Electroconvulsive الاستيلاء (ECS) نموذج حيوانات تجريبية للعلاج اليكتروكونفولسيفي للاكتئاب الشديد. ECS عالمياً يحفز النشاط في قرن آمون، مما يؤدي إلى سينابتوجينيسيس واللدونه متشابك. وهنا يصف لنا طرق الاستقراء ECS في الفئران ووجود سوبسيلولار من هيبوكامبي بهم دراسة التغيرات المستحثة بالضبط في البروتينات متشابك.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
مضبوطات اليكتروكونفولسيفي في الفئران وتجزئة لهذه هيبوكامبي دراسة التغيرات المستحثة بالضبط في البروتينات بوستسينابتيك الكثافة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الاستيلاء على اليكتروكونفولسيفي (ECS) نموذج حيوانات تجريبية electroconvulsive العلاج، العلاج الأكثر فعالية للاكتئاب الشديد. ECS يستحث المعمم منشط رمعي المضبوطات مع انخفاض معدلات الوفيات، وموت الخلايا العصبية، وهو نموذج يستخدم على نطاق واسع للعقاقير المضادة للصرع الشاشة. هنا، يمكننا وصف أسلوب الاستقراء ECS في الذي يتم تسليم الحالي 55-اماه موجزاً عن 0.5 الجرذان s للذكور 200-250 جم في الوزن عن طريق أقطاب مشبك الإذن. هذا التحفيز الثنائية أنتجت المرحلة 4-5 رمعي المضبوطات التي استغرقت حوالي 10 ثانية. بعد وقف ECS الحاد أو المزمن، شام معظم الفئران استعادت منشودا سلوكيا من الفئران "لا مصادرة". لأنه يرفع ECS عالمياً نشاط الدماغ، كما استخدمت لدراسة التعديلات المعتمدة على نشاط البروتينات متشابك وآثارها على قوة متشابك باستخدام أساليب متعددة. على وجه الخصوص، يتيح تجزئة سوبسيلولار بوستسينابتيك كثافة (PSD) في تركيبة مع النشاف الغربية لتحديد كمي لوفرة البروتينات متشابك في هذا الهيكل متشابك المتخصصة. على النقيض من أسلوب تجزئة سابقة التي تتطلب كمية كبيرة من أدمغة القوارض، يصف لنا هنا أسلوب تجزئة صغيرة لعزل مديرية الأمن العام من هيبوكامبي من فأر واحد، دون السكروز التدرج الطرد المركزي. باستخدام هذا الأسلوب، نظهر أن الكسر PSD معزولة تحتوي على بروتينات الغشاء بوستسينابتيك، بما في ذلك PSD95، GluN2B، و GluA2. سينابتوفيسين ماركر presynaptic وقابل للذوبان بروتين هيولى α-tubulin استبعدت من الكسر مديرية الأمن العام، مما يدل على نجاح PSD العزلة. وعلاوة على ذلك، انخفض ECS المزمنة التعبير GluN2B في مديرية الأمن العام، مشيراً إلى أن لدينا أسلوب تجزئة PSD الصغيرة يمكن تطبيقها على الكشف عن التغييرات في البروتينات PSD هيبوكامبال من فأر واحد بعد العلاجات الجينية أو صيدلانية أو الميكانيكية .
المقدمة
وقد استخدمت العلاج اليكتروكونفولسيفي لعلاج المرضى الذين يعانون من اضطرابات الاكتئاب الرئيسية، بما في ذلك الاكتئاب المقاوم للعقاقير والاكتئاب الثنائي القطب وأمراض باركنسون ومرض الفصام1،2. في هذا العلاج، وتولد الاستيلاء على التحفيز الكهربائي تسليمها إلى رئيس تخديره من المرضى عن طريق ابيكرانيال أقطاب1،،من23. وقد الإدارة المتكررة من ECS سريرياً مفيدة لاضطرابات الاكتئاب المقاوم للأدوية1،،من23. ومع ذلك، ظل الآلية الدقيقة الأساسية ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جميع الإجراءات التجريبية بما في ذلك المواد الحيوانية أقرتها لجنة الاستخدام في جامعة إيلينوي في اوربانا-الشمبانيا ورعاية الحيوانات المؤسسية.
1-الحفاظ على مستعمرة الفئران
- تتكاثر الفئران سبراغ داولي (انظر الجدول للمواد) والحفاظ عليها في الشروط القياسية بدوره الضوء الظلام 12-ح ومتواصلة للحصول على الغذاء والماء.
- فطم الجراء الفئران في يوم ما بعد الولادة (ع) 28 وتضعهم في مجموعات من 2-4 ليتيرماتيس الذكور أو الإناث.
- علامة ذيول الفئران الذكور مع علامة سوداء دائمة غير سامة لتحديد الهوية.
- تزن ذكور الفئران 3 مرات في الأسبوع، وسجل بها بوديويايتس.
2-إعداد جهاز ECS
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
استخدام الإجراءات المفصلة المقدمة هنا، صدمة كهربائية واحدة (55 ماجستير، 100 البقول/s ل 0.5 s) تسليمها عن طريق الإذن-كليب أقطاب الناجمة عن مرحلة غير متكرر مضبوطات منشط رمعي 4-5 في الفئران (الشكل 1أ-ب). تلقي الحادة ECS التعريفي 8 مجموع الجرذان وعرض المضبوطات منشط رمعي المرحلة 4-5. المضبوطات استغرقت حوالي 10 s، وجميع الفئران استرجاعها، في غضون 1-2 دقيقة لوقف الاستيلاء. ولم يتلق صدمة كهربائية الشام "لا الاستيلاء" الفئران ولذلك لم يتم عرض المضبوطا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا، يمكننا وصف أسلوب الاستقراء ECS في الفئران التي يتسبب تحفيز نشاط الخلايا العصبية في هذه هيبوكامبي العالمية. ECS هو نموذج حيوان العلاج اليكتروكونفولسيفي، الذي يستخدم سريرياً لعلاج المخدرات اضطرابات الاكتئاب المقاوم للحرارة في البشر1،،من23. وعلى الرغم من استخدام العلاج اليكتروكونفولسيفي لعلاج الاكتئاب الحاد، الآلية الدقيقة الأساسية لا يزال غير واضح. للحث على السلوكيات المضادة ديبريسانت تشبه في القوارض ECS ويحفز الخلايا هيبوكام.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون الدكتور إريك جيم بولتون للسماح لنا باستخدام أجهزة الطرد المركزي له لتجزئة والدكتور غراهام H. ديرينج في مختبر الدكتور ريتشارد لام هوجانير جامعة جون هوبكنز لتزويدنا بالبروتوكول الصغيرة لتجزئة مديرية الأمن العام.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| يزود Spargue-Dawley rat | Charles River Laboratories | ECS | |
| مولد نبض | Ugo Bsile ، Comerio ، إيطاليا | 57800 | ECS لوازم |
| MilliQ لنظام تنقية المياه | EMD Millipore | Z00Q0VWW | إمدادات التجزئة الخلوية |
| السكروز | Em science | SX 1075-3 | إمدادات |
| التجزئة الخلويةNa4< / sub>O7< / sub>P2< / sub> | SIGMA-ALDRICH | 221368 | إمدادات التجزئة الخلوية |
| حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA) | SIGMA-ALDRICH | E9884 | إمدادات التجزئة الخلوية |
| الفرعية HEPES | SIGMA-ALDRICH | H0527 | إمدادات التجزئة الخلوية |
| حمض أوكادايك | TOCRIS | 1136 | إمدادات التجزئة تحت الخلوية |
| وقف مثبط البروتياز | الحراري العلمي | 78429 | إمدادات التجزئة الخلوية |
| NaVO3< / sub> | SIGMA-ALDRICH | 72060 | لوازم التجزئة الخلوية |
| EMD Millipore Sterito مرشحات الزجاجة العلوية الفراغية المعقمة | فيشر Scientific | SCGPS05RE | التجزئة الخلوية |
| مقص القزحية | WPI (الدقة العالمية الأدوات) | 500216-G | يوفر التجزئة الخلوية |
| طبقا لزراعة الأنسجة 30 مم | يوفر فيشر ساينتفيك | 08-772B | لوازم التجزئة الخلوية |
| الخالط الزجاجي ومدقة تفلون | VWR | 89026-384 | إمدادات التجزئة الخلوية |
| 1.7 مل أنبوب الطرد المركزي | الدقيق DENVILLE SCIENTIFIC INC. ؛ | C2170 (1001002) | تجزئة الخلوية تزود |
| أجهزة الطرد المركزي Sorvall Legend XT / XF | Thermo Fisher | 75004521 | تجزئة الخلايا |
| كاشف فحص البروتين BCA A ، 500 مل | Thermo Fisher | # 23228 | لوازم اللطخة الغربية |
| كاشف فحص البروتين BCA B ، 25 مل | Thermo Fisher | # 1859078 | إمدادات Western blot |
| جل SDS-polyacrylamide (SDS-PAGE) | BIO-RAD | مستلزمات اللطخة الغربية | |
| قيد التشغيل Buffer | Made in the Lab | blot Supplies. | |
| خلية الرحلان الكهربائي العمودي Mini-PROTEAN Tetra للمواد الهلامية MiniPrecast ، 4-GEL | : BIO-RAD | # 1658004 | اللطخة الغربية تزود |
| غشاء البولي فينيل ثنائي فلوريد (PVDF) ؛ | Milipore | IPVH00010 | Western blot supplies |
| Transfer Buffer | Made in the laboratory | blot supplies. | |
| تريس قاعدة | فيشر العلمية | BP152-1 | لطخة غربية إمدادات |
| جلايسين | فيشر العلمي | BP381-5 | لطخة غربية |
| إمدادات كبريتات دوديسيل الصوديوم | SIGMA-ALDRICH | 436143 | إمدادات اللطخة الغربية |
| الميثانول | فيشر Scientific | A454-4 | اللطخة الغربية تزود |
| Triton X-100 | فيشر Scientific | BP151-500 | المنظفات لعزل |
| PSD Mini Trans-Blot Module | BIO-RAD | # 1703935 | اللطخة الغربية اللطافة |
| الفورية خالية من الدسم الحليب الجاف | الفوري قيمة | لطخة الغربية توريد | |
| متعدد الأغراض الدوار ; | النموذج العلمي | الحراري - 2314 | اللطخة الغربية لوازم |
| Hyblot CL Autoradiography Film | DENVILLE SCIENTIFIC INC. ؛ | E3018 (1001365) | لطخة غربية |
| الركيزة الكيميائية المحسنة | Thermo Scientific | 32106 | Western blot |
| معالج فيلم Konica SRX-101A | KONICA MINOLTA | SRX-101A | اللطخة الغربية |
| <قوية>اسم الجسم المضاد< / strong> | |||
| PSD-95 | إشارات الخلية | # 2507 | تخفيف الجسم المضاد = 1: 500 - 1,000 ، الوقت = 9 - 12 ساعة ، درجة حرارة التفاعل = 4 & درجة ؛ ج ، الأنواع المضيفة = |
| إشارات خلية | Synaptophysin | للأرانب # 4329 | تخفيف الجسم المضاد = 1: 500 - 1,000 ، الوقت = 9 - 12 ساعة ، درجة حرارة التفاعل = 4 ° ؛ C ، الأنواع المضيفة = أرنب |
| ألفا توبولين | سانتاكروز | SC-5286 | الجسم المضاد = 1: 500 - 1,000 ، الوقت = 9 - 12 ساعة ، درجة حرارة التفاعل = 4 & درجة ؛ C ، الأنواع المضيفة = الفأر |
| GluN2B | Neuromab | 75-097 | تخفيف الجسم المضاد = 1: 500 - 1,000 ، الوقت = 9 - 12 ساعة ، درجة حرارة التفاعل = 4 & درجة ؛ C ، الأنواع المضيفة = Mouse |
| GluA2 | Sigma-aldrich | Sab 4501295 | تخفيف الأجسام المضادة = 1: 500 - 1,000 ، الوقت = 9 - 12 ساعة ، درجة حرارة التفاعل = 4 ° ؛ C ، الأنواع المضيفة = أرنب |
| STEP | Santacruz | SC-23892 | تخفيف الجسم المضاد = 1: 200 - 500 ، الوقت = 9 - 12 ساعة ، درجة حرارة التفاعل = 4 ° ؛ C ، الأنواع المضيفة = الفأر |
| Peroxidas AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H + L) مختبر | Jackson ImmunoReserch | 715-035-150 | تخفيف الأجسام المضادة = 1: 2،000-5،000 ، الوقت = 1 ساعة ، درجة حرارة التفاعل = RT ، الأنواع المضيفة = الحمار |
| Peroxidas AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H + L) مختبر | Jackson ImmunoReserch | 711-035-152 | تخفيف الأجسام المضادة = 1: 2،000-5،000 ، الوقت = 1 ساعة ، درجة حرارة التفاعل = RT ، الأنواع المضيفة = الحمار |
المراجع
- Dierckx, B., Heijnen, W. T., van den Broek, W. W., Birkenhager, T. K. Efficacy of electroconvulsive therapy in bipolar versus unipolar major depression: a meta-analysis. Bipolar Disord. 14 (2), 146-150 (2012).
- McClintock, S. M., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
