نحن هنا وصف طريقة بسيطة ويمكن الوصول إليها على نطاق واسع لإصابة الأعصاب القطعي في يرقات ذبابة الفاكهة لتصور وكمية التنكس العصبي من الخلايا العصبية الحركية في تقاطع عصبي عضلي (نمج) من اليرقات الطور الثالث.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
A بسيطة العصبية الميكانيكية إصابة منهجية للدراسة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يحدث انحطاط الخلايا العصبية أثناء التطور الطبيعي واستجابة للإصابة، والإجهاد، والمرض. السمات الخلوية من انحطاط الخلايا العصبية هي مشابهة بشكل ملحوظ في البشر واللافقاريات كما هي الآليات الجزيئية التي تدفع هذه العمليات. ذبابة الفاكهة ، ذبابة الفاكهة ميلانوغاستر ، يوفر قوية ولكنها بسيطة نموذج الكائنات الوراثية لدراسة التعقيدات الخلوية للأمراض الاعصاب. في الواقع، ما يقرب من 70٪ من الجينات البشرية المرتبطة بالمرض لديها هالوجول ذبابة الفاكهة ووصف عدد كبير من الأدوات والمقايسات باستخدام الذباب لدراسة الأمراض العصبية البشرية. على وجه التحديد وقد ثبت تقاطع العصبية والعضلية (نمج) في ذبابة الفاكهة ليكون نظام فعال لدراسة الأمراض العصبية والعضلية بسبب القدرة على تحليل الاتصالات الهيكلية بين الخلايا العصبية والعضلات. هنا، ونحن تقرير عن في الجسم الحي محرك عصبي إصابة الفحص في ذبابة الفاكهة ، والتييستحث بالتكاثر التنكس العصبي في نمج 24 ساعة. باستخدام هذه المنهجية، وصفنا تسلسل الزمني من الأحداث الخلوية مما أدى إلى انحطاط الخلايا العصبية الحركية. طريقة الإصابة لديها تطبيقات متنوعة، كما تم استخدامها لتحديد الجينات المحددة المطلوبة للتنكس العصبي وتشريح الردود النسخي لإصابة الخلايا العصبية.
المقدمة
يحدث انحطاط الخلايا العصبية أثناء التطور الطبيعي ويمكن أن يكون سببه عملية الشيخوخة الطبيعية، والإصابة، والإجهاد، أو حالات المرض. ذبابة الفاكهة ميلانوغاستر ، ذبابة الفاكهة المشتركة، يوفر كائن نموذج بسيط وقوي لدراسة التنكس العصبي بسبب تشابه ملحوظ في الآليات الجزيئية التي تدفع انحطاط الخلايا العصبية. يتم تسليط الضوء على أوجه التشابه هذه من خلال حقيقة أن ما يقرب من 70٪ من الجينات البشرية المرتبطة بالمرض لديها هالوجول ذبابة الفاكهة . 1 بالإضافة إلى ذلك، تم تطوير العديد من المقايسات والأدوات التكنولوجية لدراسة الأمراض العصبية البشرية واستخدامها في ذبابة الفاكهة .
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. إعداد الكواشف والمعدات
- إعداد 1X تشريح العازلة (70 ملي كلوريد الصوديوم، 5 ملي بوكل، 0.02 ملي كاكل 2 ، 20 ملي مغكل 2 ، 10 ملي ناهكو 3 ، 115 ملي السكروز، 5 ملي تريهالوز، 5 هيبيس مم؛ ودرجة الحموضة 7.2).
- إعداد 1X الفوسفات مخزنة المالحة (بس).
- إعداد 1X بت باستخدام برنامج تلفزيوني 1X مع 0.01٪ تريتون X-100.
- إعداد عصير الفاكهة لوحات أجار. 14 ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
باستخدام الإجراء المعروض هنا، أثبتنا أن إصابة الخلايا العصبية الميكانيكية يسمح للتشريح الزمني للأحداث الاعصاب. 14 ، 18 تسلسل الأحداث وقد تم وصفها سابقا ويبدأ مع انقطاع فوري في الهيكل الخلوي، تليها عيوب الاتجار محور عصبي، وتراكم البروتينات أوبيكيتيناتد، والتنكس العصبي اللاحقة 24 ساعة بعد الإصابة. قبل الإصابة، وت نمجس تظهر بريسينابتيك علامة المنطقة النشطة برب في أبوسيتيون إلى علامة دسبغ بعد ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الإصابات الميكانيكية العصبية وصفها في وقت سابق وأظهرت هنا يمكن استخدامها للحث على الإصابة / الإجهاد في الأعصاب القطعي لليرقات ذبابة الفاكهة . 4 ، 5 ، 6 ، 14 وقد استخدمت هذه التقنية التجريبية سابقا لتشريح التسلسل الزمني للأحداث التي تؤدي إلى التنكس العصبي، وكذلك لدراسة التغيرات النسخي في الخلايا العصبية الحركية الأجسام آخر إصابة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
نود أن نشكر جميع أعضاء كيلر ومختبرات ماجي في جامعة كوينبياك للحصول على اقتراحات مفيدة. على وجه الخصوص، نود أن نشكر بارون L. لينكولن الثاني لتطوير هذا الفحص الإصابة داخل مختبر كيلر. كما نود أن نشكر كلية كينيبياك كلية الآداب والعلوم منحة في المعونة الممنوحة لك لك كيلر.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مقص التشريح الدقيق | أدوات العلوم | الدقيقة 15000-08 | |
| Dumont # 3 Fallps | Fine Science | Tools 11231-30 | يفضل بعض الناس الحجم 3 ، بينما يفضل البعض الآخر الحجم 5 |
| Dumont # 5 Fulps | Fine Science Tools | 11251-30 | يفضل بعض الناس الحجم 3 ، بينما يفضل البعض الآخر الحجم 5 |
| CO2< / sub> | Tank Tech Air | UN 1013 | يمكن شراء أحجام مختلفة من |
| الخزانات CO2< / sub> جهاز التخدير | Genesee Scientific | 59-114 | |
| دبابيس من الفولاذ المقاوم للصدأ ، مقاس 0.1 | أدوات العلوم الدقيقة | 26002-10 | |
| SylGard 184 سيليكون مطاط أسماكاني ، قاعدة وعامل معالجة | Dow Corning | 3097358-1004 | لصب ألواح التشريح |
| محلول Bouin's | Sigma | HT 10132-1L | يجب اختبار الأجسام المضادة للتأكد من كفاءتها في Bouin's و PFA |
| 4٪ بارافورمالدهايد (PFA) في المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS) يجب | Affymetrix | FLY-8030-20 | للتأكد من كفاءتها في Bouin's و PFA |
| تشريح ستيريو MIcroscope | AmScope | SM-1BZ | |
| مصدر الضوء | AmScope | HL150-AY-220V | |
| المضاد للجسم المضاد NC82 | الدراسات التنموية بنك الورم الهجين | nc82-s | |
| الأجسام المضادة للأقراص الكبيرة | الدراسات التنموية Hybridoma Bank | AF3 | |
| Alexa Fluor المضادة للفجل الحار بيروكسيداز | Jackson Immunoresearch | 123-545-021 ؛ 123-585-021 ؛ 123-605-021 | يمكن للمرء أن يكون Alexa Fluor & reg ؛ 488 أو 594 أو 647 |
| Flystuff عصير العنب أجار بريمكس | جينيسي العلمي | 47-102 | |
| شرائح المجهر | جينيسي العلمية | 29-101 | |
| أغطية زجاجية | فيشر ساينتفيك | 12-545-87 | |
| صندوق المرافق الحراري العلمي نالجيني | فيشر ساينتفيك | 03-484C | يستخدم لإنشاء غرفة رطبة لاستعادة اليرقات |
المراجع
- Bier, E. Drosophilia, the golden bug, emerges as a tool for human genetics. Nat. Rev. Genet. 6 (1), 9-23 (2005).
- Ugur, B., Chen, K., Bellen, H. J. Drosophila tools and assays for the study of human diseases. Dis Model Mech. 9 (3), 235-244 (2016).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
