ويرد بروتوكول لإنشاء نموذج الفأر المهندسة وراثيا من سرطان القولون والمستقيم عن طريق العدوى الغدة اللحية القطاعية وترصدها عن طريق التنظير القولون عالية الدقة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
ويرد بروتوكول لإنشاء نموذج الفأر المهندسة وراثيا من سرطان القولون والمستقيم عن طريق العدوى الغدة اللحية القطاعية وترصدها عن طريق التنظير القولون عالية الدقة.
على الرغم من مزايا سهولة تطبيق وفعالية من حيث التكلفة، ونماذج الماوس سرطان القولون والمستقيم على أساس حقن الخلايا السرطانية لها قيود شديدة ولا محاكاة بدقة علم الأورام الورم ونشر الخلايا السرطانية. وقد أدخلت نماذج الفئران المهندسة وراثيا للتغلب على هذه القيود؛ ومع ذلك، فإن مثل هذه النماذج تتطلب من الناحية التقنية، وخاصة في الأجهزة الكبيرة مثل القولون الذي هو المطلوب فقط ورم واحد.
ونتيجة لذلك، تم تطوير نموذج مناعة، وراثيا نموذج الفأر من سرطان القولون والمستقيم الذي يتطور الأورام موحدة للغاية، ويمكن استخدامها لدراسات البيولوجيا الورم وكذلك التجارب العلاجية. يبدأ تطور الورم عن طريق العدوى الجراحية، القطاعية من القولون البعيدة مع فيروس الغدة كري في الفئران متحولة مشروط مجمع. الأورام يمكن الكشف عنها بسهولة ورصدها عن طريق تنظير القولون. نحن هنا وصف تقنية الجراحية من العدوى الغدة القطعي منوالقولون، ومراقبة الورم عن طريق تنظير القولون عالية الدقة وتقديم أورام القولون والمستقيم الناتجة.
لا يزال سرطان القولون والمستقيم (كرك) أحد الأسباب الرئيسية للوفاة المرتبطة بالسرطان في البلدان الغربية. 1 في حين أن تشخيص المرضى الذين يعانون من مرض المرحلة المبكرة هو جيد، يتم تشخيص العديد من الأورام في مراحل لاحقة والتي، على الرغم من العديد من خيارات العلاج، والتشخيص محدودة. 2 ، 3 ، 4 ، 5
وتستند معظم نماذج الماوس الحالية من كرك على زرع الخلايا السرطانية المستمدة من خطوط الخلايا أو أورام المريض في الفئران عوز....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم استعراض التجارب الحيوانية المقدمة هنا بشكل مستقل واعتمادها من قبل لجنة رعاية الحيوان واستخدام الحكومة المؤسسية وتم إجراؤها وفقا للاتحاد الاتحادات المخبرية للعلوم الحيوانية (فيلاسا) المبادئ التوجيهية. وقد اتخذت جميع التدابير الممكنة لتقليل المعاناة بما في ذلك التخدير وتسكين أو، إذا لزم الأمر، القتل الرحيم المبكر.
1. المحلية الورم الحث عن طريق الجراحية العدوى الغدة كري
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إذا أجريت بشكل كاف،> 85٪ من الحيوانات تطوير الأورام. الوفيات من هنا قدمت الإجراء الجراحي هو <5٪، والوفيات من تنظير القولون يكاد يكون غير موجود. في معظم الفئران، يتم الكشف عن آفة واحدة. في حوالي 30٪ 2 - 3 يمكن الكشف عن الأورام الصغيرة التي عادة فتيل إلى ورم واحد في غضون 2-3 أسابيع بعد تحريض الورم.
النمط الظاهري والسلوك البيولوجي للأورام الناتج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
في حين أنها سهلة عموما لتوليد والحفاظ على، الكلاسيكية نماذج الماوس كرك على أساس حقن خط الخلية هي اصطناعية وغير قادرة على تلخيص تماما المرض البشري. ونتيجة لذلك، وضعت جيمس. كان أول جيم جيم الماوس أبك مين ، الذي يؤوي طفرة خالية متخالف في الجين أبك، وبالتالي محاكاة المرض وراثي الإنسان داء السلائل الغدية العائلي (فاب). 21 ومع ذلك، أبك مين الفئران تتطور دائما الأورام المعوية متعددة لا تقتصر على القولون. أيضا، والوقت والمكان المحدد لتشكيل الو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
ويكرس هذا العمل لذكرى البروفسور موريتز كوخ.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوية > الكواشف / المواد الاستهلاكية < / قوية> | |||
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline | Life Technologies GmbH | 14190169 | |
| Trypsin-EDTA (0.25٪ ، فينول أحمر) Life | Technologies GmbH | 25200072 | |
| محلول ملحي عادي 0.9٪ (E154) | Serumwerk Bernburg AG | 10013 | |
| Aqua ad injectabilia | B. Braun Melsungen AG | 235144 | |
| Ad5CMV-Cre (الفيروس الغدي ، c = 2E + 11 PFU / مل) | ناقل نقل الجينات الأساسية جامعة أيوا | ||
| 15 مل ، 50 مل أنابيب الطرد المركزي | Greiner Bio-One GmbH | 188271 / 227270 | |
| أنابيب Eppendorf 1.5 مل / 2 مل | Sarstedt AG & Co. | 72،695،400 | |
| طبق بتري PS 100/15 مم (معقم ، نوكلون) | حقنة فيشر Scientific GmbH | 10508921 / NUNC150350 | |
| 1 مل (بدون حجم ميت) - Injekt-F SOLO | Braun / neoLab | 194291661 | |
| إبرة حقن 30G | BECTON DICKINSON | 304000 | |
| Name | Company | <قوي>رقم الكتالوج | تعليقات |
| تسكين / تخدير | |||
| Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie) | AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Medical | ||
| oxygen | Air Liquide Medical GmbH-Buprenorphine | ||
| (Temgesic) | Indivior Eu Ltd. | - | |
| Bepanthen - مرهم العيون | Bayer Vital GmbH | 10047757 | |
| التخدير البحثية على الطاولة x / O2 Flush w / Sevoflurane Vaporizer | Parkland Scientific | V3000PS / PK | |
| strong>Name < / strong > | Company < / strong > | Catalog Number < / strong > | Comments < / strong> |
| <قوي > معدات جراحية < / قوي > | |||
| مسحات السليلوز | Lohmann & Rauscher Deutschland | 13356 | |
| حقنة الأنسولين EMG 1 مل (مع قنية 30 جرام) | B. Braun Melsungen AG | 9161627S | |
| أنابيب التجويف الدقيقة (التجويف: 0.28 مم / القطر: 0.61 مم) | Smiths Medical Deutschland | 800/100/100 | |
| Micro-Adson Fallps | أدوات العلوم الدقيقة | 11018-12 | |
| مقص القزحية - أدوات العلوم الدقيقة ToughCut | 14058-11 | ||
| Olsen-Hegar حامل إبرة | أدوات العلوم | الدقيقة 12002-12 | |
| مجموعة AutoClip | أدوات العلوم الدقيقة | 12020-00 | |
| PDS Z1012H 6/0 C1 (خياطة جراحية) | جونسون آند أمبير Johnson Medical GmbH | Z1012H | |
| Curved Micro Serrefine Vascular Clamp | أدوات العلوم الدقيقة | 18055-05 | |
| Fogarty Spring Clips | Edwards | CDSAFE 6 | |
| Hot Plate 062 | Labotect | 13854 | |
| Isis - ماكينة حلاقة الشعر | Aesculap - Braun | - | |
| Name | الشركة | <قوي>رقم الكتالوج | <قوي>تعليقات |
| <قوي>تنظير القولون | |||
| نافورة الضوء البارد زينون 175 SCB | كارل شتورتس | 20132101-1 | كارل شتورتز نظام ماينز |
| كابل إضاءة الألياف | كارل شتورتز | 69495NL | كارل شتورتز نظام كولوفيو ماينز |
| TRICAM رأس كاميرا ثلاثي الشرائح | كارل شتورتس | 20221030 | كارل شتورتس نظام كولوفيو ماينز |
| TRICAM SLII وحدة التحكم في الكاميرا | كارل شتورز | 20223011-1 | كارل شتورتس كولوفيو سستمر ماينز |
| شاشة مسطحة 15 بوصة EndoVue | Karl Storz | 9415NN | Karl Storz Coloview System Mainz |
| تلسكوب هوبكنز المستقيم إلى الأمام قطر 1.9 مم ؛ الطول 10 سم قابل للتعقيم نقل ضوء الألياف البصرية مدمج كارل | شتورز | 64301AA | |
| غمد الحماية والفحص | كارل شتورز | 61029C |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.