يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج الفأر المهندسة وراثيا لسرطان القولون والمستقيم المتفرقة

9.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/55952

⸱

يوليو 6, 2017

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

في هذه المقالة

ملخص

ويرد بروتوكول لإنشاء نموذج الفأر المهندسة وراثيا من سرطان القولون والمستقيم عن طريق العدوى الغدة اللحية القطاعية وترصدها عن طريق التنظير القولون عالية الدقة.

الملخص

على الرغم من مزايا سهولة تطبيق وفعالية من حيث التكلفة، ونماذج الماوس سرطان القولون والمستقيم على أساس حقن الخلايا السرطانية لها قيود شديدة ولا محاكاة بدقة علم الأورام الورم ونشر الخلايا السرطانية. وقد أدخلت نماذج الفئران المهندسة وراثيا للتغلب على هذه القيود؛ ومع ذلك، فإن مثل هذه النماذج تتطلب من الناحية التقنية، وخاصة في الأجهزة الكبيرة مثل القولون الذي هو المطلوب فقط ورم واحد.

ونتيجة لذلك، تم تطوير نموذج مناعة، وراثيا نموذج الفأر من سرطان القولون والمستقيم الذي يتطور الأورام موحدة للغاية، ويمكن استخدامها لدراسات البيولوجيا الورم وكذلك التجارب العلاجية. يبدأ تطور الورم عن طريق العدوى الجراحية، القطاعية من القولون البعيدة مع فيروس الغدة كري في الفئران متحولة مشروط مجمع. الأورام يمكن الكشف عنها بسهولة ورصدها عن طريق تنظير القولون. نحن هنا وصف تقنية الجراحية من العدوى الغدة القطعي منوالقولون، ومراقبة الورم عن طريق تنظير القولون عالية الدقة وتقديم أورام القولون والمستقيم الناتجة.

المقدمة

لا يزال سرطان القولون والمستقيم (كرك) أحد الأسباب الرئيسية للوفاة المرتبطة بالسرطان في البلدان الغربية. 1 في حين أن تشخيص المرضى الذين يعانون من مرض المرحلة المبكرة هو جيد، يتم تشخيص العديد من الأورام في مراحل لاحقة والتي، على الرغم من العديد من خيارات العلاج، والتشخيص محدودة. 2 ، 3 ، 4 ، 5

وتستند معظم نماذج الماوس الحالية من كرك على زرع الخلايا السرطانية المستمدة من خطوط الخلايا أو أورام المريض في الفئران عوز....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم استعراض التجارب الحيوانية المقدمة هنا بشكل مستقل واعتمادها من قبل لجنة رعاية الحيوان واستخدام الحكومة المؤسسية وتم إجراؤها وفقا للاتحاد الاتحادات المخبرية للعلوم الحيوانية (فيلاسا) المبادئ التوجيهية. وقد اتخذت جميع التدابير الممكنة لتقليل المعاناة بما في ذلك التخدير وتسكين أو، إذا لزم الأمر، القتل الرحيم المبكر.

1. المحلية الورم الحث عن طريق الجراحية العدوى الغدة كري

  1. إعداد الحيوانات لعملية جراحية
    ملاحظة: تقريبا أي طفرة مشروطة ("فلوكسد"....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

إذا أجريت بشكل كاف،> 85٪ من الحيوانات تطوير الأورام. الوفيات من هنا قدمت الإجراء الجراحي هو <5٪، والوفيات من تنظير القولون يكاد يكون غير موجود. في معظم الفئران، يتم الكشف عن آفة واحدة. في حوالي 30٪ 2 - 3 يمكن الكشف عن الأورام الصغيرة التي عادة فتيل إلى ورم واحد في غضون 2-3 أسابيع بعد تحريض الورم.

النمط الظاهري والسلوك البيولوجي للأورام الناتج.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في حين أنها سهلة عموما لتوليد والحفاظ على، الكلاسيكية نماذج الماوس كرك على أساس حقن خط الخلية هي اصطناعية وغير قادرة على تلخيص تماما المرض البشري. ونتيجة لذلك، وضعت جيمس. كان أول جيم جيم الماوس أبك مين ، الذي يؤوي طفرة خالية متخالف في الجين أبك، وبالتالي محاكاة المرض وراثي الإنسان داء السلائل الغدية العائلي (فاب). 21 ومع ذلك، أبك مين الفئران تتطور دائما الأورام المعوية متعددة لا تقتصر على القولون. أيضا، والوقت والمكان المحدد لتشكيل الو.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

ويكرس هذا العمل لذكرى البروفسور موريتز كوخ.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوية > الكواشف / المواد الاستهلاكية < / قوية>
Dulbecco's Phosphate Buffered SalineLife Technologies GmbH14190169
Trypsin-EDTA (0.25٪ ، فينول أحمر) LifeTechnologies GmbH25200072
محلول ملحي عادي 0.9٪ (E154)Serumwerk Bernburg AG10013
Aqua ad injectabiliaB. Braun Melsungen AG235144
Ad5CMV-Cre (الفيروس الغدي ، c = 2E + 11 PFU / مل)ناقل نقل الجينات الأساسية
جامعة أيوا
15 مل ، 50 مل أنابيب الطرد المركزيGreiner Bio-One GmbH188271 / 227270
أنابيب Eppendorf 1.5 مل / 2 ملSarstedt AG & Co.72،695،400
طبق بتري PS 100/15 مم (معقم ، نوكلون)حقنة فيشر Scientific GmbH10508921 / NUNC150350
1 مل (بدون حجم ميت) - Injekt-F SOLOBraun / neoLab194291661
إبرة حقن 30GBECTON DICKINSON304000
NameCompany<قوي>رقم الكتالوجتعليقات
تسكين / تخدير
Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie)AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Medical
oxygenAir Liquide Medical GmbH-Buprenorphine
(Temgesic)Indivior Eu Ltd.-
Bepanthen - مرهم العيونBayer Vital GmbH10047757
التخدير البحثية على الطاولة x / O2 Flush w / Sevoflurane VaporizerParkland ScientificV3000PS / PK
strong>Name < / strong > Company < / strong > Catalog Number < / strong > Comments < / strong>
<قوي > معدات جراحية < / قوي >
مسحات السليلوزLohmann & Rauscher Deutschland13356
حقنة الأنسولين EMG 1 مل (مع قنية 30 جرام)B. Braun Melsungen AG9161627S
أنابيب التجويف الدقيقة (التجويف: 0.28 مم / القطر: 0.61 مم)Smiths Medical Deutschland800/100/100
Micro-Adson Fallpsأدوات العلوم الدقيقة11018-12
مقص القزحية - أدوات العلوم الدقيقة ToughCut14058-11
Olsen-Hegar حامل إبرةأدوات العلومالدقيقة 12002-12
مجموعة AutoClipأدوات العلوم الدقيقة12020-00
PDS Z1012H 6/0 C1 (خياطة جراحية)جونسون آند أمبير Johnson Medical GmbHZ1012H
Curved Micro Serrefine Vascular Clampأدوات العلوم الدقيقة18055-05
Fogarty Spring ClipsEdwardsCDSAFE 6
Hot Plate 062Labotect13854
Isis - ماكينة حلاقة الشعرAesculap - Braun-
Nameالشركة<قوي>رقم الكتالوج<قوي>تعليقات
<قوي>تنظير القولون
نافورة الضوء البارد زينون 175 SCBكارل شتورتس20132101-1كارل شتورتز نظام ماينز
كابل إضاءة الأليافكارل شتورتز69495NLكارل شتورتز نظام كولوفيو ماينز
TRICAM رأس كاميرا ثلاثي الشرائحكارل شتورتس20221030كارل شتورتس نظام كولوفيو ماينز
TRICAM SLII وحدة التحكم في الكاميراكارل شتورز20223011-1كارل شتورتس كولوفيو سستمر ماينز
شاشة مسطحة 15 بوصة EndoVueKarl Storz9415NNKarl Storz Coloview System Mainz
تلسكوب هوبكنز المستقيم إلى الأمام
قطر 1.9 مم ؛ الطول 10 سم
قابل للتعقيم
نقل ضوء الألياف البصرية مدمج كارل
شتورز64301AA
غمد الحماية والفحصكارل شتورز61029C
آلة < البصرية

المراجع

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2016. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
  2. Weitz, J., et al. Colorectal cancer. Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).
  3. Bork, U., et al.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

نموذج فأر لسرطان القولون والمستقيمحقن فيروس Adeno-Creعدوى القولون القطاعيةتنظير القولون عالي الدقةتقنية مراقبة الأورامالفئران المعدلة وراثياًإجراء جراحي للقولونتدابير السلامة البيولوجية للفيروسات الغديةأليل Cre-Reporter الفلوريأورام القولون البعيدة