ويصف هذه المخطوطة الأداة المساعدة من الموجات فوق الصوتية التي أجريت على إناث الفئران لتصميم نماذج تجريبية لتحقيق الصحة الإنجابية وأمراض النساء. ويرد شرح خطوة بخطوة عن كيفية تنفيذ التقييم أولتراسونوجرافيك.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تخطيط الصدى في تحقيقات الإنجابية تجريبية على الفئران
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مع تطور التكنولوجيا الإنجابية المساعدة والقيود الأخلاقية للبحوث على البشر، استخدمت نماذج حيوانية الفئران على نطاق واسع في الطب الإنجابي. في الماضي، دراسة لتطوير الجهاز التناسلي في القوارض استناداً إلى الفحص النسيجي مرة واحدة من الأنسجة قصت. في الآونة الأخيرة، مع تطوير الاستبانة المهبل بالموجات فوق الصوتية، الموجات فوق الصوتية عالية الجودة يمكن الآن إجراء تقييم الأجهزة التناسلية للفئران، مما يتيح طريقة جديدة لدراسة الجهاز التناسلي. تم الحصول على الصور باستخدام نظام أولتراسونوجرافيك عالية الدقة. تم إجراء تخطيط الصدى أمراض النساء على 28 عمرها 8 الأسبوع غير الحوامل الجرذان والفئران سبراغ داولي الحوامل 5. ونحن تصف كيفية التعرف على الأجهزة التابعة للجهاز التناسلي والهياكل المرتبطة بها في وجهات النظر النمطية أثناء المراحل المختلفة من السفاد دورة. لون تدفق دوبلر استخدمت لقياس تدفق الدم في الشريان الرحمي وتقييم التغييرات نمط تدفق الدم الرحم أثناء المراحل المختلفة للحمل. لقد أظهرنا أن الاستكشاف بالموجات فوق الصوتية طريقة مفيدة لتقييم التغييرات في الأجهزة التناسلية الداخلية. استخدامها يثير إمكانية إجراء تجارب إضافية، بما في ذلك الإجراءات الطبية أو الجراحية، ويوفر القدرة على رصد التغيرات سونوجرافيك للأجهزة الداخلية دون التضحية بالحيوانات.
المقدمة
نماذج حيوانية الفئران قد استخدمت على نطاق واسع في الطب التناسلي، بما في ذلك في الجنين وزرع المبيض1،2. بيد في الماضي، دراسة تطوير الجهاز التناسلي في القوارض واستند الفحص النسيجي مرة واحدة من الأنسجة قصت، ولم يكن من الممكن في الفئران3دراسة طولية التغيرات اليومية الجهاز التناسلي. الموجات فوق الصوتية وقد استخدمت على نطاق واسع في ساعدت التكنولوجيا الإنجابية في البشر لأكثر من 30 عاماً، ولكن فقط تم تطبيق هذه التكنولوجيا قيمة إلى الفئران مؤخرا.
كان هدفنا وضع نهج أولتراسونوجرافيك لتقييم الأجهزة التناسلية للفئران سبراغ داولي لتصميم نماذج تجريبية لتحقيق الإنجاب وأمراض النساء وإثبات هذا الإجراء نظراً لمعرفتنا، وهناك لا منشورات تصور الحالية فيما يتعلق بهذا الإجراء. يصف لنا إجراء الفحص أولتراسونوجرافيك من الجهاز التناسلي للأنثى في الفئران والنتائج أولتراسونوجرافيك هذا التشريح وتدفق الدم الشريان الرحمي باستخدام الموجات فوق الصوتية عالية الوضوح. يمكننا رصد الخصائص بطانة الرحم والمبايض وتدفق الدم الشريان الرحمي في الحيوانات غير الحوامل في مراحل مختلفة من دورة السفاد لتقييم الاختلافات الكبيرة في سمك بطانة الرحم والمبيض مورفولوجيا وتدفق الدم الرحم في مراحل مختلفة من دورة السفاد، مماثلة للمرأة. ونحن تستخدم معدات الموجات فوق الصوتية عالية الجودة مع تردد 70 ميغاهيرتز ومستوى قرار من 30 ميكرون. وكان هدفنا الأخرى لتقييم التغيرات في المقاومة لتدفق الدم الرحم في الجرذان الحوامل. يسمح هذا الأسلوب لدراسة التغيرات اليومية في الأجهزة الإنجابية دون التضحية بالحيوانات.
وهناك عدة صعوبات تقنية في استخدام الموجات فوق الصوتية على الفئران. وتشمل هذه الصعوبات: بطانة الرحم الفئران أرق كثير من الإناث بشرية4. صعوبة في تصوير المبيضين الفئران قد نسبت إلى الجلد أكثر سمكا وعضلات جدار البطن في الفئران، مما أدى إلى تخفيف شبه الكامل ل الموجات فوق الصوتية5، والشريان الرحمي أكثر بكثير من الصعب العثور في غير الحوامل الفئران. أننا قد تحل العديد من المشاكل التقنية مع الإجراء، ونظهر لتلك المشاكل التي ما زالت، كيفية التقليل إلى أدنى حد لها.
رصد نجاح التغييرات سونوجرافيك في الأجهزة التناسلية للفئران دون الحاجة إلى التضحية بالحيوانات سيتم فتح إمكانية بناء المستقبل نماذج حيوانية للطب الإنجابي وغيرها من العمليات الجراحية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت هذه الدراسة صارمة وفقا للتوصيات الواردة في الدليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية "المعاهد الوطنية للصحة" ووفقا سيصلون (بحوث الحيوان: الإبلاغ في تجارب فيفو) المبادئ التوجيهية. البروتوكول تلقي ترخيص للتجارب الحيوانية الامتثال للتوجيه 2010/63/الاتحاد الأوروبي مع رقم الترخيص A13170404 (أنيكسو 1). جميع التجارب التي أجريت في مختبر معتمد من قبل الاتحاد الأوروبي بعد مبادئ توجيهية وطنية للرعاية الأخلاقية للحيوانات (RD 53/2013، وتوجيه الاتحاد الأوروبي رقم 63/2010). تمت الموافقة البروتوكول اللجنة المعنية "أخلاقيات التجارب الحيوانية" من جامعة مورثيا.
1-إعداد الحيوان
ملاحظة: جميع التجارب التي حظيت بقسم الحيوان التجريب بجامعة مورسيا والتوليد وجامعة "إدارة مورسيا التوليد".
- استخدم الأسبوع عمره 8 سبراغ داولي الفئران (28 إناث الفئران) وزنها 200-250 غم في جميع التجارب.
ملاحظة: هنا، ونحن أيضا استخدام الفئران الحوامل 5. - للحصول على الفئران الحوامل، قفص عمرها 8 الأسبوع الفئران الذكور الإناث والخصبة ورفيقه من 17:00-23:00 h. تحديد المكونات المهبلي في الصباح اليوم التالي تم تفسيره في التزاوج نجاح. النظر في اليوم الأول من الحمل، وفي اليوم التالي بعد أن كانوا قد تزاوج.
- القيام التجارب في أيام 9 و 15 و 18 من الحمل.
- الفئران البيت في مجموعات من اثنين مع حرية الحصول على الغذاء والمياه والاحتفاظ بها في دورات منتظمة ح 12 الضوء/الظلام.
- بعد التأقلم لشروط مرفق كحد أدنى لمدة أسبوعين، استخدام الخلايا المهبلية اليومية صباح اليوم لتقييم تواتر السفاد والانتظام.
ملاحظة: تم اختيار الفئران الثمانية والعشرين مع مرحلة السفاد عادية 4 إلى 5 أيام لإدراجها في الدراسة.
2-إعداد الفئران للتصوير
ملاحظة: تم الحصول على صور باستخدام الموجات فوق الصوتية المهبل عالية الدقة. تم تحديد مراحل دورة الشبقية بعنق اللطاخة المهبلية.
- قبل دراسة التصوير، تخدير السد في قاعة توجيهي مع الغاز إيسوفلوراني 2-3%.
- إزالة الحيوان وفورا مكان الآنف داخل مخروط الآنف متصل بنظام التخدير والحفاظ على الحيوان على 1.5-2% isoflurane خلال النظر في أولتراسونوجرافيك.
- إزالة الفراء من الهامش الساحلي في البطن والذيلية مع لوس أنجليس كليبرز وكريم مزيل الشعر.
- وضع الفئران أنيسثيتيزيد في موقف ضعيف على طاولة ساخنة لتأمين الفئران وضمان الراحة المثلى والصيانة من المعلمات الفسيولوجية لمدة دورة التصوير. ينبغي أن تدمج جميع المعلمات الفسيولوجية مع الصور والتقاط البيانات في الوقت الحقيقي عن طريق تطبيق الموجات فوق الصوتية.
- بلطف بإدراج تحقيق المستقيم (بعد التشحيم) لرصد درجة حرارة الجسم (37.5 درجة مئوية ± 0.5 درجة مئوية).
- ضع محول (30 هرتز) في حامل ثابتة وتحريكه على طول محور عمودي ومحور أفقي (إلى الأمام إلى الوراء وجنبا إلى جنب) باستخدام جويستيك تشغيلها يدوياً أو باليد.
- تطبيق بلسم العيون النفطي لعيون الفئران لتجنب التجفيف أثناء الإجراء.
3-النظر في الإجراءات
ملاحظة: تشريح الأعضاء التناسلية rats´: المهبل يكمن الظهرية للمثانة البولية، ويقسم قرنان الرحم التي تمتد نحو الكلي. وترتبط المبايض لقرون الرحم عن طريق أوفيدوكتس (الشكل 1). الرحم يقع في المنطقة الخلفية للكلى.
-
تعريف الرحم
- باستخدام المثانة كعلامة بارزة للعثور على عنق الرحم، اتبع عنق الرحم للعثور على فرع ابواق اليسار واليمين من الرحم.
- قم بالتبديل إلى عرض ثنائي الأبعاد والفيديو عن طريق تحديد "ب-الوضع". قياس القطر أنتيرو الخلفي من كل القرن الرحم في المنطقة منتصف البرزخية في صورة خط الوسط السهمي. الكشف عن القياسات باستخدام برامج النظام أولتراسونوجرافيك.
- قياس سمك بطانة الرحم من الحدود اتشوجينيك للحدود اتشوجينيك عبر تجويف الرحم في صورة خط الوسط السهمي في "ب-الوضع".
- تغيير إلى وضع دوبلر لون عن طريق تحديد "لون دوبلر". استخدام لون دوبلر لتحديد إمدادات الدم من بطانة الرحم وقياس تدفق الدم من بطانة الرحم. تحديد المعلمات التالية في وضع اللون دوبلر: تعيين مرشح الترددات العالية في 4 هرتز، مجموعة تردد التكرار النبضي بين 4 و 48 كيلوهرتز، وبوابة "نابض دوبلر" تعيين بين 0.2 و 0.5 مم.
-
تحديد تدفق الدم الشريان الرحمي
- الحصول على دوبلر الطول الموجي في الشريان الرحمي قرب الهامش الجانبي-أدنى من مفرق عنق الرحم قريبة من شريان حرقفي على كل جانب.
- استخدم المعلمات التالية في طريقة دوبلر: تعيين مرشح الترددات العالية في 6 هرتز، مجموعة تردد التكرار النبضي بين 4 و 48 كيلوهرتز، وبوابة "نابض دوبلر" تعيين بين 0.2 و 0.5 مم.
- الحرص على تنظيم تدفق الدم وشعاع دوبلر للتقليل من زاوية دوبلر. سجل الزاوية بين شعاع دوبلر والسفينة. القيم التي اتخذت بعد بزاوية 60 درجة غير دقيقة وينبغي تجنبها6.
- قياس السرعة القصوى الانقباضية (آيندهوفن) والسرعة نهاية الانبساطي (ادف) من ثلاث دورات متتالية. ثم حساب الانقباضي الانبساطي (S/D) نسبة (آيندهوفن/ادف) والمقاومة index (RI) ([آيندهوفن-ادف]/بي إس في آيندهوفن) القيم لكل القرن الرحم.
- قياس تدفق الدم الشريان الرحمي للفئران الحوامل 5 خلال 9th، 15th، اليومال 18 من الحمل.
-
تحديد المبيض وتدفق الدم الشريان المبيض
ملاحظة: توجد المبايض الفئران الإناث الوحشي للكلى على كلا الجانبين من الحيوان، ويقيمون في منصات الدهون الموجودة في نهاية القرن الرحم (الشكل 1).- صورة المبيض وتبدأ التحقيق في طائرة عرضية ووضعه على الجانب الأفقي للحيوان أقل قليلاً من أضلاعه. الكلي ولوحة الدهون لها مظهر هايبريتشويك مقارنة بالمبيض.
- قياس الحدود الخارجية المبيض والمسام. أرقام بمقياس لكل صورة في ملليمتر، مع زيادات 0.1 ملم.
ملاحظة: يساعد على تصوير دوبلر اللونية، وطريقة دوبلر السلطة مع تحديد كثافة المبيض وتدفق توجيهي.
4-تصميم الدراسة
- فحص دورة السفاد بعنق اللطاخة المهبلية.
- تقسيم جميع الفئران في مجموعتين. المجموعة 1 أو خصبة مسبقاً (أو بيريوفولاتوري)، وتشمل على الفئران التي كانت في بروستروس والسفاد مراحل دورة. المجموعة 2 أو بعدها خصبة، تشمل على الفئران التي كانت في وقت مبكر ديستروس وديستروس أواخر مراحل دورة.
- رصد ومقارنة القطر أنتيرو الخلفي من كل القرن الرحم في المنطقة منتصف البرزخية في الفئات 1 و 2.
- رصد ومقارنة سمك بطانة الرحم والخصائص لبطانة الرحم في المجموعتين 1 و 2.
- رصد ومقارنة حجم (أقطار كحد أقصى) وخصائص المبيض، وترجمة أي بصيلات بيريوفولاتوري في كلا المبيضين في الفئات 1 و 2.
- رصد ومقارنة تدفق الدم الشريان الرحمي في المجموعتين 1 و 2.
- رصد ومقارنة تدفق الدم الشريان الرحمي الفئران الحوامل في مراحل مختلفة من الحمل (أيام 9 و 15 و 18 من الحمل).
- أداء التحليلات الإحصائية باستخدام SPSS. تقديم البيانات يعني ± الانحراف المعياري (SD) أو الوسيط مع النطاقات المجال. تحليل النتائج باستخدام اختبار t للطالب بين المجموعات المختلفة. واعتبر فقيمه أقل من 0.05 فرقا يعتد به إحصائيا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
لا توجد أي اختلافات كبيرة في أقطار القرن الخلفي أنتيرو الرحم أو في سمك بطانة الرحم بين الجانبين في القرن الأفريقي الرحم (الجدول 1). بالمقارنة مع المجموعة 2، كان متوسط سمك بطانة الرحم في المجموعة 1 الاختلافات أكثر سمكا، ولكن ليس كبيرا (P > 0.05) عثر بين المجموعتين (الشكل 3). ومع ذلك، وجدنا السوائل داخل الرحم (في 8 من أصل 28 الفئران) قرب دورة السفاد المرتبطة بالتغيرات في بطانة الرحم مورفولوجيا (الشكل 2).
دراسات دوبلر كم...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
بسبب التعديلات الإجرائية واستكشاف الأخطاء وإصلاحها التي كانت مطلوبة في هذه الدراسة، على الرغم من أن هدفنا من تحديد جميع مراحل السفاد دورة في الفئران باستخدام الموجات فوق الصوتية، كنا غير قادر على العثور على أي اختلافات كبيرة. نحن افترض أن هذه الصعوبات قد يكون بسبب دورة السفاد يدوم سوى بضعة أيام في الفئران، خلافا للدورة في المرأة. نحن على ثقة من أن جميع قياسات أجريت في الوقت المناسب بالضبط لتحديد أي اختلافات. ولذلك، نحن تجميع السفاد في مراحل دورة في إلا مرحلتين لتقييم لأي خلافات، ولكن لم يلاحظ أي. كما هو متوقع، وجدنا لا ي...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
هذا البحث أيده قسم التجريب الحيوان بجامعة مورسيا والتوليد وجامعة "قسم التوليد في مورسيا". ونحن نشكر جميع الفنيين العاملين في سيب (en Biomédicas البحوث التجريبية Centro)، قسم التجريب الحيوان من جامعة مورسيا، الذين تعاونت في هذا المشروع.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| نظام التصوير الجزئي عالي الدقة Vevo3100 في الجسم الحي * | Visual Sonics، inc. | www.visualsonics.com/products | |
| نظام سكة حديد متكامل Vevo بما في ذلك وحدة المراقبة الفسيولوجية. | شركة Visual Sonics، Inc. | www.visualsonics.com/products | |
| MX400 Transducter | Visual Sonics، Inc. | www.visualsonics.com/products | |
| Vevo Lab Software | Visual Sonics، Inc. | www.visualsonics.com/products | |
| HSD: Sprague Dawley SD | Envigo، inc. | تشحيم سلالة الفئران | |
| الإمداد | |||
| CIBERTEC CA-EAC20 نظام عربة التخدير | Cibertec SA & nbsp ؛ | آلة التخدير | |
| Ecogel 100 جل الموجات فوق الصوتية | Eco-Med Pharmaceuticals Inc. | ||
| غسول إزالة الشعر (Nair) | التوريد | ||
| Isoflurane | Esteve Veterinaria | التخدير الاستنشاقي | |
| * البرنامج المطلوب هو برنامج Vevo بما في ذلك تطبيق B-Mode وتطبيق دوبلر الموجة النبضية وحزمة أدوات تحليل إجهاد الأوعية الدموية. |
المراجع
- Hunter, R. K. II, et al. Adipose-Derived Stromal Vascular Fraction Cell Effects on a Rodent Model of Thin Endometrium. PLoS ONE. 10 (12), e0144823(2015).
- Wang, H., Dey, S. K. Roadmap to embryo implantation: clues from mouse models. Nat Rev Genet. 7 (3), 185-199 (2006).
- Pistner, A., Belmonte, S., Coulthard, T., Blaxall, B. C. Murine Echocardiography and Ultrasound Imaging. J Vis Exp. (42), (2010).
- Lohmiller, J. J., Swing, S. P. Reproduction and Breeding. The Laboratory Rat. , 2nd, Elsevier Academic Press. 147-164 (2006).
- Jaiswal, R. S., Singh, J., Adams, G. P. High-resolution ultrasound biomicroscopy for monitoring ovarian structures in mice. Reprod Biol Endocrinol. 7 (69), (2009).
- Kim, G. H. Murine Fetal Echocardiography. J Vis Exp. (72), (2013).
- Jing, Z., Qiong, Z., Yonggang, W., Yanping, L. Rat bone marrow mesenchymal stem cells improve regeneration of thin endometrium in rat. Fertil Steril. 101 (2), 587-594 (2014).
- Mu, J., Adamson, S. L. Developmental changes in hemodynamics of uterine artery, utero- and umbilicoplacental, and vitelline circulations in mouse throughout gestation. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 291 (3), H1421-H1428 (2006).
- Anderson, C. M., Lopez, F., Zhang, H. Y., Pavlish, K., Benoit, J. N. Reduced uteroplacental perfusion alters uterine arcuate artery function in the pregnant Sprague-Dawley rat. Biol Reprod. 72 (3), 762-766 (2005).
- Hongmei, L., et al. Ultrasound Molecular Imaging of Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 Expression for Endometrial Receptivity Evaluation. Theranostics. 5 (2), 206-217 (2015).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
