تسجيل الكهربية من ذبابة الفاكهة تريتشويد سنسيلا في الاستجابة ل أودورانتس من التقلب المنخفض

ذبابة الفاكهة تستجيب أورنس لعدد كبير من الروائح الكريهة، مع أطوال سلسلة الكربون واسعة النطاق ومجموعة متنوعة من المجموعات الوظيفية، بما في ذلك الاسترات والكحول والكيتونات والكتونات والألدهيدات والتيربين والأحماض العضوية والأمينات ومركبات الكبريت والحلقات غير المتجانسة والعطريات ^{2 ، 3 -} تختلف الروائح في خصائصها الفيزيائية يمكن أن يكون لها تقلبات مختلفة بشكل ملحوظ، ويشار إليها بضغط بخار المركب. والجدير بالذكر أن الروائح ذات الصلة بيولوجيا لذبابة الفاكهة ميلانوغاستر تختلف بشكل كبير في تقلباتها. على سبيل المثال، IR92a أورنس تستجيب للأمونيا ⁴ ، وهو متقلب للغاية، مع ضغط بخار 6،432 مم زئبق عند 20 درجة مئوية. في المقابل، OR67d أورنس الرد على فرمون الذكور، رابطة الدول المستقلة خلات -vaccenyl ( ج فا) ^{5 ، 6} ، ضغط البخار الذي هو 43 مم زئبق في 20 درجة مئوية.

في الآونة الأخيرة، حددنا العديد من سلسلة طويلة الأحماض الدهنية الدهنية كما بروابط ل أورنس أور 47b. وهي موجودة في نوع 4 أنتينال تريشويد سينسيلوم (at4). من بين سلسلة طويلة من الروائح الكريهة الأحماض الدهنية، وجدنا أن حمض بالميتوليك يعمل كفرمون مثير للشهوة الجنسية الذي يعزز محاكم الذكور عن طريق تفعيل أورنس أور 47b ¹ . ومع ذلك، في دراسة أخرى باستخدام طريقة تقليدية رائحة التسليم، وأظهرت لوريت الميثيل لانتزاع ردود من أورنس أور 47b، في حين أن حمض بالميتوليك أثار أي رد عندما قدمت من نفس المسافة ¹⁰ . بالمقارنة مع C فا، الأحماض الدهنية طويلة السلسلة هي أقل تقلبا، مع ضغوط بخار أقل من 0.001 مم زئبق عند 25 درجة مئوية ¹¹ . التذبذب المنخفض بطبيعته من الروائح الكريهة الأحماض الدهنية الطويلة السلسلة، والذي يحول دون العرض الفعال للهوائي عبرأنظمة تسليم الرائحة التقليدية، من المرجح أن تمثل نتائج سلبية كاذبة ¹⁰ . هذا التناقض يسلط الضوء على عدم كفاية أنظمة تسليم الرائحة التقليدية في تقديم الروائح منخفضة التقلب. وقد تبين سابقا أن التسليم الفعال للروائح الغليان يطير يتطلب قريبة من مصدر الرائحة والأنسجة المستهدفة ⁶ . وهكذا، لتوصيف كامل آثار الفيرومونات النشطة بيولوجيا في حين محاكاة المسافة التي من المحتمل أن تواجهها ذباب الفاكهة في الطبيعة ^{12 ، 13} ، اتفقنا على أن الحد الأدنى من المسافة يجب أن تمنح أولوية عالية في إجراءاتنا.

أسلوبنا يحمل المزيد من المزايا، بما في ذلك التوافق مع منصات الكهربية القياسية والتقنيات. تتطلب أجهزة تلاعب الحفار الموجودة مسبقا الحد الأدنى من التعديل لاستيعاب هذا البروتوكول، ومعظم خطوات سر تتطلب تعديلات طفيفة فقط. هذهيجعل تقنيتنا متاحة بسهولة للباحثين من ذوي الخبرة في سر. وعلاوة على ذلك، وتقنياتنا يسمح لعرض الروائح ذات تقلبات منخفضة مع بداية حادة والإزاحة، وربط تسليم التحفيز مع استجابة الخلايا العصبية. وأخيرا، يسهل تخطيط الأجهزة التبادلات السريعة بين خراطيش الرائحة، وتسريع جمع البيانات على مدى الجرعة المطلوبة.

نبدأ من خلال مراجعة إعداد مرجعية وتسجيل أقطاب، الكبار مثل المحلول الدملمف (أهل)، خراطيش تسليم الرائحة، و أولفاكتوميتر المقابلة. ثم نناقش إعداد حلول بالميتوليك حمض رائحة، تليها إعداد ذبابة للتسجيل. ونحن نمضي قدما في النظر في معايير اختيار سنسيلوم الخلقي لتسجيل وأكثر عن كثب تحديد المواقع من خرطوشة رائحة قبل تقديم البيانات التمثيلية المكتسبة باستخدام هذه الطريقة. وأخيرا، نختتم من خلال استكشاف التطبيقات المفيدة لهذا تكنيقإي، بعض القضايا التي واجهتها، وحلولها.

1. إعداد الأجهزة ل at4 تسجيل

1. استخدام أداة ماصة مجتذب لإعداد أقطاب مع الشعيرات الدموية الزجاج ألومينوسيليكات (أود 1.0 ملم، إد 0.64 ملم). حادة غيض من القطب إشارة قليلا مع زوج من ملقط غرامة لتسهيل الإدراج في كليبيوس من الطاير ( أي لوحة مدورة في الجزء الأمامي من رئيس ذبابة، فوق الفم).
   ملاحظة: تم استخدام الذكور وت البالغ من العمر 7 أيام (برلين) في هذه الدراسة. استخدام أهل محلول ملحي ¹⁴ كما بالكهرباء لكلا الأقطاب.
2. إعداد 1 L من AHL عن طريق خلط 900 مل من الماء المقطر مع 6.312 غرام من كلوريد الصوديوم، 0.373 غرام من بوكل، 0.337 غرام من NaHCO _3، 0.1120 غرام من ناه ₂ PO _4، 1.892 غرام من طرهالوز ּ 2 H ₂ O، 3.423 غرام من السكروز، 1.192 غرام من هيبيس، و 8.2 مل من 1M مغكل ₂ . باستخدام الماء المقطر، وجلب الحجم الإجمالي يصل إلى 1 L. جلب الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 باستخدام 1 N هيدروكسيد الصوديوم وتعقيم الحل معفراغ-- يحركها نظام تصفية. للتخزين على المدى الطويل، والحفاظ على أليكوتس أهل في 4 درجات مئوية.
   ملاحظة: تسليم متسقة من حمض بالميتوليك تتوقف على التوحيد بين خراطيش. فمن الأهمية بمكان أن يتم تجميع كل خرطوشة بطريقة استنساخه.
3. باستخدام شفرة حلاقة، إزالة 0.9 سم من غيض من 200 ميكرولتر ماصة طرف لإنشاء أول خرطوشة القسم، قياس 4.1 سم؛ الرجوع إلى أبعاد مفصلة في الشكل 1A . استخدام آخر 200 ميكرولتر ماصة طرف وإزالة 1.7 سم و 1.5 سم من طرف والقاعدة، على التوالي، لإنشاء قسم خرطوشة الثاني، وقياس 1.8 سم ( الشكل 1A ). استخدام مسطرة لضمان استنساخه.
4. استخدام ⅛ "ثقب الناخس لقطع أقراص من ورقة الترشيح.
5. استخدم ملقط لوضع قرص ورق الترشيح في طرف قسم الخرطوشة الثاني. تأكيد بصريا أن هناك فتحة في طرف خرطوشة التي يمكن أن تمر الهواء.
6. إرفاق مقاطع خرطوشة الأولى والثانية معا، كما هو مبين في الشكل 1A . زاوية قسم خرطوشة الثاني النزولي لتسهيل ساحة تهدف إلى الإعدادية ( الشكل 1B ).
7. توصيل خرطوشة مع أنبوب تسليم الرائحة، التي شنت على ميكرومانيبولاتور.
   ملاحظة: هذا التصميم يسمح خرطوشة لتكون سويفلد الخارج لتسهيل تبادل ( الشكل 1C ).
8. تعيين تدفق الهواء ترطيب مستمر إلى 2 لتر / دقيقة في وحدة تحكم كتلة واحدة وتدفق الرائحة إلى 500 مل / دقيقة في وحدة تحكم كتلة أخرى.
9. باستخدام البرنامج (انظر جدول المواد )، برنامج الإجراء لإدارة نفخة رائحة مس 500.

2. إعداد بالميتوليك حمض أودورانت حلول للتسليم

ملاحظة: Or47b ORNs الرد على كل من رابطة الدول المستقلة - وحمض -palmitoleic غير المشبعة. كما حمض بالميتوليك غير مستقر في RT، يتم تخزين الأسهم في -20 درجة مئوية وتستخدم في غضون شهر عند الافتتاح. الإيثانول هو المذيب المفضل للحمض بالميتوليك.

1. استخدام خلاط دوامة لخلط بدقة 10 ميكرولتر من المخزونات cis- أو ترانس- بالميتوليك حمض أو التخفيفات مع 90 ميكرولتر من الايثانول بنسبة 100٪ لمدة 10 أضعاف التخفيفات المسلسل في 1.7 مل ميكروتوبس. إعداد التخفيفات حمض بالميتوليك جديدة يوميا قبل التجارب واستخدامها في غضون يوم واحد.
   ملاحظة: ل أودورانتس التي ليست قابلة للذوبان في الإيثانول، ويوصى قنينة زجاجية لإعداد التخفيفات رائحة مع أنواع أخرى من المذيبات العضوية.
2. باستخدام ميكروبيبيت P10، وتطبيق 5 ميكرولتر من رابطة الدول المستقلة حلول حمض -palmitoleic من التخفيفات المطلوب لورق الترشيح في كل خرطوشة المقابلة.
   ملاحظة: أعلى جرعة (10 ^-1 ) يحتوي على 450 ميكروغرام من المركب. بالنسبة للحلول حمض عبر -ibmitoleic، وتطبيق 4.5 ميكرولتر بدلا من ذلك بحيث يحتوي على أعلى جرعة (10 ^-1 ) أيضا 450 ميكروغرام من رانه مجمع.
3. لتتبخر تماما المذيبات، ووضع خراطيش حمض بالميتوليك في مجفف المجفف لمدة 1 ساعة في رت و 7.59 ملم زئبقي من الضغط.
   ملاحظة: خراطيش يمكن استخدامها لمدة تصل إلى 4 ساعات في رت.

3. إعداد ذبابة الفاكهة للوصول جاهز ل at4 سنسيلا لفي فيفو التسجيلات الكهربية

ملاحظة: يتم تربة الذباب وت (برلين) في وسط الذرة المتوسطة في 25 درجة مئوية في دورة 1212 ضوء الظلام. عند الانفصال، يتم فصل الذباب حسب الجنس إلى مجموعات من عشرة، حيث يتم تجميعها حتى 7 د من العمر. OR47b أورنس في الذباب الذكور والإناث على حد سواء تستجيب لحمض بالميتوليك. وللتبسيط، يتم فحص الذباب الذكري فقط في الدراسة الحالية.

1. تجميع شريحة الطيران الإعدادية: على شريحة زجاجية، ووضع ساترة الزجاج (18 × 18 ملم ² ) على كمية صغيرة من الطين النمذجة، وتشكيل ~ 3 درجة زاوية مع شريحة زجاجية. وضع الشريط على الوجهين على البريد الداخليدج من ساترة وعلى منطقة الشريحة أدناه مباشرة. استبدال مع شريط جديد لكل يوم من تسجيل ( الشكل 2A ).
2. استخدام الشافطة يطير ¹⁵ لجمع ذبابة من الفائدة في الأنابيب ومن ثم تناسب 200 ماصة ميكرولتر طرف على نهاية الأنبوب. في وقت واحد نفض الغبار أنبوب إلى الأمام في حين تهب الهواء في أنبوب لدفع الطاير إلى نهاية طرف ماصة. استخدام شفرة حلاقة لقطع فقط تحت الجسم من الطاير و 2 رؤساء أطوال فوق الطاير.
3. تامب الجزء السفلي من طرف ماصة مع الطين النمذجة، ودفع يطير إلى أعلى حتى يتعرض كل من هوائيات و كوليوس ( الشكل 2B ). لتجنب قتل الذبابة، إضافة فقط ما يكفي من الطين لفضح هوائيات و أريستاي، وهذا يمنع البطن من يطير من سحق. وعلاوة على ذلك، إضافة الطين ببطء وبلطف لمنع أي انقباض مفاجئ. تأكد من أن الطاير على قيد الحياة عن طريق التحقق من أنتينالأو حركة بروبوسيس.
4. استخدام ملقط للمناورة طرف ماصة الذي يطير. توجيه الرأس بحيث تواجه كليبينوس إلى يمين المراقب. ضبط الإعدادية على طول ساترة باستخدام ملقط غرامة حتى الجانب الجانبي للهوائي يكمن على سطح ساترة مسجلة ( الشكل 2B ).
5. وضع قضيب عقد على أريستا لتأمين الهوائي إلى الشريط على الوجهين لمنع الحركة ( الشكل 2B ).
   ملاحظة: يتم سحب قضيب عقد من الزجاج البورسليكات الشعرية مع مجتذب ماصة وعقد في موقف مع الطين النمذجة ( الشكل 2A ).
6. وضع الإعدادية على مرحلة تلاعب ( الشكل 2C ). باستخدام المجهر، تأكد من أن تريتشويدس مرئية على طول الحافة البعيدة الوحشية للجزء الثالث من الهوائي.
   ملاحظة: من الناحية المثالية، يجب أن تكون ظلية سنسيلا بوضوح ضد الخلفية، مما يبسط لهم وتحديد وتسهيل تسجيل ( الشكل 3 ). في هذا التحضير، فإن غالبية سنسيلا خندقية يمكن الوصول إليها هي من نوع at4.
7. إبقاء الإعدادية تحت تدفق الهواء ترطيب مستمر (2 لتر / دقيقة) تسليمها عن طريق أنبوب منفصل تسليم الهواء من مسافة حوالي 2 سم من الإعدادية ( الشكل 4 )، كما هو موضح سابقا ^{2 ، 15} .

4. تسجيل في النشاط 4 سينسيلوم من أورنس أور 47b في AT4 تريشوادس في الاستجابة لحمض بالميتوليك

1. إدراج القطب المرجعي في كوليوس ( الشكل 3A ). لتجنب تلف الأنسجة، تأكد من أن يتم إدراج القطب أسفل السطح مباشرة، حيث يمكن الاتصال الدملمف تحت بشرة، مع حركة سريعة وسلسة.
2. خفض القطب تسجيل ببطء ببطء يدخل نفس الطائرة من وجهة نظر كما سينسيلوم الهدف (= "زفيغ"> الشكل 3B). سجل تحت عدسة الهدف 50X.
   ملاحظة: إهاب تريتشويدال صعبة يتطلب إدخال القطب تسجيل في قاعدة سينزيلار، الذي يوفر مساحة أوسع هدف أكبر أن يقلل من احتمال أن انحرف الكهربائي بعيدا ( الشكل 3B ، أقحم).
3. قبل تطبيق المحفزات رائحة إلى سينسيلوم، ومراقبة معايير الاختيار التالية. ينبغي رفض أي خندقية فشل في تلبية هذه المعايير واختيار سنسيلوم بدلا من ذلك.
   1. لاحظ نسبة عالية من الإشارة إلى الضوضاء (انظر الشكل 3C على سبيل المثال).
   2. مراقبة طفرات محددة من at4A و at4C الخلايا العصبية ( الشكل 3C ).
      ملاحظة: من ملاحظة، يظهر ارتفاع AT4B ارتفاع مشابهة جدا ل at4A ¹⁰ ولا يمكن التعرف عليها بسهولة دون تحفيز رائحة.
   3. لاحظ أن معدل إطلاق القاعدية من الخلايا العصبية AT4A هوحول أو تحت 20 هرتز.
      ملاحظة: هذا المعيار هو محدد ل at4A لأن معدل اطلاق القاعدية للخلايا العصبية هو أعلى من ذلك من أورنس الأساسية ² . ويشير إطلاق القاعدية أعلى بكثير إلى أن الخلايا العصبية قد تكون قد تضررت أثناء الإدراج الكهربائي.
4. توصيل خرطوشة إلى أنبوب تسليم الرائحة. تبدأ مع السيطرة المذيبات ومن ثم أودورانتس، من انخفاض إلى تركيزات عالية. استخدام ميكرومانيبولاتور للمناورة خرطوشة نحو الإعدادية بينما تهدف خرطوشة مباشرة على رأس الإعدادية. تأكيد بصريا أن خرطوشة وأشار مباشرة في الهوائي ( الشكل 4 ) من بضعة مليمترات بعيدا.
   ملاحظة: الهدف هو توجيه افتتاح خرطوشة مباشرة في الهوائي ووضعه على مقربة من الأنسجة المستهدفة.
5. تأكد من أن خرطوشة الرائحة مفصولة عن قطب التسجيل على يمينها من 1 - مم 2 ومن الطاير قبلp أسفل ما يقرب من 1 ملم.
   ملاحظة: في الإعداد الموصوفة هنا، يحدها خرطوشة رائحة بشكل وثيق من القطب الكهربائي، القطب المرجعي، والشريحة الإعدادية الطيران ( الشكل 4 ).
   ملاحظة: الالتفات إلى المسافة بين خرطوشة وتسجيل / أقطاب المرجعية. ويوصى مسافة حوالي 4 ملم ¹ . اتصال غير مقصود قد إنهاء إشارة وكسر غيض من القطب تسجيل، وإلحاق الضرر الخلايا العصبية الحالية وتعقيد مزيد من التسجيلات.
   ملاحظة: النظر في المسافة الفاصلة بين خرطوشة والشريحة الإعدادية الطيران. لمس ساترة قد طرد أيضا تسجيل القطب لتعطيل التسجيل.
6. اضغط على "سجل" في برنامج الحصول على البيانات لبدء التسجيل.
   ملاحظة: بالنسبة لكل تسجيل 10 ثوان، يتم تسليم نبضة رائحة بمسافة مس 500 مباشرة إلى الهوائي، كما هو موضح في الخطوة 1.9.
7. بعد تطبيق الرائحة،سحب بعناية خرطوشة قبل استبدالها مع خرطوشة من أعلى تركيز المقبل. استمر حتى يتم الحصول على مجموعة الجرعة بأكملها.
   ملاحظة: من المستحسن أن يتم تسجيل أورن واحد فقط أور 47b من كل ذبابة لتجنب أي آثار محتملة للتكيف.
8. شطف تماما تسجيل القطب مع الماء المقطر بعد الانتهاء من تسجيل لهذا اليوم.
9. تحليل ورسم البيانات باستخدام برامج تحليل متواجد حاليا المتاحة تجاريا.

تم تطبيق أسلوبنا بنجاح لتحديد فعالية نسبية من عبر ( الشكل 5A ) مقابل رابطة الدول المستقلة ( الشكل 5B ) ايزومرات حمض بالميتوليك. وتظهر بيانات ممثل لدينا أن عبر حمض -Bmitoleic هو يجند أكثر فعالية ل أورنس أور 47b بالمقارنة مع إسوفورم رابطة الدول المستقلة ( الشكل 5C ). وسجلت خلية عصبية واحدة من كل ذبابة، مع اثني عشر الذباب سجلت في منحنى الجرعة، ليصبح المجموع 24 الذباب. تم الحصول على البيانات الجماعية من ثلاثة تكرار مستقل من التجارب، مع 8 الذباب سجلت في كل منهما. تمثل أشرطة الخطأ سيم

وتجدر الإشارة إلى أن المسافة بين فتح خرطوشة الرائحة ورأس الطاير لها تأثير كبير على نتيجة التسجيل. للحصول على استجابة كبيرة ل pحمض الأميتوليك في أورنس أورس 47، قدمنا ​​رائحة على مسافة قريبة، حوالي 4 ملم بعيدا عن الهوائي 1 ( الشكل 6A ). عندما يتم عرض حمض بالميتوليك بعيدا عن الهوائي (~ 11 ملم)، ونحن يمكن أن نادرا ما نلاحظ أي استجابة كبيرة من أورنس أوراس 47a نفسه ( الشكل 6B ). هذه النتائج تسلط الضوء على أهمية العرض عن قرب من حمض بالميتوليك ( الشكل 6C -D ). تم جمع البيانات من تجارب موازية من 6 الذباب الذكور (برلين، 7 د القديمة). تم تسجيل أورن واحد أور 47b / يطير. تمثل أشرطة الخطأ سيم

الشكل 1: خرطوشة وإعداد أولفاكتوميتر. ( A ) إعداد خراطيش رائحة. من اليسار إلى اليمين: معيار 200 ميكرولترماصة طرف، الأولى و الثانية أقسام خرطوشة، و خرطوشة رائحة الانتهاء. ( B ) خرطوشة متصلة أولفاكتوميتر، والتي تبين الصعود نزولا من القسم الثاني. ( C ) الإعداد أولفاكتوميتر تصور أنبوب تسليم الرائحة التي شنت على ميكرومانيبولاتور، مع خرطوشة رائحة المرفقة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2: إعداد ذبابة الفاكهة . ( A ) إعداد كامل، والتي تبين المواقف النسبية للطاير، ساترة، وعقد قضيب. ( ب ) نظرة عن قرب من الإعدادية، والتي تبين المواقع من الذبابة، اتجاهه أنتينال، و كليبيوس لها. يتم وضع قضيب عقد فوق أريستا،وتأمين الجزء الثالث من الهوائي إلى الشريط ذي الوجهين. ( C ) إعداد تزوير. جميع العناصر الرئيسية مشروحة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 3: تحديد 4 سينسيلوم ل سر. ( A ) عرض 4X من الإعدادية، والتي تبين القطب المرجعي إدراجها في كوليبيوس، وعقد قضيب فوق أريستا، والقطب تسجيل وضعه بالقرب من الجزء أنتينال الثالث. ( B ) عرض 50X من القطب، تستعد لإدراج في 4 تريتشويد. أقحم: رسم توضيحي لموقف قطب التسجيل. ( C ) آثار ممثل سر من النشاط ارتفاع خط الأساس، مما يدل على جيدة (أعلى) أو الفقراء (القاع) إشارة إلى نويس ه. نسبة إشارة جيدة إلى الضوضاء يسمح تحديد موثوق بها من at4A و at4c المسامير. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 4: موضع الخرطوشة. ( A ) ويهدف خرطوشة رائحة مباشرة على رأس الطاير من مسافة بضعة ملم. ( B ) وجهة نظر أخرى من الإعدادية و أولفاكتوميتر من زاوية مختلفة. ( C ) نظرة مقربة من الإعدادية و أولفاكتوميتر، والتي تبين موقف خرطوشة رائحة فوق الشريحة ذبابة الإعدادية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

جنرال الكتريك = "1">
الشكل 5: يتتبع ممثل والجرعات المنحنيات من أورنس أور 47b ردا على رابطة الدول المستقلة - أو عبر حمض البيتوليك. ( أب ) سر من AT4A أورنس التي تعبر عن مستقبلات OR47b مع ترانس - ( A ) أو رابطة الدول المستقلة حمض -palmitoleic ( B ). وقد أجريت تسجيلات مع الذكور وت البالغ من العمر 7 سنوات الذكور. ويظهر الرسم البياني ارتفاع ارتفاع (وسط) ورسم بياني التحفيز الوقت (أسفل، مثبتة في 50 مللي ثانية) أدناه آثار العينة (ن = 12). ( C ) منحنيات الجرعة والاستجابة مقارنة الاستجابات ارتفاع أورن ب أور 4747 إلى رابطة الدول المستقلة - أو عبر حمض البيتوليك. متوسط ​​± سيم (* p <0.05؛ ** p <0.01؛ t -test). السيطرة: السيطرة السلبية دون حمض بالميتوليك. الرجاء الضغط هنالعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 6: تفعيل at4A بواسطة حمض بالميتوليك يتطلب التحفيز على المدى القريب. ( أب ) سر من AT4A أورنس في ويلديب 7 أيام من العمر الذكور برلين. تم تسليم رابطة الدول المستقلة حمض -palmitoleic على مسافة قريبة (~ 4 ملم) أو أبعد من ذلك (~ 11 مم) (ن = 6). ( C ) مقارنة الاستجابات ارتفاع المقابلة (مثبتة في 50 مللي ثانية، ممهدة بيري التحفيز الوقت الرسوم البيانية). ( D ) مقارنة استجابات ارتفاع متوسط ​​المقابلة. ردود AT4A إلى انخفاض حمض بالميتوليك بشكل ملحوظ كما يزيد المسافة التحفيز. أعيد طباعته بإذن من الشكل S4 في المرجع 1 . الرجاء انقر هنا لعرضنسخة أكبر من هذا الرقم.

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.