مقالة منهجية
وهنا يصف لنا أسلوب الذي يجمع في الموقع تيترامير MHC تلطيخ مع إيمونوهيستوتشيميستري لتحديد الترجمة، والنمط الظاهري، وكمية محددة مستضد الخلايا في الأنسجة. هذا البروتوكول يستخدم لتحديد الخصائص المكانية والمظهرية لخلايا تي CD8 مستضد على حدة بالنسبة لنوع الخلية الأخرى والهياكل في الأنسجة.
خلايا T حاسمة بالنسبة للعديد من العمليات المناعية، بما في ذلك كشف والقضاء على الخلايا المصابة بالفيروس، ومنع المناعة الذاتية، ومساعدة في الإنتاج ب-الخلايا والخلايا البلازما من الأجسام المضادة، وكشف والقضاء على الخلايا السرطانية. تطوير MHC-تيترامير تلطيخ الخلايا T محددة مستضد تحليلها بواسطة التدفق الخلوي ثورة في قدرتنا على دراسة وفهم إيمونوبيولوجي خلايا تي. بينما مفيدة للغاية لتحديد الكمية والنمط الظاهري محددة مستضد خلايا T، التدفق الخلوي لا يمكن تحديد التعريب المكانية محددة مستضد تي الخلايا إلى الخلايا والهياكل في الأنسجة، وتقنيات التصنيف الحالية الأخرى لاستخراج تي الخلايا اللازمة للتدفق الخلوي محدودة الفعالية في الأنسجة غير اللمفاوية. في الموقع تلطيخ تيترامير MHC (IST) هو تقنية لتصور خلايا تي التي محددة لمولدات المضادات للفائدة في الأنسجة. في تركيبة مع إيمونوهيستوتشيميستري (المدينة)، يمكن تحديد المحكمة العراقية الخاصة وفرة والموقع والنمط الظاهري لخلايا محددة مستضد CD8 و CD4 T في الأنسجة. هنا، نحن تصف وضع بروتوكول لوصمة عار وتعداد الخلايا التائية CD8 مستضد على حدة، مع تعمل محددة تقع داخل مقصورات الأنسجة محددة. هذه الإجراءات هي نفسها التي استخدمت في المنشور الذي صدر مؤخرا من لي et al.، بعنوان "الخلايا المنتجة" فيروس نقص المناعة القردي "في" المسام تقمع جزئيا "من CD8 الخلايا+ " في فيفو "." الأساليب المذكورة قابلة للتطبيق على نطاق واسع لأنها يمكن استخدامها لترجمة، النمط الظاهري، وتحديد مقدار أساسا أي خلية CD8 T مستضد محددة تتوفر فيها MHC tetramers، في أي أنسجة.
خلايا T حاسمة بالنسبة للعديد من العمليات المناعية، بما في ذلك كشف والقضاء على الخلايا المصابة بالفيروس، ومنع المناعة الذاتية، ومساعدة في الإنتاج ب-الخلايا والخلايا البلازما من الأجسام المضادة، وكشف والقضاء على الخلايا السرطانية. تطوير ببتيد/MHC الفئة الأولى تيترامير تلطيخ محددة مستضد خلايا CD8 تي1 ووضع عهدا MHC الفئة الثانية تيترامير تلطيخ الخلايا CD4 تي2 بالتدفق الخلوي أحدث ثورة في قدرتنا على دراسة وفهم إيمونوبيولوجي خلايا تي. بينما مفيدة للغاية لتحديد الكمية والنمط الظاهري محددة مستضد خلايا T، التدفق الخلوي لا تسمح للكشف عن توطين المكانية محددة مستضد خلايا تي إلى الخلايا والهياكل في الأنسجة، والحالية الأخرى تقنيات تفصي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
1-1 اليوم: تقطيع الأنسجة الطازجة والحضانة الأولية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الشكل 1 يبين كيفية جمع الصور [كنفوكل] باستخدام مجهر [كنفوكل]. الشكل 2 يوضح تحليل الصورة الكمية باستخدام إيماجيج. الشكلان 3 و 4 إظهار الممثل الصور من العقدة الليمفاوية الأنسجة من سيف إصابة المكاك الريسوسي ملطخة MHC tetramers، CD8 الأجسام المضادة، والأجسام المضادة CD20، وتثبت خصوصية تلطيخ تيترامير MHC. الشكل 3 يقارن MHC الفئة الأولى tetramers محملة ببتيد من سيف مقارنة .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المحكمة العراقية الخاصة جنبا إلى جنب مع المدينة يوفر أداة أساسية لكشف وتميز، والتحديد الكمي للخلايا التائية CD8 محددة مستضد في البيئات الأصلية مع السياق هياكل الأنسجة والخلايا الأخرى. هنا، يمكننا وصف إجراءات مفصلة للمحكمة العراقية الخاصة جنبا إلى جنب مع المدينة، متبوعاً بتحليل الصورة الكمية، تحديد الموقع، ووفرة، والنمط الظاهري محددة مستضد تي CD8 الخلايا في الغدد الليمفاوية من macaques الريسوسي. تلطيخ مشابهة يمكن تطبيقها على الإنسان، الماوس، أو الأنسجة الأنواع الأخرى لأي MHC--أنا تيتراميرس متوفرة. وباﻹضافة إلى ذلك، الببتي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
أيد هذا العمل "خدمة الصحة العامة" منح من "معاهد الصحة الوطنية" (T32 DA007097، R01AI096966، andUM1AI26617).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| منشأة | لرباعي رباعي المعاهد الوطنية | مونومر MHC-مواد لإعداد معقد التوافق النسيجي | |
| ExtrAvidin-FITC | سيجما-ألدريتش | E2716 | مواد لإعداد معقد التوافق النسيجي |
| مصل الماعز العادي | جاكسون للبحوث المناعية | 005-000-121 | |
| منخفض الذوبان الاغاروز | Promega | V3121 | |
| الهيبارين | سيجما ألدريتش | SLBL6391V | |
| تريتون X-100 | سيجما ألدريتش | T-6878 | |
| اليوريا | جي تي بيكر | 4204-05 | |
| جيلاتين الجلسرين | سيجما ألدريتش | SLBH2672V | |
| إن بروبيل غالات | سيجما ألدريتش | P3130 | |
| جرذ و حبة CD8 (1: 500) | Acris | 0714 | الجسم المضاد غير مستقر ، استخدم استخدام واحد المجمدة |
| m-a-h-CD20 (1:500) | NOVOCASTRA | 6026819 | |
| m-a-h-Ki67 (1:500) | ناقلات | 6022201 | |
| الماعز a-m-A488 (1: 2,000) | Jackson Immunoresearch | 124083 | |
| goat-a-rb-Cy3 (1: 5,000) | Jackson Immunoresearch | 106232 | |
| goat-a-rat-Cy5 (1: 5,000) | Jackson Immunoresearch | 118088 | |
| Goaz-a-h-IgM-Dylight649 (1: 5،000) | Jackson Immunoresearch | 86579 | |
| Compresstome: VF-300 Microtome | Precisionary Instruments، LLC | 1079 | |
| مجموعة سريعة لاصقة فورية | Loctite | 46551 | |
| 24 بئر ألواح زراعة الأنسجة ذات القاع المسطح | Falcon | 353226 | |
| Microscope | Globe scienfitic Inc. | #1321 | |
| Razor شفرة | Ted Pella, Inc | 121-6 | |
| مشرط ريش يمكن التخلص منه | FEATHER SAFETY RAZOR CO. LTD. | رقم 21 | |
| فرشاة الرسم المستديرة # 2 | PRINCETON ART & amp شركة الفرشاة | 4350R | يمكن تقليم حسب الحاجة باستخدام |
| مجهر حلاقة متحد البؤر | أوليمبوس | FV1000 | |
| FV10-ASW_Viewer4.0 | أوليمبوس |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن