إلى الشريحة لنشر الغدة من شقة بحيث الغدة ستلتزم الشريحة لتثبيت.
  3. غمر الشرائح في تثبيتي (على سبيل المثال، الإيثانول 100٪، الكلوروفورم، وحمض الخليك الجليدي في نسبة 6: 3: 1)بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة.
  4. إزالة الغدد من تثبيتي وغسل في الإيثانول لمدة 15-30 دقيقة. بعد غسل لمدة 30 دقيقة، وتغير تدريجيا إلى الماء عن طريق صب 1/3 من الإيثانول وإضافة الماء. السماح للغسل الجلوس لمدة 5 دقائق في كل مرة، وتكرار مع إضافة الماء 3 مرات.
  5. وصمة عار (على سبيل المثال، حل الشبك القرمزي) لمدة 12-24 ساعة.
    ملاحظة: سوف الأنسجة سمكا تتطلب وقتا أطول تلطيخ مرات. انظر المرجع 3 للحصول على تفاصيل تلطيخ.
  6. صب قبالة وصمة عار بعد الوقت المخصص وشطف الشرائح في الماء لمدة 30 ثانية. تجفف الأنسجة عن طريق غسل الشرائح في الايثانول 70٪ لمدة 15 دقيقة، تليها أداء غسل 15 دقيقة في الايثانول 95٪ وغسل النهائي في الايثانول بنسبة 100٪ لمدة 20 دقيقة.
  7. مسح الدهون من الأنسجة عن طريق وضعها في زيلين لمدة لا تقل عن 24 ساعة، أو أطول إذا كان النسيج سميكة، بحيث تتم إزالة أي مناطق مبهمة أو بيضاء.
  8. إزالة الأنسجة من زيلين وبسرعة إضافة مأونتينغ المتوسطة إلى الشريحة لتجنب الأنسجة الجفاف. وضع ساترة على القمة. السماح للشريحة لتجف لمدة 48 ساعة على الأقل.
  9. تقييم الأنسجة مثبتة بالكامل لشذوذ، كما هو موضح في 2 .
    ملاحظة: عندما يتم الكشف عن الآفات في يتصاعد كله و سيكتيونينغ ضروري لتحديد هويتهم، يجب اتباع الخطوات التالية.

2. إزالة جبل كله الثديية من شريحة زجاجية

  1. إزالة ساترة وتصاعد المتوسطة عن طريق غمر الشريحة كامل جبل الثديية في جرة تلطيخ الزجاج مليئة زيلين بين عشية وضحاها.
    ملاحظة: قد تتطلب الأنسجة والشرائح سمكا مع حل تصاعد المفرط وقتا إضافيا لإزالة ساترة.
  2. بعد نقع بين عشية وضحاها الأولي، ضع الشرائح في الزيلين الطازجة وينقع لمدة 6 ساعات. أداء واحد نقع النهائي في الزيلين الطازجة بين عشية وضحاها.
    ملاحظة: ساترة سوف تقع بسهولة قبالة الشريحة بعد آخر نقع.
  3. مع أغأحب اليد، عقد الشريحة وإزالة بعناية ساترة مع زوج من ملقط لضمان أن تتم إزالته في قطعة واحدة.
    ملاحظة: في حالة أن ساترة لا تزال تعلق على الشريحة الزجاجية، ومواصلة تمرغ حتى يمكن إزالتها مع القليل من الجهد.
  4. مرة واحدة تتم إزالة ساترة، عقد الشريحة عموديا على طبق بيتري الزجاج التي تحتوي على الزيلين، واتخاذ بعناية حادة، شفرة حلاقة المتاح وشريحة شفرة في حركة واحدة أسفل الشريحة.
  5. مرة واحدة يتم إزالة الأنسجة، وغمر بسرعة لوحة الثديية في زيلين شغل الزجاج طبق بتري لضمان أن الأنسجة لا الهواء الجاف.
    ملاحظة: كن حذرا مع هذه الخطوة. جبل كله رقيقة (≤ 1 ملم)، وهشة من معالجة الزيلين. أي انطباعات أو دموع قد تغير مورفولوجيا الأنسجة وتعقد التقييمات في وقت لاحق.

3. تجهيز الأنسجة

  1. مرة واحدة في الأنسجة في طبق بتري، نقله بعنايةإلى كاسيت الأنسجة المسمى. الاستيلاء على حافة لوحة الدهون مع حادة-- الانف، ملقط مسننة-- ملقط للحد من تلف الأنسجة.
    1. باستخدام الحلاقة، وقطع الأنسجة الكبيرة (وخاصة بالنسبة للفئران) في نصف ووضعها في اثنين من أشرطة وصفت منفصلة من شأنها أن تستوعب حجم الأنسجة. وضع الأنسجة الجانب الأيمن حتى (استخدام العقدة الليمفاوية كمرجع). تأكد من أن الأنسجة دون العقدة الليمفاوية يتم الاحتفاظ في نفس، موقف تستقيم عندما يتم نقله إلى كاسيت.
  2. وضع الكاسيت في وعاء من الزيلين لمدة تصل إلى 2 ساعة قبل وضعها في معالج الأنسجة.
    ملاحظة: فمن المستحسن لمعالجة العينات في نفس اليوم يتم وضعها في الكاسيت. لم يتم اختبار النقع الموسعة في الزيلين.
  3. تحميل الحد الأقصى لعدد الكاسيت في معالج الأنسجة باليد.
  4. قبل البدء، برنامج جميع الكواشف التي سيتم استخدامها لهذه العملية في قائمة كاشف المعالج. لأتمتة الحركةمن محطة واحدة إلى أخرى، استخدم خيارات القائمة وإنشاء برنامج جديد. عند اكتمال جميع الخطوات، حدد "موافق" للمتابعة.
    ملاحظة: سيسمح المعالج بمراجعة جميع تفاصيل المحطة قبل البدء.
    1. أتمتة المعالج لنقع الأشرطة في زيلين لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية، تليها نقع الثانية في الزيلين الطازج في ظل نفس الظروف. أتمتة المعالج لإزالة الكاسيت من محلول زيلين ونقل الأنسجة إلى المحطة التالية التي تحتوي على 1: 1 زيلين: خليط البارافين المنصهر، تعيين في 60 درجة مئوية، لمدة 30 دقيقة.
      ملاحظة: المعالج ثم نقل أشرطة في غرفة جديدة تحتوي على البارافين المنصهر لمدة 1 ساعة. بعد 1 ساعة، سيتم نقل العينات تلقائيا إلى غرفة جديدة من البارافين المنصهر الطازج وسيتم معالجتها لمدة 2 ساعة إضافية. يتم تنفيذ كلا الخطوتين في 60 درجة مئوية.
    2. ثم يقوم المعالج بنقل الكاسيت إلى المحطة التي تحتوي على الفقرة المنصهرةفيفين لمدة 1 ساعة. ثم، يتم نقل العينات تلقائيا إلى المحطة النهائية من البارافين المنصهر الطازج ومعالجتها لمدة 2 ساعة إضافية. يتم تنفيذ كلا الخطوتين في 60 درجة مئوية.

4. تضمين الأنسجة الثديية المصنعة

  1. وضع أشرطة في 58 درجة مئوية بارافين عقد خزان من محطة التضمين حتى جاهزة لتضمين الأنسجة في القالب.
  2. إزالة غطاء كاسيت لتحديد أفضل حجم العفن للأنسجة. تأكد من أن القالب كبير بما فيه الكفاية لاستيعاب الأنسجة، وترك مساحة كافية لديك حدود خالية من الأنسجة من البارافين حول محيط.
  3. إضافة 3-4 ملم من البارافين المنصهر للقالب وتوجيه سطح كامل جبل الثديية، والتي كانت متاخمة للجزء السفلي من الشريحة الزجاجية والجزء السفلي من كاسيت، التي تواجه في القالب.
  4. نقل القالب إلى لوحة التبريد وسرعة ضبط الأنسجة حسب الحاجة بحيث يكون موازيا للقالب بottom.
    ملاحظة: مرة واحدة في بارافين يصلب، وسوف بيسكورد النسيج في المكان.
  5. باستخدام ملقط الدافئة، وضع المسمى، النصف السفلي من الكاسيت على رأس القالب؛ اضغط بقوة باستخدام ملقط.
  6. إضافة البارافين المنصهر إضافية إلى القالب في حركة مستمرة لتغطية الكاسيت بأكمله. نقل القالب من لوحة دافئة إلى لوحة الباردة لاستكمال تصلب كتلة.
  7. إزالة كتلة من القالب عندما البارافين يصلب تماما لتجنب الشقوق أو فقاعات الهواء.
    ملاحظة: تخزين الأنسجة جزءا لا يتجزأ من البارافين في درجة حرارة الغرفة حتى جاهزة للقسم.

5. سيكتيونينغ الأنسجة الثديية جزءا لا يتجزأ من البارافين على مشراح

  1. قبل سيكتيونينغ، احتضان كتل البارافين في -20 درجة مئوية لمدة 1 ساعة.
    ملاحظة: سيكون هناك المتبقية تصاعد المتوسطة في كتلة من الأصلي كوفرسليبد كامل جبل الأنسجة. تقشعر لها الأبدان كتلة يحسن تقسيم الاقسام و ريبونينغ.
  2. إعداد هيئة التصنيع العسكريدوامة من قبل تحول على حمام الماء، التي تحتوي على الماء المقطر الطازج، وضبط درجة الحرارة إلى 42-45 درجة مئوية. وضع شفرة جديدة، منخفضة الشخصي على مشراح وتعيينه في 4 ميكرون.
    ملاحظة: يتم تقليل جودة القسم مع أقسام سمكا من 4 ميكرون بسبب وجود المتوسطة المتزايدة المتبقية في الأنسجة.
  3. إدراج كتلة في مشراح مع الشمع التي تواجه شفرة ومحاذاة الطائرة العمودية. ثم، رطبة جزء من لوحة الشاش في الماء البارد ووضعه على كتلة لعدة دقائق.
  4. قسم كتلة عن طريق تحويل عجلة كبيرة في حركة عقارب الساعة، جنبا إلى جنب مع عجلة متقدمة الخشنة، حتى يتم الحصول على الوجه الكامل أو مقطع تمثيلي من كتلة.
    ملاحظة: الأنسجة رقيقة بسبب زيلين المقاصة خلال عملية جبل كامل. محاذاة كتلة بشكل صحيح مع شفرة لتقليل عدد من التخفيضات في الحصول على قسم تمثيلي.
  5. اختر الشريطقسم باليد، تعويم بعناية الشريط في دافئ (45 درجة مئوية) حمام الماء (أعدت مسبقا)، والسماح للتجاعيد الأنسجة لتبديد وتطفو بعناية قسم على شريحة زجاجية نظيفة.
  6. وضع الشرائح تستقيم على رف التجفيف لإزالة المياه الزائدة. احتضان الشرائح في مربع الشريحة فتح قليلا بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية.

6. الآلي ودليل H & E تلطيخ من الأنسجة الثديية المقسمة

  1. قبل تلطيخ، يتم تخزين الشرائح في درجة حرارة الغرفة.
  2. لتلطيخ الآلي، حدد H & E من خيارات وصمة عار على القائمة الرئيسية. ديبارافينيزاتيون، تلطيخ، والجفاف كلها اكتمال على تلطيخ الآلي. استخدام المتوسطة المتزايدة وساترة لتركيب المقاطع.
  3. إذا تلطيخ يدويا الشرائح، ديبارافينيز المقاطع عن طريق غمر الشرائح في زيلين لمدة 5 دقائق. نقل إلى الزيلين الطازجة وتكرار لمدة 5 دقائق.
  4. ترطيب الشرائح عن طريق غمر ثم مرتين في الإيثانول 100٪ لمدة 3 دقائق لكل منهما، تليها اثنين من التكرار في الطازجة الإيثانول 95٪ واثنين من يغسل منفصلة في 1X غسل العازلة في 5 دقائق لكل منهما.
  5. شطف الشرائح في الماء المقطر.
  6. إضافة الشرائح إلى الهيماتوكسيلين لمدة 1-2 دقيقة. إزالة الشرائح وشطف لهم مع تشغيل مياه الصنبور لمدة 5 دقائق.
    ملاحظة: تصفية الهيماتوكسيلين قبل كل استخدام.
  7. وضع الشرائح في حمض الخليك الجليدية 1٪ لمدة 30 ثانية لتعزيز التمايز اللون، ثم شطف في تشغيل مياه الصنبور لمدة 1 دقيقة.
  8. إضافة الشرائح إلى برنامج تلفزيوني 1X لمدة 30 ثانية إلى 1 دقيقة إلى الأزرق أقسام الأنسجة، تليها 5 دقائق شطف في مياه الصنبور ثم في 95٪ الكحول لمدة 15-20 ثانية.
  9. كونترستين مع الحل يوزين لمدة 30 ثانية إلى 1 دقيقة. بعد ذلك، يذوى الشرائح مرتين في الطازجة الايثانول 95٪، تليها اثنين من التكرار الطازجة في الإيثانول 100٪. أداء كل غسل لمدة 5 دقائق.
  10. مسح الشرائح في الزيلين، مع اثنين من التغييرات في الزيلين لمدة 5 دقائق لكل منهما.
  11. ساترةقسم الأنسجة مع تصاعد المتوسطة والجافة شقة بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

هذه الطريقة فعالة في المساعدة مع التشخيصات التي قد تكون قد غاب خلاف ذلك إذا كان المقابل الأصلي H & E القسم من لوحة الثديية لا تظهر أي تغييرات نسيجية. ومع ذلك، فإن النتيجة تكون مفيدة فقط إذا تم اتخاذ الرعاية خلال الإعداد كامل جبل الأولي، وكذلك أثناء إعداد الأنسجة للتقييم النسيجي. سوف التضمين البارافين توفير الحماية وسوف تساعد على الحفاظ على الأنسجة ل سيكتيونينغ في المستقبل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الغدة الثديية كله جبل هو أداة قوية التي يمكن استخدامها لتوضيح التطور الثديي الطبيعي والتغيرات المورفولوجية التي قد تنشأ وتستمر بعد التعرض للمواد الكيميائية، بما في ذلك اضطرابات الغدد الصماء. عندما يتم تقييم جبل كامل وقسم H & E من نفس الحيوان معا، فإنها يمكن أن توفر لقطة بصرية دقيقة من التعديلات في وقت مبكر، والتي يمكن أن تتحول إلى حالة أكثر مريضا.

القدرة على الحصول على هذه المعلومات المفيدة تكمن في ضمان أن تؤ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين أي مصالح متضاربة للإعلان فيما يتعلق بالبحث، أو التأليف، و / أو نشر هذه المقالة.

شكر وتقدير

ويود المؤلفون أن يعترفوا بام باموفويغو، وتينيت جونز، وناتاشا كلايتون، نيهس، بخبرتهم الفنية ودعمهم لهذا المشروع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
وسائط تركيب XyleneSigma-Aldrich214736
PermountThermo Fisher ScientificSP15-100لتغطية الحوامل الكاملة و H& الأقسام E
المعالج الآليلايكا الحيويةنموذج # ST5020
HM 355S الأوتوماتيكي ميكروتومثيرمو فيشر العلمية 905200
البارافينلايكا بيوأنظمةEM-400
Superfrost plus شرائح المجهرThermo Fisher Scientific4951PLUS-001مشحونة إلكتروستاتيكيا
فيشر أرقى 24x60x1ثيرمو فيشر Scientific12-548-5Pأغطية
Varistain Gemini ES ملطخ منزلقأوتوماتيكي Thermo Fisher ScientificA78000014
Sta-OnLeica Biosystems3803107مادة لاصقة سائلة ؛ تستخدم في الحمام المائي عند التقطيع
Harris Hematoxylin المعدل 72711Richard-Allan Scientific (جزء من Thermo Scientific)72711
EosinLeica Biosystems3801600
كربونات الليثيوممختبرات SkyTechLCQ500
حمض الخليك الجليديالحراري فيشر ساينتفيكA38-500المطلوب في
كلوروفورمماكرون للكيماويات الدقيقة4440-04المطلوبة في الإيثانول المثبت 100٪ من كارنوي
6505001050000 شركة وارنر جراهاممطلوبة في شرائح التثبيت والغسيل من كارنوي
95٪ إيثانولشركة وارنر جراهام6505011137320190
الشب كارمينSigma-AldrichC1022-25G
كبريتات البوتاسيوم الألومنيوم دوديكاهيدرات ، سيجما التراسيجما-ألدريتشA7210-500G
عازلة غسيل أتمتة ، 20XBiocare MedicalTWB945
ماكرون المثبت من كارنوي

المراجع

  1. Rudel, R. A., Fenton, S. E., Ackerman, J. M., Euling, S. Y., Makris, S. L. Environmental exposures and mammary gland development: State of the science, public health, implications, and research recommendations. Environ Health Perspect. 119 (8), 1053-1061 (2011).
  2. Keenan, K. P., Wallig, M. A., Hascheck, W. M. Nature via Nurture: Effect of Diet on Health, Obesity, and Safety Assessment. Toxicol Pathol. 41 (2), 190-209 (2013).
  3. Stanko, J. P., Fenton, S. E. Quantifying branching density in rat mammary gland whole mounts using the Sholl analysis method. J Vis Exp. , In press (2017).
  4. Toxicology Program, N. ational Specifications for the conduct of studies to evaluate the toxic and carcinogenic potential of chemical, biological, and physical agents in laboratory animals for the national toxicology program (NTP). National Toxicology Program, National Institutes of Environmental Health Sciences. , Research Triangle Park, NC. Available from: http://ntp.niehs.nih.gov/ntp/test_info/finalntp_toxcarspecsjan2011.pdf (2011).
  5. Toxicology Program, N. ational Specifications for the conduct of studies to evaluate the reproductive and developmental toxicity of chemical, biological, and physical agents in laboratory animals for the National Toxicology Program (NTP). National Toxicology Program, National Institutes of Environmental Health Sciences. , Research Triangle Park, NC. Available from: http://ntp.niehs.nih.gov/ntp/test_info/finalntp_reprospecsmay2011_508.pdf (2011).
  6. Mammary gland whole mount processing and staining. , Available from: http://www.cpl.colostate.edu/pathology/protocols/wm.htm (2016).
  7. Whole mount preparations. , Available from: http://www.protocol-online.org/cgi-bin/prot/view_cache.cgi?ID=2149 (2016).
  8. Filgo, A. J., et al. Mammary gland evaluation in juvenile toxicity studies: Temporal developmental patterns in the male and female Harlan Sprague Dawley Rat. Toxicol Pathol. 44 (7), 1034-1058 (2016).
  9. Tucker, D. K., Foley, J. K., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. Preparation of high-quality hematoxylin and eosin-stained sections from rodent mammary gland whole mounts for histopathologic review. Toxicol Pathol. 44 (7), 1059-1064 (2016).
  10. Hvid, H., Thorup, O., Oleksiewicz, M. B., Sjogren, I., Jensen, H. E. An alternative method for preparation of tissue sections from the rat mammary gland. Exp Toxicol Path. 63 (4), 317-324 (2011).
  11. Munoz-de-Toro, M., et al. Perinatal exposure to bisphenol-A alters peripubertal mammary gland development in mice. Endocrinology. 146 (9), 4138-4147 (2005).
  12. Padilla-Banks, E., Jefferson, W. N., Newbold, R. Neonatal exposure to the phytoestrogen genistein alters mammary gland growth and developmental programming of hormone receptor levels. Endocrinology. 147 (10), 4871-4882 (2006).
  13. Nikaido, Y., et al. Effects of maternal xenotestrogen exposure on development of the reproductive tract and mammary gland in female CD-1 mouse offspring. Reprod Toxicol. 18 (6), 803-811 (2004).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

سيكتيونينغ الغدة الثديية يتصاعد كله لتحديد الآفة
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.