مقالة منهجية

تسجيل اللدونة متشابك في شرائح هيبوكامبال الحاد تحتفظ في صغيرة الحجم-إعادة التدوير، ونضح-، وغمر من نوع نظام الدائرة

DOI:

10.3791/55936

⸱

يناير 1, 2018

 ,  ,  , 
1The Institutes of Brain Science, the State Key Laboratory of Medical Neurobiology, the Collaborative Innovation Center for Brain Science, Fudan University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويصف هذا البروتوكول تحقيق الاستقرار في مستوى الأوكسجين في كمية صغيرة من المخزن المؤقت المعاد تدويرها والجوانب المنهجية لتسجيل تعتمد على النشاط اللدونة متشابك في شرائح هيبوكامبال الحاد المغمورة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

على الرغم من أن التجارب التي أجريت على شرائح المخ كانت تستخدم منذ عام 1951، ما زالت المشاكل التي تقلل من احتمال تحقيق تحليلاً مستقرة وناجحة للتحوير انتقال متشابك عند إجراء التسجيلات الميدانية المحتملة أو داخل الخلايا. هذه المخطوطة يصف الجوانب المنهجية التي قد تكون مفيدة في تحسين الظروف التجريبية للحفاظ على شرائح الدماغ الحادة وتسجيل إمكانات بوستسينابتيك ضادات الميدانية في دائرة غمر متاحة تجارياً مع وحدة كاربوجينيشن إلى الخارج. ويساعد التدفق--كاربوجينيشن لتحقيق الاستقرار في مستوى الأوكسجين في التجارب التي تعتمد على إعادة تدوير الخزان العازلة الصغيرة لتعزيز فعالية التكاليف التجارب المخدرات. وبالإضافة إلى ذلك، يعرض المخطوطة تجارب الممثل أن دراسة آثار أنماط كاربوجينيشن مختلفة ونماذج التحفيز على اللدونة متشابك تعتمد على نشاط انتقال متشابك.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في عام 1951، كانت التجارب شريحة الدماغ الحادة التي ذكرت أول أجرى1. في عام 1971، بعد التسجيلات الناجحة في المختبر من الكمثرى قشرة2،3 واكتشاف أن الخلايا العصبية هيبوكامبال مترابطة العرض على طول المحور سيبتوتيمبورال الحصين4، واحدة من وكان أول التسجيلات في المختبر لنشاط الخلايا العصبية هيبوكامبال حققت5. التشابه بين المعلمات العصبية أو نيوروستروكتورال من الخلايا العصبية تحت ظروف فيفو في و في المختبر لا تزال موضوعا ل المناقشة بعض6، ولكن في عام 1975، أشارت شوارتزكروين7 القاعدية يتم الاحتفاظ بخصائص الخلايا العصبية في المختبر وأن التحفيز عالية التردد (أي، تيتانيزاتيون) من أفيرينتس في تشكيل هيبوكامبال الحث تيسير إمكانات متشابك8طويلة الأمد. الكهربية من تسجيل نشاط الخلايا العصبية في المختبر توسعا كبيرا في دراسة الآليات الخلوية المعتمدة على النشاط اللدونة متشابك9،10، التي اكتشفت في عام 1973 بالنعيم et al. 11 في فيفو التجارب مع الأرانب.

دراسة نشاط الخلايا العصبية أو إشارات المسارات في شرائح المخ، ولا سيما في الشرائح هيبوكامبال الحاد، الآن أداة قياسية. ولكن المثير للدهشة، تجارب في المختبر لم تكون موحدة، كما يدل على ذلك النهج المتعددة التي لا تزال قائمة لإعداد وصيانة لشرائح هيبوكامبال الحاد. ريد et al. (1988) 12 استعراض التحديات المنهجية للحفاظ على شرائح الدماغ الحادة في أنواع مختلفة من الدوائر شريحة والخيارات للاستحمام المستوى المتوسط والأس الهيدروجيني ودرجة الحرارة والأكسجين. هذه المعلمات التي ما زال من الصعب التحكم في قاعة التسجيل بسبب عناصر مصنوعة خصيصا للأجهزة في المختبر تسجيل شريحة. منشورات يمكن العثور على أنه قد تساعد على التغلب على بعض التحديات المنهجية والتي تصف أنواع جديدة من غمر شريحة الدوائر، مثل نظام ميكروبيرفوسيون 3D فراغي13، دائرة مع تعزيز تدفق الصفحي والأكسجين العرض14، ونظام ب مراقبة درجة الحرارة المحوسبة15، و نظام تسجيل غرفة متعددة16. هذه الغرف ليست سهلة لبناء، تعتمد معظم العلماء على الدوائر شريحة المتاحة تجارياً. يمكن تحميل هذه الدوائر على نظام مجهر، مما يسمح للجمع بين الكهربية والأسفار التصوير18،،من1719. نظراً لهذه الدوائر تبقى شرائح المخ المغمورة في السائل الدماغي النخاعي الاصطناعية (قام)، بمعدل تدفق عالية من المخزن المؤقت الحل تحتاج إلى صيانة، زيادة نفقات تطبيق المخدرات. وتحقيقا لهذه الغاية، ادخلنا نظام التروية إعادة تدوير مع تدفق--كاربوجينيشن الذي يوفر الاستقرار كافية لتسجيل الإمكانات الميدانية في دائرة غمر شريحة باستخدام وحدة تخزين صغيرة نسبيا قام طويلة الأجل. وبالإضافة إلى ذلك، يمكننا تلخيص كيف يؤثر استخدام هذا النظام التجريبي كاربوجينيشن/التروية نتائج تعتمد على النشاط اللدونة متشابك10 وكيف ينظم متشابك تثبيط استطالة حقيقية النواة 2 عامل كيناز (eEF2K) 20من انتقال العدوى.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأبقى على الحيوانات وفقا للمعايير المقررة لرعاية الحيوان والإجراءات لمعاهد علوم المخ والدولة مفتاح المختبر من الطبية بيولوجيا الأعصاب من جامعة فودان، شانغهاي، الصين.

1-حل إعداد

ملاحظة: انظر الجدول للمواد.

  1. إعداد المخزن المؤقت تشريح (حل معدلة جي): 92 مم كلوريد الصوديوم، 2.5 ملم بوكل، 1.25 ملم نة2بو4، 30 ملم ناكو3، جلوكوز 25 مم، 20 مم حبيس، 3 مم نا+-بيروفات، 10 مم MgSO4، و 0.5 مم كاكل2.
  2. قم بضبط درجة الحموضة إلى 7.6 باستخدام هيدروكسيد الصوديوم م 1 دون كاربوجينيشن.
  3. مخزن المخزن المؤقت في 4 درجات مئوية.
    ملاحظة: توضح المعايرة السائل الملبدة بالغيوم. أوسمولاليتي موسم 305-310. كاربوجين21 يحتوي على الأكسجين 5% ثاني أكسيد الكربون و 95 في المائة.
  4. إعداد قام بإضعاف 10 × الحل الأسهم من قام يحتوي على بيكربونات والسكر، إعطاء تكوين نهائي ل: 124 مم كلوريد الصوديوم 2.5 ملم بوكل، كاكل 2.5 ملم2، 2 مم مجكل2و 1.25 مم خ2ص4.
  5. إضافة بيكربونات والسكر تصل إلى 10 ملم الجلوكوز و 26 ملم ناكو3.
  6. كاربوجيناتي قام من خلال أنبوب مثقب سيليكون مع نهاية محظورة فورا بعد إضافة ناكو3.
  7. قياس درجة الحموضة بينما كاربوجيناتينج (7.3-7.4 pH).
    ملاحظة: سعة المخزن المؤقت يمكن تعديلها قليلاً عن طريق تغيير كمية ناكو3. نظراً لدرجة الحموضة الناتجة تعتمد على درجة الحرارة، من الضروري أن تحقق درجة الحموضة الناتجة أثناء كاربوجيناتينج في درجة حرارة العامل (مثلاً، 30 درجة مئوية).

2-إعداد شرائح هيبوكامبال الحادة

ملاحظة: انظر الجدول للمواد.

  1. وضع شبكة شريحة-عقد في تشكيل غرفة حضانة لشرائح الدماغ الحادة، وملء الدائرة مع قام، وكاربوجيناتي (4-6 لتر/ساعة) على الأقل 30 دقيقة22 في 28-30 درجة مئوية.
  2. بارد الأدوات الجراحية وصولاً إلى 2-4 درجة مئوية.
  3. ضع كوب زجاج مليئة بالبرد وتقطيع المخزن المؤقت (2-4 درجة مئوية) وصيانتها في أن خليط جليد ومياه، قرب فيبرتوم كاربوجيناتيد.
  4. تخدير الجرذان أو الفئران حتى تختفي ردود الفعل القرنية (30-50 ثانية) باستخدام إيسوفلوراني بأخذ 500 ميليلتر في جرة زجاجية 2 لتر أو 12.5 ميليلتر في أنبوب 50 مل.
  5. عزل الدماغ باستخدام أسلوب وصف وتصور بالتفصيل في منشورات ماتيس et al. (2011) 23 ويوانكسيانج et al. (2014) 24.
  6. تبريد الدماغ وصولاً إلى 2-4 درجة مئوية في مخزن مؤقت تشريح المثلج (لمدة 2 دقيقة على الأقل) قبل تشريح المخيخ وفصل في نصفي الكرة الأرضية.
  7. استخدام شفرة جراحية باردة لتشريح قطعة من قشرة الظهرية بزاوية 70 درجة على طول الحافة الظهرية لكل نصف الكرة الأرضية25 للحصول على شرائح عرضية من البطني والجزء المتوسط من قرن آمون، كما هو مبين في الشكل 1ج و هاء.
  8. مع ملعقة أسمنت أسنان باردة، نقل نصف الكرة بقطعة من ورق الترشيح بإيجاز الجافة على السطح الذي تم إنشاؤه (ق 1-2).
  9. جبل نصفي مع الأسطح طازجة قطع على منصة تشريح المثلج باستخدام الغراء لاصق سريع المفعول؛ لقد نهاية والذيلية من على وجه الكرة الأرضية شفرة حلاقة (الشكل 1د).
  10. وضع منهاج تشريح في غرفة التبريد فيبرتوم وملء تلك الدائرة مع المخزن المؤقت تشريح (2-4 درجة مئوية). كاربوجيناتي استخدام أنبوب مثقب سليكون.
  11. قص 350 ميكرون الشرائح باستخدام إعدادات فيبرتوم كافية (مثل سرعة النصل إلى الأمام: 1.2 mm/s، بليد السعة: 1 ملم).
  12. عزل تشكيل هيبوكامبال من سوبيكولوم وكورتيسيس انتورهينال باستخدام اثنين الحقن cannulas (> ز 28) كالمقص.
  13. إزالة الفقاعات من مش عقد شريحة الدائرة الحضانة المعدة مسبقاً باستخدام ماصة باستور.
  14. نقل الشرائح التي لديها بعض الشفافية في بيراميدالي الطبقة من منصة تشريح على شبكة غرفة الحضانة. تجنب أي قابلة للطي وتمتد، والتداخل، والعائمة قبل يسفط قام والشريحة إلى ماصة باستور كبير فم.
    ملاحظة: يمكن أن يستغرق الإجراء بأكمله (الخطوة 2، 5-2، 14) 5-10 دقيقة؛ ولذلك، من المهم لفحص درجة حرارة المخزن المؤقت الحل مع مرور الوقت للحفاظ عليه في 4 درجات مئوية.
  15. احتضان الشرائح عند 30 درجة مئوية على الأقل 1.5-2 ح في غرفة الحضانة وتوفير كاربوجين في 4-6 لتر في الساعة.
    ملاحظة: ضبط معدل تدفق كاربوجين تعميم المخزن المؤقت في الحاضنة، ولكن منع الشرائح عائمة.

3-إدخال تعديلات على كاربوجينيشن لقام "إعادة التدوير من الخزانات الصغيرة"

  1. إضافة موصل أنبوب 3-الطريق إلى التدفق الخارجي لنظام إعادة التدوير (الشكل 2ب).
  2. توصيل الذراع الأوسط موصل الأنبوب 3-الطريقة مع أنبوب توريد كاربوجين وتنظيم معدل التدفق مع مقياس تدفق الهواء (3-4 لتر في الساعة، الشكل 2د و الشكل 4ج).
  3. إضافة موصل أنبوب 3-الطريقة ثانية لتدفق نظام إعادة التدوير. توصيل الذراع الأوسط للأنبوبة التي تواجه سخان مضمنة والقسم العلوي من الذراع إلى أنبوب رقيقة سليكون (طولها 10 سم)، والذراع السفلي إلى أنبوب التدفق من الخزان (المنخفضة تمرير مرشح؛ الشكل 4 ج).
  4. مكان عصارة أنبوب على أنبوب رقيقة سليكون (OD: 2 مم) في موضع على طول الأنبوب أين نبض قام في قاعة شريحة، التي تم إنشاؤها بواسطة مضخة تمعجية، في حدها الأدنى.
    ملاحظة: التدفق كاربوجينيشن (تدفق-الكربوهيدرات.) تعديل يقلل حساسية على المستوى كاربوجينيشن لحجم الخزان قام، قام إعادة التدوير معدل، والمواقف النسبية أنبوب داخل الخزانات الصغيرة قام (< 50 مل؛ الشكل 3). فيما يتعلق بمرشح تمرير منخفض، يقلل كمية معينة من الهواء في أنابيب رقيقة سيليكون نبض تدفق قام؛ وهكذا، ينبغي ملء الأنبوب في الغالب مع الهواء.

4.تسجيل الاستجابات متشابك في دائرة شريحة غمر

ملاحظة: انظر الجدول للمواد.

  1. قبل الحارة الحل قام في حمام مائي لحوالي 28-30 درجة مئوية (وهذا يمنع تكوين فقاعة في دائرة التسجيل).
  2. بدء تشغيل نظام إعادة التدوير (4-5 مل/دقيقة) وتنشيط سخان مضمنة حجته نظام ح 1 على الأقل.
  3. بريسواك قطعة صغيرة من عدسة تنظيف الورق ونايلون شبكة ثابتة على سلك البلاتين على شكل U في قاعة شريحة غمر لبضع دقائق (الشكل 4).
  4. إزالة سلك البلاتين على شكل U.
  5. إيقاف تشغيل إعادة التدوير ووضع شريحة على العدسة تنظيف الورق.
  6. فورا بوضع شبكة عقد شريحة أعلى الشريحة والتبديل على المضخة واسمحوا شريحة حجته لمدة 30 دقيقة دون غمس الهدف إلى قام.
  7. ملء ميكروبيبيتي البورسليكات (أي، مسرى التسجيل) مع قام (تلميح المقاومة: شغل MΩ 1-2، 1/3 مع قام) وجبل بأنها في حامل ماصة.
  8. فحص العزل الكهربائي التحفيز معدنية بوضعه في NaHCO3 الحل (> 40 ملم). الاتصال القطب إلى القطب السلبي من مولد الجهد DC (الخامس 1-2، القطب إيجابية: سلك الفضة أو البلاتين)، ومراعاة تكوين فقاعات في التلميح تحت مجهر تشريح (> التكبير 60 x).
  9. ضع مسرى التحفيز التنغستن معزول الإيبوكسي تم اختبارها في حامل مناور وأسلاك الإشارة في قاعة شريحة.
  10. إضافة قطب إشارة ثانية إلى الدائرة وتوصيله إلى مقبس إشارة من هيدستاجي تسجيل القطب (الشكل 4أ).
  11. في برنامج التحكم مكبر للصوت، انقر فوق مربع "وضع المشبك صفر" والمضي قدما بالنقر المزدوج فوق مربع "إخراج الحصول على قائمة". اختر مكسب من "100"، انقر نقراً مزدوجاً فوق "عالية تمرير تصفية مربع القائمة (سل)،" اختر "0.1 هرتز"، وانقر نقراً مزدوجاً فوق "تمرير منخفض مرشح مربع القائمة (AC)" لاختيار "3 كيلو هرتز."
  12. في برنامج التسجيل، انقر فوق شأن "اكتساب | فتح البروتوكول ". اختر بروتوكول يحتوي على إعدادات السماح تلقائياً للتحفيز العرضية والترقيم من إمكانات تضخيم في 10-20 كيلو هرتز 50-100 مللي ثانية، وأن يشغل المعزل تحفيز 10 مللي ثانية بعد بدء تسجيل العرضية.
  13. ضع التحفيز واقطاب تسجيل في سطر وموازية ل pyramidale الطبقة، على سبيل المثال (الشكل 4ب و الشكل 5).
  14. انقر فوق "الحصول على | تحرير البروتوكول "واختر علامة التبويب" المشغل "(في إطار منبثق). انقر فوق المربع "مشغل مصدر" واختيار "الفضاء بار" كمصدر للمشغل. انقر فوق الزر "موافق". انقر فوق الزر "تسجيل" لبدء اكتساب وملاحظة نافذة منبثقة مع زر الزناد.
  15. في برنامج حافز المعزل، انقر فوق مربع "التحكم بالجهد" وأدخل "0". انقر فوق الزر "تحميل". انقر فوق في إطار "برنامج تسجيل" واضغط على شريط المسافة. كرر هذه الدورة بالتتابع إدخال القيم من 1 إلى 8، وعلى سبيل المثال، في خطوات أم 1 في المربع "التحكم بالجهد".
  16. الربط بين قوة التحفيز مع القيم فيبسب-المنحدر وتحديد قوة التحفيز المطلوب للحصول على الحد الأقصى 40% من فيبسب-المنحدر. انقر فوق "مربع عنصر التحكم الجهد"، وقم بإدخال القيمة المحددة. انقر فوق الزر "تحميل".
    ملاحظة: يتم استخدام المعزل تحفيز تطبيق الجهد موجزة أو البقول الحالية على أنسجة المخ. يمكن أن يكون للحبوب ثنائية الطور المايكروثانيه 100 كل مرحلة.
  17. في برنامج التسجيل، انقر فوق الزر إيقاف ثم في القائمة "الحصول". انقر فوق "تحرير البروتوكول" واختر علامة التبويب "المشغل" في إطار منبثق. انقر فوق مربع المصدر مشغل واختار "جهاز ضبط الوقت الداخلي" كمصدر للمشغل. انقر فوق الزر "موافق". انقر فوق الزر السجل يبدأ التسجيل التلقائي للإمكانات الميدانية كل 30 ثانية، على سبيل المثال. انقر فوق الزر "إيقاف" بعد 30-60 دقيقة.
  18. انقر فوق القائمة "الحصول على"، انقر فوق "بروتوكول مفتوحة"، اختر البروتوكول التعريفي المرجوة من اللدونة متشابك، وانقر فوق الزر "موافق". انقر فوق الزر "تسجيل" لتنشيط تلقائياً على تحفيز عالية التردد وتسجيل. انقر فوق الزر "إيقاف".
    ملاحظة: في حالة الدراسات المتصلة اللدونة متشابك، تطبيق واحد من النماذج القياسية التعريفي للتقوية طويلة الأجل أو طويلة الأجل من الاكتئاب بعد التسجيل المطول خط الأساس. يصور الممثل أمثلة على تحوير الناتجة عن انتقال متشابك في الرقم 7 و الرقم 8.
  19. في برنامج التسجيل، انقر فوق "الحصول على | فتح بروتوكول "واختر البروتوكول نفسه كما في الخطوة 4، 12. انقر فوق الزر "موافق" ومن ثم انقر فوق "تسجيل". الاحتفاظ تلقائياً بتشغيل التسجيلات الميدانية المحتملة ح 2-4، على سبيل المثال. انقر فوق الزر "إيقاف" إنهاء التسجيل.
  20. في حالة الدراسات الصيدلانية، تطبيق المجمع مباشرة قام خزان إذا كانت الإدارة مجمع الدائمة المطلوب (الشكل 6).

5-تنظيف الإعداد وتلميحات

ملاحظة: انظر أدناه للحصول على نصائح عامة.

  1. تنظيف النظام الأسبوعي بإعادة تدوير 10 ٪ ح2س2 للا يزيد عن 20 دقيقة، متبوعاً بالغسيل بواسطة H2o.
    ملاحظة: لا ينصح الإيثانول للتنظيف. ليس من المستحسن كذلك أن تزج بأسلاك المرجع والهدف في ح2س2.
  2. إزالة الملح سرع على سطح العدسة الهدف أو محيط الدائرة مع 0.1 N HCl ثم الماء.
  3. أغسل bubbler كاربوجين في الماء المقطر أو 0.1 N HCl.
  4. تزج غرفة الحضانة شريحة في 10 ٪ ح2س2 لمدة 5 دقائق مرة واحدة في أسبوع وثم شطف جيدا غرفة الحضانة مع منزوع H2o.
  5. في حالة أقطاب التحفيز معدنية، شطف نصيحة الكهربائي محفزة مع المياه. بعد كل تجربة ولطف يمسح طرف القطب حفز مع كرة القطن غارقة مع الإيثانول لإزالة الأنسجة المتبقية.
  6. تقليل مقاومة أقطاب التحفيز المعدنية التجارية عن طريق إزالة العزل في تلميح عن طريق انتقد حذراً مع الصنفرة.
  7. الحد من الخسائر كاربوجين من قام أثناء إعادة التدوير من خلال الأنابيب باستبدال أنابيب السيليكون بأنابيب تترافلوروايثيلين.
  8. إبقاء الأسلاك الفضية لتسجيل القطب والقطب مرجع في التبييض لعدة أيام بشكل أجكل على سطح الأسلاك.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في المقطع بروتوكول، وصفت لنا إعداد شرائح هيبوكامبال الحاد من الجزء البطني والوسيطة لتشكيل هيبوكامبال (الشكل 1) من الفئران الذكور C57BL/6 وذكور جرذان ويستار (5-8 أسابيع). يساعد على المحافظة على استقرار وضع نصفي الكرة الأرضية على منصة تقطيع اللحم ويزيل الحاجة إلى تحقيق الاستقرار مع أجار أو [اغروس]. نظام التروية نفسه يستند على مضخة تمعجية يعمل على تناوب عالية لإعطاء معدل التدفق المطلوبة من السائل. وهكذا، الشيخوخة السريعة لمعيار أنابيب داخل المضخة خلقت مشكلة كبير...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

على الرغم من أن واجهة شريحة الدوائر يحمل أكثر قوة الردود متشابك25،26،،من2728، غمر دوائر توفير راحة إضافية لتسجيل التصحيح-المشبك والأسفار التصوير. وهكذا، لقد قمنا بوصف عدة جوانب من التسجيلات الميدانية المحتملة في شرائح هيبوكامبال الحاد باستخدام دائرة شريحة غمر تجارية التي يمكن أن تمتد بسهولة إلى تصوير المسابير fluorescence في الخلايا العصبية17،

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب يعلن أنه أجرى البحث في غياب أي علاقات تجارية أو مالية يمكن أن يفسر تضارب المصالح محتملة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قد أجرى، وتحليلها، وتصميم التجارب وكتبت المخطوطة. مركزي وس. ب. وساعدت في إعداد الشكل وإجراء التجارب. هذا العمل كان يدعمها تشرف (31320103906) والمشروع 111 (B16013) على يد

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<القوام>الكواشف المطلوبة< / القوية>
الكاشف الكيميائيسينوفارم كلوريد الصوديوم
KClSinopharm الكاشف الكيميائي ، الصين10016318
KH2< / sub>PO4< / sub>كاشف سينوفارم الكيميائي ، الصين10017618
MgCl2< / sub> · 6H2Oكاشف سينوفارم الكيميائي ، الصين10012818
CaCl2Sinopharm Chemical Reagent, China10005861
NaHCO3Sinopharm Chemical Reagent, China10018960 10010518
NaH2 كاشف كيميائي PO4< / sub>، الصين20040718
HEPESSigmaH3375
بيروفات الصوديومSigmaA4043
MgSO4< / sub>كاشف سينوفارم الكيميائي ، الصين20025118
هيدروكسيد الصوديومالكاشف الكيميائي سينوفارم ، الصين10019718
<قوي >أدوات ومواد للتشريح < / قوي >
قطع الرأسهارفارد55-0012لقطع رأس الفئران
مقص ضمادةSCHREIBER12-4227لقطع رأس الفأر
شفرة مزدوجة الحوافFlying Eagle ، الصين74-C
مقص قزحيةRWD ، الصينS12003-09
Bone RongeursRWD, ChinaS22002-14
SpoonHammacher HSN 152-13
ملعقة أسمنت الأسنانHammacher HSN 016-15
حفارة أسنان مزدوجةحدادة جراحية ، الولايات المتحدة الأمريكيةBS-415-017
تهتز MicrotomeLeica ، ألمانياVT1200S
شفرة جراحية   ؛RWD ، الصينS31023-02
حامل جراحيRWD ، الصينS32007-14
< قوي > معدات ومواد الفيزيولوجيا الكهربية < / قوي >
مجتذب ماصة عموديNarishige ، طاولة عزل الاهتزازاليابانية PC-10
Meirits ، اليابانADZ-A0806
تسجيل النوع المغمور غرفةWarner InstrumentsRC-26GLP
4 محاور MicromanipulatorSutter ، الولايات المتحدة الأمريكيةMP-285 ، MP-225
Platinum WireWorld Precision InstrumentsPTP406
مكبرالأجهزة الجزيئية ، الولايات المتحدة الأمريكيةMulticlamp 700B
نظام الحصولالأجهزة الجزيئية ، الولايات المتحدة الأمريكيةDigidata 1440A
Anaysis برنامجالأجهزة الجزيئية ، الولايات المتحدة الأمريكيةClampex 10.2
مجهر مضاننيكون ، اليابانFN1
LED مصدر ضوءمجموعة Lumen Dynamics Group ، كنداX-cite 120LED
ماصات دقيقةهارفاردGC150TF
ماصات دقيقة للبورسليكاتسوتر ، الولايات المتحدة الأمريكيةBF150-86مشبك التصحيح
التنغستن القطبالكهربائي أنظمة AM ، الولايات المتحدة الأمريكية575500
مضخة تمعجيةأطول ، الصينأنابيب BT00-300T
للمضخة التمعجيةISMATEC ، Wertheim ، ألمانياSC03091x التدفق ، ID: أنابيب 1.02 مم
للمضخة التمعجيةISMATEC ، Wertheim ، ألمانياSC0319أنابيب 2x للتدفق الخارجي ، ID: 2.79 مم
كاميرا CCDPCO ، ألمانياpco.edge sCMOS
عدسة تنظيف ورقكوداك
50 مل أنبوب الطرد المركزي المخروطيالحراري العلمي339652
الغرفة المسبقةوارنر إنسترونٹسBSC-PC
سخان مضمنوارنر إنسترومنتزSF-28
جهاز التحكم في درجة الحرارةوارنر إنسترومنتزTC-324B
، الصين 10019318 جهاز النهاية للصوت على البيانات تسجيل خارج الخلية

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McIlwain, H. Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain. Biochem J. 48 (4), (1951).
  2. McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. Responses in vitro from the piriform cortex of the rat, and their susceptibility to centrally-acting drugs. J Neurochem. 14 (9), 937-938 (1967).
  3. Yamamoto, C., McIlwain, H. Electrical activities in thin sections from the mammalian brain maintained in chemically-defined media in vitro. J Neurochem. 13 (12), 1333-1343 (1966).
  4. Andersen, P., Bliss, T. V., Lomo, T., Olsen, L. I., Skrede, K. K. Lamellar organization of hippocampal excitatory pathways. Acta Physiol Scand. 76 (1), 4-5 (1969).
  5. Skrede, K. K., Westgaard, R. H. The transverse hippocampal slice: a well-defined cortical structure maintained in vitro. Brain Res. 35 (2), 589-593 (1971).
  6. Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. Slices have more synapses than perfusion-fixed hippocampus from both young and mature rats. J Neurosci. 19 (8), 2876-2886 (1999).
  7. Schwartzkroin, P. A. Characteristics of CA1 neurons recorded intracellularly in the hippocampal in vitro slice preparation. Brain Res. 85 (3), 423-436 (1975).
  8. Schwartzkroin, P. A., Wester, K. Long-lasting facilitation of a synaptic potential following tetanization in the in vitro hippocampal slice. Brain Res. 89 (1), 107-119 (1975).
  9. Reymann, K. G., Frey, J. U. The late maintenance of hippocampal LTP: requirements, phases, 'synaptic tagging', 'late-associativity' and implications. Neuropharm. 52 (1), 24-40 (2007).
  10. Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. Synaptic plasticity in health and disease: introduction and overview. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 369 (1633), 20130129(2014).
  11. Bliss, T. V., Gardner-Medwin, A. R. Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the unanaestetized rabbit following stimulation of the perforant path. J Physiol. 232 (2), 357-374 (1973).
  12. Reid, K. H., Edmonds, H. L., Schurr, A., Tseng, M. T., West, C. A. Pitfalls in the Use of Brain-Slices. Prog Neurobiol. 31 (1), 1-18 (1988).
  13. Rambani, K., Vukasinovic, J., Glezer, A., Potter, S. M. Culturing thick brain slices: an interstitial 3D microperfusion system for enhanced viability. J Neurosci Methods. 180 (2), 243-254 (2009).
  14. Hajos, N., et al. Maintaining network activity in submerged hippocampal slices: importance of oxygen supply. Eur J Neurosci. 29 (2), 319-327 (2009).
  15. Redondo, R. L., et al. Synaptic tagging and capture: differential role of distinct calcium/calmodulin kinases in protein synthesis-dependent long-term potentiation. J Neurosci. 30 (14), 4981-4989 (2010).
  16. Stopps, M., et al. Design and application of a novel brain slice system that permits independent electrophysiological recordings from multiple slices. J Neurosci Methods. 132 (2), 137-148 (2004).
  17. Behnisch, T., Matsushita, S., Knopfel, T. Imaging of gene expression during long-term potentiation. Neuroreport. 15 (13), 2039-2043 (2004).
  18. Karpova, A., et al. Encoding and transducing the synaptic or extrasynaptic origin of NMDA receptor signals to the nucleus. Cell. 152 (5), 1119-1133 (2013).
  19. Karpova, A., Mikhaylova, M., Thomas, U., Knopfel, T., Behnisch, T. Involvement of protein synthesis and degradation in long-term potentiation of Schaffer collateral CA1 synapses. J Neurosci. 26 (18), 4949-4955 (2006).
  20. Weng, W., Chen, Y., Wang, M., Zhuang, Y., Behnisch, T. Potentiation of Schaffer-Collateral CA1 Synaptic Transmission by eEF2K and p38 MAPK Mediated Mechanisms. Front Cell Neurosci. 10 (247), (2016).
  21. Meduna, L. J., Jackman, A. I. Carbon dioxide inhalation therapy. Res Publ Assoc Res Nerv Ment Dis. 31, 280-286 (1953).
  22. Edwards, F. A., Konnerth, A., Sakmann, B., Takahashi, T. A thin slice preparation for patch clamp recordings from neurones of the mammalian central nervous system. Pflugers Arch. 414 (5), 600-612 (1989).
  23. Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology. J Vis Exp. (49), (2011).
  24. Yuanxiang, P., Bera, S., Karpova, A., Kreutz, M. R., Mikhaylova, M. Isolation of CA1 nuclear enriched fractions from hippocampal slices to study activity-dependent nuclear import of synapto-nuclear messenger proteins. J Vis Exp. (90), e51310(2014).
  25. Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats. J Neurosci Meth. 130 (1), 19-32 (2003).
  26. Kloosterman, F., Peloquin, P., Leung, L. S. Apical and basal orthodromic population spikes in hippocampal CA1 in vivo show different origins and patterns of propagation. J Neurophysiol. 86 (5), 2435-2444 (2001).
  27. Thiemann, W., Malisch, R., Reymann, K. G. A new microcirculation chamber for inexpensive long-term investigations of nervous tissue in vitro. Brain Res Bull. 17 (1), 1-4 (1986).
  28. Shetty, M. S., et al. Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents. J Vis Exp. (103), (2015).
  29. Du, H., Lin, J., Zuercher, C. Higher efficiency of CO2 injection into seawater by a venturi than a conventional diffuser system. Bioresour Technol. 107, 131-134 (2012).
  30. Weinman, J., Mahler, J. An Analysis of Electrical Properties of Metal Electrodes. Med Electron Biol Eng. 2, 299-310 (1964).
  31. Fanselow, M. S., Dong, H. W. Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures. Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).
  32. Wang, M., et al. Translation of BDNF-gene transcripts with short 3' UTR in hippocampal CA1 neurons improves memory formation and enhances synaptic plasticity-relevant signaling pathways. Neurobiol Learn Mem. , (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

ACSF

مقالات ذات صلة