استزراع في فيفو--مثل مورين Astrocytes استخدام بروتوكول أوسام سريعة وبسيطة وغير مكلفة

Anne C. Wolfes; Camin Dean

doi:10.3791/56092

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

استزراع في فيفو--مثل مورين Astrocytes استخدام بروتوكول أوسام سريعة وبسيطة وغير مكلفة

7.8K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/56092

⸱

يناير 10, 2018

Anne C. Wolfes¹^,²^,³ , Camin Dean³

¹Chemical Biology, Chemistry Research Laboratory, University of Oxford, ²Department of Physiology, Anatomy, and Genetics, University of Oxford, ³Trans-synaptic signaling, European Neuroscience Institute

في هذه المقالة

ملخص

بروتوكول أوسام الموصوفة هنا الأمثل لاستزراع astrocytes مورين بمعزل عن غيرها من خلايا المخ بطريقة سريعة وبسيطة وغير مكلفة. أستروسيتيس أوسام معرض عفوية Ca^{2 +} إشارات ومورفولوجيا والجينات التعبير ملامح مشابهة ل astrocytes في فيفو.

الملخص

أوسام ( لوث-تكلف هعاصي sطلعت ستروسيتي مسلوب) ينطوي البروتوكول بطريقة سريعة وبسيطة وغير مكلفة لتوليد كميات كبيرة من فيفو--مثل الماوس وفار astrocyte الزراعات الأحادية : يمكن عزل خلايا الدماغ من مناطق مختلفة من الدماغ، وبعد أسبوع ثقافة الخلية، تخلصت الخلايا غير أستروسيتيك بوضع أطباق الثقافة على شاكر ح 6 في الحاضنة. ثم يتم باساجيد astrocytes المتبقية في لوحات جديدة مع وسيلة محددة astrocyte (يطلق عليها NB + H). ملحوظة: + ح تحتوي على تركيزات منخفضة من الهيبارين-ملزمة مماثلة مثل عامل النمو (هبيجف)، الذي يستخدم بدلاً من المصل في المتوسط. بعد تزايد في NB + H، قد أستروسيتيس أوسام مورفولوجيا النجمية وميزة العمليات الدقيقة. وعلاوة على ذلك، أن هذه أستروسيتيس أكثر في فيفو--مثل التعبير الجيني من astrocytes المتولدة عن أساليب نشرها مسبقاً. Ca^{2 +} تصوير وديناميات حويصلة، وأحداث أخرى قريبة من الغشاء وبالتالي يمكن دراستها في العمليات أستروسيتيك الجميلة في المختبر، مثلاً، باستخدام الخلايا الحية [كنفوكل] أو مجهرية TIRF. جدير بالذكر أن أستروسيتيس أوسام أيضا يحمل عفوية Ca^{2 +} إشارات مماثلة إلى astrocytes في فيفو.

المقدمة

أستروسيتيس تؤثر على وظيفة المخ من خلال الدعم الغذائي وتدفق الدم، وإشارات متشابك واللدونه والاتصالات بين الخلايا--وهي الآليات التي تتمحور حول عمليات أستروسيتيك رقيقة. يسمح البروتوكول أوسام الموصوفة هنا دراسة هذه العمليات دون تدخل من الخلايا العصبية وغيرها إطلاق، ومفيدة مثلاً، للتعبير عن العديد من البروتينات وحتى Ca^{2 +} إشارات التداخل عبر خلايا الدماغ المختلفة أنواع. علاوة على ذلك، هذا الأسلوب يتغلب على القيود المفروضة على التقنيات المتاحة سابقا. على وجه الخصوص، يوفر لنا البروتوكول في فيفو--مثل طريقة رخيصة والتعبير الجيني في سريعة، سهلة، ومورفولوجيا (النجمية astrocytes مع العمليات رقيقة).

مورفولوجيا الخلايا والجينا....