1. جمع ونقل الأسماك الحية
ملاحظة: يصف هذا البروتوكول كيفية جمع الأسماك التي تمتلك المثانة الغاز، من عمق ≥15 م إلى السطح. وسيؤدي النقل السريع إلى السطح إلى إحداث توسع في المثانة الغازية عن طريق تغيير الضغط الذي يمكن أن يلحق ضررا جسيما بالسمك أو يقتله. وينبغي توخي الحذر، حيث أن الضرر الذي يلحق بالأسماك خلال هذه الخطوة الأولى سيؤثر سلبا على بقائها وعلى سلوكها فيما بعد.
- قبل الغوص مع الغوص، وجمع المواد التالية: شبكة اليد مناسبة لالتقاط الأنواع المستهدفة تحت الماء. أكياس البولي ايثيلين مزدوجة التي هي كبيرة بما فيه الكفاية للأسماك؛ مطاط (80 مم × 6 مم)؛ اسطوانة أكسجين لتضخيم أكياس جمع على السطح؛ والباجين، وهو مضاد للميكروبات يضم 10٪ نيفورستيرينات الصوديوم. مربع رغوة البوليسترين التي لوضع أكياس جمع. الماصات. وإذا لزم الأمر (راجع الخطوة 1.4)، حبل بطولأي ما يعادل أقصى عمق الغوص، فضلا عن وزن لا يقل عن 2 كجم.
- جمع أنواع الأسماك المستهدفة باستخدام شبكة اليد أثناء الغوص. في حين لا يزال تحت الماء، ووضع الأسماك التي تم التقاطها في كيس البولي ايثيلين وربط فم الحقيبة مع المطاط. وإذا استغرقت عملية نقل الأسماك إلى الحوض ≥1 يوم، فإنه يحافظ أيضا على المياه من الموائل الطبيعية في أكياس أخرى، لاستخدامها في تجديد مياه حفظ الأسماك.
ملاحظة: من أجل السلامة، يجب أن تعمل المهام تحت الماء من قبل شخصين على الأقل. - السطح من نقطة الجمع مع أكياس الأسماك بسرعة لا تزيد عن 1 م / دقيقة: بينما في عمق 10 م أو أكثر، ووقف تصاعدي لمدة 1-5 دقائق كل 2 م؛ ومن عمق 10 م إلى محطة السطح لمدة 1-5 دقائق كل 1 م. عندما لا تتمكن الأسماك الملتقطة من الحفاظ على طفوها في الحقيبة ( أي إذا كانت تطفو مع مثانة غاز موسعة في حين لا تزال تحاول السباحة نحو القاع)، إما الحفاظ على نفس العمق لمدة 1-5 دقائق أو دييمتد إلى 1 - 2 متر أعمق. مرة واحدة يبدو أن الأسماك لاستعادة الطفو، واستئناف الصعود إلى السطح.
ملاحظة: إذا كان هناك احتمال أن الهواء في خزان سكوبا سوف تنفد في حين تصاعدي، ربط حبل إلى كيس البولي إثيلين وإرفاق وزن ≥2 كجم. بعد المشغل تحت الماء صعد بأمان، وسحب هذا ما يصل الى السطح في نفس السرعات المنصوص عليها أعلاه. - على الشاطئ أو القارب، حل 10 جزء في المليون إلباجين في الماء من كل كيس البولي ايثيلين بعد تطفو على السطح.
ملاحظة: على الرغم من أن بعض الأسماك قد لا تكون قادرة على الحفاظ على الطفو فقط بعد أن يتم جلبها إلى السطح، ومعظم يمكن أن يتوقع أن يتعافى في غضون يوم واحد. - إذا كانت كثافة الأسماك في كيس جمع عالية، وتقسيم الأسماك بين أكثر من أكياس لمنع منها إتلاف بعضها البعض عن طريق فرك ضد بعضها البعض أثناء النقل. إذا كانت الأسماك نوعا عدوانيا، قم بتقسيمها بشكل فردي بين الأكياس.
- تضخيم حقيبة جمع مع الأكسجين ومرة أخرى ختم فم الحقيبة باستخدام rubberbands. عند إدخال الأكسجين في الحقيبة، وانخفاض فوهة في كيس الماء لزيادة محتوى الأوكسجين المذاب. يجب أن تكون حقيبة موسعة بالكامل 1/4 كامل بالماء.
- إبقاء أكياس جمع مع الأسماك في مربع رغوة البوليسترين، للحفاظ على درجة حرارة الماء مستقرة وتقليل الإجهاد الأسماك في ظل ظروف مظلمة.
- إذا كان سوف يستغرق ≥1 يوم لنقل الأسماك إلى الحوض، مرة واحدة في اليوم الصرف 1/4 إلى 1/3 من المياه في كل كيس حفظ الأسماك، وذلك باستخدام المياه الاحتفاظ بها من الموائل التي تم إضافة 10 جزء في المليون إلباجين ، و أعد حزم كل مع الأكسجين. كل يوم، وإزالة الأسماك الميتة والفضلات على الجزء السفلي عن طريق شبكة اليد أو ماصة.
مالحظة: إذا كان النقل بالطائرة متورطا، انتظر يوم واحد على األقل لتأقلم األسماك مع ضغط الهواء على السطح قبل النقل ألن تغيير الضغط بخطوتين) من تحت الماء إلى السطح، والسطح إلى الهواء العلوي (على المدى القصير قد يؤثر سلبا) بقاء الأسماك. ط>
2. أكليماتينغ الأسماك إلى حوض السمك
- تعويم الحقيبة التي تحتوي على الأسماك في الحوض لمدة 30 دقيقة لتحقيق المساواة في درجة حرارة المياه.
- على مدى فترة 10 دقيقة، وتبادل تدريجيا المياه حقيبة مع ماء الحوض، لتجنب الصدمة الناجمة عن اختلاف مفاجئ في كيمياء المياه (على سبيل المثال ، ودرجة الحموضة والملوحة).
ملاحظة: الأسماك التي يصدمها فرق كبير جدا في كيمياء المياه قد تظهر تغير غير طبيعي في لون الجسم و / أو السلوك. مراقبة هذا بعناية أثناء التأقلم. - حل 10 جزء في المليون إلباجين في ماء الحوض.
- بعد ذلك، مرة واحدة يوميا لمدة 3 أيام، وتجديد 1/3 من ماء الحوض، بعد أن أضاف 10 جزء في المليون إلباجين إلى المياه بديل.
- وأخيرا، تبدأ في القضاء على البلغين من خلال تبادل نصف ماء الحوض مرة واحدة في اليوم، حتى يتلاشى اللون.
3. حقن المرئية زرع إلاستومر (في) علامة لتحديد الأسماك الفردية
t "> ملاحظة: في هذا العمل، يتم التعرف على الأسماك الفردية باستخدام علامات في؛ للحصول على أمثلة، راجع فريدريك
10 ، أولسن و فولستاد
11 ، و ليبلانك و نواكيس
12. أيضا، إذا كانت الأنواع الدراسة كبيرة بما فيه الكفاية لعقد في يد ، فإن الجدول الجراحي المستخدم في الخطوة 3.2 لن يكون ضروريا.
- تحديد موقف الحقن ولون العلامة لكل فرد. الخيار الأكثر أمانا هو اختيار نقطة الحقن في الجزء الظهرية العضلية السميكة أو الذيلية جزء من الجسم، وتجنب حقنه في البطن حيث يمكن اختراق الأعضاء الداخلية.
ملاحظة: يتم وصف نظام الترقيم في الشكل 1 : إذا كانت أنواع الدراسة كبيرة بما فيه الكفاية للحقن في 8 وظائف ممكنة، وهذا النظام يسمح بتحديد 154 شخصا باستخدام لون واحد. عشرة ألوان من علامات في المتاحة تجاريا. اختيار لون مميزا على أساس لون الجسم من الأسماك. - <قوية> بالنسبة للأسماك التي هي أصغر من يمكن أن تعقد في اليد، وإعداد الجدول الجراحي على النحو التالي (الرجوع أيضا إلى كينكل وآخرون 13 ) ( الشكل 2 ).
- قطع اسفنج لينة قياس 5 سم L × 5 سم W، والتي هي على الأقل 5-10 ملم أقل من ارتفاع طبق بتري.
- قطع الأخدود في الاسفنج من حوالي 5-10 ملم عمق، وضبط عرضه إلى أن من عرض الجسم التقريبي للأسماك. قطع مجلس البولي فينيل (بك) متنها (0.3 مم سمك) إلى 5 سم L × 5 سم W، وثنيها إلى وديان أضعاف (أو M- الشكل).
- تعيين مجلس بك مخدد على رأس الاسفنجة مخدد ثم تعيين الاسفنج في طبق بتري (ø 160 ملم، عمق 30 ملم). استخدام المياه من خزان الانتعاش لملء طبق بتري حتى يتم مغمورة مجلس بك بشكل كاف.
- قم بإعداد علامات في وفقا لدليل وضع علامات في. مزيج المواد المطاط الصناعي وإضافة الخليط إلى سيري 3 ملنج مع إبرة قياس 29، كما هو وارد في المجموعة.
- إعداد خزانات المياه اثنين لاستخدامها أثناء أداء الحقن العلامة: واحدة للتخدير واحد للشفاء؛ ضبط درجة الحرارة والملوحة تركيز هذه لتتناسب مع الماء في تربية الحوض. استخدام مضخة الهواء مع حجر الهواء لتعميم ما لا يقل عن الماء في خزان الانتعاش.
- إعداد السائل التخدير عن طريق خلط 2-ميثيلكوينولين مع حجم مساو من الايثانول 99.5٪. إضافة هذا إلى خزان التخدير لتحقيق تركيز 18 جزء في المليون.
ملاحظة: يعتمد التركيز الأمثل من السائل التخدير على الأنواع وحجم الجسم من الأفراد. لذلك، فحص التركيز الأمثل لأنواع الدراسة مقدما. - نقل الأسماك الفردية إلى خزان التخدير والسماح لهم لتصبح تخدير: وهذا هو، الانتظار حتى الأسماك لا تتفاعل مع لمسها أو إلى الاهتزازات المياه عندما يتم استغلالها خارج الخزان. كما يتغير لون الجسم عندما يكون أنسثيتيزد في العديد من الأسماك، وأيضا مراقبة لون الجسم بعناية والقاضي عما إذا كان تخدير الأسماك من التغييرات. لأن هناك بعض الاحتمال أن الأسماك قد تقفز من خزان التخدير، والحفاظ على تغطيتها باستخدام لوحة الاكريليك شفافة، على الأقل حتى تبدأ الأسماك للتحرك ببطء.
ملاحظة: ضبط الوقت اللازم لتخدير و / أو ضبط تركيز السائل التخدير، اعتمادا على الأنواع الدراسة وحجم جسمها. إذا توقفت حركة أوبيركولوم من قبل التخدير، فإن الأسماك ستكون في خطر كبير من الموت. - كما الأسماك سوف تضعف إذا تم تدفئة الجسم، والحفاظ على الأصابع في الماء البارد نسبيا أثناء تخدير الأسماك.
- رفع الأسماك من خزان التخدير وقياسه بسرعة أو تسجيل البيانات اللازمة (الطول الكلي، والجنس، وما إلى ذلك ). إذا ظهر أن السمكة تتعافى أثناء القياس، فعليك نقلها فورا إلى خزان التخدير.
- نقل الأسماك إلى طاولة الجراحية. تعيين الأسماك بطني الجانب أسفل في رانه الأخدود بك. إذا كان حجم الجسم هو صغير جدا، واستخدام مجهر مجهر في حين جعل الحقن. إذا كانت الأنواع الدراسة كبيرة بما فيه الكفاية لعقد في يد، وضخ علامة في حين يتم عقد.
- وضع الجانب مشطوف من الإبرة نحو الخارج وأشار نحو رأس الأسماك. إدراج إبرة تحت الجلد، أكثر أو أقل بالتوازي مع الجسم، وعلى مقربة من مجرد تحت الجلد ممكن. ضبط عمق الإدراج اعتمادا على حجم الجسم الأسماك وسهولة لرؤية العلامة في نهاية المطاف.
- حقن علامة في حين سحب الإبرة، ووقف الحقن قبل شطبة الإبرة تصل إلى نقطة دخول الإبرة (وهذا سيكون من السهل أن نلاحظ إذا حقن العلامة في منطقة واسعة نسبيا).
- عند الانتهاء من حقن العلامة، على الفور نقل الأسماك إلى خزان الاسترداد. إذا ظهر الانتعاش بطيئة جدا، بلطف تعميم المياه باليد.
- بعد الانتعاش، والعودة الأسماك إلى الحوض تربية، والاستمرار في إضافة 10 جزء في المليون إلباغان إلى الماء لمدة 3 أيام.
ملاحظة: تحت ظروف منخفضة الرؤية لعلامات في، سوف أوفا ضوء تصفيتها تسهيل التعرف على العلامات.
4. عد بيض لاصق ديمرسال
- ولإقامة عش البيض الاصطناعي الذي يمكن للأسماك أن تودع فيه البيض اللاصق، قطع أنبوب بك غير شفاف (5 سم، طوله 6 سم) في النصف، عمودي على القطر.
ملاحظة: حجم الأنابيب المذكورة أعلاه هو مناسبة لتفريخ غوبي صغير نسبيا T. ماريناي . وبالتالي، ضبط حجم الأنابيب البلاستيكية وشكل كما هو مناسب لأنواع الدراسة. - طباعة شبكة 5 مم × 5 مم على ورقة مضادة للماء وقطع عليه لتناسب المنطقة الداخلية من الأنابيب البلاستيكية.
- إصلاح ورقة للماء إلى الداخل من الأنابيب البلاستيكية باستخدام المطاط.
ملاحظة: إذا كان من الصعب على الإناث لربط البيض على ورقة للماء، والبيض تقع من ورقة، وجعل ورقة محكم مع الصنفرة. - تغطية أسفل حوض السمك مع طبقة من الرمل، 1- سم 2 سم. إدراج ما يقرب من ثلث الأنابيب البلاستيكية بشكل غير مباشر في الرمل، مع الجانب ثابت ورقة أسفل.
- بعد التفريخ الناجح من الأسماك، وإزالة ورقة مع كتلة البيض من الأنابيب البلاستيكية ووضعه في طبق بتري مع ماء الحوض. إصلاح ورقة جديدة داخل الأنابيب البلاستيكية ووضع هذا مرة أخرى على الجزء السفلي من الحوض. وأخيرا، عد البيض عن طريق تصوير كتلة البيض.
- بدلا من ذلك، إذا رصدت رعاية البيض الوالدين التي يتعين القيام بها بعد التفريخ، يجب الحرص على عدم جلب البيض من الماء. بدلا من ذلك، استخدم طبق بتري لتغليف البيض والورق جنبا إلى جنب مع ماء الحوض، تصوير كتلة البيض بسرعة، ومن ثم إعادة التأكيد بعناية ورقة مع كتلة البيض مرة أخرى في نفس الأنابيب البلاستيكية قبل أن يعود كل ذلك إلى موقعها الأصلي على أسفل حوض السمك. وأخيرا، عد البيض باستخدام الصورة.
- عد البيض باستخدام إيماجيج ( الشكل 3 ). يتم شرح هذه الطرق التلقائية واليدوية عد الخلايا بالتفصيل في ما يلي: عد الخلايا الأساسية (جامعة شيكاغو، المتكاملة المتكاملة المجهر الضوئي مرفق، http://digital.bsd.uchicago.edu/image_j.php). تحليل الجسيمات (http://imagej.net/Particle_Analysis)؛ عداد الخلية (https://imagej.net/Cell_Counter).
- وإلا، إذا توضع البيض كثيفة، وتقدير عدد البيض عن طريق حساب نسبة الكثافة المنطقة: عد البيض في المطبوعة 5 × 5 مم 2 الشبكة لحساب كثافة البيض، وقياس مساحة السطح التي تغطيها البيض من قبل إيماجيج، وتقدير العدد الإجمالي للبيض من كثافة أعلى لكل وحدة ومساحة السطح. يتم شرح طريقة قياس مساحة السطح أعلاه من قبل إيماجيج في ما يلي: تعيين نطاق ... (فرع خدمات البحوث، https://imagej.nih.gov/ij/docs/menus/analyze.html). فإنه يفسر كيفية تحديد النطاق المكاني للصورة. باستخدام إيماجيج لقياس المساحة السطحية (كلية ولاية كين، الأكاديميةتيشنولوغي، https://dept.keene.edu/at/2011/04/15/by-matthew-ragan/).
ملاحظة: إذا كانت البيض شفافة، ورقة للماء الأسود هو أكثر ملاءمة لطريقة العد التلقائي لأن إيماجيج يمكن التعرف على مخطط للبيض بشكل فردي.